Made available in DSpace on 2017-07-24T19:22:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliana L Geus.pdf: 4903915 bytes, checksum: 8d7a5502117481a71579a6da1c94de8c (MD5) Previous issue date: 2016-12-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to clinically evaluate the longevity of tooth whitening in smokers, quantify nicotine in teeth exposed to cigarette smoke, as well as evaluate the genotoxic effect of cigarettes through the micronucleus frequency. For this study were conducted four studies. In studies 1 and 2, sixty patients, thirty smokers and thirty nonsmokers, were submitted to at-home bleaching with carbamide peroxide (CP) 10% for three hours daily during three weeks. The color was assessed using the Vita Easyshade spectrophotometer, and shade guides Vita classical organized by value and Vita Bleachedguide D-MASTER, after 12 and 30 months of bleaching, before and after dental prophylaxis. In study 3, sixty-nine teeth were exposed to smoke of 400 cigarettes (positive control). In one group, the dental prophylaxis was performed and, in another, the in-office leaching with hydrogen peroxide (HP) 35%. The color was evaluated initially, after exposure to cigarette smoke, and after dental prophylaxis or in-office bleaching. The teeth of each group were analyzed by gas chromatography and mass spectrometry in order to measure the amount of nicotine in each group. The study 4 consisted of a systematic review that evaluated the frequency of micronuclei in smokers and nonsmokers. Data from studies 1 and 2 showed that for both groups, the main factor was statistically significant (p <0.001). An effective bleaching was observed in both groups at 12 months after dental prophylaxis, however, a dental darkening was observed after 30 months for both groups. In study 3, the amount of nicotine was higher in the positive control group (3.3 ± 1.3 mg / g of tooth), then the prophylaxis group (2.1 ± 1.4 mg / g) and bleaching group (0.8 ± 0.3 mg / g). There was a visually perceptible dental darkening in all groups exposed to cigarette smoke (p <0.001). In the study 4 was a significant difference in the frequency of micronuclei in smokers compared to nonsmokers, however the Chi2 test showed high heterogeneity in the methodology of the assessed studies (p <0.00001). It can be concluded that the bleaching with 10% CP was stable in both groups at 12 months, while the extrinsic stains of diet and smoking were removed by dental prophylaxis, which did not occur in the evaluation of 30 months. Cigarette smoke penetrates in the tooth structure, however the dental prophylaxis and bleaching with PH 35% removed partially the nicotine of tooth. A higher frequency of micronuclei in exfoliated cells of smokers was found in comparison with non-smokers. / O objetivo deste estudo foi avaliar clinicamente a longevidade do clareamento dental em pacientes fumantes, quantificar a nicotina em dentes expostos à fumaça de cigarro, bem como avaliar o efeito genotóxico do cigarro através da frequência de micronúcleos. Para tanto foram realizados quatro estudos. Nos estudos 1 e 2, sessenta pacientes, trinta fumantes e trinta não fumantes, foram submetidos ao clareamento com peróxido de carbamida (PC) 10% por três horas diárias durante três semanas. A cor foi avaliada utilizando o espectrofotômetro Vita Easyshade, e as escalas de cor Vita classical organizada por valor e Vita Bleachedguide 3D-MASTER, após 12 e 30 meses do clareamento, antes e depois de profilaxia dental. No estudo 3, sessenta e nove dentes foram expostos à fumaça de 400 cigarros (controle positivo). Em um grupo foi realizada profilaxia dental e em outro, clareamento de consultório com peróxido de hidrogênio (PH) 35%. A cor foi avaliada inicialmente, após a exposição à fumaça do cigarro, e após a profilaxia dental ou o clareamento em consultório. Os dentes de cada grupo foram analisados por cromatografia gasosa e espectrometria de massas, a fim de mensurar a quantidade de nicotina em cada grupo. O estudo 4 consistiu de uma revisão sistemática que avaliou a frequência de micronúcleos em fumantes e em não fumantes. Os dados dos estudos 1 e 2 mostraram que para ambos os grupos, apenas o fator principal tempo foi estatisticamente significativo (p < 0,001). Um clareamento eficaz foi observado em ambos os grupos na avaliação de 12 meses, após profilaxia dental, no entanto, um escurecimento dental foi observado após 30 