Made available in DSpace on 2015-03-26T13:52:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1165886 bytes, checksum: 9908ee426c5cfd8f17fea52b7f132085 (MD5) Previous issue date: 2011-08-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The basidiospores of Pisolithus show low germination percentages despite possessing conspicuous reserve compounds for the provision of carbon and energy during the initial growth of the fungal hyphae. The highly hydrophobic and resistant cell wall of the basidiospore can contribute to basidiospores recalcitrance to germination. Thus, this study aimed at demonstrating the presence of glycogen, polysaccharides, lipids, RNA and proteins in mature basidiospores of Pisolithus microcarpus, determining the fatty acid profile of the basidiospores of ectomycorrhizal fungi, and evaluating methods of permeabilization of the basidiospore cell wall. Hystochemical techniques used in the detection of different reserve compounds in the basidiospores revealed the presence of glycogen, polysaccharides, proteins, RNA, lipids, lipoproteins, neutral lipids, and acidic lipids. The presence of 11 different fatty acids in the basidiospores of P. microcarpus, nine in those of Scleroderma sp. and 16 in the basidiospores of Suillus sp. was observed in our study. The most abundant fatty acids in the fungal basidiospores were 18:1w9c and 16:0. Besides oleic and palmitic acids, the following fatty acids showed significant contents: 16:1w5c 16:0, 18:1w5c for P. microcarpus; 12:1 AT11-12, 18:00 for Scleroderma sp.; 15:00 and 18:00 for Suillus sp. The fatty acid profile of the basidiospores of P. microcarpus showed 36.8 % similarity to that of Scleroderma sp. The fatty acid profile of these two species showed a similarity of only 5.2 % compared to that of Suillus sp. The use of chitinase, cellulase, and lyticase for 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, and 24 h, at 30 °C, under stirring at 80 rpm, and of sulfuric acid at concentrations of 5, 10, 25, 50 % (v / v) for 5, 10, 25, 50 or 80s did not promote cell wall permeability. The treatment with sodium hypochlorite at concentrations of 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 90 and 100 % of original concentration of active chlorine (20 g L-1) and contact times of 5, 10 , 20, 30, 40, 50, 60, 70, and 80s promoted the permeabilization of the basidiospore cell wall as evaluated by the staining of internal fatty acids with Sudan Black B. The highest percentage of permeabilized basidiospores, 97 %, was obtained with the treatment with hypochlorite at 100 % for 80s. However, the viability tests and the observation of basidiospores by scanning electron microscopy revealed the loss of viability and cell wall integrity. The exposure of the basidiospores to sodium hypochlorite at 5 % for 40s promoted the highest percentages of permeabilized basidiospores, 83 %, without loss of viability and morphological damages to the spore cell wall. These results contribute to the understanding of the variables that may play a role in the process of germination of basidiospores of P. microcarpus and allow the development of strategies to improve the isolation of monokaryons in vitro. / Os basidiósporos Pisolithus apresentam baixas percentagens de germinação, embora disponham de compostos de reserva para a provisão de carbono e energia durante o crescimento inicial das hifas. Neles, a parede celular altamente hidrofóbica e resistente pode contribuir para a recalcitrância à germinação. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo demonstrar a presença de glicogênio, polissacarídeo, lipídeos, RNA e proteínas em basidiósporos maduros de Pisolithus microcarpus, determinar o perfil de ácidos graxos de basidiósporos de fungos ectomicorrízicos e avaliar métodos de permeabilização da parede celular dos basidiósporos. As técnicas histoquímicas utilizadas na detecção de diferentes compostos de reserva nos basidiósporos evidenciaram a presença de glicogênio, polissacarídeos, proteínas, RNA, lipídeos totais, lipoproteínas, lipídeos neutros e lipídeos ácidos. Detectou-se a presença de onze ácidos graxos distintos nos basidiósporos de P. microcarpus, nove nos de Scleroderma sp. e dezesseis nos de Suillus sp. Os ácidos graxos mais abundantes nas estruturas fúngicas analisadas foram o 18:1w9c e o 16:0. Além do ácido oléico e ácido palmítico, destacaram-se os seguintes ácidos graxos: 16:1w5c, 18:1w5c para P. microcarpus; 12:1at11-12 e 18:00 para Scleroderma sp.; 18:00 e 15:00 para Suillus sp. O perfil de ácidos graxos dos basidiósporos de P. microcarpus apresentou similaridade de 36,8 % com o de Scleroderma sp. O perfil de ácidos graxos dessas duas espécies apresentou similaridade de somente 5,2 % em relação àquele de Suillus sp. O uso de quitinase, liticase e celulase por 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12 e 24 h, sob agitação a 80 rpm e a 30 °C, não resultou na permeabilização da parede celular dos basidiósporos. O tratamento dos basidiósporos com ácido sulfúrico nas concentrações de 5, 10, 25, 50 % (v/v), por 5, 10, 25, 50 ou 80 s, também não resultou na permeabilização dos basidiósporos. Os tratamentos com hipoclorito de sódio em concentrações de 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 90 e 100 % da concentração original de cloro ativo (20 g L- 1) e tempos de contato de 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 e 80 s promoveram a permeabilização da parede celular dos basidiósporos avaliada pela penetração do corante Negro Sudão B. A maior percentagem de basidiósporos permeabilizados, 97 %, foi obtida com o tratamento com hipoclorito a 100 % pelo tempo de 80 s. No entanto, os testes de viabilidade e a observação dos basidiósporos por microscopia eletrônica de varredura evidenciaram a perda da integridade da parede celular e da viabilidade dos esporos quando submetidos a esse tratamento. A exposição dos basidiósporos ao hipoclorito de sódio a 5 % pelo tempo de 40 s foi o tratamento que resultou em maiores percentagens (83 %) de basidiósporos permeabilizados, sem prejuízos na viabilidade e da morfologia desses propágulos. Os resultados obtidos contribuem para a compreensão das variáveis que atuam no processo de germinação dos basidiósporos de P. microcarpus e permitirão o desenvolvimento de estratégias visando melhorar a obtenção de monocários in vitro.

