Leguminosas forrageiras como espécies de Lotus., adaptadas às condições ambientais nos estados do sul do Brasil, podem ser uma alternativa importante para aumentar o fornecimento de forragem de alto teor protéico para o gado além de ter boa adaptabilidade a solos de baixa fertilidade. Uma das vantagens do uso de leguminosas forrageiras é a obtenção de nitrogênio a partir da simbiose com bactérias diazotróficas como os rizóbios. Este trabalho objetivou a seleção de rizóbios nativos a partir de amostras de solo de oito localidades do Rio Grande do Sul. Foram obtidos 259 isolados de rizóbios em plantas de Lotus glaber e 68 em Lotus subbiflorus. Estes foram avaliados quanto à eficiência na fixação de nitrogênio em simbiose com plantas, em cultivo em casa de vegetação, e quanto à morfologia colonial, produção de melanina e caracterizados geneticamente por comparação do perfil eletroforético dos produtos de amplificação do DNA genômico, pela reação em cadeia da polimerase com os oligonucleotídeos iniciadores BOX e ERIC. Apenas cinco isolados produziram melanina. Foram selecionados nove isolados para L. glaber que foram mais eficientes na fixação de nitrogênio do que as estirpes SEMIA 830 e U510, com índice de eficiência relativa de 88 a 132% e dois isolados para L. subbiflorus que foram mais eficientes do que as estirpes SEMIA 849 e SEMIA 850, com Índice de eficiência relativa de 128 a 159%. Na caracterização genética, observou-se que nenhum isolado apresentou identidade com as estirpes recomendadas, o que demonstra que nos solos do Rio Grande do Sul existem rizóbios autóctones capazes de fixar nitrogênio eficientemente em simbiose com Lotus glaber e Lotus subbiflorus, podendo ser recomendados para estudos a campo e para a produção de inoculantes para estas leguminosas no Brasil. / Forage legume species such as Lotus., adapted to the local environmental conditions of South Brazilian States can be an important alternative to increase the supply of high protein content forage to the cattle besides the good adaptability to low-fertility soils. One of the advantages of using forage legumes relays on the acquisition of nitrogen from the symbiosis with diazothrophic bacteria such as Rhizobia. This work aimed the selection of native Rhizobia from soil samples of eight localities of Rio Grande do Sul. It was obtained 259 Rhizobia isolates from plants of Lotus glaber and 68 from Lotus subbiflorus. These isolates were evaluated on the efficiency of symbiotic nitrogen fixation with plants, grown in greenhouse conditions, on colonial morphology, capability of melanin production and genetically characterized by PCR genomic DNA fingerprinting using primers BOX and ERIC. Only five isolates produced melanin. It was selected nine isolates for L. glaber that were more efficient on nitrogen fixation than strains SEMIA 830 and U510, with relative efficiency index ranging from 88 to 132%, and two isolates for L. subbiflorus that were more efficient than strains SEMIA 849 and SEMIA 850, with relative efficiency index of 128 and 159%. Related to the genetic characterization, it was observed that isolates have no identity to the recommended strains, which shows that in the soils of Rio Grande do Sul there are autochthonous Rhizobia capable of efficient symbiotic nitrogen fixation with Lotus glaber and Lotus subbiflorus, which may be recommended to field evaluations and to the production of inoculants to these legume in Brazil.

Algumas enzimas são encontradas facilmente em diferentes microrganismos do ambiente e requerem um destaque especial devido a seu grande valor econômico. As proteases apresentam grande diversidade bioquímica, sendo facilmente manipuláveis, favorecendo dessa maneira suas aplicações biotecnológicas. Três linhagens bacterianas de Bacillus sp. foram isoladas com o objetivo de produzir protease e determinar as condições ótimas de temperatura, pH, e efeito de substratos e substâncias químicas sobre a atividade da enzima, assim como verificar a atividade depilatória e a utilização como agentes de modificação de proteína. As linhagens de Bacillus sp. apresentaram halos de atividade proteolítica em placas de Ágar Leite em diferentes pHs. O padrão proteolítico das enzimas em extrato bruto utilizando inibidores de protease indica que são serina-proteases, com alta especificidade pelo substrato azocaseína, pH e temperatura ótimos de 9,0 e 37ºC, respectivamente. As enzimas mantiveram-se estáveis à 37ºC por 30 minutos, entretanto quando submetidas a uma temperatura de 55ºC, perderam 50% da atividade inicial nos primeiros 20 minutos. A atividade enzimática foi parcialmente inibida por PMSF e benzamidina e totalmente por HgCl2. A adição de detergentes como o SDS ou o Triton X100 ocasionou um leve aumento na atividade das