meses para ambos os grupos. No estudo 3 a quantidade de nicotina foi maior no grupo controle positivo (3,3 ± 1,3 μg/g de dente), seguida pelo grupo profilaxia (2,1 ± 1,4 μg/g) e grupo clareamento (0,8 ± 0,3 μg/g). Houve um escurecimento dental visualmente perceptível em todos os grupos expostos à fumaça do cigarro (p < 0,001). No estudo 4 foi observada uma diferença significativa na frequência de micronúcleos em fumantes quando comparados aos não fumantes, porém o teste Chi2 revelou alta heterogeneidade na metodologia dos estudos avaliados (p < 0,00001). Pode-se concluir que o clareamento com PC 10% manteve-se estável em ambos os grupos aos 12 meses, quando as manchas extrínsecas da dieta e do cigarro foram removidas por profilaxia dental, o que não ocorreu na avaliação de 30 meses. A fumaça do cigarro penetra na estrutura dental, no entanto a profilaxia dental e o clareamento com PH 35% removeram parcialmente a nicotina do dente. Foi encontrada uma maior frequência de micronúcleos em células esfoliadas de fumantes em comparação com não fumantes.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:22:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliana Larocca Geus.pdf: 2198997 bytes, checksum: 8d29399aeb40e13ac3aa426797a08b0e (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to clinically evaluate the effectiveness, stability of color, dental sensitivity and genotoxicity of at-home bleaching with 10% carbamide peroxide (CP) in smokers and nonsmokers. For this study, two experiments were conducted. In Experiment 1 were selected 60 patients with central incisors A2 or darker, compared to Vita classical shade guide (Vita Zahnfabrik, Bad Säckingen, Germany), 30 smokers (S- experimental group) and 30 non-smokers (NS - control group). The bleaching was carried out with 10% CP (Whiteness Perfect, FGM, Joinville, Santa Catarina, Brazil) for a period of 3 hours daily for three weeks.The color was assessed by Vita classical (Vita Zahnfabrik, Bad Säckingen, Germany) and spectrophotometer Vita Easyshade (Vita Zahnfabrik, Bad Säckingen, Germany) initially during bleaching (1st, 2nd and 3rd weeks) and after this procedure (1 week and 1 month). The tooth sensitivity was recorded by the patients, using a 0-4 scale and visual analogue scale (VAS) of 10 cm. The Experiment 2 was conducted in the same sample of Experiment 1. The color was evaluated using Vita Bleachedguide 3D-MASTER (Vita Zahnfabrik, Bad Säckingen, Germany) in the same periods that Experiment 1. The genotoxicity of bleaching was evaluated by the frequency of micronuclei (MN) in the gingival tissue before and after bleaching. Data from two experiments were evaluated by analysis of variance two-factor repeated measures and Tukey's test for contrast of means (α=0.05). Data from ΔSGU and ΔE showed an effectiveness of dental bleaching in both groups after three weeks of treatment.The prevalence of tooth sensitivity was similar between groups. The frequency of MN in the experimental group was significantly higher than in the control group regardless of bleaching treatment. It can be concluded that the effectiveness of bleaching and tooth sensitivity resulting from the procedure does not seem to be affected by smoking and dental bleaching with 10% carbamide peroxide can be considered a safe procedure. / O objetivo deste estudo foi avaliar clinicamente a efetividade, estabilidade da cor, sensibilidade dental e genotoxicidade do clareamento caseiro com peróxido de carbamida (PC) 10% em pacientes fumantes e não fumantes. Para este estudo foram realizados dois experimentos. No Experimento 1 foram selecionados 60 pacientes com os incisivos centrais com cor A2 ou mais escuros, por comparação com a escala Vita classical (Vita Zahnfabrik, Bad Säckingen, Alemanha), sendo 30 fumantes (FU - grupo experimental) e 30 não fumantes (NF - grupo controle). O clareamento dental foi realizado com PC 10% (Whiteness Perfect –FGM, Joinville, Santa Catarina, Brasil) pelo período de 3 h diariamente, durante três semanas. A cor foi avaliada por meio da escala Vita classical e espectrofotômetro Vita Easyshade (Vita Zahnfabrik, Bad Säckingen, Alemanha), inicialmente, durante o clareamento dental (1ª, 2ª e 3ª semanas) e após este procedimento (1 semana e 1 mês). A sensibilidade dental foi registrada pelos próprios pacientes, através da escala 0-4 e escala visual analógica (EVA) de 10 cm. O Experimento 2 foi realizado na mesma