Orientador: Everlon Cid Rigobelo / Coorientador; Fernando Antonio de Ávila / Banca: Mariana Carina Frigieri / Banca: Leonardo Lucas Madaleno / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar a inoculação de micro-organismos encapsulados em mudas de frutíferas verificando a interação do inóculo com agentes encapsulantes como a argila e o alginato. O experimento foi realizado em um delineamento inteiramente casualizado, com cinco repetições, no esquema fatorial 3x2. Os tratamentos foram: controle, inóculo, argila, argila com inóculo, alginato e alginato com inóculo microbiano. As mudas foram mantidas em condições de viveiro durante um período de três meses. As análises realizadas nas plantas foram altura e diâmetro, matéria seca foliar e de raiz. As avaliações no solo foram teor de amônio e nitrato, atividade enzimática da desidrogenase, fosfato solúvel, carbono da biomassa microbiana e número total de bactérias. Nenhum tratamento promoveu o aumento de altura, diâmetro, matéria seca foliar e matéria seca de raiz nas mudas das frutíferas comparado com o tratamento controle. Os agentes encapsulantes promoveram um efeito significativo, nos teores de amônio e nitrato, na concentração de carbono da biomassa microbiana e no número total de bactérias nas mudas de araçá-boi. Paras a mudas de mamey, manga e pitanga não foram encontradas alterações significativas. Os resultados sugerem que os agentes encapsulantes utilizados como a argila e alginato na presença ou ausência de micro-organismos podem melhorar alguns parâmetros de solo, apesar de não terem promovido um maior crescimento vegetal. / Abstract: This study had as aim evaluate the inoculation of immobilized microorganisms at seedlings of fruit trees to verify interaction between encapsulating agents such as clay and alginate. The trial was carried out randomized design with five replicates at 3 x 2 factorial. The treatments were: control, inoculum, clay, clay plus inoculum, alginate and alginate plus microbial inoculum. The seedlings were kept at nursery conditions during three months. The analysis carried out at plants were shoot dry matter and root dry matter. The soil assessment were ammonium and nitrate content, dehydrogenase enzymatic activity, soluble phosphate, microbial biomass carbon bacteria total number. No treatment promoted the increase of plant height, diameter, shoot dry matter and root dry matter of the fruit trees compared to control. The encapsulating agents promoted significant effect at the ammonium and nitrate content at the carbon concentration and also at the bacteria total number at the araçá-boi seedlings. To mamey, manga and pitanga seedlings did not find significant changes. The results suggest that encapsulating agents used such as clay and alginate together with microorganisms or not might improve some soil parameters, even though, the plant growth had not been promoted. / Mestre

O lançamento indiscriminado nos corpos dágua de esgotos domésticos sem tratamento, ou mesmo tratados, mas sem desinfecção apropriada, contribui com quantidade significativa de organismos do chamado "grupo coliforme", entre os quais agentes específicos de doenças de veiculação hídrica podem estar presentes. A aplicação no solo de efluentes de esgotos domésticos devidamente tratados, ao invés de sua disposição direta em cursos dágua, além de ser uma maneira alternativa para disposição de resíduos e controle biológico de poluentes, constitui um modo adequado de fornecimento de nutrientes ao solo e plantas. Este trabalho teve como objetivo avaliar a redução de coliformes termotolerantes após aplicações no solo de efluente de esgoto doméstico tratado por um período de 60 dias, associando os valores obtidos ao adensamento de rizobactérias Pseudomonas fluorescens e Bacillus spp. presentes nas rizosferas de diferentes culturas. O experimento foi desenvolvido em área da Fazenda Piloto do Departamento de Ciências Agrárias da Universidade de Taubaté e o Delineamento Experimental constou de blocos casualizados com cinco tratamentos envolvendo o cultivo de aveia, cevada, triticale, feijão preto e solo sem cultivo (Testemunha), totalizando 20 parcelas de solo classificado como Latossolo Vermelho Amarelo Distrífico. Os resultados obtidos por meio de análises microbiológicas de amostras de solo rizosfórico e não rizosfórico apresentaram um maior adensamento de rizobactérias na rizosfera da aveia. Entretanto, a maior eficiência obtida na redução de coliformes termotolerantes foi alcançada nos tratamentos envolvendo feijão preto e solo sem cultivo. / The indiscriminate launching in the water courses of sewers domestic without treatment, or exactly treat, but without appropriate disinfection, contributes with significant amount of organisms of the called "coliform group", between which specific agents of illnesses of water propagation can be present. The application of the effluent in the ground, instead of its direct disposal in water courses, beyond being an alternative way for the disposal of residues and biological control of pollutants, constitutes an adequate way of supply of nutrients to the ground and plants. So, this work had as objective to evaluate the reduction of fecal coliforms, after controlled applications of effluent in ground cultivated, associating the values gotten to the increase of fluorescent rhizobacterias Pseudomonas and Bacillus spp. presents in the rhizospheres of different cultures. The project was developed in conditions of field in area of the Pilot Farm of Department of Agrarian Sciences of the University of Taubaté, city of Taubaté, SP. The