enzimas. Os sobrenadantes das linhagens de Bacillus sp. apresentaram enzimas com a capacidade de promover depilação de peles bovinas. Exames histológicos demonstraram que o tratamento com as enzimas não acarretou danos ao colágeno. Esses resultados indicam que as proteases produzidas pelos isolados apresentaram potencial para aplicação em processos envolvendo hidrólise de queratina, além da utilização como agente de modificação de proteínas. / Some enzymes are easily found in different microorganisms of the environment and they require a special prominence due its great economic value. Proteases present great biochemistry diversity, being easily manipulated allowing in this way, their biotechnological applications. Three Bacillus sp. strains were isolated intending to produce protease and determine optimal conditions of temperature, pH, and effect of chemical substances on the activity of the enzyme, as well as to verify the depilatory activity and utilization as agents protein modification. Bacillus sp. strains showed proteoyitic activity in milk plates in different pH.The proteolytic characteristic of enzymes in crude extract using protease inhibitors indicates that they are serine-proteases, with high specificity to azocasein, with optimal pH and temperature at 9,0 and 37oC, respectively. The enzymes have been kept stable at 37oC for 30 minutes. Nevertheless, when they were subjected to 55oC they lost 50% of their initial activity in the first 20 minutes. The enzymatic activity was partially inhibited by PMSF and benzamidine and totally by HgCl2. The addition of detergents, as SDS and Triton X100, caused a light increase on enzymes activity. The supernatants of Bacillus sp. strains showed enzymes with capacity to depilate bovine skin. Histological evaluation showed that the treatment with enzymes do not promote damage to collagen. These results indicate that proteases produced by isolated present a powerful application in processes involving keratin hydrolysis, as well as the use as an agent that modifies proteins.

As espécies de Trichoderma incluem muitos isolados com importância agronômica empregados principalmente como agentes de controle biológico. Pesquisas recentes vêm demonstrando a capacidade de alguns isolados atuarem na promoção de crescimento e na indução de resistência em diferentes culturas. Este trabalho teve como objetivo avaliar isolados de Trichoderma spp. no desenvolvimento das plantas de feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.). Isolados de três espécies de Trichoderma (T. asperellum, T. harzianum e T. viride) foram testados verificando a atividade destes isolados no controle de Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli e Sclerotinia sclerotiorum, e a capacidade destes em: produzir ácido indol acético (AIA), sideróforos e solubilizar fosfato in vitro, bem como interagir com um inoculante de rizóbio na promoção do crescimento em casa de vegetação e atuarem na imunização das plantas tratadas. Todos os isolados produziram metabólitos voláteis, enzimas hidrolíticas, AIA, sideróforos e solubilizaram fosfato in vitro. Trichoderma spp. aumentou a porcentagem de germinação e vigor das sementes tratadas, entretanto o efeito na promoção de crescimento não foi comprovado. A atividade enzimática de peroxidase, polifenoloxidase e fenilalanina amônia-liase foi maior em plantas tratadas com Trichoderma spp. Os resultados demonstram que a seleção pode direcionar aqueles isolados que podem ser empregados na agricultura de acordo com suas características e pode ser uma solução para garantir o sucesso da aplicação no campo. / Trichoderma species includes many important agricultural isolates, mainly deployed as biological control agents. Recent researches has demonstrated the ability of some isolates to act in growth promotion and immunity induction in different crops. This work aimed to evaluate Trichoderma spp. isolates in common bean plants (Phaseolus vulgaris L.) development. Strains of three Trichoderma species (T. asperellum, T. harzianum and T. viride) were tested by verifying the activity of these strains on Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli and Sclerotinia sclerotiorum control and their abilities on indol acetic acid (IAA) and siderophores production and phosphate in vitro solubilization. Their interacting with rhizobia inoculant in growth promotion in greenhouse condition and acting in treated plants immunization was also evaluated. All strains produced volatile metabolites, hydrolytic enzymes, IAA, siderophores and they solubilized phosphate in vitro. Trichoderma spp. increased the percentage of germination and vigor in treated seeds. However, the effect in growth promotion was not proven. The enzymatic activity of peroxidase, polyphenoloxidase and phenylalanine ammonia lyase was higher in plants treated with Trichoderma spp. The results demonstrated that selection can target those strains that can be deployed in agriculture in according to their characteristics and can be a solution to ensure the success on field application.

