Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2017-09-26T21:37:04Z No. of bitstreams: 1 Disserta??o definitiva ILANA - revisada.pdf: 1964258 bytes, checksum: 73df2e7ec0b51bebe48619b3d272ec45 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T21:37:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disserta??o definitiva ILANA - revisada.pdf: 1964258 bytes, checksum: 73df2e7ec0b51bebe48619b3d272ec45 (MD5) Previous issue date: 2017-03-27 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado da Bahia - FAPEB / Pineapple is a tropical fruit of great commercial value, Brazil is the second largest producer of pineapple in the world. The most produced variety in the country is the ?Perola?, followed by Smooth Cayenne and, both have a high degree of sus-ceptibility to fusariosis or pineapple gum disease, caused by the fungus Fusarium guttiforme.Once installed, this disease can reduce pineapple yield by up to 80%. Lactic bacteria (BAL) have their metabolic characteristics and the potential to inhibit bacterial and fungal growth, as well as to neutralize toxins produced by F. guttiforme.This work aimed to determine by in vitro tests the inhibitory effect of lactic acid bacteria on the etiologic agent of fusariosis. Qualitative and quantitative microbial inhibition tests were performed, comparing strains of lactic acid bacteria and crude pineapple extract against F. guttiforme isolates. Determination of mycotoxins in the fungal extracts of these isolates. The inhibitory effect of Lactobacillus plantarum Abx3 and Lactobacillus paracasei subsp.paracasei Abx5.2 was observed for isolateson F. guttiforme, the same did not occur with crude pineapple extract, and mycotoxin production was not detected in extracts of fungal isolates. The preliminary results of this work point out that lactic bacteria present potential to be used as a biocontrol product on F. guttiforme. / O abacaxi ? uma fruta tropical de grande valor comercial, sendo o Brasil o se-gundo maior produtor no mundo. A variedade mais produzida no pa?s ? a P?rola, seguida pela Smooth Cayenne, ambas possuem alto grau de suscetibilidade ? fusa-riose ou gomose do abacaxi, causada pelo fungo Fusarium guttiforme. Esta doen?a, uma vez instalada, pode reduzir em at? 80% a produ??o dos cultivares. As bact?rias l?ticas (BAL), devido as suas caracter?sticas metab?licas possuem potencial de inibir o crescimento bacteriano e f?ngico, bem como neutralizar toxinas produzidas por algunsmicro-organismos. Este trabalho teve como objetivodeterminar atrav?s de tes-tes ?in vitro? o efeito inibit?rio de bact?rias l?cticas sobre o agente etiol?gico da fusa-riose do abacaxi.Foram realizados ensaios qualitativo e quantitativode inibi??o mi-crobiana, confrontando cepas de bact?rias l?ticas e extrato bruto do abacaxifrente aisolados de F.guttiforme. Determinarse h? micotoxina nos extratos f?ngicos destes isolados. Constatou-se efeito inibit?rio do Lactobacillus plantarum Abx3 e Lactobacillus paracaseisubsp.paracasei Abx5.2 sobre os isolados de F. guttiforme. O mesmo n?o aconteceu com o extrato bruto de abacaxi, e n?o foi detectada a produ??o de micotoxina nos extratos dos isolados f?ngicos. Os resultados preliminares deste trabalho apontamque as bact?rias l?ticas apresentam potencial de serem utilizadas em formula??es de produto de biocontrolede F. guttiforme.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 803605 bytes, checksum: e8592fe1b32668a421b60b22522cb6d7 (MD5) Previous issue date: 2011-09-05 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Degradation of petroleum hydrocarbons by micro-organisms in coastal environments is a very interesting strategy for remediation of these compounds. However, microbial degradation is often limited by nutrients avaiability, particularly nitrogen and phosphorus. In this work, we compared the effect of addition of water-soluble (urea and KH2PO4) or oleophilic (urea-formaldehyde resin and soy lecithin) nitrogen and phosphorus sources on oil degradation by indigenous micro-organisms and bacteria in consortia in microcosms composed by beach sand contaminated with crude oil. The microcosms were submitted to daily water exchanges representing tides activities. We also analysed the retention capability of both nutrient sources in contaminated sediment. For this, we performed UFC.mL-1 counts and quantification of nitrogen and phosphorus concentrations in the water during the experiment. The remaining oil in the sand was extracted with hexane and quantified by spectrophotometry, in which the degradation corresponds to the difference between the initial and final amounts of oil. Water-soluble nutrients have been shown to be gradually washed away during the water exchange and not remained in the sediment for bacterial supply. However, an opposite pattern was verified for oleophilic nutrients, which is a desirable feature for application in environments with intense action of waves and tides. Despite the increased retention of oleophilic nutrients, there were no significant differences in microbial counts between both treatments. In addition, oil degradation occurred mainly in those microcosms supplied with water-soluble nutrients. Although the inoculated micro-organisms are able to use the oleophilic nutrient sources, more detailed studies on the concentration of nutrients to be applied and the availability of