Submitted by BETSABÉIA HELOISA GENTILHA MILANI (betinhamilani@gmail.com) on 2018-06-28T13:05:02Z No. of bitstreams: 1 Dissertação.pdf: 1558747 bytes, checksum: 3a8943f2bc8b0aefaea823971809b4e6 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Lucia Martins Frederico null (mlucia@fca.unesp.br) on 2018-06-28T16:40:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 milani_bhg_me_botfca.pdf: 1495799 bytes, checksum: f0b9300c4bb930af2aa7150c2dff005e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-28T16:40:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 milani_bhg_me_botfca.pdf: 1495799 bytes, checksum: f0b9300c4bb930af2aa7150c2dff005e (MD5) Previous issue date: 2018-05-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O plasma rico em plaquetas (PRP) é utilizado no tratamento de enfermidades articulares, porém, após a aplicação de PRP intra-articular, observa-se se observa algumas reações adversas locais em equinos, como efusão sinovial, influxo celular e aumento da concentração de PGE2 sinoviais. Os antígenos da membrana plaquetária podem causar diversas alterações imunológicas e alterar a expressão de proteínas. O lisado plaquetário (LP) seria uma alternativa para a aplicação do conteúdo íntegro do PRP, porém sem a membrana plaquetária. Portanto, esse trabalho tem por finalidade a investigação do possível potencial inflamatório da membrana plaquetária no líquido sinovial e comparação com o PRP, após a indução de sinovite experimental aguda. Foram utilizadas 20 articulações radiocárpicas de equinos hígidos. Cada grupo foi composto por 5 articulações sendo eles: o grupo controle, grupo PRP, grupo LP e grupo LPS. O grupo PRP recebeu o tratamento com plasma rico em plaquetas, o grupo LP recebeu o lisado plaquetário e o grupo LPS recebeu o tratamento com lipopolissacarideo. Todos os grupos, menos o controle, receberam a dose de 0,25 ng/mL intra-articular, e foi colhido amostras de líquido sinovial em seriados momentos (0,4,8,24, 48 horas e 7 dias) e exame físico individual de cada animal. Além disso, foi feito a dosagem de PGE2. Os resultados após indução da sinovite experimental aguda e a aplicação do LP e PRP, apontaram que houve alterações semelhantes no líquido sinovial e redução dos sinais de inflamação da mesma forma em ambos os grupos (P< 0,05). Desta maneira, o uso do LP foi semelhante em comparação com o PRP intra-articular, na redução da inflamatória articular local. / Platelet-rich plasma (PRP) is used in the treatment of joint diseases, however, after administered of intra-articular PRP, there are some local adverse reactions in horses, as synovial effusion, cellular influx and increased concentration of synovial PGE2. Antigens of the platelet membrane can case various immunological changes and alter the expression of proteins. Platelet lysate (LP) would be an alternative for the application of the full content of PRP, but without the platelet membrane. Therefore, this work is to investigate the possible inflammatory potential of the platelet membrane in the synovial fluid and to compare it with PRP after the induction of acute experimental synovitis. Twenty radiocarpal joints of healthy horses were used. Each group consisted of 5 joints: the control group, the PRP group, the LP group and the LPS group. The PRP group received treatment with platelet rich plasma, the LP group received the platelet lysate.All groups, except the control, received the intra- (0,4,8,24, 48 hours and 7 days) and physical examination of each animal. In addition, PGE 2 was dosed. The results after induction of acute experimental synovitis and the application of LP and PRP, indicated that there were similar alterations in the synovial fluid and reduction of the signs of inflammation in the same way in both groups (P< 0,05). In this method, the use of LP was similar in comparison to the intra-articular PRP, in the reduction of local inflammatory joint.