Experimental Delineation consisted of some blocks, with five treatments composites for culture of annual species: Oats, Barley, Wheat, Black Beans and ground without culture (as Witness) and four repetitions, totalizing 20 ground parcels with area of 2m x 1m and space among them of 50cm. Controlled applications of effluent had been carried through in Red - Yellow Latossolo, in intervals of 20 days for a period of sixty days. From 60 days had been registered in all the treatments reduction of high values base 106 to high values base 103. One concludes that the technique of controlled application of effluent in ground cultivated revealed efficient in the reduction of fecal coliforms, however, for a conclusive evaluation of the capacity-support of the ground and performance of the rhizospheres of cultures, it becomes necessary the continuity of the experiment for a bigger period of applications, as well as, the job of other vegetal species in the treatment of domestic sewers.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O Brasil à um dos maiores produtores mundiais de banana (Musa sp.), sendo responsÃvel por 10% de toda a produÃÃo mundial (FAO, 2002). Nessa perspectiva, percebe-se a necessidade de incrementar a sua produÃÃo, e dentre as estratÃgias adotadas, pode-se antecipar a fase de aclimataÃÃo, por meio da associaÃÃo de mudas de bananeiras com fungos micorrÃzicos arbusculares. Os biofertilizantes comumente se referem ao efluente resultante da fermentaÃÃo aerÃbia ou anaerÃbia de produtos orgÃnicos puros ou complementados com produtos minerais. SÃo utilizados na agricultura para vÃrios fins, e sua aplicaÃÃo promove a melhoria das propriedades fÃsicas e quÃmicas e estimulando a atividade biolÃgica. Objetivou-se com o presente estudo avaliar o desenvolvimento de plantas de bananeiras submetidas à biofertirrigaÃÃo, aplicada em diferentes estÃdios de seu desenvolvimento, e da atividade da microbiota de um Cambissolo LatossÃlico EutrÃfico. O experimento foi conduzido em casa de vegetaÃÃo pertencente ao setor de Microbiologia do Solo do Departamento de CiÃncias do Solo da Universidade Federal do Cearà (UFC). O solo utilizado no experimento foi coletado em uma Ãrea de mata nativa, situada em Ãrea de cultivo comercial de bananeira, pertencente à Fazenda Frutacor Apodi, localizada no municÃpio de QuixerÃ, CearÃ. Foi considerado, para efeito de coleta, o solo a uma profundidade de 0 a 20 cm. Inicialmente, as amostras foram encaminhadas para o LaboratÃrio de Microbiologia do Solo do Departamento de CiÃncias do Solo, onde foi realizada anÃlise preliminar do solo para extraÃÃo e quantificaÃÃo das espÃcies de fungos micorrÃzicos arbusculares, que ocorriam de forma natural no solo. A anÃlise constou da extraÃÃo dos esporos, atravÃs da tÃcnica de peneiramento Ãmido (Gerdemann & Nicolson, 1963). O experimento constou de 12 tratamentos, com 09 repetiÃÃes; e 01 tratamento controle com 15 repetiÃÃes, totalizando 123 parcelas. Decorridos 30, 45 e 60 dias apÃs o plantio (DAP), foram retiradas 03 repetiÃÃes dos tratamentos, respectivamente, para avaliaÃÃo da colonizaÃÃo micorrÃzica radicular. No intervalo entre as etapas de plantio das mudas e inÃcio da aplicaÃÃo do biofertilizante, foi aplicada soluÃÃo nutritiva de Hewitt (1966) sem fÃsforo para todas as amostras, e para o tratamento controle (T13), foi aplicada soluÃÃo nutritiva completa com fÃsforo, semanalmente, atà 90 dias, apÃs aclimataÃÃo (Fase 1). A Fase 2, apÃs a aplicaÃÃo dos tratamentos supramencionados, constou da avaliaÃÃo das seguintes caracterÃsticas: crescimento, teor dos elementos minerais na planta, colonizaÃÃo micorrÃzica radicular (tÃcnica de Phillips & Hayman, 1970 e Giovanetti & Mosse, 1980), determinaÃÃo do carbono da biomassa microbiana (CBM) segundo Vance et al. (1987), a respiraÃÃo basal do solo (RBS), quantificaÃÃo de CO2 liberado em mg de C-CO2/100 cm3 de solo, durante o intervalo de tempo utilizado no monitoramento, e o quociente metabÃlico (qCO2) calculado pela razÃo entre a respiraÃÃo basal e a biomassa microbiana-C (Anderson & Domsch, 1978). O experimento foi implantado por meio de um delineamento estatÃstico inteiramente casualizado, em esquema fatorial 3 x 4. A mistura solo-areia recebeu biofertilizante em trÃs Ãpocas diferentes de aplicaÃÃo (30,45 e 60 dias apÃs o plantio das mudas), em quatro doses (0; 25; 50; 100%). Os dados foram submetidos à anÃlise de variÃncia pelo teste F e comparaÃÃes nas mÃdias pelo teste de Duncan a 5% de probabilidade. ApÃs a avaliaÃÃo dos resultados, concluiu-se que a biofertilizaÃÃo da bananeira pode ocorrer aos 30 dias apÃs o plantio, sendo a concentraÃÃo de (100%), a mais adequada para o crescimento das plantas; O biofertilizante na dose de 100%, independente do perÃodo em que à iniciada, promoveu a produÃÃo de massa de matÃria seca e os teores dos macronutrientes (N, P, K, S, Ca, Na e Mg). Os parÃmetros microbiolÃgicos nÃo foram influenciados pelas doses, nem Ãpocas de aplicaÃÃo do biofertilizante, à exceÃÃo do quociente metabÃlico (qCO2) que foi menor quando aplicada a dose 100% do biofertilizante. / Brazil is a major producer of banana (Musa sp.), Accounting for 10% of the total world production (FAO, 2002). From this perspective, we see the need to increase their production, and among the strategies adopted, one can anticipate the acclimatization phase, through the association of banana seedlings with mycorrhizal fungi. Biofertilizers commonly refer to the effluent resulting from aerobic or anaerobic fermentation of organic products alone or supplemented with mineral products. They are used in agriculture for various purposes, and its application promotes the improvement of physical and chemical properties and stimulating biological activity. The objective of this study was to evaluate the development of banana plants subjected to biofertilizer irrigation applied at different stages of their development and activity of the microbiota of a Cambisol LatossÃlico Eutrophic. The experiment