Un naevus congénital mélanocytique (CMN) est une prolifération bénigne de mélanocytes cutanés, cliniquement apparente à la naissance. On en retrouve chez approximativement 1% des nouveau-nés. Les CMN de taille large (LCMN), définis par un diamètre le plus large de plus de 20 cm, affectent environ 1 nouveau-né sur 20.000.<p>Puisque les LCMN ont une propension à dégénérer en tumeur mélanomateuse (dans 2 à 5% des cas) et que leur grande taille apporte un contingent cellulaire abondant, ils représentent un bon modèle d’étude des étapes initiales de la mélanotumorigénèse. Nous disposions précisément de cultures primaires de mélanocytes établies à partir de vingt-sept cas de naevi congénitaux (24 de taille large et 3 de taille moyenne (MCMN)) curetés pour la plupart chez des enfants en période néonatale.<p>La première phase de ce projet a permis d’identifier un mécanisme alternatif d’activation de l’oncogène BRAF dans deux cas de LCMN. Nous avons en effet mis en évidence dans ces deux cas de LCMN une translocation chromosomique entrainant une activation constitutive de BRAF par le biais d’une perte de son domaine auto-inhibiteur. Si des mutations activatrices de BRAF sont fréquemment rencontrées dans les tumeurs mélanocytiques, elles restent rares dans les naevi congénitaux et les mélanomes survenant dans des zones non exposées au soleil. Les translocations chromosomiques décrites ici pourraient représenter un mécanisme moléculaire récurrent d’activation de l’oncogène BRAF dans ces groupes de tumeurs mélanocytiques.<p>La seconde phase du projet consistait à réaliser sur notre série de 27 L/MCMN des analyses caryotypiques, des analyses « mutationnelles » (pour rechercher la présence de mutations activatrices des oncogènes BRAF et NRAS) et des études d’expression différentielle.<p>A l’inverse de ce que l’on observe dans le mélanome malin, les anomalies chromosomiques sont rares et isolées, reflétant très probablement le caractère bénin de ces lésions.<p>La mutation BRAFV600E a été mise en évidence pour 4/27 CMN (15%), des mutations du gène NRAS pour 19/27 (70%), soit une situation en miroir de ce que l’on observe dans les CMN de petite taille (SCMN) et dans les naevi acquis bénins, confirmant les résultats obtenus par d’autres. <p>L’étude du profil d’expression transcriptionnelle révèle des dysrégulations communes à l’ensemble des échantillons naeviques, comme une franche augmentation d’expression du transcrit de l’Ostéopontine.<p>Le profil d’expression des échantillons de CMN BRAFV600E semble refléter une réduction de la synthèse et de la distribution de pigment et une activation de gènes impliqués dans la réponse cellulaire aux dommages à l’ADN. Comme des altérations des mécanismes de la pigmentation peuvent générer des dommages oxydatifs au niveau de l’ADN, l’activation de la réponse cellulaire aux dommages à l’ADN pourrait refléter la capacité des cellules naeviques à se protéger contre le stress cellulaire. Enfin, on observait aussi une expression élevée de gènes médiant la chimiorésistance dans différents cancers, ce qui pourrait éventuellement jouer un rôle dans l’inefficacité caractéristique et bien connue de la chimiothérapie dans le mélanome malin.<p> / Doctorat en Sciences médicales / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Les aquaporines (AQPs) sont des petites protéines formant des canaux hydriques àtravers les membranes cellulaires. Les AQPs 0, 1, 2 ,4 ,5 ,6 et 8 assurent le transport sélectif de l'eautandis que les AQPs 3, 7, 9 et 10 permettent également le passage du glycérol. Nous avons étudié leurexpression dans l'épiderme, la couche supérieure de notre peau supposée imperméable. Dans lesmélanocytes, des cellules dendritiques responsables de la pigmentation, seule l'AQP1 est exprimée.Nous avons montré que les kératinocytes, les cellules majoritaires de l'épiderme, expriment enprolifération les AQPs 3 et 10, alors que les kératinocytes différenciés expriment les AQPs 3 et 9. Lalocalisation de l'AQP3 a été précédemment rapportée à la membrane plasmique des kératinocytes, de lacouche basales à la couche épineuse. Nous avons localisé l'AQP9 dans les kératinocytes différenciés dela couche granuleuse au contenu riche en glycérol et réduit en eau. De fait nous pensons que l'AQP9 ysert de transporteur de glycérol. Enfin contrairement à d'autres auteurs, nous n'avons pu mettre enévidence de lien entre prolifération tumorale et expression des aquaporines.

La Biometrogie cutanée est un nouveau spectre de différentes méthodes d'évaluation qui permettent de mesurer les différents paramètres de la peau même en cas des petites modifications. Dans la première partie de nos travaux, nous avons étudié différentes capacités de ces méthodes afin de les corréler avec d'autres données cliniques et histologiques. Ces données nous ont encouragés à découvrir de plus en plus la pigmentation de la peau qui est un peu plus compliquée que les autres paramètres. Par conséquent, sur la deuxième partie, nous nous sommes concentrés sur la biologie cutanée en particulier sur la morphologie et l'activité des mélanocytes. Les travaux de cette thèse ont porté sur les effets de la phénytoïne sur les mélanocytes humains afin de savoir si cette molécule peut être un traitement efficace pour le vitiligo. Dans un premier temps, nous avons évalué deux concepts : tout d'abord et pour la première fois, les effets in vitro des différentes concentrations de phénytoïne sur la morphologie et l'activité des mélanocytes humains, et parallèlement, nous avons mis en place la méthode du transfert de mélanosomes sur les mélanocytes et des kératinocytes humains. Dans un deuxième temps, nous avons procédé à l'évaluation in vivo de la forme topique à différentes concentrations à l'aide d'une étude in vivo sur des cochons d'Inde noirs. Notre travail constitue une étape clé dans la compréhension des mécanismes d'action de la phénytoïne sur les mélanocytes humains qui contribuerait à l'amélioration des pratiques cliniques et donc à la qualité de vie des patients souffrant de troubles pigmentaire. / Cutaneaous Biometrogy is a new vast spectrum of measuring methods wich provide the possibility to measure the différents parameteres of the skin even in the case of small changes. In the first part of this work, we studied various capabilities of these methods in order to correlates them with other clinical and histological data. These data encouraged us to discover more and more the skin pigmentation which is a little more complicated than the other parameters.So, on the second part, we concentrated more on cutaneaous biology particularily on the melanocytes morphology and activity.The work of this thesis focused on the effects of phenytoin on human melanocytes in order to know if this molecule can be eventually an available treatment for vitiligo.Fisrt, we evaluated two concepts : for the first time we evaluated the in vitro effects of the different concentrations of phenytoin on the morphology and activity of human melanocytes and, in parallel, we implemented the method of transfert of melanosomes on human melanocytes and keratinocytes.In a second step, the topical form of phenytoin at different concentrations was evaluated through an in vivo study on black ginea pigs.Our work is a key step on understanding the mechanisms of avtion of phenytoin on human melanocytes which would contribute to the improvement of clinical practices and therefore to the quality of life of patients suffering from depilatory disorders.