Orientador: Ana Liz Garcia Alves / Resumo: O plasma rico em plaquetas (PRP) é utilizado no tratamento de enfermidades articulares, porém, após a aplicação de PRP intra-articular, observa-se se observa algumas reações adversas locais em equinos, como efusão sinovial, influxo celular e aumento da concentração de PGE2 sinoviais. Os antígenos da membrana plaquetária podem causar diversas alterações imunológicas e alterar a expressão de proteínas. O lisado plaquetário (LP) seria uma alternativa para a aplicação do conteúdo íntegro do PRP, porém sem a membrana plaquetária. Portanto, esse trabalho tem por finalidade a investigação do possível potencial inflamatório da membrana plaquetária no líquido sinovial e comparação com o PRP, após a indução de sinovite experimental aguda. Foram utilizadas 20 articulações radiocárpicas de equinos hígidos. Cada grupo foi composto por 5 articulações sendo eles: o grupo controle, grupo PRP, grupo LP e grupo LPS. O grupo PRP recebeu o tratamento com plasma rico em plaquetas, o grupo LP recebeu o lisado plaquetário e o grupo LPS recebeu o tratamento com lipopolissacarideo. Todos os grupos, menos o controle, receberam a dose de 0,25 ng/mL intra-articular, e foi colhido amostras de líquido sinovial em seriados momentos (0,4,8,24, 48 horas e 7 dias) e exame físico individual de cada animal. Além disso, foi feito a dosagem de PGE2. Os resultados após indução da sinovite experimental aguda e a aplicação do LP e PRP, apontaram que houve alterações semelhantes no líquido sinovial e redução dos sina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Epitélios confluentes de queratinócitos autólogos, cultivados segundo metodologia padronizada por Rheinwald e Green em 1975, têm sido usados como enxertos em diferentes situações clínicas. Contudo, a presença de componentes xenobióticos empregados nesta metodologia implica na possibilidade de transmissão de zoonoses, príons e viroses aos pacientes, além de envolver questões éticas relacionadas à utilização de animais. Tais preocupações têm direcionado pesquisadores a buscar alternativas que superem este impasse; no entanto, as formulações obtidas até o momento não são completamente satisfatórias. Assim, nossa proposta neste estudo, foi omitir ou substituir os componentes xenobióticos tradicionalmente utilizados no meio para queratinócitos, por similares humanos. Como resultado, padronizamos um meio de cultura onde omitimos o emprego de toxina colérica, substituímos o soro fetal bovino por lisado de plaquetas humanas na concentração de 2,5% e a insulina de origem bovina foi substituída por insulina recombinante humana na mesma concentração do método original (5 &mu;g/mL). Com os resultados obtidos foi possível concluir ser viável o cultivo de queratinócitos humanos, mantidos em meio de cultura livre de componentes xenobióticos. / Confluent epithelia of autologous keratinocytes, cultivated according to standardized methodology by Rheinwald and Green in 1975, have been used as grafts in different clinical situations. However, the presence of xenobiotics components applied in this method implies the possibility of transmission of zoonoses, príons, and viruses to patients, besides involving ethical issues related to the use of animals for components obtainment. Such concerns have driven researchers to seek alternatives that overcome this deadlock, as the formulations obtained so far are not completely satisfactory. Thus, our proposal in this study was to omit or replace the xenobiotics components traditionally used in the medium to keratinocytes culture, by human similar. As a result, we have standardized a culture medium whereby we omitted the use of cholera toxin, replaced fetal bovine serum by human platelet lysate at a 2.5% concentration and bovine insulin was replaced by recombinant human insulin at the same concentration as the original method (5 &mu;g/mL). With the results obtained we could conclude that the method to be viable to cultivate human keratinocytes, kept in culture medium free of xenobiotics components.