was conducted in a greenhouse belonging to the sector of Soil Microbiology, Department of Soil Science, Federal University of Cearà (UFC). The soil used in the experiment was collected in an area of native vegetation, located in the area of commercial cultivation of banana, belonging to the Frutacor Tableland Farm, located in the city of QuixerÃ, CearÃ. Was considered, for purposes of collection, the soil to a depth of 0 to 20 cm. Initially, the samples were sent to the Laboratory of Soil Microbiology, Department of Soil Science, where it recognized soil preliminary analysis for extraction and quantification of species of mycorrhizal fungi occurring naturally in the soil. The analysis consisted of extraction of spores, using the technique of wet sieving (Gerdemann & Nicolson, 1963). The experiment consisted of 12 treatments with 09 replicates, and 01 control treatment with 15 repetitions, totaling 123 plots. After 30, 45 and 60 days after planting (DAP, were removed 03 repetitions of the treatments, respectively, for evaluation of the mycorrhizal root. In the interval between the stages of planting seedlings and early application of biofertilizer was applied nutrient solution Hewitt (1966) no phosphorus for all the samples and the control treatment (T13) were given a complete nutrient solution with phosphorus, weekly until 90 days after acclimatization (Phase 1). Phase 2, after application of the treatments mentioned above, the evaluation consisted of the following: growth, content of mineral nutrients in plant root colonization (technical Phillips & Hayman, 1970 and Giovanetti & Mosse, 1980), determination of soil microbial biomass (MBC) according to Vance et al. (1987), soil basal respiration (SBR), quantification of CO2 released in mg C-CO2/100 cm3 of soil, during the time interval used in monitoring, and metabolic quotient (qCO2) calculated by the ratio of respiration basal and microbial biomass-C (Anderson & Domsch, 1978). The experiment was carried out using a randomized block design in a factorial 3 x 4. The soilsand mixture biofertilizer received in three different times of application (30,45 and 60 days after planting the seedlings), in four doses (0, 25, 50, 100%). The data were submitted to analysis of variance by F test and compare the means by Duncan test at 5% probability. After evaluating the results, we concluded that the biofertilization banana may occur 30 days after planting, and the 100% concentration the most suitable for plant growth; The biofertilizer at 100% independent the period that is initiated, promoted the production of dry matter and the contents of macronutrients (N, P, K, S, Ca, Na and Mg). The microbiological parameters were not influenced by the doses or times of application of biofertilizer, except for the metabolic quotient (qCO2) which was lower when applied to 100% dose of biofertilizer.

Orientador: Marli Teixeira de Almeida Minhoni / Resumo: O manejo agrícola altera, em muito, as características físicas, químicas e biológicas dos solos. A cultura e as condições climáticas, assim como o tipo de solo propriamente dito, afetam a decomposição da matéria orgânica do solo e, consequentemente, a biogeociclagem dos nutrientes. A matéria orgânica é uma característica importante em relação à fertilidade do solo, de modo que o impacto do uso do solo precisa ser avaliado principalmente em agroecossistemas. O conhecimento dos efeitos do uso da terra e das práticas agrícolas sobre a comunidade microbiana é de fundamental importância, em vista das importantes funções que os microorganismos desempenham no solo e que irão se refletir na produtividade agrícola. Neste sentido, uma avaliação da biomassa microbiana e de microorganismos do solo pode evidenciar diversas alterações no ecossistema do solo que estão associadas ao teor de argila e/ou sistemas de plantio. No presente estudo, caracterizou-se a camada superficial do perfil de solos sob plantio direto e plantio convencional em quatro fazendas no Brasil em relação a alguns de seus componentes microbiológicos. Para tanto, analisou-se, mensalmente, a respiração do solo, a biomassa microbiana e grupos de microorganismos. A avaliação da biomassa microbiana foi feita através da técnica da fumigação-incubação (FI), utilizando-se a Equação: [(C-CO2 liberado pelo solo fumigado, no período de 0-10 dias de incubação) - (C-CO2 liberado pelo solo não-fumigado, ao longo de 10-20 dias de incubação)]/0,45. Os cálculos indicaram um conteúdo de carbono da biomassa microbiana significativamente maior nos solos sob sistema de plantio direto em relação àqueles sob plantio convencional, na camada amostrada (0-10 cm de profundidade). Quantidades significativamente maiores ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The crop management changes greatly the physical, chemical and biological soil properties. Furthermore, the crop and soil types, and the climatic conditions would affect on soil organic matter decomposition and on nutrients biogeociclying. Soil organic matter is a important characteristic in relationship soil fertility. The knowledge about effects on soil using and agriculture practices on soil microbial communities is very important, due to the function that microorganisms have in soil and it was going to in soil fertility. In this sense, evaluation of the soil microbial biomass and micro-organisms greatly aids predictions several changes in the soil ecosystems are associated with reduced tillage as compared with conventional tillage. Surface soils from long-term no-till and conventional tillage plots at four Brazil farms were characterised for microbial components. Soil respiration, microbial biomass carbon and counts of microorganisms were measured at intervals monthly. The evaluation of microbial biomass carbon was done by fumigation-incubation technique (FI). For calculating the soil microbial biomass carbon, the equation used was: Equation = [(CO2-C evolved by fumigated soil, 0-10 days) - (CO2-C evolved by unfumigated soil, 10-20 days)]/0,45. Significantly greater amounts of CO2-C were released from no-till than from conventional tilled soils. qCO2 values were not significantly different between tillage systems. This observation confirms that the tillage affected biological activity in those soils, further that qCO2 values didn't have significantily different which two tillage systems, in studied soils. Number both fungi and bacteria were assayed by Most Probable Number (MPN) by the agar drop counting technique and the microorganisms groups were calculated using by traditional Most Probable Number (MPN) method...