amostra do Experimento 1. A cor foi avaliada através da escala Vita Bleachedguide 3D-MASTER (Vita Zahnfabrik, Bad Säckingen, Alemanha) nos mesmos períodos do Experimento 1. A genotoxicidade do clareamento foi avaliada através da frequência de micronúcleos (MN) do tecido gengival, antes e após o clareamento. Os dados dos dois Experimentos foram avaliados por análise de variância de dois fatores para medidas repetidas e teste de Tukey para o contraste das médias (α = 0,05). Os dados de variação de unidades de escala Vita (ΔUEV) e variação de cor (ΔE) mostraram efetividade do clareamento dental em ambos os grupos após três semanas de tratamento. A prevalência de sensibilidade dental foi semelhante entre os grupos. A frequência de MN no grupo experimental foi significativamente maior que no grupo controle, independentemente do tratamento clareador. Pode-se concluir que a efetividade do clareamento e a sensibilidade dental decorrentes do procedimento não parecem ser afetadas pelo hábito de fumar e o clareamento dental com peróxido de carbamida 10% pode ser considerado um procedimento seguro. Palavras-chave: Clareamento dental; Tabaco; Testes para Micronúcleos; Sensibilidade da dentina.

The objective of this study was to evaluate the influence of biofortification with selenium in the bioactive compounds of broccoli; to test their toxicity and mutagenicity in vivo to prove their safety for consumption; to develop microparticles by the spray dryer technique and to evaluate its physicochemical properties. The broccoli seedlings were biofortified through the addition of 2 mL of 50 &mu;M sodium selenate solution 15 days after sowing (DAS), and collected 30 DAS. The samples were analyzed by different methods for the quantification of selenium (ICP-MS, benchtop and handheld EDXRF). The energy-dispersive X-ray fluorescence spectrometry made either in bench or in a portable equipment presented a good performance for the quantification of selenium, together with low cost and less analysis time. The selenium biofortification technique increased the concentration of this micronutrient in broccoli seedlings. In addition, it also allowed a significant increase in bioactive compounds, such as chlorophyll (12%), phenolic (26%) and flavonoid (19%) compounds, vitamin C (32%) and sulforaphane (12%), the main bioactive compound with anticarcinogenic potential. The efficiency of biofortification with selenium in the culture was verified, and toxicity and mutagenicity studies were conducted in female and male mice treated with different doses of selenium-biofortified broccoli seedlings. After 40 consecutive days of treatment, broccoli seedlings with selenium at doses of 45 and 70 &mu;g Se/kg body weight resulted in significant changes in the relative weights of vital (liver, spleen and kidneys) and reproductive organs (ovary/testis), with the presence of histological alterations in the kidneys and spleen in mice of both sexes. In male mice, the dose of 70 &mu;g Se/kg body weight increased the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes. In females this increase was not observed, demonstrating greater sensitivity of males to the treatment. Finally, microparticles of ethanolic extracts of broccoli seedlings with and without selenium were developed through the spray drying microencapsulation technique. The samples presented low moisture (4-5%) and hygroscopicity (11-12 g of water absorbed 100/g of microparticle) and high solubility (99%). However, there was a significant reduction in the content of phenolic compounds and antioxidant activity after the microencapsulation process. The results of this study demonstrate the importance of biofortification of selenium as a strategy to increase the content of bioactive compounds in broccoli and that the dose of 15 &mu;g Se/kg body weight had no significant toxic or mutagenic effects. In addition, microencapsulation has been shown to allow the elaboration of samples with good technological characteristics however, optimization studies should be conducted to increase the retention power of bioactive compounds and their antioxidant activity. / Os objetivos desse estudo foram avaliar a influência da biofortificação com selênio nos compostos bioativos de brócolis; testar sua toxicidade e mutagenicidade in vivo como forma de comprovar sua segurança para consumo; desenvolver micropartículas pela técnica de spray dryer e avaliar suas propriedades