Submitted by PPG Pediatria e Sa?de da Crian?a (pediatria-pg@pucrs.br) on 2017-10-03T19:45:05Z No. of bitstreams: 1 TeseF?timaversaofinal.pdf: 880598 bytes, checksum: 689eb5cf56995aa9a6100e6827f43c4c (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-10-04T13:52:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseF?timaversaofinal.pdf: 880598 bytes, checksum: 689eb5cf56995aa9a6100e6827f43c4c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-04T13:56:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseF?timaversaofinal.pdf: 880598 bytes, checksum: 689eb5cf56995aa9a6100e6827f43c4c (MD5) Previous issue date: 2017-03-22 / PROBOLSA / Introduction: Acute respiratory tract infections (ARTI) are one of the most important causes of mortality in children under 5 years old. In developed countries ARTI account for 20% of emergency consultations and 75% of antibiotic prescriptions. Children in attending day care are more prone to recurrence of respiratory infections. Bacterial immunostimulants, resulting from the chemical lysis of microorganisms associated with most respiratory tract infections, have been propagated as possibly useful intervention for prevention of recurrent respiratory infections. Objective: To analyze the effectiveness of OM-85 Broncho-vaxom (OM-85 BV) on the prevention of upper respiratory tract infections in healthy children attending preschool during the 6-month period. Methods: A randomized, double-blind, placebo controlled study was conducted in 54 healthy children aged between 6 months to 5 years attending in the School for Early Childhood Education between the months of April and September. Use of OM-85 BV for 3 months and observed for a further 3 months the following outcomes: upper respiratory tract infection, bronchopneumonia, other infections, use of antibiotics, emergency consultations, need for hospital stay, side effects of the medication. Results: Of the 54 children included, 57% were male. All completed the study and there were no significant differences between the groups. Of the 27 patients in group OM-85 BV, 19 (70,4%), attending daycare full-time and 16 (64,85%) half period, morning or evening. Breastfeeding was exclusive until 6 months in 6 patients (22,2%) on the OM-85 BV group and in 7 (25,9%) patients in the control group. Family history of smoking was positive in 11 (40,7%) patients in the OM-85 BV group and in 13 (48,1%) patients in the control group. Regarding the number of respiratory infections, the mean in the OM-85 BV group in the first 3 months was 0,92? 0,87 and in the placebo group was 0,74? 1,02 and in the 6 months was 1,62? 1,47 and 1,03?1,34, respectively. Antibiotic was used in 10 (37%) children of the OM-85BV group in the 3 months of treatment and in 13 (48,1%) of the placebo group, and in the 6 months of follow-up the use was 48,1% in both groups. The mean number of hospitalizations was very low in the period of the study. The mean number of emergency visits during the first 3 months was 0,81?1,21 in the OM-85 BV group and 1,29?1,48 in the placebo group and at 6 months was 1,77?1,80 in the OM-85 BV group and 2,03?1,76 in the placebo group. Conclusions: OM-85 BV was not effective as an intervention in daycare children with no history of IRR. No statistically significant difference was observed between the groups in the use of antibiotics, emergency consultations and hospitalizations. / Introdu??o: As infec??es agudas do trato respirat?rio est?o entre as causas mais importantes de mortalidade na faixa et?ria abaixo dos 5 anos, sendo, em pa?ses desenvolvidos, respons?veis por 20% das consultas nas emerg?ncias e 75% das prescri??es de antibi?ticos. Crian?as que frequentam creche s?o mais propensas ? recorr?ncia das infec??es respirat?rias. Os imunoestimulantes bacterianos, resultantes da lise qu?mica de microrganismos associados com a maioria das infec??es respirat?rias, t?m sido propagados como interven??o possivelmente ?til para a preven??o das infec??es respirat?rias recorrentes (IRR). Objetivo: Analisar a efic?cia do OM-85 Broncho Vaxom (OM-85 BV) na preven??o de infec??es respirat?rias do trato respirat?rio superior em crian?as h?gidas que frequentam pr?