(Complete abstract, click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1021310 bytes, checksum: 0c045c919e03b4c610ced66f97c4c031 (MD5) Previous issue date: 2013-09-06 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The inulinases present a great variety of applications, such as the production of fructose syrup, bioethanol and fructooligosaccharides. The industrial versatility presented by these enzymes drives the discovery of new sources of microbial inulinase. In this study, 48 fungi were isolated from the rhizosphere of yacon tuber (Polymnia sanchifolia). The criteria to screening the fungi producers of inulinase were: growth in inulin as unique carbon source and enzyme activitiy by the DNS method. Six promising fungi were selected for the analysis of halo formation by inulin hydrolysis and molecular identification using the ITS rDNA region. For the following studies, the fungus Fusarium oxysporum F6 was selected for having the best production of inulinase and the conditions of inulinase production by this fungus were studied. The best enzyme production occurred at 72 h of growth in minimal medium with 2% inulin. Through the response surface methodology using solid-state fermentation, it was possible to estimate that the increase of the inulin concentration affected the inulinase production by this fungus, reaching a production of up to 2.2 U/ml of inulinase. Optimal activity was observed at 50 °C and pH 5.5. The thin layer chromatography showed that the enzyme has endo-inulinase activity. Comparison of the amino acid sequence of F. oxysporum f. sp. cubense 4 with other fungal inulinases reinforce this characteristic, given the presence of conserved regions with the sequences of other endo-inulinase. The phylogenetic analysis also showed a similarity between the amino acid sequences encoding fungal endo-inulinase. This study demonstrated that the yacon tuber is a good source for the isolation of fungal inulinase producers because a reasonable number of isolates were obtained in trials using this source. The fungus Fusarium oxysporum F6 showed the greatest potential for inulinase production, mainly in solid state fermentation. The fungus Staphylotrichum boninense was also isolated and inulinase production of this fungus will be studied in more detail, due to the reports of their differential production of secondary metabolites by this fungus. / As inulinases apresentam uma variedade de aplicações, como a produção de xarope de frutose, bioetanol e frutooligossarídeos. A versatilidade industrial apresentada por estas enzimas impulsiona a descoberta de novas fontes de inulinases microbianas. Neste estudo, 48 fungos foram isolados a partir da rizosfera do tubérculo yacon (Polymnia sanchifolia). Os isolados passaram por uma triagem, em que os critérios avaliados foram o crescimento em meio mínimo contendo 1% de inulina como única fonte de carbono e a atividade enzimática pelo método de DNS. Os seis fungos mais promissores foram selecionados para a análise da formação de halo de hidrólise da inulina e identificação molecular utilizando a região ITS rDNA. Para os estudos seguintes, o fungo Fusarium oxysporum F6 foi selecionado por apresentar a melhor produção de inulinase e as condições de produção de inulinase por esse fungo foram estudadas. A melhor produção da enzima ocorreu em 72 h de crescimento em meio mínimo e em 2% de inulina. Através da metodologia de superfície de resposta, utilizando a fermentação em estado sólido, foi possível verificar que o aumento na concentração de inulina afetou positivamente a produção de inulinase por esse fungo, alcançando uma produção de até 2,2 U/mL de inulinase. A atividade ótima foi verificada na temperatura de 50 °C e pH 5,5. A cromatografia de camada delgada mostrou que a enzima apresenta atividade de endo-inulinase. Comparações de uma sequência de aminoácidos de F. oxysporum f. sp. cubense 4 com outras inulinases fúngicas reforçaram essa característica, devido à presença de regiões conservadas com as sequências de outras endo-inulinases. A análise filogenética também demonstrou a proximidade entre as sequências de aminoácidos que codificam endo-inulinases fúngicas. Este trabalho demonstrou que o tubérculo yacon é uma boa fonte para o isolamento de fungos produtores de inulinase, pois um razoável número de isolados foi obtido nas triagens utilizando essa fonte. O fungo Fusarium oxysporum F6 apresentou o maior potencial de produção de inulinase, principalmente em fermentação no estado sólido. O fungo Staphylotrichum boninense também foi isolado e a produção de inulinase desse fungo ainda será estudada mais detalhadamente, devido aos relatos de sua produção diferenciada de metabólitos secundários.