Orientadores: Selma Candelaria Genari, Arnaldo Rodrigues dos Santos Jr / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:34:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Estacia_Paulo_D.pdf: 6150044 bytes, checksum: 110dea14d6f4f095b413388e63202177 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Os perfluorocarbonos líquidos (PFCLs) são usados em cirurgias oftalmológicas servindo não apenas como ferramenta intra-operatória, mas também como agente tamponante intra­ ocular. Entretanto, alguns autores afirmam que o perfluoroctano (PFOC), um tipo de PFCLs, pode causar reações inflamatórias e danos celulares à retina. Na tentativa de solucionar esses inconvenientes, foram desenvolvidos os alcanos semifluorinados (ASF) com a indicação de substituto vítreo de longo prazo. Nesse sentido, avaliou-se o possível efeito tóxico apresentado pelo PFOC e pelo perfluorohexiloctano (F6Hg), um tipo de ASF, em condições controladas por meio de cultura celular. Utilizou-se, para isso, a linhagem celular Vero, internacionalmente recomendada para ensaios com citotoxicidade e estudos com biomateriais. Foi feita uma análise da toxicidade indireta, onde as células entram em contato apenas com elementos solúveis que possam ser eliminados pelo PFOC ou F6Hs, e toxicidade direta, ou seja, a toxicidade dependente do contato, do PFOC ou F6Hs com as células. A toxicidade indireta foi realizada por métodos quantitativos através da absorbância, indicando a viabilidade celular. A toxicidade direta foi avaliada por meio de métodos citoquímicos, imunocitoquímicos e morfológicos, utilizando-se como controle células em meio de cultura livre de qualquer tratamento, um controle positivo para toxicidade (adesivos de silicone), que apresentam comprovado efeito tóxico, e um controle de peso (lamínulas de vidro) que exercessem uma compressão mecânica similar ao PFOC ou F_s utilizados. A análise da toxicidade, seja direta ou indireta, foi feita, inicialmente, para o PFOC e F6Hs individualmente e, depois, de forma conjunta e comparativa. Em relação ao PFOC, os estudos mostraram que não apresenta toxicidade indireta, mas é capaz de promover algumas alterações tóxicas mediadas pelo contato direto. O F6Hs também não mostrou toxicidade direta, ao contrário do PFOC; as alterações celulares promovidas pelo F6Hs eram similares às feitas pelo controle peso e distintas do controle de toxicidade. Assim, concluiu-se que o F_s não apresenta efeito tóxico direto, apenas compressivo. Esses dados foram corroborados pelo estudo integrado e comparativo, reforçando nossas conclusões. A análise conjunta dos dados mostrou que o F 6Hs é um produto com melhores propriedades como substituto vítreo de longo prazo do que o PFOC, porque, ao contrário deste último, não apresentou efeito tóxico e, por ter um menor peso específico, gerou uma menor ação compressiva sobre as células estudadas / Abstract: Perfluorocarbon liquids (PFCLs) are used in eye surgeries, not only as an intraoperative tool, but also as intraocular tamponading agents. However, some authors state that perfluoroctane (PFOC), a type of PFCL, may cause inflammatory reactions and damage the retina. In an attempt to avoid these effects, semifluorinated alkanes (SFA) were developed as long-term vitreous replacements. Therefore, we comparatively assessed the potential toxic effect ofPFOC and perfluorohexyloctane (F6Hs), a type ofSFA, under controlled cell culture conditions. Vero cells were used for this purpose, as internationally recommended for cytotoxicity tests and studies with biomaterials. We analyzed indirect cytotoxicity, where the cells only come into contact with soluble elements that can be eliminated by PFOC and F_s, in addition to direct toxicity (contact toxicity) of PFOC or F6Hs to the cells. Indirect toxicity was assessed quantitatively by way of absorbance, indicating cell viability. In its turn, direct toxicity was evaluated by cytochemical, immunocytochemical and morphological methods. Cells embedded in a treatment-free culture medium were used as control- a positive control for toxicity (silicone bands), with an undeniably toxic effect on cells, and a weight control (glass slides) that produced a mechanical compression similar to the amount of PFOC or F 6Hs used in the experiment. Both direct and indirect toxicity were fIrst assessed separately and, later on, collectively and comparatively. Our results show that PFOC does not produce indirect toxicity, but it causes some toxic effects mediated