nutrients for micro-organisms are necessary in order to maximize the stimulus generated. / A degradação de hidrocarbonetos de petróleo por micro-organismos em ambientes costeiros é uma estratégia extremamente interessante de remediação desses compostos enquanto contaminantes ambientais. No entanto, essa biodegradação é frequentemente limitada pela disponibilidade de nutrientes, principalmente nitrogênio e fósforo. Neste trabalho foi comparado o efeito da adição de fontes de nitrogênio e fósforo solúveis em água (uréia e KH2PO4) e oleofílicas (resina uréia-formaldeído e lecitina de soja) sobre a degradação de petróleo cru, em microcosmos de areia de praia, por micro-organismos nativos ou adicionados em consórcios. As fontes de nutrientes foram ainda comparadas quanto a sua retenção no sedimento contaminado após trocas diárias de água. Para isso, realizou-se contagens de UFC.mL-1 e análises da concentração de nitrogênio e de fósforo na água. O óleo remanescente na areia foi extraído com hexano e quantificado por espectrofotometria, sendo a degradação correspondente a diferença entre as quantidades inicial e final de petróleo. Verificou-se que os nutrientes hidrossolúveis não permaneceram no sedimento, mas foram gradativamente lavados pela remoção diária de água. Um comportamento inverso ocorreu para os nutrientes oleofílicos, sendo essa uma característica desejável para sua aplicação em ambientes com intensa ação de ondas e marés. Apesar da maior retenção de nutrientes quando esses são oleofílicos, não se verificou diferenças consideráveis nas contagens microbianas entre os dois tratamentos. Além disso, a degradação do óleo ocorreu principalmente naqueles microcosmos supridos com os nutrientes solúveis em água. Embora os micro-organismos inoculados sejam capazes de utilizar as fontes oleofílicas como nutrientes, estudos mais detalhados da concentração a ser aplicada e da disponibilização desses nutrientes para os micro-organismos são necessários, a fim de se maximizar o estímulo gerado.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1393937 bytes, checksum: d627ac6102daffc287744ec3395e1fd3 (MD5) Previous issue date: 2013-08-09 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Flocculent yeasts are useful in fermentation processes because they can be easily separated from the fermentation mash reducing costs with cell separation equipment. The flocculation phenotype is not often found in native yeasts, including the species Kluyveromyces marxianus which has a high biotechnological potential due to its ability to assimilate a variety of substrates, ferment at higher temperatures and present a high growth rate. This work aimed at the construction of flocculent strains of K. marxianus with potential to ferment agro-industrial residues. The cassettes used in the construction of flocculent strains of K. marxinaus were amplified from 4 different flocculent strains of Saccharomyces cerevisiae, each strain has a cassette consisting of the URA3 gene as a selection mark and a flocculation gene FLO under control of the constitutive promoter TDH3 (URA3-TDH3p-FLO) and each of these strains contains a different flocculation gene (FLO1, FLO5, FLO9 and FLO10). In order to obtain an auxotrophic mutant strain of K. marxinaus UFV-3, the URA3 gene of this strain was amplified and cloned. Then a fragment of its coding region was removed yielding an inactive gene (URA3Δ), which was used in the transformation of K. marxinaus UFV-3. Due to the impossibility to obtain an auxotrophic strain of K. marxinaus UFV-3, we used the CBS 6556 strain auxotrophic for uracil. This strain was transformed by electroporation using the cassettes from S. cerevisiae. We obtained 4 flocculent strains of K. marxianus CBS 6556 that were selected by growth in medium without uracil. By carrying out the phenotypic analysis of the transformants, it was found that all the strains were flocculants; however, the flocculation degree was different between the 4 strains. The fermentation characteristics of the flocculent strains of K. marxianus were evaluated by using glucose, lactose and glucose/lactose as carbon and energy source and it was found that the strain transformed with the cassette containing the gene FLO9 (KMCBSFLO9) was the strain that showed the best fermentative performance preserving its ability to flocculation. In order to verify the influence of flocculation phenotype in the alcohol tolerance, the KMCBSFLO9 strain, the less flocculant strain (KMCBSFLO10) and the no-flocculant strain (KMCBSΔURA3) were cultured in the presence of different concentrations of ethanol. The results showed that the flocculent and no-flocculant strains present higher cell viability after 12 hours of culture in the presence of different concentrations of ethanol. / Leveduras floculantes são de grande utilidade em processos fermentativos, pois são separadas facilmente do mosto de fermentação. Diminuindo os custos associados á etapa de separação das células. O fenótipo de floculação não é encontrado com frequência em leveduras nativas, incluindo a espécie Kluyveromyces marxianus a qual apresenta alto potencial biotecnológico devido a sua hablilidade de assimilar um amplo espectro de substratos, apresentar uma alta taxa de crescimento e ser termotolerante. Este trabalho teve como objetivo a construção de linhagens floculantes de K. marxianus com