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 310696 bytes, checksum: e605f10bbbe4b744866d2e079c4a4535 (MD5) Previous issue date: 2003-08-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Alcohol dehydrogenase, ADH, activity was investigated in Streptococcus thermophilus NCDO 1968, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus ATCC 11842, Lactobacillus acidophilus ATCC 4356, and the probiotic strain Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20, after growth at 37°C for 12 hours, and storage at 4°C for 21 days. L. delbrueckii subsp. bulgaricus and L. acidophilus presented positive results for ADH activity in Alcohol Indicator Medium, while L. delbrueckii UFV H2b20 presented negative results after 21 days. This method was not discriminatory for S. thermophilus. ADH activity was also measured by the oxidation of NAD(P)H and expressed as μmol of NAD(P)H oxydized per min per mg protein. The average activity in L. acidophilus was 1,06x10-7 µmol.min-1.mg-1. The activity increased to 9,17x10-7µmol.min-1.mg-1 after cells were kept in MRS medium at 4°C, for 5 days. Increases in ADH activity were also detected in cell free extracts of L. delbrueckii subsp. bulgaricus and S. thermophilus. The three strains displayed low ADH activity in MRS broth after 21 days at 4°C. The headspace analysis by Gas Chromatography/ Mass Spectroscopy revealed acetaldehyde production by L. delbrueckii subsp. bulgaricus, L. acidophilus and S. thermophilus. The latter produced acetaldehyde only after storage at 4°C. Ethanol production was not detected. Despite some ADH activity was detected in liquid medium, the combined results do not support completely the hypothesis that ADH activity would be induced itself after storage at low temperatures. Other studies are still needed. / A atividade de etanol desidrogenase, ADH, foi investigada em espécies de bactérias usadas na fabricação do iogurte, Streptococcus thermophilus NCDO 1968, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus ATCC 11842, Lactobacillus acidophilus ATCC 4356, e da linhagem probiótica Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20, após crescimento a 37°C por 12 horas e estocagem a 4°C por 21 dias. Em meio indicador de álcool, L. delbrueckii subsp. bulgaricus e L. acidophilus apresentaram resultado positivo para atividade de ADH, enquanto L. delbrueckii UFV H2b20, resultado negativo. A detecção da atividade, nesse meio, não foi discriminatória para S. thermophilus. A atividade de ADH, em meio líquido, foi determinada pela medida da oxidação de NAD(P)H e expressa em µmoles de NAD(P)H oxidado por minuto por mg de proteína. A atividade em L. acidophilus foi, em média de 1,06x10-7 µmol.min-1.mg-1, aumentando para 9,17x10- 7µmol.min-1.mg-1, após a estocagem das células em meio MRS, por 5 dias, a 4°C. Também houve aumento de atividade de ADH nos extratos livres de células de L. delbrueckii subsp. bulgaricus e S. thermophilus. Os resultados em meio líquido mostraram que as três culturas apresentaram baixa atividade de ADH durante a estocagem por 21 dias, a 4°C. A metodologia baseada em GC/MS, por headspace, permitiu detectar acetaldeído produzido por L. delbrueckii subsp. bulgaricus, L. acidophilus e S. thermophilus, o qual produziu acetaldeído somente após a estocagem a 4°C. Entretanto, a atividade de ADH não foi observada após a incubação para crescimento a 37°C, por 12 h, nem após a estocagem a 4°C por 21 dias, não sendo observada a produção de etanol, nas condições estudadas. Estes resultados não confirmam a hipótese de uma ADH que se manifestaria após longos períodos em baixas temperaturas, embora baixa atividade da enzima tenha sido detectada em meio líquido. Outros estudos são necessários.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 355631 bytes, checksum: 3e49bb2d2677506413b7513516919754 (MD5) Previous issue date: 2011-02-21 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Endophytic bactéria in fruits inhabits internal tissues without cause visible damage or symptons. However, there is no report of their presence and the diversity in Coffea canephora fruits. Thereby, this work aimed to determine the existence and diversity of cultivable endophytic bacteria in fruits of that specie in three maturation stages. Bacterial isolation and quantification were performed in R2A medium and resulted in 140 isolates gathered in 21 morphotypes, being 55 % of Gram-positive bacteria. The community is composed by 14 genera and 18 bacterial species belonging to phylum Actinobacteria, Firmicutes, Bacteroides, Alpha and Gamma- Proteobacteria. For the first time, Kocuria turfanensis and Pantoa vagans are identified as endophytic species. From 18 species identified as endophytic in C. canephora fruits, seven are not described as endophytic in fruits, namely: Bacillus thuringiensis, Bacillus licheniformis, Agrobacterium tumefaciens, Escherichia coli, Enterobacter hormaechei, Chryseobacterium sp. and Ochrobactrum sp.. The diversity of cultivable endophytic bacteria was distinct in the three maturation stages of C. canephora fruits, being larger in green fruits, where Bacillus subtilis was predominant. The number of Gram-positive isolates was higher than that for Gram-negative in the first two development stage, while in mature fruits the number of colonies from both Gram-positive and Gram-negative was similar. In the last maturation stage, diversity of endophytic bacteria species was smaller and Klebsiella oxytoca was the predominant specie, what was assigned to probable effects of higher caffeine and sugar concentration in the fruits. / Bactérias endofíticas em frutos são as que habitam partes internas sem causar danos ou sintomas aparentes. Entretanto, a presença e diversidade delas em frutos de Coffea canephora não foram ainda relatadas na literatura. Assim, o presente trabalho objetivou determinar a existência e diversidade de bactérias endofíticas cultiváveis nos frutos dessa espécie em três estádios de maturação. O isolamento e a quantificação foram realizados em meio R2A, sendo obtidos 140 isolados que, pelas características morfológicas das colônias, foram agrupadas em 21 morfotipos, sendo 55 % de Gram-positivas. Na comunidade foram identificadas representantes de Actinobacteria, Firmicutes, Bacteroidetes, Alpha- e Gamma-Proteobacteria, com 14 gêneros e 18 espécies. Kocuria turfanensis e Pantoea vagans são pela primeira vez identificadas como espécies endofíticas. Sete das 18 espécies identificadas como endofíticas em frutos de C. canephora não são espécies descritas como endofíticas em frutos, a saber: Bacillus thuringiensis, Bacillus licheniformis, Agrobacterium tumefaciens, Escherichia coli, Enterobacter hormaechei, Chryseobacterium sp. e Ochrobactrum sp.. A diversidade das bactérias endofíticas cultiváveis mostrou-se distinta nos três estádios de maturação de frutos de C. canephora, sendo maior nos frutos verdes, nos quais a predominância foi de Bacillus subtilis. Nos dois primeiros estádios de desenvolvimento o número de isolados de Gram-positivas foi maior que o de Gram-negativas, enquanto nos frutos maduros o número de colônias de Gram-positivas e Gram-negativas foi similar. No último estádio de maturação a diversidade de espécies de bactérias endofíticas foi menor e a Klebsiella oxytoca foi a espécie dominante, fato atribuído a prováveis efeitos da maior concentração de cafeína e açúcares nos frutos.