-escola, durante o per?odo de 6 meses. M?todos: Desenvolveu-se um estudo randomizado duplo cego placebo controlado em 54 crian?as previamente h?gidas, com idade entre 6 meses e 5 anos, que frequentavam a Escola de Educa??o Infantil entre os meses de abril e setembro. Usado OM-85 BV por 3 meses e observado por mais 3 meses os seguintes desfechos: presen?a de infec??o do trato respirat?rio superior, broncopneumonia, outras infec??es, uso de antibi?ticos, consultas na emerg?ncia, necessidade de interna??o hospitalar, dias de aus?ncia ? creche e efeitos colaterais da medica??o. Resultados: Das 54 crian?as inclu?das, 57% eram do sexo masculino. Todos completaram o estudo e n?o houve diferen?as significativas entre os grupos. Dos 27 pacientes do grupo OM-85 BV, 19 (70,4%), frequentavam a creche em turno integral e dos 27 pacientes do grupo controle, 16 (64,8%). O aleitamento materno, foi exclusivo at? o 6? m?s em 6 (22,2%) pacientes do grupo OM-85 BV em 7 (25,9%) pacientes do grupo controle. Quanto ? hist?ria familiar de fumo, foi positiva em 11 (40,7%) pacientes do grupo OM-85 BV e em 13 (48,1%) pacientes do grupo controle. Em rela??o ao n?mero de infec??es respirat?rias, a m?dia no grupo OM-85 BV nos primeiros 3 meses foi 0,92?0,87 e no grupo placebo foi 0,74?1,02 e nos 6 meses foi 1,62?1,47 e 1,03?1,34, respectivamente. Antibi?tico foi usado em 10 (37%) crian?as do grupo OM-85BV nos 3 meses de tratamento e em 13 (48,1%) do grupo placebo, j? nos 6 meses de acompanhamento o uso foi de 48,1% nos dois grupos. A m?dia de interna??es foi muito baixa no per?odo estudado. A m?dia de consultas na emerg?ncia nos primeiros 3 meses foi de 0,81?1,21 no grupo OM-85 BV e 1,29?1,48 no grupo placebo e nos 6 meses foi de 1,77?1,80 no grupo OM-85 BV e 2,03?1,76 no grupo placebo. Conclus?es: OM-85 BV n?o foi eficaz como interven??o em crian?as que frequentam creche, sem hist?ria de IRR. N?o houve diferen?a estatisticamente significativa no uso de antibi?ticos, consultas na emerg?ncia e interna??es hospitalares

Epitélios confluentes de queratinócitos autólogos, cultivados segundo metodologia padronizada por Rheinwald e Green em 1975, têm sido usados como enxertos em diferentes situações clínicas. Contudo, a presença de componentes xenobióticos empregados nesta metodologia implica na possibilidade de transmissão de zoonoses, príons e viroses aos pacientes, além de envolver questões éticas relacionadas à utilização de animais. Tais preocupações têm direcionado pesquisadores a buscar alternativas que superem este impasse; no entanto, as formulações obtidas até o momento não são completamente satisfatórias. Assim, nossa proposta neste estudo, foi omitir ou substituir os componentes xenobióticos tradicionalmente utilizados no meio para queratinócitos, por similares humanos. Como resultado, padronizamos um meio de cultura onde omitimos o emprego de toxina colérica, substituímos o soro fetal bovino por lisado de plaquetas humanas na concentração de 2,5% e a insulina de origem bovina foi substituída por insulina recombinante humana na mesma concentração do método original (5 &mu;g/mL). Com os resultados obtidos foi possível concluir ser viável o cultivo de queratinócitos humanos, mantidos em meio de cultura livre de componentes xenobióticos. / Confluent epithelia of autologous keratinocytes, cultivated according to standardized methodology by Rheinwald and Green in 1975, have been used as grafts in different clinical situations. However, the presence of xenobiotics components applied in this method implies the possibility of transmission of zoonoses, príons, and viruses to patients, besides involving ethical issues related to the use of animals for components obtainment. Such concerns have driven researchers to seek alternatives that overcome this deadlock, as the formulations obtained so far are not completely satisfactory. Thus, our proposal in this study was to omit or replace the xenobiotics components traditionally used in the medium to keratinocytes culture, by human similar. As a result, we have standardized a culture medium whereby we omitted the use of cholera toxin, replaced fetal bovine serum by human platelet lysate at a 2.5% concentration and bovine insulin was replaced by recombinant human insulin at the same concentration as the original method (5 &mu;g/mL). With the results obtained we could conclude that the method to be viable to cultivate human keratinocytes, kept in culture medium free of xenobiotics components.