by direct contact; and that F6H8 did not present direct toxicity. Differently from PFOC, cellular alterations caused by F6H8 were similar to those produced by the weight control and different from the toxicity controI. Therefore, our conc1usion is that F6H8 has a compressive rather than a direct toxic effect. These fIndings were corroborated by the integrated and comparative study, thus strengthening our conc1usions. The joint analysis of our data revealed that F6Hs has better properties as long-term vitreous replacement than PFOC, since it showed a lower specifIc weight and no toxic effect, which resulted in a lighter compressive action on the cultured cells / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Angelo Luiz Cortelazzo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:56:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Argento_MarcoAntonio_D.pdf: 15864964 bytes, checksum: a88c337703b051d7aa45a6a32fd60566 (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado

Orientador : Antonio Fernando Martorelli de Lima / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-28T04:58:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Palioto_DanielaBazan_D.pdf: 2504166 bytes, checksum: 52e0762b51537a46a411499bc0275b40 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O conhecimento das diferenças morfológicas e proliferativas de fibroblastos do ligamento periodontal (FLP) e fibroblastos gengivais (FG) são fundamentais para o melhor entendimento do papel destas células nos eventos de homeostasia, doença e regeneração periodontal. O primeiro objetivo desse estudo foi comparar as características morfológicas, o potencial proliferativo e a síntese protéica de FLP e de FG. Os fibroblastos foram cultivados pela técnica do explante a partir de fragmentos gengival e do ligamento periodontal de um mesmo paciente. As células foram isoladas e plaqueadas para análise em microscopia de contraste de fase e microscopia óptica. O índice de proliferação celular foi determinado por contagem automática de células nos dias 1, 4, 7, 15 e 21 e pelo ensaio de incorporação de bromodioxiuridina (BrdU). A síntese de proteína total foi verificada por eletroforese em gel de poliacrilamida e zimografia. Os resultados mostraram que FLP são maiores e mais alongados que os FG em condições de subconfluência e confluência celular. Os FLP proliferam mais rapidamente que os FG nos períodos de 1, 4 e 7 dias (P<0,05). Nos períodos subsequentes de 15 e 21 dias, não houve diferença estatística significativa entre o número de células do dois tipos celulares. O índice de incorporação de BrdU demonstrou potencial proliferativo de 65,1 .:t 11,0 % para FLP e 41,2.:t 17,1% para FG (P<0,05). A síntese de proteína total verificada em nosso experimento no período de 24 horas mostrou resultados similares para FLP e FG. Nossos resultados demonstraram que FLP e FG são diferentes na morfologia e na capacidade proliferativa, porém são semelhantes na síntese protéica. O segundo objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da matriz protéica do esmalte (EMD), do fator de crescimento insulina-símile (IGF-I) e da associação dos dois fatores sobre o potencial proliferativo e a capacidade de adesão e migração celular de fibroblastos do ligamento periodontal humano. Esse estudo foi conduzido utilizando a análise de proliferação por contagem automática de células (Coulter Counter_ / Abstract: The knowledge of morphological and proliferative differences between Gingival Fibroblasts (GF) and Periodontal Ligament Fibroblast (PDL) is essential to understand the role of each cell on the homeostasis, disease process and regeneration Df the periodontium. The first objective of this study was to compare the PDL and GF morphology, proliferation rate and protein synthesis. PDL and GF were explanted from tissues Df the same patients. To characterize and compare the cells morphology, PDL and GF were plated for optical and phase contrast microscopy. The proliferation rates were determined by automated count at days 1, 4, 7, 15 and 21, and by Bromodeoxyuridine Labelling Index (BrdU). The total protein content was analyzed by means of electrophoresis in 10% polyacrylamide gel and zimography containing gelatin as substrate. PDL were greater and more elongatOO than GF in subconfluence and confluence conditions. The proliferative rate Df PDL was higher than GF at 1, 4, and 7 days (P < 0.05). At 15 and 21 days there was no statistically significant difference between cells number. The BrdU Index demonstrated a proliferative potential Df 65.1 ! 