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2017-09-26T21:37:04Z No. of bitstreams: 1 Disserta??o definitiva ILANA - revisada.pdf: 1964258 bytes, checksum: 73df2e7ec0b51bebe48619b3d272ec45 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T21:37:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disserta??o definitiva ILANA - revisada.pdf: 1964258 bytes, checksum: 73df2e7ec0b51bebe48619b3d272ec45 (MD5) Previous issue date: 2017-03-27 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado da Bahia - FAPEB / Pineapple is a tropical fruit of great commercial value, Brazil is the second largest producer of pineapple in the world. The most produced variety in the country is the ?Perola?, followed by Smooth Cayenne and, both have a high degree of sus-ceptibility to fusariosis or pineapple gum disease, caused by the fungus Fusarium guttiforme.Once installed, this disease can reduce pineapple yield by up to 80%. Lactic bacteria (BAL) have their metabolic characteristics and the potential to inhibit bacterial and fungal growth, as well as to neutralize toxins produced by F. guttiforme.This work aimed to determine by in vitro tests the inhibitory effect of lactic acid bacteria on the etiologic agent of fusariosis. Qualitative and quantitative microbial inhibition tests were performed, comparing strains of lactic acid bacteria and crude pineapple extract against F. guttiforme isolates. Determination of mycotoxins in the fungal extracts of these isolates. The inhibitory effect of Lactobacillus plantarum Abx3 and Lactobacillus paracasei subsp.paracasei Abx5.2 was observed for isolateson F. guttiforme, the same did not occur with crude pineapple extract, and mycotoxin production was not detected in extracts of fungal isolates. The preliminary results of this work point out that lactic bacteria present potential to be used as a biocontrol product on F. guttiforme. / O abacaxi ? uma fruta tropical de grande valor comercial, sendo o Brasil o se-gundo maior produtor no mundo. A variedade mais produzida no pa?s ? a P?rola, seguida pela Smooth Cayenne, ambas possuem alto grau de suscetibilidade ? fusa-riose ou gomose do abacaxi, causada pelo fungo Fusarium guttiforme. Esta doen?a, uma vez instalada, pode reduzir em at? 80% a produ??o dos cultivares. As bact?rias l?ticas (BAL), devido as suas caracter?sticas metab?licas possuem potencial de inibir o crescimento bacteriano e f?ngico, bem como neutralizar toxinas produzidas por algunsmicro-organismos. Este trabalho teve como objetivodeterminar atrav?s de tes-tes ?in vitro? o efeito inibit?rio de bact?rias l?cticas sobre o agente etiol?gico da fusa-riose do abacaxi.Foram realizados ensaios qualitativo e quantitativode inibi??o mi-crobiana, confrontando cepas de bact?rias l?ticas e extrato bruto do abacaxifrente aisolados de F.guttiforme. Determinarse h? micotoxina nos extratos f?ngicos destes isolados. Constatou-se efeito inibit?rio do Lactobacillus plantarum Abx3 e Lactobacillus paracaseisubsp.paracasei Abx5.2 sobre os isolados de F. guttiforme. O mesmo n?o aconteceu com o extrato bruto de abacaxi, e n?o foi detectada a produ??o de micotoxina nos extratos dos isolados f?ngicos. Os resultados preliminares deste trabalho apontamque as bact?rias l?ticas apresentam potencial de serem utilizadas em formula??es de produto de biocontrolede F. guttiforme.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-05Bitstream added on 2014-06-13T21:02:53Z : No. of bitstreams: 1 rocha_mm_dr_botfca.pdf: 1150326 bytes, checksum: 893acd7e01d7f269b3eaa875876c771e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O manejo agrícola altera, em muito, as características físicas, químicas e biológicas dos solos. A cultura e as condições climáticas, assim como o tipo de solo propriamente dito, afetam a decomposição da matéria orgânica do solo e, consequentemente, a biogeociclagem dos nutrientes. A matéria orgânica é uma característica importante em relação à fertilidade do solo, de modo que o impacto do uso do solo precisa ser avaliado principalmente em agroecossistemas. O conhecimento dos efeitos do uso da terra e das práticas agrícolas sobre a comunidade microbiana é de fundamental importância, em vista das importantes funções que os microorganismos desempenham no solo e que irão se refletir na produtividade agrícola. Neste sentido, uma avaliação da biomassa microbiana e de microorganismos do solo pode evidenciar diversas alterações no ecossistema do solo que estão associadas ao teor de argila e/ou