Por mais de 30 anos, a utilização do meio de cultura, enriquecido com soro bovino, e de fibroblastos murinos, com a taxa de proliferação controlada por irradiação ou por ação de drogas anti-cancerígenas, vem desempenhando com sucesso o seu papel de auxiliar no desenvolvimento dos queratinócitos em cultura, para fins clínicos. Porém, atualmente há uma preocupação crescente acerca da possibilidade de transmissão de príons e virose animais, aos pacientes transplantados. Levando em conta esta preocupação, o presente trabalho tem como objetivo cultivar fibroblastos humanos em meio enriquecido com lisado de plaquetas humanas e determinar a dose de irradiação dessas células, para obtenção da camada de sustentação na cultura de células da epiderme. Para realização do objetivo proposto, padronizamos a lise das plaquetas, utilizamos este lisado para cultivar os fibroblastos humanos e verificamos a dose de irradiação suficiente para inibir sua duplicação. Queratinócitos humanos foram cultivados nestas camadas de sustentação, em meio de cultura suplementado com o lisado. Com os resultados obtidos concluímos que o lisado de plaquetas a 10% promoveu uma melhor adesão e proliferação dos fibroblastos humanos e em todas as doses testadas (60 a 300 Gy), estes tiveram as suas atividades mitóticas inativadas pela radiação ionizante, sendo que as camadas de sustentação obtidas com doses de 70 a 150 Gy foram as que proporcionaram o melhor desenvolvimento dos queratinócitos em meio contendo 2,5% de lisado de plaquetas humanas. Portanto, foi possível padronizar, tanto o cultivo dos fibroblastos humanos, quanto sua inativação para utilização como camada de sustentação na cultura de queratinócitos, de maneira a eliminar os componentes xenobióticos. / For over 30 years, the use of culture medium, enriched with bovine serum, and murines fibroblasts, with the rate of proliferation controlled by irradiation or by share anticarcinogenic drugs, has been playing successfully its role in assisting in the development of keratinocytes in culture, for clinical purposes. However, currently there is a growing concern about the possibility of transmitting prions and animals viruses to transplanted patients. Taking into account this concern, the present work aims to cultivate human fibroblasts in a medium enriched with human platelets lysate and determine the irradiation dose of these cells, for obtaining feeder layer in epidermal cell culture. For carrying out the proposed objective, platelets lysis has standardized, this lysate was used for human fibroblasts cultivation and the irradiation dose enough to inhibit its duplication was evaluated. Human keratinocytes were cultivated in these feeder layers, in culture medium enriched with the lysate. With these results we conclude that the 10% platelets lysate promoted a better adhesion and proliferation of human fibroblasts and in all dose levels tested (60 to 300 Gy), these had their mitotic activity inactivated by ionizing irradiation, being that the feeder layers obtained with doses from 70 to 150 Gy were those that provided the best development of keratinocytes in medium containing 2.5% of human platelet lysate. Therefore, it was possible to standardize both the cultivation of human fibroblasts as its inactivation for use as feeder layer in culture of keratinocytes, so as to eliminate xenobiotics components.

Por mais de 30 anos, a utilização do meio de cultura, enriquecido com soro bovino, e de fibroblastos murinos, com a taxa de proliferação controlada por irradiação ou por ação de drogas anti-cancerígenas, vem desempenhando com sucesso o seu papel de auxiliar no desenvolvimento dos queratinócitos em cultura, para fins clínicos. Porém, atualmente há uma preocupação crescente acerca da possibilidade de transmissão de príons e virose animais, aos pacientes transplantados. Levando em conta esta preocupação, o presente trabalho tem como objetivo cultivar fibroblastos humanos em meio enriquecido com lisado de plaquetas humanas e determinar a dose de irradiação dessas células, para obtenção da camada de sustentação na cultura de células da epiderme. Para realização do objetivo proposto, padronizamos a lise das plaquetas, utilizamos este lisado para cultivar os fibroblastos humanos e verificamos a dose de irradiação suficiente para inibir sua duplicação. Queratinócitos humanos foram cultivados nestas camadas de sustentação, em meio de cultura suplementado com o lisado. Com os resultados obtidos concluímos que o lisado de plaquetas a 10% promoveu uma melhor adesão e proliferação dos fibroblastos humanos e em todas as doses testadas (60 a 300 Gy), estes tiveram as suas atividades mitóticas inativadas pela radiação ionizante, sendo que as camadas de sustentação obtidas com doses de 70 a 150 Gy foram as que proporcionaram o melhor desenvolvimento dos queratinócitos em meio contendo 2,5% de lisado de plaquetas humanas. Portanto, foi possível padronizar, tanto o cultivo dos fibroblastos humanos, quanto sua inativação para utilização como camada de sustentação na cultura de queratinócitos, de maneira a eliminar os componentes xenobióticos. / For over 30 years, the use of culture medium, enriched with bovine serum, and murines fibroblasts, with the rate of proliferation controlled by irradiation or by share anticarcinogenic drugs, has been playing successfully its role in assisting in the development of keratinocytes in culture, for clinical purposes. However, currently there is a growing concern about the possibility of transmitting prions and animals viruses to transplanted patients. Taking into account this concern, the present work aims to cultivate human fibroblasts in a medium enriched with human platelets lysate and determine the irradiation dose of these cells, for obtaining feeder layer in epidermal cell culture. For carrying out the proposed objective, platelets lysis has standardized, this lysate was used for human fibroblasts cultivation and the irradiation dose enough to inhibit its duplication was evaluated. Human keratinocytes were cultivated in these feeder layers, in culture medium enriched with the lysate. With these results we conclude that the 10% platelets lysate promoted a better adhesion and proliferation of human fibroblasts and in all dose levels tested (60 to 300 Gy), these had their mitotic activity inactivated by ionizing irradiation, being that the feeder layers obtained with doses from 70 to 150 Gy were those that provided the best development of keratinocytes in medium containing 2.5% of human platelet lysate. Therefore, it was possible to standardize both the cultivation of human fibroblasts as its inactivation for use as feeder layer in culture of keratinocytes, so as to eliminate xenobiotics components.