potencial para fermentar resíduos agroindustriais. Os cassetes utilizados na construção das linhagens floculantes de K. marxinaus foram amplificados de 4 linhagens floculantes de Saccharomyces cerevisiae que possuem, cada uma, um cassete constituído pelo o gene URA3 como marca de seleção e por um gene de floculação FLO, sob o controle do promotor constitutivo TDH3 (URA3-TDH3p-FLO). Sendo que cada uma dessas linhagens contém um gene de floculação diferente (FLO1, FLO5, FLO9 E FLO10). A fim de obter um mutante auxotrófico da linhagem de K. marxinaus UFV-3 o gene URA3 desta linhagem foi amplificado, clonado e um fragmento da sua região codificadora foi retirado obtendo-se um gene inativo URA3Δ que foi utilizado na transformação da K. marxinaus UFV-3. Neste trabalho não foi possível obter uma linhagem de K. marxinaus UFV-3 auxotrófica para uracila, por isso utilizamos a linhagem CBS 6556 já auxotrófica para uracila. Esta linhagem foi transformada por eletroporação utilizando os cassetes FLO obtendo-se 4 diferentes linhagens floculantes de K. marxianus CBS 6556 que foram selecionadas em meio sem uracila. A análise fenotípica dos transformantes mostrou que que todas as linhagens eram floculantes, contudo, o grau de floculação variou entre as 4 linhagens. Avaliou-se o perfil fermentativo das linhagens floculantes de K. marxianus utilizando glicose, lactose e glicose mais lactose como fonte de carbono e energia. Foi verificado que a linhagem transformada com o cassete contendo o gene FLO9 (KMCBSFLO9) apresentou melhor capacidade fermentativa e manteve sua capacidade de floculação. Com a finalidade de verificar a influência do fenótipo de floculação na viabilidade celular em resposta ao etanol a linhagem de KMCBSFLO9, assim como da linhagem menos floculante (KMCBSFLO10), e a não floculante (KMCBSΔURA3) foram cultivadas na presença de diferentes concentrações de etanol. Os resultados demonstraram que tanto a linhagem não floculante como as duas linahgens floculantes se mostraram resistentes ao etanol.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 01 - capa_abstract.pdf: 112846 bytes, checksum: f260bcc7fb2e9aa227782fd9e02a5c86 (MD5) Previous issue date: 2006-10-04 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The diversity of resistance mechanisms to antimicrobial compounds was investigated in E. coli strains isolated from poultry. All 30 isolates were resistant to ampicillin and 26 of them were resistant to at least two antibiotics. Multi-resistance profiles were confirmed, including intermediate levels. Forty percent of the strains presented four resistance markers and 93% of the isolates were resistant to tetracycline, an antibiotic commonly used in poultry farms. The β-lactamase diversity among the strains was probed against seven compounds. Among strains bearing the same resistance profile for other groups of antimicrobial drugs, it was possible to observe different β-lactamases activity against the tested substrates. This fact suggests either a pool of resistance genes or regulatory differences. The isolate that displayed confirmed activity against six of the β-lactamic antibiotics bears a large molecular mass plasmid that confers the AmpR phenotype. A fragment of this plasmid with approximately 5 kb was subcloned in the pCCR9 vector which is commonly used to detect β-lactamase genes. The amino acid deduced from nucleotide sequencing displayed 100% of identity to TEM-1, a class A serine β-lactamase. Next to the gene encoding TEM-1 was found putative transposon related to the Tn3 family, albeit with some differences in the order and direction of transcription of the genes. / A diversidade dos mecanismos de resistência a antimicrobianos foi investigada em Escherichia coli, originadas de frangos de corte. Dos 30 isolados, todos resistentes à ampicilina, 26 apresentaram mais de uma marca de resistência. Foram confirmados modelos de multirresistência, incluindo níveis intermediários de resistência. Em 40% dos casos, ocorreram quatro marcas e 93% dos isolados resistiram à ação de tetraciclina, um promotor de crescimento usual na agropecuária. A diversidade de β-lactamases entre os isolados foi demonstrada pela ação direta contra sete β-lactâmicos. Os isolados com mesmo modelo de resistência possuíam, sob mesmas condições, espectro de ação e de atividade diferentes, mostrando que há amplo pool de genes de resistência, ou diferenças regulatórias nessas bactérias. O isolado com maior espectro de ação, confirmado sobre seis β-lactâmicos, contém um plasmídeo de alta massa molecular, que confere resistência a ampicilina. Um fragmento deste plasmídeo, com aproximadamente 5 kb, foi clonado em pCCR9, vetor usado para detecção de genes de resistência a β-lactâmicos. As análises das seqüências obtidas revelaram 100 % de identidade com TEM-1, uma serina β-lactamase da classe A. Próximo ao gene codificador da TEM-1, foi encontrado um transposon putativo relacionado com os da família Tn3, porém com particularidades na ordem e direção de transcrição dos genes componentes.