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 638022 bytes, checksum: 770358d90456348a933e0711ab667f05 (MD5) Previous issue date: 2011-07-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) consist exclusively of carbon and hydrogen atoms arranged in a linear, angular or clustered. Several PAH suffer enzymatic activation and tend to bind to DNA, causing mutations and replication errors. Many of these molecules are known to be toxic, mutagenic and carcinogenic. The PAH are recalcitrant compounds due to its low water solubility and high sorption to soil. The use of biosurfactants has been an option usually effective for removing hydrophobic organic contaminants in complex matrices such as soil. The surfactin is a lipopeptide synthesized by Bacillus subtilis and highly effective in reduction of tension between water and hydrophobiccompounds.Unlike of an exhaustive extraction, the biosurfactants act by increasing the bioavailability of the contaminant and facilitates its degradation.In this work the experiment of phenanthrene biodegradation was conducted in clayed soils contaminated with 14C-phenanthrene and 4 12C-phenanthrene concentrations (1, 10, 40 and 100 mg g-1). Biodegradation was evaluated with the addition of supplements: surfactin (0.825 mg g-1), yeast extract (1.0 mg g-1) and an inoculum (30 mg g-1) obtained from the addition of diesel to a compost made of the municipal solid waste, for enrichment of microorganisms degraders of hydrocarbons. The flasks were kept at 35 °C for 49 days. The 14CO2 produced was captured in scintillation vials containing 2 ml of KOH (1 mol L-1). The bottles were changed on days 8, 18, 25, 32, 37, 44 and 49. After replacing the vials on the thirtieth-second day, was made a second application of surfactin (0.230 mg g-1) in all treatments. The highest degradation activity was achieved in the first 8 days of incubation, only treatments that received the inoculum. After the eighth day until the new surfactin supplementation (32 days), increased activity was not significant in any of the treatments. The activity increased again after the addition of surfactin further, but at a lower rate than achieved in the first 8 days. This result was attributed to the lower concentration of surfactin and the effects of adsorption of phenanthrene to the soil. The degradation activity in samples with the highest concentration of phenanthrene (100 mg g-1) did not differ in the treatments with and without surfactin. This result suggests that the concentration of bioavailable phenanthrene on this dose remained high enough to sustain the activity of degradation. Supplementation with yeast extract resulted in a lower degradation activity in treatments with 10, 40 and 100 mg g-1 of phenanthrene. In the treatments with the lowest dose of phenanthrene (1 mg g-1), yeast extract stimulated the degradation of the contaminant. It is concluded that supplementation with yeast extract stimulated the degradation of surfactin, which resulted in reducing the degradation of phenanthrene in higher concentrations of the contaminant. The results of the work indicate that the bioremediation of soils contaminated with PAH requires the maintenance of solubilizing agents such as surfactin. Due to the rapid degradation of biosurfactant on the ground, it is suggested that the best strategy is to inoculate microorganisms producers of this class of compounds and the maintenance of favorable conditions to ensure the production of biosurfactants in situ, during the process of bioremediation. / Os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAS) são constituídos exclusivamente por átomos de carbono e hidrogênio e organizados sob forma linear, angular ou agrupada. Diversos HPA ao sofrerem ativação enzimática, tendem a ligar-se ao DNA, c ausando erros de replicação e mutações. Muitas dessas moléculas são reconhecidas como tóxicas, mutagênicas e carcinogênicas. Os HPA são compostos recalcitrantes, em razão de sua baixa solubilidade em água e alta sorção ao solo. O uso de biossurfactantes é uma opção geralmente eficaz na remoção de contaminantes orgânicos hidrofóbicos de matrizes complexas, como o solo. A surfactina é um lipopeptídeo sintetizado por Bacillus subtilis e possui alta atividade de redução da tensão entre compostos hidrofóbicos e a água. Diferente de uma extração exaustiva, os biossurfactantes agem aumentando a biodisponibilidade do contaminante e facilitam a sua biodegradação. Neste trabalho, foi conduzido um experimento de biodegradação de fenantreno em latossolo argiloso, contaminado com 14C-fenantreno e com 4 concentrações de 12C-fenantreno (1, 10, 40 e 100 μg g-1). A biodegradação foi avaliada com a adição dos suplementos surfactina (0,825 mg g-1), extrato de levedura (1,0 mg g-1) e de um inóculo (30 mg g-1), obtido a partir da adição de óleo diesel a composto de resíduo sólido urbano, para enriquecimento de micro-organismos degradadores de hidrocarbonetos. Os frascos foram mantidos a 35 °C por 49 dias. O 14CO2 produzido foi capturado em tubos de cintilação, contendo 2 mL de KOH (1 mol L-1). Os frascos foram substituídos nos dias 8, 18, 25, 32, 37, 44 e 49. Após a troca do frasco no trigésimo segundo dia, foi feita