sistemas de plantio. No presente estudo, caracterizou-se a camada superficial do perfil de solos sob plantio direto e plantio convencional em quatro fazendas no Brasil em relação a alguns de seus componentes microbiológicos. Para tanto, analisou-se, mensalmente, a respiração do solo, a biomassa microbiana e grupos de microorganismos. A avaliação da biomassa microbiana foi feita através da técnica da fumigação-incubação (FI), utilizando-se a Equação: [(C-CO2 liberado pelo solo fumigado, no período de 0-10 dias de incubação) - (C-CO2 liberado pelo solo não-fumigado, ao longo de 10-20 dias de incubação)]/0,45. Os cálculos indicaram um conteúdo de carbono da biomassa microbiana significativamente maior nos solos sob sistema de plantio direto em relação àqueles sob plantio convencional, na camada amostrada (0-10 cm de profundidade). Quantidades significativamente maiores... / The crop management changes greatly the physical, chemical and biological soil properties. Furthermore, the crop and soil types, and the climatic conditions would affect on soil organic matter decomposition and on nutrients biogeociclying. Soil organic matter is a important characteristic in relationship soil fertility. The knowledge about effects on soil using and agriculture practices on soil microbial communities is very important, due to the function that microorganisms have in soil and it was going to in soil fertility. In this sense, evaluation of the soil microbial biomass and micro-organisms greatly aids predictions several changes in the soil ecosystems are associated with reduced tillage as compared with conventional tillage. Surface soils from long-term no-till and conventional tillage plots at four Brazil farms were characterised for microbial components. Soil respiration, microbial biomass carbon and counts of microorganisms were measured at intervals monthly. The evaluation of microbial biomass carbon was done by fumigation-incubation technique (FI). For calculating the soil microbial biomass carbon, the equation used was: Equation = [(CO2-C evolved by fumigated soil, 0-10 days) - (CO2-C evolved by unfumigated soil, 10-20 days)]/0,45. Significantly greater amounts of CO2-C were released from no-till than from conventional tilled soils. qCO2 values were not significantly different between tillage systems. This observation confirms that the tillage affected biological activity in those soils, further that qCO2 values didn't have significantily different which two tillage systems, in studied soils. Number both fungi and bacteria were assayed by Most Probable Number (MPN) by the agar drop counting technique and the microorganisms groups were calculated using by traditional Most Probable Number (MPN) method...(Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 803605 bytes, checksum: e8592fe1b32668a421b60b22522cb6d7 (MD5) Previous issue date: 2011-09-05 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Degradation of petroleum hydrocarbons by micro-organisms in coastal environments is a very interesting strategy for remediation of these compounds. However, microbial degradation is often limited by nutrients avaiability, particularly nitrogen and phosphorus. In this work, we compared the effect of addition of water-soluble (urea and KH2PO4) or oleophilic (urea-formaldehyde resin and soy lecithin) nitrogen and phosphorus sources on oil degradation by indigenous micro-organisms and bacteria in consortia in microcosms composed by beach sand contaminated with crude oil. The microcosms were submitted to daily water exchanges representing tides activities. We also analysed the retention capability of both nutrient sources in contaminated sediment. For this, we performed UFC.mL-1 counts and quantification of nitrogen and phosphorus concentrations in the water during the experiment. The remaining oil in the sand was extracted with hexane and quantified by spectrophotometry, in which the degradation corresponds to the difference between the initial and final amounts of oil. Water-soluble nutrients have been shown to be gradually washed away during the water exchange and not remained in the sediment for bacterial supply. However, an opposite pattern was verified for oleophilic nutrients, which is a desirable feature for application in environments with intense action of waves and tides. Despite the increased retention of oleophilic nutrients, there were no significant differences in microbial counts between both treatments. In addition, oil degradation occurred mainly in those microcosms supplied with water-soluble nutrients. Although the inoculated micro-organisms are able to use the oleophilic nutrient sources, more detailed studies on the concentration of nutrients to be applied and the availability of nutrients for micro-organisms