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:52:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1428549 bytes, checksum: e5f4d14aaf06e63420c374bb81738d9b (MD5) Previous issue date: 2014-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fungi belonging to the genus Gibellula are found parasitizing spiders and have wide distribution in tropical and subtropical regions of the planet. This genus is spider specific and it is believed that this specificity is related to infection mechanism that probably acts at the level of the exoskeleton. Although many reports and descriptions of Gibellula spp. in the literature, there is no approach to the ecology of these natural enemies of spiders. Moreover, the knowledge of this kind in Brazil is extremely scarce. Therefore the aim of this study was to conduct a survey of the species of Gibellula in Research, Training and Environmental Education Mata do Paraiso, Viçosa - MG station, and to make a study of classical taxonomy, and establish relationships between host-pathogen interaction. Were performed collections in different areas of the forest in order to favor the detection of greater quantity and diversity of these fungi. The mummified spiders were identified to better understand the host-pathogen relationship. Were collected a total of 79 parasitized spiders that were distributed in ten families (Anyphaenidae, Araneidae, Corinnidae, Linyphiidae, Pholcidae, Salticidae, Sparassidae, Theridiidae, Thomisidae, Zodariidae), the most frequent Anyphaenidae (25.3%) and Pholcidae (26.6 %). Of the 79 fungi specimens collected, 20 ( 25.3%) were isolated and kept in pure culture. Among them nine species of Gibellula were identified, including Gibellula dimorpha was first reported in Brazil , and five new species will be proposed. / Fungos pertencentes ao gênero Gibellula são encontrados parasitando aranhas e possuem ampla distribuição pelas regiões tropicais e subtropicais do planeta. Este gênero é específico de aranhas e acredita-se que essa especificidade esteja relacionada ao mecanismo de infecção que provavelmente atua em nível de exoesqueleto. Apesar de diversos relatos e descrições de Gibellula spp. na literatura, não há nenhuma abordagem relativa a ecologia desses inimigos naturais em aranhas. Além disso, o conhecimento a respeito desse gênero no Brasil é extremamente escasso. Portanto o objetivo deste trabalho foi conduzir um levantamento das espécies de Gibellula na Estação de Pesquisas, Treinamento e Educação Ambiental Mata do Paraíso, Viçosa-MG, bem como efetuar um estudo de taxonomia clássica, e estabelecer relações de interação entre patógeno-hospedeiro. Foram realizadas coletas em diferentes áreas da mata de forma a favorecer a detecção de maior quantidade e diversidade desses fungos. As aranhas mumificadas foram identificadas para melhor compreensão da relação patógeno-hospedeiro. Foram coletadas um total de 79 aranhas parasitadas que se distribuíram em dez famílias (Anyphaenidae, Araneidae, Corinnidae, Linyphiidae, Pholcidae, Salticidae, Sparassidae, Theridiidae, Thomisidae, Zodariidae), sendo as mais frequentes Anyphaenidae (25,3%) e Pholcidae (26,6%). Dos 79 espécimes de fungos coletados, 20 (25,3%) foram isolados e mantidos em cultura pura. Dentre eles, nove espécies de Gibellula foram identificadas, entre as quais Gibellula dimorpha foi relatada pela primeira vez no Brasil, e cinco espécies novas serão propostas.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:52:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1038016 bytes, checksum: e4a54618750c87d0bd2298c56aa44839 (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This study aimed the prospection of bacteria capable of using petroleum hydrocarbons as their source of carbon and energy, and the analysis of the structure and dynamics of the microbial community that colonizes the oil after its scattering in the sea. We used data from T-RFLP multiplex, and simulate and analyze the efficiency of different petroleum bioremediation strategies by Trindade Island s shoreline. For these analyses, an experiment was settled 100 meters away from Turtles Beach, an aluminum rod, measuring 1.5 meters containing 20 acrylic slabs (4 x 3 cm) with a thin petroleum layer over them, was stuck to a fixed float and rested there for 60 days. During this time, triplicates for a posterior extraction of DNA present in the biofilms formed over the oil layer were made. Passed the 60 days, the last 5 slabs were collected with the purpose of isolation in enrichment media, thus, colonies capable of using hydrocarbons as carbon source could be obtained. The biofilm DNA was used in PCR multiplex for the detection of Bacteria, Archaea and fungi and a posterior diversity analysis. Water from the island s shoreline was used in an experiment that simulates different bioremediation strategies: natural attenuation, bioestimulation, bioaugmentation and the mutual use of the last two strategies. The simulation in this experiment was conducted using nutrients, a bacteria previously isolated from the environment Rhodococcus rhodochrous, biosurfactant and crude oil, previously heated up to 210 oC for the elimination of the more volatile compounds. Fifteen isolates capable of growing in media containing hydrocarbon were isolated. The microbial community structure was studied based on Shannon-Weaver's index (H ), Simpson's dominance (D) and Margalef's richness (R). The Bacteria domain showed to be most diversified during the oil colonization. The composition of the microbial community over the oil showed some variation in the in situ experiment during the first 30 days of sea exposition. The addition of nutrients and a biosurfactant