11.0 % for PDL and 41.2 :t 17.1 % for GF (P < 0.05).The synthesis of protein in a period of 24 hours was similar for both PDL and GF. Our results demonstrated that PDL and GF are different in morphology and in proliferative capacity, however, they do not differ in protein synthesis. The second objective of the present study was to evaluate the effects of the enamel matrix protein (EMD) the effects of Insulin growth factor-I (IGF-I) and the association of the these two factors on periodontal ligament fibroblasts. The study was based on the proliferation rate, and cellular attachment and migration. The proliferation rate was determined by counting the cells afier 1, 3, 7 and 10 days with the help of a automated counter (Coulter Counter). The cellular attachment was analyzed by means of colorimetric assays. Migration assays was performed in Boyden chambers for a period of 4h and analyzed by means of colorimetric assays. EMD has significantly raised the proliferation rate from a minimum concentration of 50 uglml up to maximum concentration of 200 uglml in a 24h period. The proliferation rate continuing to be raised in a period of 3,7 and 10 days (P < 0.05). IGF-I has not altered the proliferation rate at any concentration. The association of EMD + IGF-I raised the proliferation rate independently of the concentration. However, the association has not resulted on further significant effect when compared to the use of EMD alone. The cellular attachment and migration was not altered by EMD, IGF-I or EMD + IGF-I. Our results showed that EMD increased the proliferation rate of PDL but did not improve cellular attachment and migration. IGF-I did not raise neither the proliferation rate no r the cellular attachment and migration and did not have any additional effect on the EMD alone / Doutorado / Periodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:01:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8542_1.pdf: 3548292 bytes, checksum: 02ac2525538b75fe919202b0e18f224b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / O laser possui características físicas que favorecem uma interação específica com os tecidos biológicos. Para avaliar a sua influência sobre a taxa de proliferação, células oriundas do carcinoma epidermóide de laringe (H.Ep-2), in vitro, foram irradiadas com 685 nm e 830 nm, usando-se doses terapêuticas de 0,5 e 1,7 J/cm2. Oito protocolos foram estudados e observados em cinco tempos distintos (T0h, T6h, T24h, T48h e T72h). Foram preparadas 40 microplacas contendo 200 &#956;l de suspensão celular, com 105 células/ml, em cada poço. Destas, 20 microplacas foram mantidas em nutrição ideal (10% SBF) e as outras 20 microplacas em déficit nutricional (5% de SBF). Ao final das 72 horas do experimento, todos os grupos apresentaram aumento na taxa de proliferação, tanto nas culturas em nutrição padrão quanto nas culturas em déficit nutricional. Das culturas em déficit nutricional, a que recebeu 685 nm e 0,5 J/cm2 apresentou a menor curva de crescimento, enquanto todas as outras tiveram um desenvolvimento semelhante. Independente da dose utilizada, as culturas mantidas em nutrição padrão e irradiadas com 830 nm apresentaram as maiores taxas de proliferação. Comparando-se os dois comprimentos de onda, observou-se diferença significativa apenas entre as células mantidas com 10% SBF, irradiadas com 830 nm e 1,7 J/cm2 (p<0,001). De maneira geral, analisando-se todas as curvas de crescimento, as culturas que receberam as menores doses responderam mais rapidamente à indução de proliferação, enquanto que a luz infravermelha apresentou os melhores resultados. Comparando-se os grupos irradiados aos seus respectivos controles, não houve diferença estatística significativa. Sob os parâmetros estudados, não se pode afirmar que a laserterapia altere a taxa de proliferação de células H.Ep-2 in vitro