No ciclo natural de transmissão da leishmaniose, as fêmeas infectadas de flebotomíneos regurgitam promastigotas na pele de hospedeiro junto com a saliva. Tem sido descrito que componentes da saliva do vetor possuem propriedades imunomodulatórias que facilitam o estabelecimento da infecção no hospedeiro, contudo a maior parte dos estudos emprega lisado de glândula salivar (LGS) de vetores colonizados em laboratório. Dessa forma, o principal objetivo deste estudo foi avaliar a especificidade do LSG dos flebotomíneos Lutzomyia flaviscutellata e Lutzomyia (Psychodopygus) complexus capturados no campo na infectividade de Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (Viannia) braziliensis. Camundongos BALB/c foram inoculados no coxim plantar traseiro com formas promastigotas de L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis na ausência ou presença do LGS de L. flaviscutelata, e L. (P.) complexus. A evolução da infecção foi acompanhada semanalmente e biópsias do ponto de inoculação foram coletadas para análise histopatológica e determinação de carga parasitária na 4ª e 8ª semana pós-infecção (PI); e o linfonodo de drenagem para caracterização de subpopulações de linfócitos T por citometria de fluxo. Células de linfonodo de drenagem foram também cultivadas, com estímulo homólogo, para quantificação de citocinas (IL-10, IL- 12 e IL-4) no sobrenadante. A infecção por L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis não se mostrou exacerbada nos grupos co-inoculados com o LGS de ambas as espécies em relação ao grupo controle, inoculado somente com o parasito. O tamanho de lesão e carga parasitária do grupo controle foi maior ou igual aos grupos com saliva. Na infecção por L. (L.) amazonensis houve diminuição dos linfócitos CD4+ e aumento na população de linfócitos CD8+ enquanto na infecção por L. (V.) braziliensis houve manutenção da população de linfócitos CD4+ e aumento de linfócitos CD8+ em todos os grupos quando comparados ao grupo saudável. A produção de IL-10 e IL-12, não diferiram entre os grupos, assim como a produção de IL-4 no grupo infectado por L. (V.) braziliensis. No entanto, nos grupos infectados apenas com L. (L.) amazonensis e com saliva de L. flaviscutellata, foi observada uma maior produção de IL-4 em relação ao grupo saudável. De forma geral, os resultados mostraram que a saliva de L. flaviscutellata e de Lutzomyia (P.) complexus, no seu binômio natural vetor/parasito ou não, não favoreceram o estabelecimento da infecção causada por L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis em camundongos BALB/c. / During the natural transmission of leishmaniasis, the infected female phlebotomine regurgitates promastigotes into the host\'s skin together with the saliva. It has been reported that components of vector saliva contain immunomodulatory properties that facilitate the establishment of infection in the host, however the most studies employed salivary gland lysate (SGL) of laboratory colonized vectors. Thus, the main objective of this study was to evaluate the specificity of SGL of the phlebotomines Lutzomyia flaviscutellata and Lutzomyia (Psychodopygus) complexus caught in the field in the infectivity of L. (L.) amazonensis and L. (V.) braziliensis. BALB/c mice were inoculated in the hind footpad with promastigotes of L. (L.) amazonensis and L. (V.) braziliensis in the absence or presence of L. flaviscutelata, and L. (P.) complexus SGL. The evolution of the lesion size was evaluated weekly and biopsies from the site of infection were collected for histopathological analysis and determination of parasite load in the 4th and 8th week post infection (PI), and the draining lymph node to characterize subsets of T cells by