are necessary in order to maximize the stimulus generated. / A degradação de hidrocarbonetos de petróleo por micro-organismos em ambientes costeiros é uma estratégia extremamente interessante de remediação desses compostos enquanto contaminantes ambientais. No entanto, essa biodegradação é frequentemente limitada pela disponibilidade de nutrientes, principalmente nitrogênio e fósforo. Neste trabalho foi comparado o efeito da adição de fontes de nitrogênio e fósforo solúveis em água (uréia e KH2PO4) e oleofílicas (resina uréia-formaldeído e lecitina de soja) sobre a degradação de petróleo cru, em microcosmos de areia de praia, por micro-organismos nativos ou adicionados em consórcios. As fontes de nutrientes foram ainda comparadas quanto a sua retenção no sedimento contaminado após trocas diárias de água. Para isso, realizou-se contagens de UFC.mL-1 e análises da concentração de nitrogênio e de fósforo na água. O óleo remanescente na areia foi extraído com hexano e quantificado por espectrofotometria, sendo a degradação correspondente a diferença entre as quantidades inicial e final de petróleo. Verificou-se que os nutrientes hidrossolúveis não permaneceram no sedimento, mas foram gradativamente lavados pela remoção diária de água. Um comportamento inverso ocorreu para os nutrientes oleofílicos, sendo essa uma característica desejável para sua aplicação em ambientes com intensa ação de ondas e marés. Apesar da maior retenção de nutrientes quando esses são oleofílicos, não se verificou diferenças consideráveis nas contagens microbianas entre os dois tratamentos. Além disso, a degradação do óleo ocorreu principalmente naqueles microcosmos supridos com os nutrientes solúveis em água. Embora os micro-organismos inoculados sejam capazes de utilizar as fontes oleofílicas como nutrientes, estudos mais detalhados da concentração a ser aplicada e da disponibilização desses nutrientes para os micro-organismos são necessários, a fim de se maximizar o estímulo gerado.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1393937 bytes, checksum: d627ac6102daffc287744ec3395e1fd3 (MD5) Previous issue date: 2013-08-09 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Flocculent yeasts are useful in fermentation processes because they can be easily separated from the fermentation mash reducing costs with cell separation equipment. The flocculation phenotype is not often found in native yeasts, including the species Kluyveromyces marxianus which has a high biotechnological potential due to its ability to assimilate a variety of substrates, ferment at higher temperatures and present a high growth rate. This work aimed at the construction of flocculent strains of K. marxianus with potential to ferment agro-industrial residues. The cassettes used in the construction of flocculent strains of K. marxinaus were amplified from 4 different flocculent strains of Saccharomyces cerevisiae, each strain has a cassette consisting of the URA3 gene as a selection mark and a flocculation gene FLO under control of the constitutive promoter TDH3 (URA3-TDH3p-FLO) and each of these strains contains a different flocculation gene (FLO1, FLO5, FLO9 and FLO10). In order to obtain an auxotrophic mutant strain of K. marxinaus UFV-3, the URA3 gene of this strain was amplified and cloned. Then a fragment of its coding region was removed yielding an inactive gene (URA3Δ), which was used in the transformation of K. marxinaus UFV-3. Due to the impossibility to obtain an auxotrophic strain of K. marxinaus UFV-3, we used the CBS 6556 strain auxotrophic for uracil. This strain was transformed by electroporation using the cassettes from S. cerevisiae. We obtained 4 flocculent strains of K. marxianus CBS 6556 that were selected by growth in medium without uracil. By carrying out the phenotypic analysis of the transformants, it was found that all the strains were flocculants; however, the flocculation degree was different between the 4 strains. The fermentation characteristics of the flocculent strains of K. marxianus were evaluated by using glucose, lactose and glucose/lactose as carbon and energy source and it was found that the strain transformed with the cassette containing the gene FLO9 (KMCBSFLO9) was the strain that showed the best fermentative performance preserving its ability to flocculation. In order to verify the influence of flocculation phenotype in the alcohol tolerance, the KMCBSFLO9 strain, the less flocculant strain (KMCBSFLO10) and the no-flocculant strain (KMCBSΔURA3) were cultured in the presence of different concentrations of ethanol. The results showed that the flocculent and no-flocculant strains present higher cell viability after 12 hours of culture in the presence of different concentrations of ethanol. / Leveduras floculantes