A Terapia Fotodinâmica (TFP) é uma técnica para tratamento de câncer que usa um fotossensibilizador (FS) na presença de luz e oxigênio gerando espécies altamente reativas de oxigênio que levam as células tumorais à morte. <br />Neste trabalho foi realizado um estudo comparativo com três FSs: Photogem&reg; (PG), um derivado de hematoporfirina que está sendo usado em TFD no Brasil; Photodithazine&reg; (PZ), um derivado hidrossolúvel de mono-L-aspartil clorina, que está na fase clínica para aprovação e Hipericina (HY), um pigmento fotoativo encontrado na planta Hypericum perforatum e usado na medicina popular que está sendo considerado como um promissor agente fotodinâmico para o tratamento de tumores. Este estudo utilizou uma Hipericina sintetizada no Brasil e diversos parâmetros para comparar os três FSs: a concentração inibitória média (IC50) em linhagens celulares; a constante de velocidade de fotoxidação da albumina de soro bovino na presença dos FSs e luz determinada pelo decréscimo na fluorescência da BSA em 340 nm; a fotoxidação do ácido úrico acompanhada pelo decréscimo da banda característica do ácido úrico em 290 nm após irradiação na presença dos FSs como uma estimativa indireta do rendimento quântico de formação de oxigênio singlete (&Delta;&Phi;); o rendimento quântico de fluorescência utilizando rodamina B como padrão; a acumulação dos FSs em células em função do tempo de incubação e a estimativa da quantidade de radicais livres formados após irradiação através da técnica de captura de spins. Todos os resultados obtidos evidenciam uma maior eficiência fotodinâmica da HY seguida pelo PZ e depois por Photogem e, portanto sugerem a Hipericina como o FS de maior potencial para utilização em Terapia Fotodinâmica. / Photodynamic Therapy (PDT) is a technique for the cancer treatment that uses a photosensitizer (FS) in the presence of light and oxygen which combined are able to generate highly reactive oxygen species that lead to tumor cells death. <br />In this investigation, a comparative study with three FSs: Photogem &reg; (PG), a hematoporphyrin derivative being used in PDT in Brazil; Photodithazine &reg; (PZ), a soluble derivative of mono-L-aspartyl chlorin, which is in clinical phase for approval and Hypericin (HY), a photoactive pigment found in the plant Hypericum perforatum and used in popular medicine that is being considered as a promising agent for photodynamic treatment of tumors. The present study used a Hypericin synthesized in Brazil and several parameters to compare these three FSs: the mean inhibitory concentration (IC50) in cell lines; the rate constant for the photooxidation of bovine serum albumin in the presence of light and the FSs determined by the decrease in the fluorescence of BSA at 340 nm; the photooxidation of uric acid assessed by the decrease of the characteristic band of uric acid at 290 nm after irradiation in the presence of the FSs as an indirect estimate of the quantum yield of formation of singlet oxygen (&Delta;&Phi;); the quantum yield of fluorescence using rhodamine B as a standard; the accumulation of FSs in cells as a function of the incubation time, and the estimative of the produced free radicals after irradiation by the technique of spin trapping. All the results show a higher photodynamic efficiency of HY followed by PZ and then by Photogem suggesting Hypericin as the FS with the greatest potential for use in Photodynamic Therapy.

Os venenos de serpentes são complexas misturas de proteínas e peptídeos que apresentam uma variedade de atividades biológicas. Estudos apontam para uma rica diversidade de moléculas bioativas de baixa massa molecular nos venenos, como a crotamina, miotoxina A, peptídeos potenciadores de bradicinina (BPPs) inibidores do tipo Kunitz de serinopeptidases e tripeptídeos inibidores de metalopeptidases. O interesse nestas moléculas está relacionado ao potencial uso como agentes terapêuticos contra diversas patologias, como distúrbios da coagulação e modulação da atividade de metalopeptidases, moléculas estas envolvidas com tumorigenêse e outros processos patológicos como inflamação crônica e distúrbios neurológicos. O veneno da serpente Bitis gabonica rhinoceros provoca alterações fisiopatológicas como severa desordem na coagulação sanguínea e danos teciduais seguidos de necrose. No presente estudo foram isoladas e caracterizadas metalopeptidases e serinopeptidases, além de componentes de baixa massa molecular como inibidor do tipo Kunitz e BPPs. Estes peptídeos foram testados quanto a sua capacidade inibitória frente as peptidases endógenas e sequenciados por espectrometria de massa. Os nossos dados mostram que as peptidases isoladas degradam caseína e não tem atividade sobre colágeno. A serinopeptidase tem atividade &beta;-fibrinogenolítica e o inibidor tipo Kunitz isolado apresenta maior capacidade de inibir a quimotripsina, com valor de Ki= 0,07 &mu;M, mostrando-se um promissor substituto ao fármaco aprotinina. Este peptídeo apresentou também atividade citotóxica em células B16F10 e tênue atividade