generated significant raise in the oil degradation. The treatment that provided the best solution was the one with nutrients, biosurfactant and the inoculum. In conclusion, the biostimulation with nutrients and biosurfactants, along with bioaugmentation with an autochthonous isolated, are recommended bioremediation strategies in case of accidents with oil spills by Trindade Island's coast. / Este estudo teve como objetivos prospectar bactérias capazes de utilizar hidrocarbonetos do petróleo como fonte de carbono e energia, analisar a estrutura e dinâmica da comunidade microbiana que coloniza o petróleo após sua exposição no mar utilizando dados de T­RFLP multiplex, assim como simular e analisar a eficiência de diferentes estratégias de biorremediação de petróleo no litoral da Ilha da Trindade Brasil. Para tanto, foi montado um experimento à aproximadamente 100 m da praia das Tartatugas na Ilha da Trindade, onde uma haste de alumínio de 1,5 m de comprimento, contendo 20 cupons de acrílico (4 cm x 3cm) com uma delgada camada de petróleo em sua superfície, foi presa a uma bóia fixa e permaneceu no local por 60 dias. Ao longo desse período, foram realizadas coletas em triplicata para posterior extração do DNA dos biofilmes formados sobre a camada de petróleo nas placas. Após os 60 dias, as últimas cinco placas foram coletadas para o isolamento em meios de enriquecimento para a obtenção de colônias capazes de utilizar hidrocarbonetos como fonte de carbono. O DNA extraído dos biofilmes foi utilizado em PCR multiplex para a detecção de Bacteria, Archaea e fungos e posterior análise de índices de diversidade. Água coletada no litoral da Ilha da Trindade foi utilizada em um experimento simulando diferentes estratégias de biorremediação: atenuação natural, bioestimulação, bioaumentação e o conjunto das duas últimas. Nas simulações, foram utilizados nutrientes, uma bactéria isolada do próprio ambiente como inóculo (Rhodococcus rhodochrous), biossurfactante e petróleo previamente aquecido a 210 °C para remoção dos compostos voláteis. Foram obtidos 15 isolados capazes de crescer em meios contendo hidrocarbonetos. A estrutura da comunidade microbiana foi avaliada com base nos índices de Shannon­Weaver (H ), dominância de Simpson (D) e riqueza de Margalef (R). O domínio Bacteria mostrou ser o mais diverso durante a colonização do óleo. Foram observadas flutuações significativas na composição da comunidade microbiana aderida ao petróleo no experimento in situ durante os primeiros 30 dias de exposição do petróleo no mar. A adição de nutrientes e de biossurfactante promoveu aumento significativo da biodegradação do petróleo. O tratamento que forneceu a melhor resposta foi aquele em que foram adicionados nutrientes, inóculo e biossurfactante. Conclui­se que a bioestimulação com nutrientes e biossurfactantes, além da bioaumentação com um isolado autóctone, são estratégias de biorremediação recomendadas em caso de acidentes envolvendo derramamentos de petróleo na região litorânea da Ilha da Trindade.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:52:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1165886 bytes, checksum: 9908ee426c5cfd8f17fea52b7f132085 (MD5) Previous issue date: 2011-08-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The basidiospores of Pisolithus show low germination percentages despite possessing conspicuous reserve compounds for the provision of carbon and energy during the initial growth of the fungal hyphae. The highly hydrophobic and resistant cell wall of the basidiospore can contribute to basidiospores recalcitrance to germination. Thus, this study aimed at demonstrating the presence of glycogen, polysaccharides, lipids, RNA and proteins in mature basidiospores of Pisolithus microcarpus, determining the fatty acid profile of the basidiospores of ectomycorrhizal fungi, and evaluating methods of permeabilization of the basidiospore cell wall. Hystochemical techniques used in the detection of different reserve compounds in the basidiospores revealed the presence of glycogen, polysaccharides, proteins, RNA, lipids, lipoproteins, neutral lipids, and acidic lipids. The presence of 11 different fatty acids in the basidiospores of P. microcarpus, nine in those of Scleroderma sp. and 16 in the basidiospores of Suillus sp. was observed in our study. The most abundant fatty acids in the fungal basidiospores were 18:1w9c and 16:0. Besides oleic and palmitic acids, the following fatty acids showed significant contents: 16:1w5c 16:0, 18:1w5c for P. microcarpus; 12:1 AT11-12, 18:00 for Scleroderma sp.; 15:00 and 18:00 for Suillus sp. The fatty acid profile of the basidiospores of P. microcarpus showed 36.8 % similarity to that of Scleroderma sp. The fatty acid profile of these two species showed a similarity of only 5.2 % compared to that of Suillus sp. The use of chitinase, cellulase, and lyticase for 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, and 24 h, at 30 °C, under stirring at 80 rpm, and of sulfuric acid at concentrations of 5, 10, 25, 50 % (v / v) for 5, 10, 25, 50 or 80s did not promote cell wall permeability. The treatment with sodium hypochlorite at concentrations of 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 90 and 100 % of original concentration of active chlorine (20 g L-1) and contact times of 5, 10 , 20, 30, 40, 50, 60, 70, and 80s promoted the