são de grande utilidade em processos fermentativos, pois são separadas facilmente do mosto de fermentação. Diminuindo os custos associados á etapa de separação das células. O fenótipo de floculação não é encontrado com frequência em leveduras nativas, incluindo a espécie Kluyveromyces marxianus a qual apresenta alto potencial biotecnológico devido a sua hablilidade de assimilar um amplo espectro de substratos, apresentar uma alta taxa de crescimento e ser termotolerante. Este trabalho teve como objetivo a construção de linhagens floculantes de K. marxianus com potencial para fermentar resíduos agroindustriais. Os cassetes utilizados na construção das linhagens floculantes de K. marxinaus foram amplificados de 4 linhagens floculantes de Saccharomyces cerevisiae que possuem, cada uma, um cassete constituído pelo o gene URA3 como marca de seleção e por um gene de floculação FLO, sob o controle do promotor constitutivo TDH3 (URA3-TDH3p-FLO). Sendo que cada uma dessas linhagens contém um gene de floculação diferente (FLO1, FLO5, FLO9 E FLO10). A fim de obter um mutante auxotrófico da linhagem de K. marxinaus UFV-3 o gene URA3 desta linhagem foi amplificado, clonado e um fragmento da sua região codificadora foi retirado obtendo-se um gene inativo URA3Δ que foi utilizado na transformação da K. marxinaus UFV-3. Neste trabalho não foi possível obter uma linhagem de K. marxinaus UFV-3 auxotrófica para uracila, por isso utilizamos a linhagem CBS 6556 já auxotrófica para uracila. Esta linhagem foi transformada por eletroporação utilizando os cassetes FLO obtendo-se 4 diferentes linhagens floculantes de K. marxianus CBS 6556 que foram selecionadas em meio sem uracila. A análise fenotípica dos transformantes mostrou que que todas as linhagens eram floculantes, contudo, o grau de floculação variou entre as 4 linhagens. Avaliou-se o perfil fermentativo das linhagens floculantes de K. marxianus utilizando glicose, lactose e glicose mais lactose como fonte de carbono e energia. Foi verificado que a linhagem transformada com o cassete contendo o gene FLO9 (KMCBSFLO9) apresentou melhor capacidade fermentativa e manteve sua capacidade de floculação. Com a finalidade de verificar a influência do fenótipo de floculação na viabilidade celular em resposta ao etanol a linhagem de KMCBSFLO9, assim como da linhagem menos floculante (KMCBSFLO10), e a não floculante (KMCBSΔURA3) foram cultivadas na presença de diferentes concentrações de etanol. Os resultados demonstraram que tanto a linhagem não floculante como as duas linahgens floculantes se mostraram resistentes ao etanol.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 01 - capa_abstract.pdf: 112846 bytes, checksum: f260bcc7fb2e9aa227782fd9e02a5c86 (MD5) Previous issue date: 2006-10-04 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The diversity of resistance mechanisms to antimicrobial compounds was investigated in E. coli strains isolated from poultry. All 30 isolates were resistant to ampicillin and 26 of them were resistant to at least two antibiotics. Multi-resistance profiles were confirmed, including intermediate levels. Forty percent of the strains presented four resistance markers and 93% of the isolates were resistant to tetracycline, an antibiotic commonly used in poultry farms. The β-lactamase diversity among the strains was probed against seven compounds. Among strains bearing the same resistance profile for other groups of antimicrobial drugs, it was possible to observe different β-lactamases activity against the tested substrates. This fact suggests either a pool of resistance genes or regulatory differences. The isolate that displayed confirmed activity against six of the β-lactamic antibiotics bears a large molecular mass plasmid that confers the AmpR phenotype. A fragment of this plasmid with approximately 5 kb was subcloned in the pCCR9 vector which is commonly used to detect β-lactamase genes. The amino acid deduced from nucleotide sequencing displayed 100% of identity to TEM-1, a class A serine β-lactamase. Next to the gene encoding TEM-1 was found putative transposon related to the Tn3 family, albeit with some differences in the order and direction of transcription of the genes. / A diversidade dos mecanismos de resistência a antimicrobianos foi investigada em Escherichia coli, originadas de frangos de corte. Dos 30 isolados, todos resistentes à ampicilina, 26 apresentaram mais de uma marca de resistência. Foram confirmados modelos de multirresistência, incluindo níveis intermediários de resistência. Em 40% dos casos, ocorreram quatro marcas e 93% dos isolados resistiram à ação de tetraciclina, um promotor de crescimento usual na agropecuária. A diversidade de β-lactamases entre os isolados foi demonstrada pela ação direta contra sete