antimicrobiana. Dentre os BPPs identificados, o peptídeo que possui sequência não canônica apresentou a capacidade de potencializar a ação da bradicinina tanto em ensaio edematogênico quanto de inibição da atividade enzimática da enzima conversora de angiotensina. Esses resultados indicam o potencial de peptídeos de venenos animais para o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos para o tratamento de enfermidades como hipertensão e distúrbios de coagulação. / Snake venoms are complex mixtures of proteins and peptides with a wide array of activities. Some studies point towards a vast diversity of low molecular mass bioactive molecules in venoms such as crotamine, myotoxin A, bradykinin potentiating peptides (BPPs), Kunitz type serine peptidase inhibitors and tripeptides inhibiting metallopeptidases. The interest on these molecules is related to their potential use as therapeutic drugs against several pathologies such as coagulation disturbs and modulation of the activity of metallopeptidases, involved in tumorigenesis and other disease like chronical inflammation and neurological disorders. The venom of Bitis gabonica rhinoceros promotes severe blood clotting disorders and tissular damages followed by necrosis. In the present study we isolated and characterized metallo and serine-peptidases, as well as as low molecular mass components such as Kunitz inhibitors and BPPs. Those peptides were assayed for their ability to inhibit the venom ednogenous peptidases and were sequenced by mass spectrometry. Our data indicate that the isolated peptidases hydrolyze casein, but not gelatin, indicating that they have no activity on collagen. The isolated serine protase has &beta;-fibrinogenolytic activity and is not inhibited by the endogenous Kunitz peptide isolated from the venom. The Kunitzlike peptide inhibits preferentially chymotrypsin with a Ki of 0.07 &mu;M and appears as a promising substitute for the commercial drug aprotinin. Among the three bradykinin potentiating peptides, two displayed non-canonical sequences, a fact that might represent an interesting field for new studies for the development of new anti-hypertensives. Although displaying mutations in highly conserved regions, the non-canonical BPP potentialized bradykinin in both edematogenic and angiotensin converting enzyme inhibition assays. These results indicate the potential of animal venom peptides for the development of new drugs against Diseases such as hypertension and coagulopathies.

Os venenos de serpentes são complexas misturas de proteínas e peptídeos que apresentam uma variedade de atividades biológicas. Estudos apontam para uma rica diversidade de moléculas bioativas de baixa massa molecular nos venenos, como a crotamina, miotoxina A, peptídeos potenciadores de bradicinina (BPPs) inibidores do tipo Kunitz de serinopeptidases e tripeptídeos inibidores de metalopeptidases. O interesse nestas moléculas está relacionado ao potencial uso como agentes terapêuticos contra diversas patologias, como distúrbios da coagulação e modulação da atividade de metalopeptidases, moléculas estas envolvidas com tumorigenêse e outros processos patológicos como inflamação crônica e distúrbios neurológicos. O veneno da serpente Bitis gabonica rhinoceros provoca alterações fisiopatológicas como severa desordem na coagulação sanguínea e danos teciduais seguidos de necrose. No presente estudo foram isoladas e caracterizadas metalopeptidases e serinopeptidases, além de componentes de baixa massa molecular como inibidor do tipo Kunitz e BPPs. Estes peptídeos foram testados quanto a sua capacidade inibitória frente as peptidases endógenas e sequenciados por espectrometria de massa. Os nossos dados mostram que as peptidases isoladas degradam caseína e não tem atividade sobre colágeno. A serinopeptidase tem atividade &beta;-fibrinogenolítica e o inibidor tipo Kunitz isolado apresenta maior capacidade de inibir a quimotripsina, com valor de Ki= 0,07 &mu;M, mostrando-se um promissor substituto ao fármaco aprotinina. Este peptídeo apresentou também atividade citotóxica em células B16F10 e tênue atividade antimicrobiana. Dentre os BPPs identificados, o peptídeo que possui sequência não canônica apresentou a capacidade de potencializar a ação da bradicinina tanto em ensaio edematogênico quanto de inibição da atividade enzimática da enzima conversora de angiotensina. Esses resultados indicam o potencial de peptídeos de venenos animais para o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos para o tratamento de enfermidades como hipertensão e distúrbios de coagulação. / Snake venoms are complex mixtures of proteins and peptides with a wide array of activities. Some studies point towards a vast diversity of low molecular mass bioactive molecules in venoms such as crotamine, myotoxin A, bradykinin potentiating peptides (BPPs), Kunitz type serine peptidase inhibitors and tripeptides inhibiting metallopeptidases. The interest on these molecules is related to their potential use as therapeutic drugs against several pathologies such as coagulation disturbs and modulation of the activity of metallopeptidases, involved in tumorigenesis and other disease like chronical inflammation and neurological disorders. The venom of Bitis gabonica rhinoceros promotes severe blood clotting disorders and tissular damages followed by necrosis. In the present study we isolated and characterized metallo and serine-peptidases, as well as as low molecular mass components such as Kunitz inhibitors and BPPs. Those peptides were assayed for their ability to inhibit the venom ednogenous peptidases and were sequenced by mass spectrometry. Our data indicate that the isolated peptidases hydrolyze casein, but not gelatin, indicating that they have no activity on collagen. The isolated serine protase has &beta;-fibrinogenolytic activity and is not inhibited by the endogenous Kunitz peptide isolated from the venom. The Kunitzlike peptide inhibits preferentially chymotrypsin with a Ki of 0.07 &mu;M and appears as a promising substitute for the commercial drug aprotinin. Among the three bradykinin potentiating peptides, two displayed non-canonical sequences, a fact that might represent an interesting field for new studies for the development of new anti-hypertensives. Although displaying mutations in highly conserved regions, the non-canonical BPP potentialized bradykinin in both edematogenic and angiotensin converting enzyme inhibition assays. These results indicate the potential of animal venom peptides for the development of new drugs against Diseases such as hypertension and coagulopathies.

A Terapia Fotodinâmica (TFP) é uma técnica para tratamento de câncer que usa um fotossensibilizador (FS) na presença de luz e oxigênio gerando espécies altamente reativas de oxigênio que levam as células tumorais à morte. <br />Neste trabalho foi realizado um estudo comparativo com três FSs: Photogem&reg; (PG), um derivado de hematoporfirina que está sendo usado em TFD no Brasil; Photodithazine&reg; (PZ), um derivado hidrossolúvel de mono-L-aspartil clorina, que está na fase clínica para aprovação e Hipericina (HY), um pigmento fotoativo encontrado na planta Hypericum perforatum e usado na medicina popular que está sendo considerado como um promissor agente fotodinâmico para o tratamento de tumores. Este estudo utilizou uma Hipericina sintetizada no Brasil e diversos parâmetros para comparar os três FSs: a concentração inibitória média (IC50) em linhagens celulares; a constante de velocidade de fotoxidação da albumina de soro bovino na presença dos FSs e luz determinada pelo decréscimo na fluorescência da BSA em 340 nm; a fotoxidação do ácido úrico acompanhada pelo decréscimo da banda característica do ácido úrico em 290 nm após irradiação na presença dos FSs como uma estimativa indireta do rendimento quântico de formação de oxigênio singlete (&Delta;&Phi;); o rendimento quântico de fluorescência utilizando rodamina B como padrão; a acumulação dos FSs em células em função do tempo de incubação e a estimativa da quantidade de radicais livres formados após irradiação através da técnica de captura de spins. Todos os resultados obtidos evidenciam uma maior eficiência fotodinâmica da HY seguida pelo PZ e depois por Photogem e, portanto sugerem a Hipericina como o FS de maior potencial para utilização em Terapia Fotodinâmica. / Photodynamic Therapy (PDT) is a technique for the cancer treatment that uses a photosensitizer (FS) in the presence of light and oxygen which combined are able to generate highly reactive oxygen species that lead to tumor cells death. <br />In this investigation, a comparative study with three FSs: Photogem &reg; (PG), a hematoporphyrin derivative being used in PDT in Brazil; Photodithazine &reg; (PZ), a soluble derivative of mono-L-aspartyl chlorin, which is in clinical phase for approval and Hypericin (HY), a photoactive pigment found in the plant Hypericum perforatum and used in popular medicine that is being