flow cytometry. The draining lymph nodes cells were also cultured with specific antigen to determine the cytokines (IL-10, IL-12 and IL-4) in the supernatant. L. (L.) amazonensis and L. (V.) braziliensis infection was not exacerbated in the groups co-inoculated with the SGL of both species in the control group, only inoculated with the parasite. The lesion size and parasite burden of the control group was higher or equal to the groups with saliva. In L. (L.) amazonensis infection there was a decrease of CD4+ cells and an increase in the population of CD8+ cells while in L. (V.) braziliensis infection there was a maintenance of CD4+ cells and an increase in the population of CD8+ cells in all groups compared with the health group. The production of IL-10 and IL-12, did not differ between groups, as well as the production of IL-4 in the group infected by L. (V.) braziliensis. However, in the groups infected only with L. (L.) amazonensis in the presence of L. flaviscutellata saliva, it was observed a higher production of IL-4 in relation with the health group. As a whole, the results show that the saliva of L. flaviscutellata and L. (P.) complexus, in the natural vector/parasite binomium or not, did not favor the establishment of the infection caused by L. (L.) amazonensis and L. (V.) braziliensis in BALB/c mice

Os procedimentos para uso clínico de células-tronco derivadas de tecido adiposo (CT-TA) exigem grandes quantidades de células, por isso, em geral os protocolos envolvem a expansão e cultura celular in vitro. No entanto, as metodologias utilizadas rotineiramente para o cultivo de CT-TA envolvem a utilização de componentes xenobióticos, como a colagenase e o soro fetal bovino (SFB), que representam riscos potencias de reações imunológicas e transmissão de doenças infecciosas. Sendo assim, pretendeu-se no presente estudo analisar diferentes parâmetros metodológicos para isolamento e expansão de CT-TA, na ausência de componentes xenobióticos. Para tanto, as células-tronco foram isoladas por digestão enzimática ou dissociação mecânica e submetidas à expansão na presença de SFB ou lisado de plaquetas humano (LP). Os resultados mostraram que a metodologia de dissociação mecânica representa uma alternativa viável e eficiente para cultivo de CT-TA, e que o emprego de LP como suplemento para o meio de cultura aumentou de forma significativa a proliferação celular. Em função desses resultados, pode-se concluir que é possível a implementação de técnicas de isolamento e expansão de CT-TA, prescindindo-se de componentes xenobióticos. / The procedures for the clinical use of adipose-derived stem cells (ASC) require large amounts of cells, so in general protocols involve culture and cell expansion in vitro.However, the methods routinely used for the culture of ASC involves the use of xenobiotic components, such as collagenase and fetal bovine serum (FBS), that may representing potential risk of immunological reactions and the risk of transmission of infectious diseases. Thus, it was intended in this study to analyze different methodological parameters for the isolation and expansion of ASC in the absence of xenobiotic components. For this, stem cells were isolated by enzymatic digestion and mechanical dissociation and were submitted to expansion in the presence of FBS or human platelet lysate (PL). The results showed that the mechanical dissociation method represents an effective alternative to growing ASC, and that the use of PL as a supplement to the culture medium significantly increased cellular proliferation. In view of these results, we can conclude that it is possible to implement techniques for isolation and expansion of ASC, dispensing xenobiotic components.