uma segunda aplicação de surfactina (0,230 mg g-1), em todos os tratamentos. A maior atividade de degradação foi alcançada nos primeiros 8 dias de incubação, somente nos tratamentos que receberam o inóculo. Após o oitavo dia, até a nova suplementação com surfactina (32° dia), o aumento da atividade não foi significativo em nenhum dos tratamentos. A atividade voltou a aumentar após a adição suplementar de surfactina, porém, em uma taxa inferior à alcançada nos primeiros 8 dias. Esse resultado foi atribuído à menor concentração da surfactina e a efeitos de adsorção do fenantreno ao solo. Nas amostras com a maior concentração de fenantreno (100 μg g-1) a atividade de degradação não diferiu em função dos tratamentos com e sem surfactina. Esse resultado sugere que a concentração do fenantreno biodisponível, nessa dose, se manteve suficientemente alta para sustentar a atividade de degradação. A suplementação com extrato de levedura resultou em menor atividade de degradação, nos tratamentos com 10, 40 e 100 μg g-1 de fenantreno. Nos tratamentos com a menor dose de fenantreno (1 μg g-1), o extrato de levedura estimulou a degradação do contaminante. Conclui-se que a suplementação com extrato de levedura estimulou a degradação da surfactina, o que resultou em redução da degradação do fenantreno nas maiores concentrações do contaminante. Os resultados do trabalho indicam que a biorremediação de solos contaminados com HPA requer a manutenção de agentes solubilizadores, como a surfactina. Em razão da rápida degradação do biossurfactante no solo, sugere-se que a melhor estratégia seja a inoculação de micro-organismos produtores dessa classe de compostos e a manutenção de condições favoráveis a produção de biossurfactantes in situ, ao longo do processo de biorremediação.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 462563 bytes, checksum: 8c4d15a05d7b212d40f89724706d1c9a (MD5) Previous issue date: 2006-09-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Considering that the acid tolerance is an important virulence factor related to survival at low pH of gastric barrier of foodborne pathogens and the expressive increasing of prevalence of Salmonella serovar Enteritidis in recent years as etiologic agent of human salmonelosis, this work aimed to evaluate the effect of acid and storage under low temperatures on Salmonella serovar Enteritidis. The growth of S. Enteritidis CCS3 isolated of swine carcass and S. Enteritidis ATCC 13076 at Trypticasein and Soya Broth (TSB) with pH values between 3.5 and 7.2 and the survival in the same media with pH values between 1.5 and 3.5 were investigated. The tolerance to simulated gastric fluid (SGF) of these cells previously sublethal acid treatment pH 4.0, 4.5 and 5.0 inoculated in pork maintained storage by 7 days at 4 ± 1°C and by 84 days at freezing temperature (-18°C ± 1) was also evaluated. S. Enteritidis CCS3 presented higher values of specific growth rate in acidified TSB and this culture had longer time survival in pH < 3,5 than S. Enteritidis ATCC 13076. The storage in pork by seven days at 4 ± 1°C did not effect the populations of S. Enteritidis studied. After 84 days of cold storage, the media of population reductions of S. Enteritidis CCS3 and ATCC 13076 were 0.8 and 1.5 log cycle, respectively. The previous acid treatment did not enhance the survival of both cultures at low temperatures. After low temperature storage, the cells of S. Enteritidis CCS3 were tolerant until three hours SFG exposure. Instead, cells of S. Enteritidis ATCC 13076 lost culturability after 10 minutes of SFG challenge. S. Enteritidis CCS3 cells submitted to acid treatment at pH 4.0 showed are more tolerant to 180 minutes SFG exposure (15% of population reduction) than cells submitted to other acid treatments (pH 4.5 and 5.0) and cells of control (without acid treatment) with 30% of population reduction. / Considerando que a tolerância ao ácido é um importante fator de virulência relacionado à sobrevivência ao baixo pH da secreção gástrica em patógenos veiculados por alimentos e o expressivo aumento da prevalência de Salmonella sorovar Enteritidis nos últimos anos, como agente etiológico de salmonelose humana, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito de ácido e da estocagem sob temperaturas baixas em Salmonella sorovar Enteritidis. O crescimento de S. Enteritidis CCS3, isolada de carcaça suína, e S. Enteritidis ATCC 13076 foi determinado em Caldo Tripticaseína e Soja (TSB) com valores de pH que variaram de 3,5 a 7,2. A sobrevivência foi avaliada no mesmo meio com pH entre 1,5 e 3,5. A tolerância ao Fluido Gástrico Simulado (FGS) dessas bactérias previamente submetidas a tratamento ácido subletal em pH 4,0; 4,5 e 5,0 inoculadas em carne suína estocada por sete dias a 4 ± 1°C e por 84 dias sob congelamento a -18 ± 1°C foi também avaliada. S. Enteritidis CCS3 apresentou valores maiores de velocidade específica de crescimento em TSB acidificado e sobreviveu por mais tempo em pH inferior a 3,5 do que S. Enteritidis ATCC 13076. A estocagem em carne suína por sete dias a 4 ± 1°C não afetou as populações de S. Enteritidis investigadas. Após 84 dias de congelamento, as reduções médias das populações de S. Enteritidis CCS3 e ATCC 13076 foram de 0,8 e 1,5 ciclos logarítmicos, respectivamente. O tratamento ácido aplicado previamente não teve efeito sobre a sobrevivência das duas culturas sob baixas temperaturas. Após a estocagem sob temperaturas baixas, as células de S. Enteritidis CCS3 apresentaram tolerância à exposição ao FGS por até três horas. Contrariamente, células de S. Enteritidis ATCC 13076 perderam a culturabilidade após 10 minutos de desafio ao FGS. Células de S. Enteritidis CCS3 submetidas a tratamento ácido prévio em pH 4,0 mostraram-se mais tolerantes à exposição por 180 minutos ao FGS (redução de 15%) que células submetidas aos tratamentos ácidos em pH 4,5 e 5,0 e células do tratamento controle (sem tratamento ácido) com redução de 30% da população.