permeabilization of the basidiospore cell wall as evaluated by the staining of internal fatty acids with Sudan Black B. The highest percentage of permeabilized basidiospores, 97 %, was obtained with the treatment with hypochlorite at 100 % for 80s. However, the viability tests and the observation of basidiospores by scanning electron microscopy revealed the loss of viability and cell wall integrity. The exposure of the basidiospores to sodium hypochlorite at 5 % for 40s promoted the highest percentages of permeabilized basidiospores, 83 %, without loss of viability and morphological damages to the spore cell wall. These results contribute to the understanding of the variables that may play a role in the process of germination of basidiospores of P. microcarpus and allow the development of strategies to improve the isolation of monokaryons in vitro. / Os basidiósporos Pisolithus apresentam baixas percentagens de germinação, embora disponham de compostos de reserva para a provisão de carbono e energia durante o crescimento inicial das hifas. Neles, a parede celular altamente hidrofóbica e resistente pode contribuir para a recalcitrância à germinação. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo demonstrar a presença de glicogênio, polissacarídeo, lipídeos, RNA e proteínas em basidiósporos maduros de Pisolithus microcarpus, determinar o perfil de ácidos graxos de basidiósporos de fungos ectomicorrízicos e avaliar métodos de permeabilização da parede celular dos basidiósporos. As técnicas histoquímicas utilizadas na detecção de diferentes compostos de reserva nos basidiósporos evidenciaram a presença de glicogênio, polissacarídeos, proteínas, RNA, lipídeos totais, lipoproteínas, lipídeos neutros e lipídeos ácidos. Detectou-se a presença de onze ácidos graxos distintos nos basidiósporos de P. microcarpus, nove nos de Scleroderma sp. e dezesseis nos de Suillus sp. Os ácidos graxos mais abundantes nas estruturas fúngicas analisadas foram o 18:1w9c e o 16:0. Além do ácido oléico e ácido palmítico, destacaram-se os seguintes ácidos graxos: 16:1w5c, 18:1w5c para P. microcarpus; 12:1at11-12 e 18:00 para Scleroderma sp.; 18:00 e 15:00 para Suillus sp. O perfil de ácidos graxos dos basidiósporos de P. microcarpus apresentou similaridade de 36,8 % com o de Scleroderma sp. O perfil de ácidos graxos dessas duas espécies apresentou similaridade de somente 5,2 % em relação àquele de Suillus sp. O uso de quitinase, liticase e celulase por 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12 e 24 h, sob agitação a 80 rpm e a 30 °C, não resultou na permeabilização da parede celular dos basidiósporos. O tratamento dos basidiósporos com ácido sulfúrico nas concentrações de 5, 10, 25, 50 % (v/v), por 5, 10, 25, 50 ou 80 s, também não resultou na permeabilização dos basidiósporos. Os tratamentos com hipoclorito de sódio em concentrações de 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 90 e 100 % da concentração original de cloro ativo (20 g L- 1) e tempos de contato de 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 e 80 s promoveram a permeabilização da parede celular dos basidiósporos avaliada pela penetração do corante Negro Sudão B. A maior percentagem de basidiósporos permeabilizados, 97 %, foi obtida com o tratamento com hipoclorito a 100 % pelo tempo de 80 s. No entanto, os testes de viabilidade e a observação dos basidiósporos por microscopia eletrônica de varredura evidenciaram a perda da integridade da parede celular e da viabilidade dos esporos quando submetidos a esse tratamento. A exposição dos basidiósporos ao hipoclorito de sódio a 5 % pelo tempo de 40 s foi o tratamento que resultou em maiores percentagens (83 %) de basidiósporos permeabilizados, sem prejuízos na viabilidade e da morfologia desses propágulos. Os resultados obtidos contribuem para a compreensão das variáveis que atuam no processo de germinação dos basidiósporos de P. microcarpus e permitirão o desenvolvimento de estratégias visando melhorar a obtenção de monocários in vitro.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1021310 bytes, checksum: 0c045c919e03b4c610ced66f97c4c031 (MD5) Previous issue date: 2013-09-06 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The inulinases present a great variety of applications, such as the production of fructose syrup, bioethanol and fructooligosaccharides. The industrial versatility presented by these enzymes drives the discovery of new sources of microbial inulinase. In this study, 48 fungi were isolated from the rhizosphere of yacon tuber (Polymnia sanchifolia). The criteria to screening the fungi producers of inulinase were: growth in inulin as unique carbon source and enzyme activitiy by the DNS method. Six promising fungi were selected for the analysis of halo formation by inulin hydrolysis and molecular identification using the ITS rDNA region. For the following studies, the fungus Fusarium oxysporum F6 was selected for having the best production of inulinase and the conditions of inulinase production by this fungus were studied. The best enzyme production occurred at 72 h of growth in minimal medium with 2% inulin. Through the response surface methodology using solid-state fermentation, it was possible to estimate that the increase of the inulin concentration affected the inulinase production by this fungus, reaching a production of up to 2.2 