considered as a promising agent for photodynamic treatment of tumors. The present study used a Hypericin synthesized in Brazil and several parameters to compare these three FSs: the mean inhibitory concentration (IC50) in cell lines; the rate constant for the photooxidation of bovine serum albumin in the presence of light and the FSs determined by the decrease in the fluorescence of BSA at 340 nm; the photooxidation of uric acid assessed by the decrease of the characteristic band of uric acid at 290 nm after irradiation in the presence of the FSs as an indirect estimate of the quantum yield of formation of singlet oxygen (&Delta;&Phi;); the quantum yield of fluorescence using rhodamine B as a standard; the accumulation of FSs in cells as a function of the incubation time, and the estimative of the produced free radicals after irradiation by the technique of spin trapping. All the results show a higher photodynamic efficiency of HY followed by PZ and then by Photogem suggesting Hypericin as the FS with the greatest potential for use in Photodynamic Therapy.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-18Bitstream added on 2014-06-13T20:17:12Z : No. of bitstreams: 1 tagliani_mm_me_arafo.pdf: 1416082 bytes, checksum: 174957378ca932650c1583b4139e4afe (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Na biofotônica, lasers e LEDs (light-emitting diodes) têm sido empregados na bioestimulação de células e tecidos. LED é um diodo semicondutor que, quando energizado, produz luz de espectro estreito, em forma de eletroluminescência. Experimentos in vitro utilizando LEDs com diferentes comprimentos de onda demonstraram a ocorrência de significativo estímulo no crescimento celular, efeito antiinflamatório e antimicrobiano, além do metabolismo celular aumentado. Na odontologia, a aplicação clínica de lasers e LEDs em terapias objetivando a redução da hipersensibilidade dentinária tem se mostrado efetiva, através de aparente síntese e deposição de dentina reacional. Entretanto, não há trabalhos na literatura que demonstrem o efeito do LED sobre a cultura de odontoblastos, tampouco dados científicos caracterizando a relação entre LED e redução da hipersensibilidade dentinária. Assim, o objetivo desta pesquisa foi investigar a ação do LED em 630 nm sobre o metabolismo de células de linhagem odontoblástica MDPC-23. Para isto, as células foram descongeladas, cultivadas e plaqueadas. Então, o LED foi aplicado diretamente sobre estas células, em diferentes tempos (20, 40, 80 e 240”) e condições de estresse (2 ou 10% de SFB), de acordo com cada grupo experimental, por três dias consecutivos, através de um dispositivo de irradiação denominado “LEDTable”. Posteriormente, foram avaliados a viabilidade celular, através do teste MTT, e a morfologia celular, por microscopia eletrônica de varredura. Os dados obtidos nos testes de MTT foram submetidos ao teste de Mann-Whitney para a comparação das concentrações de soro fetal bovino em cada dose de energia individualmente. Foi utilizado também o teste de Kruskal-Wallis para comparar as diferentes doses de energia em cada concentração de soro fetal bovino. Os dados foram analisados estatisticamente... / Lasers and LEDs (light-emitting diodes) have been used for biostimulation of cells and tissues. LED is a semiconductor diode which produces limited spectrum visible light. In vitro experiments using LEDs at different wavelengths have shown an enhancement of cell growth, anti-inflammatory and antibacterial effects and increased cell metabolism. In dentistry, the use of lasers and LEDs in therapies to reduce dental hypersensitivity has been proved to be clinically effective, through the synthesis and deposition of reactionary dentin. However, there are no studies that demonstrate the effect of LED therapy on odontoblast-like cells and there is no scientific data linking LED irradiation to dental hypersensitivity reduction. For this reason, the aim of this study was to investigate the effect of LED 630 nm irradiation on MDPC-23 (odontoblast-like) cells metabolism. Cells were seeded on 24-wells plates and cultured. Then the LED light was directly applied to these cells under different experimental conditions (time and % of BFS), according to each experimental group, for three following days. A device named LEDTable provided red LED irradiation. Then, cell viability (MTT Assay) and cell morphology (SEM) were evaluated. The cell viability results were first submitted to Mann-Whitney tests in order