β-lactâmicos. Os isolados com mesmo modelo de resistência possuíam, sob mesmas condições, espectro de ação e de atividade diferentes, mostrando que há amplo pool de genes de resistência, ou diferenças regulatórias nessas bactérias. O isolado com maior espectro de ação, confirmado sobre seis β-lactâmicos, contém um plasmídeo de alta massa molecular, que confere resistência a ampicilina. Um fragmento deste plasmídeo, com aproximadamente 5 kb, foi clonado em pCCR9, vetor usado para detecção de genes de resistência a β-lactâmicos. As análises das seqüências obtidas revelaram 100 % de identidade com TEM-1, uma serina β-lactamase da classe A. Próximo ao gene codificador da TEM-1, foi encontrado um transposon putativo relacionado com os da família Tn3, porém com particularidades na ordem e direção de transcrição dos genes componentes.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:52:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1428549 bytes, checksum: e5f4d14aaf06e63420c374bb81738d9b (MD5) Previous issue date: 2014-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fungi belonging to the genus Gibellula are found parasitizing spiders and have wide distribution in tropical and subtropical regions of the planet. This genus is spider specific and it is believed that this specificity is related to infection mechanism that probably acts at the level of the exoskeleton. Although many reports and descriptions of Gibellula spp. in the literature, there is no approach to the ecology of these natural enemies of spiders. Moreover, the knowledge of this kind in Brazil is extremely scarce. Therefore the aim of this study was to conduct a survey of the species of Gibellula in Research, Training and Environmental Education Mata do Paraiso, Viçosa - MG station, and to make a study of classical taxonomy, and establish relationships between host-pathogen interaction. Were performed collections in different areas of the forest in order to favor the detection of greater quantity and diversity of these fungi. The mummified spiders were identified to better understand the host-pathogen relationship. Were collected a total of 79 parasitized spiders that were distributed in ten families (Anyphaenidae, Araneidae, Corinnidae, Linyphiidae, Pholcidae, Salticidae, Sparassidae, Theridiidae, Thomisidae, Zodariidae), the most frequent Anyphaenidae (25.3%) and Pholcidae (26.6 %). Of the 79 fungi specimens collected, 20 ( 25.3%) were isolated and kept in pure culture. Among them nine species of Gibellula were identified, including Gibellula dimorpha was first reported in Brazil , and five new species will be proposed. / Fungos pertencentes ao gênero Gibellula são encontrados parasitando aranhas e possuem ampla distribuição pelas regiões tropicais e subtropicais do planeta. Este gênero é específico de aranhas e acredita-se que essa especificidade esteja relacionada ao mecanismo de infecção que provavelmente atua em nível de exoesqueleto. Apesar de diversos relatos e descrições de Gibellula spp. na literatura, não há nenhuma abordagem relativa a ecologia desses inimigos naturais em aranhas. Além disso, o conhecimento a respeito desse gênero no Brasil é extremamente escasso. Portanto o objetivo deste trabalho foi conduzir um levantamento das espécies de Gibellula na Estação de Pesquisas, Treinamento e Educação Ambiental Mata do Paraíso, Viçosa-MG, bem como efetuar um estudo de taxonomia clássica, e estabelecer relações de interação entre patógeno-hospedeiro. Foram realizadas coletas em diferentes áreas da mata de forma a favorecer a detecção de maior quantidade e diversidade desses fungos. As aranhas mumificadas foram identificadas para melhor compreensão da relação patógeno-hospedeiro. Foram coletadas um total de 79 aranhas parasitadas que se distribuíram em dez famílias (Anyphaenidae, Araneidae, Corinnidae, Linyphiidae, Pholcidae, Salticidae, Sparassidae, Theridiidae, Thomisidae, Zodariidae), sendo as mais frequentes Anyphaenidae (25,3%) e Pholcidae (26,6%). Dos 79 espécimes de fungos coletados, 20 (25,3%) foram isolados e mantidos em cultura pura. Dentre eles, nove espécies de Gibellula foram identificadas, entre as quais Gibellula dimorpha foi relatada pela primeira vez no Brasil, e cinco espécies novas serão propostas.