U/ml of inulinase. Optimal activity was observed at 50 °C and pH 5.5. The thin layer chromatography showed that the enzyme has endo-inulinase activity. Comparison of the amino acid sequence of F. oxysporum f. sp. cubense 4 with other fungal inulinases reinforce this characteristic, given the presence of conserved regions with the sequences of other endo-inulinase. The phylogenetic analysis also showed a similarity between the amino acid sequences encoding fungal endo-inulinase. This study demonstrated that the yacon tuber is a good source for the isolation of fungal inulinase producers because a reasonable number of isolates were obtained in trials using this source. The fungus Fusarium oxysporum F6 showed the greatest potential for inulinase production, mainly in solid state fermentation. The fungus Staphylotrichum boninense was also isolated and inulinase production of this fungus will be studied in more detail, due to the reports of their differential production of secondary metabolites by this fungus. / As inulinases apresentam uma variedade de aplicações, como a produção de xarope de frutose, bioetanol e frutooligossarídeos. A versatilidade industrial apresentada por estas enzimas impulsiona a descoberta de novas fontes de inulinases microbianas. Neste estudo, 48 fungos foram isolados a partir da rizosfera do tubérculo yacon (Polymnia sanchifolia). Os isolados passaram por uma triagem, em que os critérios avaliados foram o crescimento em meio mínimo contendo 1% de inulina como única fonte de carbono e a atividade enzimática pelo método de DNS. Os seis fungos mais promissores foram selecionados para a análise da formação de halo de hidrólise da inulina e identificação molecular utilizando a região ITS rDNA. Para os estudos seguintes, o fungo Fusarium oxysporum F6 foi selecionado por apresentar a melhor produção de inulinase e as condições de produção de inulinase por esse fungo foram estudadas. A melhor produção da enzima ocorreu em 72 h de crescimento em meio mínimo e em 2% de inulina. Através da metodologia de superfície de resposta, utilizando a fermentação em estado sólido, foi possível verificar que o aumento na concentração de inulina afetou positivamente a produção de inulinase por esse fungo, alcançando uma produção de até 2,2 U/mL de inulinase. A atividade ótima foi verificada na temperatura de 50 °C e pH 5,5. A cromatografia de camada delgada mostrou que a enzima apresenta atividade de endo-inulinase. Comparações de uma sequência de aminoácidos de F. oxysporum f. sp. cubense 4 com outras inulinases fúngicas reforçaram essa característica, devido à presença de regiões conservadas com as sequências de outras endo-inulinases. A análise filogenética também demonstrou a proximidade entre as sequências de aminoácidos que codificam endo-inulinases fúngicas. Este trabalho demonstrou que o tubérculo yacon é uma boa fonte para o isolamento de fungos produtores de inulinase, pois um razoável número de isolados foi obtido nas triagens utilizando essa fonte. O fungo Fusarium oxysporum F6 apresentou o maior potencial de produção de inulinase, principalmente em fermentação no estado sólido. O fungo Staphylotrichum boninense também foi isolado e a produção de inulinase desse fungo ainda será estudada mais detalhadamente, devido aos relatos de sua produção diferenciada de metabólitos secundários.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 310696 bytes, checksum: e605f10bbbe4b744866d2e079c4a4535 (MD5) Previous issue date: 2003-08-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Alcohol dehydrogenase, ADH, activity was investigated in Streptococcus thermophilus NCDO 1968, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus ATCC 11842, Lactobacillus acidophilus ATCC 4356, and the probiotic strain Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20, after growth at 37°C for 12 hours, and storage at 4°C for 21 days. L. delbrueckii subsp. bulgaricus and L. acidophilus presented positive results for ADH activity in Alcohol Indicator Medium, while L. delbrueckii UFV H2b20 presented negative results after 21 days. This method was not discriminatory for S. thermophilus. ADH activity was also measured by the oxidation of NAD(P)H and expressed as μmol of NAD(P)H oxydized per min per mg protein. The average activity in L. acidophilus was 1,06x10-7 µmol.min-1.mg-1. The activity increased to 9,17x10-7µmol.min-1.mg-1 after cells were kept in MRS medium at 4°C, for 5 days. Increases in ADH activity were also detected in cell free extracts of L. delbrueckii subsp. bulgaricus and S. thermophilus. The three strains displayed low ADH activity in MRS broth after 21 days at 4°C. The headspace analysis by Gas Chromatography/ Mass Spectroscopy revealed acetaldehyde production by L. delbrueckii subsp. bulgaricus, L. acidophilus and S. thermophilus. The latter produced acetaldehyde only after storage at 4°C. Ethanol production was not detected. Despite some ADH activity was detected in liquid medium, the combined results do not support completely the hypothesis that ADH activity would be induced itself after storage at low temperatures. Other studies are still needed. / A atividade de etanol desidrogenase, ADH, foi investigada em espécies de bactérias usadas na fabricação do iogurte, Streptococcus thermophilus NCDO 1968, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus ATCC 11842, Lactobacillus