to compare the fetal bovine serum concentrations and energy dose, and then Kruskal-Wallis test was performed to compare different energy doses in every serum concentration. Data were statistically analyzed (p=0,05). Results show a biostimulation of cells kept under normal culture conditions and submitted to low LED irradiation dose (1 J/cm2). However, under nutritional stress, cells required higher energy dose to be stimulated, such as 4 J/cm2. On the other hand, a 8 J/cm2 dose did not affect the metabolism of this immortalized cell line. The SEM analysis showed a higher number of cells attached... (Complete abstract click electronic acess below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-21Bitstream added on 2014-06-13T18:56:50Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_ics_me_sjc.pdf: 668962 bytes, checksum: 9fcef8d37972e56096faee53f7658608 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O álcool atua no organismo podendo trazer várias doenças, entretanto sua ação no tecido ósseo ainda apresenta resultados controversos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do consumo crônico de álcool a 20% em osteoblastos obtidos da calvária de ratos recém-nascidos. Foram utilizadas 18 ratas prenhas, tratadas durante a gestação e divididas em grupos conforme a dieta: álcool a 20%, grupo isocalórico, e controle. Aos três dias de vida, os recém-nascidos foram eutanasiados para remoção da calvária e isolamento das células por meio de digestão enzimática sequencial, sendo estas cultivadas por períodos de até 14 dias. Foram realizados testes para avaliar o efeito do álcool na adesão, proliferação e viabilidade celular, no conteúdo de proteína total, na atividade da fosfatase alcalina e nas formações nodulares de matriz mineralizada. Os resultados mostraram que em geral, a adesão celular não foi influenciada pelo consumo crônico de álcool, já que não foi demonstrada diferença estatística entre os grupos. Contudo, o grupo álcool apresentou aumento significativo na proliferação, exceto no período de 1 dia, e nas formações nodulares. Com relação a viabilidade celular, apenas no período de 3 dias houve aumento significativo de células no grupo álcool. Os valores representativos de proteína total variaram dependendo do período estudado, sendo maior no grupo controle com 7 dias, porém aos 14 dias houve maior média nos grupos isocalórico e álcool. Quanto à fosfatase alcalina observamos aumento de sua atividade nos grupos álcool e isocalórico em todos os períodos. Concluímos que nesta metodologia, o álcool não apresentou efeito deletério para os osteoblastos, talvez pelo curto tempo de administração / The alcohol affects the organism and may cause various diseases, even though its effects on bone metabolism are still controversial. The purpose of this paper was to evaluate the effects of alcohol 20% chronic consumption in osteoblasts obtained from the calvaria of newborn mice. The alcohol was administrated to pregnant mice throughout the entire pregnancy. For that purpose, 18 mice were used, divided in groups according to the diet: 6 receiving alcohol 20%, 6 belonging to the isocaloric group and 6 receiving water and ration at will. At three days of life, the newborns were euthanized so as to remove the calvaria and start the cell culture procedures. The osteoblastic lineage cells were isolated by sequential enzymatic digestion and the osteoblasts were cultivated for periods of 14 days or less. Tests were performed on the culture slides to evaluate the effect of alcohol based on adhesion, proliferation and cellular viability on total protein content, alkaline phosphatase activity and nodule formation of mineralized matrix. The results have shown that the alcohol group presented significant increase in proliferation, except for the period of one day, and in nodule formation. A significant increase in the alcohol group concerning cellular viability was only observed in the period of 3 days and there was no statistic difference in adhesion. The total protein content was higher in the control group in 7 days, and the average higher in the isocaloric and alcohol groups in 14 days, according to the periods of time studied. An increase in the activity of the alkaline phosphatase was observed in the isocaloric and alcohol groups in all periods of evaluation. By this methodology, we have concluded that the alcohol has not presented any deleterious effect on osteoblasts, possibly due to the short period of administration