No ciclo natural de transmissão da leishmaniose, as fêmeas infectadas de flebotomíneos regurgitam promastigotas na pele de hospedeiro junto com a saliva. Tem sido descrito que componentes da saliva do vetor possuem propriedades imunomodulatórias que facilitam o estabelecimento da infecção no hospedeiro, contudo a maior parte dos estudos emprega lisado de glândula salivar (LGS) de vetores colonizados em laboratório. Dessa forma, o principal objetivo deste estudo foi avaliar a especificidade do LSG dos flebotomíneos Lutzomyia flaviscutellata e Lutzomyia (Psychodopygus) complexus capturados no campo na infectividade de Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (Viannia) braziliensis. Camundongos BALB/c foram inoculados no coxim plantar traseiro com formas promastigotas de L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis na ausência ou presença do LGS de L. flaviscutelata, e L. (P.) complexus. A evolução da infecção foi acompanhada semanalmente e biópsias do ponto de inoculação foram coletadas para análise histopatológica e determinação de carga parasitária na 4ª e 8ª semana pós-infecção (PI); e o linfonodo de drenagem para caracterização de subpopulações de linfócitos T por citometria de fluxo. Células de linfonodo de drenagem foram também cultivadas, com estímulo homólogo, para quantificação de citocinas (IL-10, IL- 12 e IL-4) no sobrenadante. A infecção por L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis não se mostrou exacerbada nos grupos co-inoculados com o LGS de ambas as espécies em relação ao grupo controle, inoculado somente com o parasito. O tamanho de lesão e carga parasitária do grupo controle foi maior ou igual aos grupos com saliva. Na infecção por L. (L.) amazonensis houve diminuição dos linfócitos CD4+ e aumento na população de linfócitos CD8+ enquanto na infecção por L. (V.) braziliensis houve manutenção da população de linfócitos CD4+ e aumento de linfócitos CD8+ em todos os grupos quando comparados ao grupo saudável. A produção de IL-10 e IL-12, não diferiram entre os grupos, assim como a produção de IL-4 no grupo infectado por L. (V.) braziliensis. No entanto, nos grupos infectados apenas com L. (L.) amazonensis e com saliva de L. flaviscutellata, foi observada uma maior produção de IL-4 em relação ao grupo saudável. De forma geral, os resultados mostraram que a saliva de L. flaviscutellata e de Lutzomyia (P.) complexus, no seu binômio natural vetor/parasito ou não, não favoreceram o estabelecimento da infecção causada por L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis em camundongos BALB/c. / During the natural transmission of leishmaniasis, the infected female phlebotomine regurgitates promastigotes into the host\'s skin together with the saliva. It has been reported that components of vector saliva contain immunomodulatory properties that facilitate the establishment of infection in the host, however the most studies employed salivary gland lysate (SGL) of laboratory colonized vectors. Thus, the main objective of this study was to evaluate the specificity of SGL of the phlebotomines Lutzomyia flaviscutellata and Lutzomyia (Psychodopygus) complexus caught in the field in the infectivity of L. (L.) amazonensis and L. (V.) braziliensis. BALB/c mice were inoculated in the hind footpad with promastigotes of L. (L.) amazonensis and L. (V.) braziliensis in the absence or presence of L. flaviscutelata, and L. (P.) complexus SGL. The evolution of the lesion size was evaluated weekly and biopsies from the site of infection were collected for histopathological analysis and determination of parasite load in the 4th and 8th week post infection (PI), and the draining lymph node to characterize subsets of T cells by flow cytometry. The draining lymph nodes cells were also cultured with specific antigen to determine the cytokines (IL-10, IL-12 and IL-4) in the supernatant. L. (L.) amazonensis and L. (V.) braziliensis infection was not exacerbated in the groups co-inoculated with the SGL of both species in the control group, only inoculated with the parasite. The lesion size and parasite burden of the control group was higher or equal to the groups with saliva. In L. (L.) amazonensis infection there was a decrease of CD4+ cells and an increase in the population of CD8+ cells while in L. (V.) braziliensis infection there was a maintenance of CD4+ cells and an increase in the population of CD8+ cells in all groups compared with the health group. The production of IL-10 and IL-12, did not differ between groups, as well as the production of IL-4 in the group infected by L. (V.) braziliensis. However, in the groups infected only with L. (L.) amazonensis in the presence of L. flaviscutellata saliva, it was observed a higher production of IL-4 in relation with the health group. As a whole, the results show that the saliva of L. flaviscutellata and L. (P.) complexus, in the natural vector/parasite binomium or not, did not favor the establishment of the infection caused by L. (L.) amazonensis and L. (V.) braziliensis in BALB/c mice