acidophilus ATCC 4356, e da linhagem probiótica Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20, após crescimento a 37°C por 12 horas e estocagem a 4°C por 21 dias. Em meio indicador de álcool, L. delbrueckii subsp. bulgaricus e L. acidophilus apresentaram resultado positivo para atividade de ADH, enquanto L. delbrueckii UFV H2b20, resultado negativo. A detecção da atividade, nesse meio, não foi discriminatória para S. thermophilus. A atividade de ADH, em meio líquido, foi determinada pela medida da oxidação de NAD(P)H e expressa em µmoles de NAD(P)H oxidado por minuto por mg de proteína. A atividade em L. acidophilus foi, em média de 1,06x10-7 µmol.min-1.mg-1, aumentando para 9,17x10- 7µmol.min-1.mg-1, após a estocagem das células em meio MRS, por 5 dias, a 4°C. Também houve aumento de atividade de ADH nos extratos livres de células de L. delbrueckii subsp. bulgaricus e S. thermophilus. Os resultados em meio líquido mostraram que as três culturas apresentaram baixa atividade de ADH durante a estocagem por 21 dias, a 4°C. A metodologia baseada em GC/MS, por headspace, permitiu detectar acetaldeído produzido por L. delbrueckii subsp. bulgaricus, L. acidophilus e S. thermophilus, o qual produziu acetaldeído somente após a estocagem a 4°C. Entretanto, a atividade de ADH não foi observada após a incubação para crescimento a 37°C, por 12 h, nem após a estocagem a 4°C por 21 dias, não sendo observada a produção de etanol, nas condições estudadas. Estes resultados não confirmam a hipótese de uma ADH que se manifestaria após longos períodos em baixas temperaturas, embora baixa atividade da enzima tenha sido detectada em meio líquido. Outros estudos são necessários.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 355631 bytes, checksum: 3e49bb2d2677506413b7513516919754 (MD5) Previous issue date: 2011-02-21 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Endophytic bactéria in fruits inhabits internal tissues without cause visible damage or symptons. However, there is no report of their presence and the diversity in Coffea canephora fruits. Thereby, this work aimed to determine the existence and diversity of cultivable endophytic bacteria in fruits of that specie in three maturation stages. Bacterial isolation and quantification were performed in R2A medium and resulted in 140 isolates gathered in 21 morphotypes, being 55 % of Gram-positive bacteria. The community is composed by 14 genera and 18 bacterial species belonging to phylum Actinobacteria, Firmicutes, Bacteroides, Alpha and Gamma- Proteobacteria. For the first time, Kocuria turfanensis and Pantoa vagans are identified as endophytic species. From 18 species identified as endophytic in C. canephora fruits, seven are not described as endophytic in fruits, namely: Bacillus thuringiensis, Bacillus licheniformis, Agrobacterium tumefaciens, Escherichia coli, Enterobacter hormaechei, Chryseobacterium sp. and Ochrobactrum sp.. The diversity of cultivable endophytic bacteria was distinct in the three maturation stages of C. canephora fruits, being larger in green fruits, where Bacillus subtilis was predominant. The number of Gram-positive isolates was higher than that for Gram-negative in the first two development stage, while in mature fruits the number of colonies from both Gram-positive and Gram-negative was similar. In the last maturation stage, diversity of endophytic bacteria species was smaller and Klebsiella oxytoca was the predominant specie, what was assigned to probable effects of higher caffeine and sugar concentration in the fruits. / Bactérias endofíticas em frutos são as que habitam partes internas sem causar danos ou sintomas aparentes. Entretanto, a presença e diversidade delas em frutos de Coffea canephora não foram ainda relatadas na literatura. Assim, o presente trabalho objetivou determinar a existência e diversidade de bactérias endofíticas cultiváveis nos frutos dessa espécie em três estádios de maturação. O isolamento e a quantificação foram realizados em meio R2A, sendo obtidos 140 isolados que, pelas características morfológicas das colônias, foram agrupadas em 21 morfotipos, sendo 55 % de Gram-positivas. Na comunidade foram identificadas representantes de Actinobacteria, Firmicutes, Bacteroidetes, Alpha- e Gamma-Proteobacteria, com 14 gêneros e 18 espécies. Kocuria turfanensis e Pantoea vagans são pela primeira vez identificadas como espécies endofíticas. Sete das 18 espécies identificadas como endofíticas em frutos de C. canephora não são espécies descritas como endofíticas em frutos, a saber: Bacillus thuringiensis, Bacillus licheniformis, Agrobacterium tumefaciens, Escherichia coli, Enterobacter hormaechei, Chryseobacterium sp. e Ochrobactrum sp.. A diversidade das bactérias endofíticas cultiváveis mostrou-se distinta nos três estádios de maturação de frutos de C. canephora, sendo maior nos frutos verdes, nos quais a predominância foi de Bacillus subtilis. Nos dois primeiros estádios de desenvolvimento o número de isolados de Gram-positivas foi maior que o de Gram-negativas, enquanto nos frutos maduros o número de colônias de Gram-positivas e Gram-negativas foi similar. No último estádio de maturação a diversidade de espécies de bactérias endofíticas foi menor e a Klebsiella oxytoca foi a espécie dominante, fato atribuído a prováveis efeitos da maior concentração de cafeína e açúcares nos frutos.