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:52:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1038016 bytes, checksum: e4a54618750c87d0bd2298c56aa44839 (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This study aimed the prospection of bacteria capable of using petroleum hydrocarbons as their source of carbon and energy, and the analysis of the structure and dynamics of the microbial community that colonizes the oil after its scattering in the sea. We used data from T-RFLP multiplex, and simulate and analyze the efficiency of different petroleum bioremediation strategies by Trindade Island s shoreline. For these analyses, an experiment was settled 100 meters away from Turtles Beach, an aluminum rod, measuring 1.5 meters containing 20 acrylic slabs (4 x 3 cm) with a thin petroleum layer over them, was stuck to a fixed float and rested there for 60 days. During this time, triplicates for a posterior extraction of DNA present in the biofilms formed over the oil layer were made. Passed the 60 days, the last 5 slabs were collected with the purpose of isolation in enrichment media, thus, colonies capable of using hydrocarbons as carbon source could be obtained. The biofilm DNA was used in PCR multiplex for the detection of Bacteria, Archaea and fungi and a posterior diversity analysis. Water from the island s shoreline was used in an experiment that simulates different bioremediation strategies: natural attenuation, bioestimulation, bioaugmentation and the mutual use of the last two strategies. The simulation in this experiment was conducted using nutrients, a bacteria previously isolated from the environment Rhodococcus rhodochrous, biosurfactant and crude oil, previously heated up to 210 oC for the elimination of the more volatile compounds. Fifteen isolates capable of growing in media containing hydrocarbon were isolated. The microbial community structure was studied based on Shannon-Weaver's index (H ), Simpson's dominance (D) and Margalef's richness (R). The Bacteria domain showed to be most diversified during the oil colonization. The composition of the microbial community over the oil showed some variation in the in situ experiment during the first 30 days of sea exposition. The addition of nutrients and a biosurfactant generated significant raise in the oil degradation. The treatment that provided the best solution was the one with nutrients, biosurfactant and the inoculum. In conclusion, the biostimulation with nutrients and biosurfactants, along with bioaugmentation with an autochthonous isolated, are recommended bioremediation strategies in case of accidents with oil spills by Trindade Island's coast. / Este estudo teve como objetivos prospectar bactérias capazes de utilizar hidrocarbonetos do petróleo como fonte de carbono e energia, analisar a estrutura e dinâmica da comunidade microbiana que coloniza o petróleo após sua exposição no mar utilizando dados de T­RFLP multiplex, assim como simular e analisar a eficiência de diferentes estratégias de biorremediação de petróleo no litoral da Ilha da Trindade Brasil. Para tanto, foi montado um experimento à aproximadamente 100 m da praia das Tartatugas na Ilha da Trindade, onde uma haste de alumínio de 1,5 m de comprimento, contendo 20 cupons de acrílico (4 cm x 3cm) com uma delgada camada de petróleo em sua superfície, foi presa a uma bóia fixa e permaneceu no local por 60 dias. Ao longo desse período, foram realizadas coletas em triplicata para posterior extração do DNA dos biofilmes formados sobre a camada de petróleo nas placas. Após os 60 dias, as últimas cinco placas foram coletadas para o isolamento em meios de enriquecimento para a obtenção de colônias capazes de utilizar hidrocarbonetos como fonte de carbono. O DNA extraído dos biofilmes foi utilizado em PCR multiplex para a detecção de Bacteria, Archaea e fungos e posterior análise de índices de diversidade. Água coletada no litoral da Ilha da Trindade foi utilizada em um experimento simulando diferentes estratégias de biorremediação: atenuação natural, bioestimulação, bioaumentação e o conjunto das duas últimas. Nas simulações, foram utilizados nutrientes, uma bactéria isolada do próprio ambiente como inóculo (Rhodococcus rhodochrous), biossurfactante e petróleo previamente aquecido a 210 °C para remoção dos compostos voláteis. Foram obtidos 15 isolados capazes de crescer em meios contendo hidrocarbonetos. A estrutura da comunidade microbiana foi avaliada com base nos índices de Shannon­Weaver (H ), dominância de Simpson (D) e riqueza de Margalef (R). O domínio Bacteria mostrou ser o mais diverso durante a colonização do óleo. Foram observadas flutuações significativas na composição da comunidade microbiana aderida ao petróleo no experimento in situ durante os primeiros 30 dias de exposição do petróleo no mar. A adição de nutrientes e de biossurfactante promoveu aumento significativo da biodegradação do petróleo. O tratamento que forneceu a melhor resposta foi aquele em que foram adicionados nutrientes, inóculo e biossurfactante. Conclui­se que a bioestimulação com nutrientes e biossurfactantes, além da bioaumentação com um isolado autóctone, são estratégias de biorremediação recomendadas em caso de acidentes envolvendo derramamentos de petróleo na região litorânea da Ilha da Trindade.