físico-químicas. As mudas de brócolis foram biofortificadas pela adição de 2 mL de solução de 50 &mu;M de selenato de sódio 15 dias de após a semeadura (DAS) e coletadas aos 30 DAS. As amostras foram analisadas por diferentes métodos para a quantificação de selênio (ICP-MS, XRF portátio e EDXRF de bancada). O método de fluorescência de Raios X por dispersão em energia feito em equipamentos de bancada ou portátil apresentou desempenho adequado para quantificação de selênio aliado à baixo custo e menor tempo de análise. A técnica de biofortificação com selênio aumentou a concentração desse micronutriente nas mudas de brócolis. Além disso, também proporcionou aumento significativo nos compostos bioativos, tais como, clorofila (12%), compostos fenólicos (26%) e flavonoides (19%), vitamina C (32%) e sulforafano (12%), principal composto bioativo com potencial anticarcinogênico do brócolis. Verificada a eficiência da biofortificação com selênio, conduziu-se estudos de toxicidade e mutagenicidade em camundongos fêmeas e machos tratados com diferentes doses de mudas de brócolis biofortificadas com selênio (15, 45 e 70 &mu;g Se/kg peso corporal). Após 40 dias consecutivos de tratamento, observou-se que os animais tratados com mudas de brócolis com selênio nas doses de 45 e 70 &mu;g Se/kg peso corporal provocaram significativas alterações nos pesos relativos dos órgãos vitais (fígado, baço e rins) e reprodutivos (ovário/testículos), com presença de alterações histológicas nos rins e no baço, em camundongos de ambos os sexos. Nos camundongos machos, a dose de 70 &mu;g Se/kg peso corporal provocou aumento da frequência de eritrócitos policromáticos micronucleados. Nas fêmeas este aumento não foi observado, demonstrando maior sensibilidade dos machos ao tratamento. Por fim, através da técnica de microencapsulação por spray dryer desenvolveu-se micropartículas a base de extratos etanólicos de mudas de brócolis com e sem selênio. As amostras apresentaram baixa umidade (4-5%) e higroscopicidade (11-12 g de água absorvida 100-1 g de micropartícula) e alta solubilidade (99%). No entanto, houve uma redução significativa no teor de compostos fenólicos e atividade antioxidante após o processo. Os resultados desse estudo demonstram a importância da biofortificação do selênio como uma estratégia para aumentar o teor de compostos bioativos no brócolis. Com relação à toxicidade, a dose de 15 &mu;g Se/kg peso corporal não apresentou efeitos tóxicos significativos em machos e fêmeas, porém apresentou pontencial mutagênico em machos. Além disso, comprovou-se que a microencapsulação possibilitou a elaboração de amostras com boas características tecnológicas, porém, estudos de otimização devem ser conduzidos a fim de aumentar o poder de retenção dos compostos bioativos e atividade antioxidante.

Chronic inflammation is intimately linked with cancer development and progression and therefore reducing or eliminating inflammation represents a logical treatment and prevention strategy. Studies have shown that anti-inflammatory agents have anti-tumour effects in cancers, with reduced metastases and mortality. Current use of anti-inflammatory agents in the treatment and prevention of cancer is limited by their toxicity and side effects. The emerging field of nanotechnology allows the fundamental properties of a drug to be altered, creating a product with improved reactivity and bioavailability, leading to more targeted treatments and reduced dosage. In the present study, the genotoxic effects of three commonly used anti-inflammatory drugs; aspirin, ibuprofen and hydrocortisone, in their bulk and nano forms were evaluated on peripheral blood lymphocytes of healthy donors using the comet assay and the micronucleus assay. In order to determine any anti-cancer effects, these agents were also tested in peripheral blood lymphocytes in patients with haematological cancers. The glucocorticoid hydrocortisone was also evaluated for anti-oxidant capacity. Our results demonstrate that the nano versions of each drug produced a different response than the bulk counterpart, indicating that a reduction in particle size had an impact on the reactivity of the drug. Our results also indicate that the nano versions of each drug were less genotoxic than the bulk formulation, further emphasising the potential of nanoparticles as an improvement to current treatment options. We also found an anti-oxidant effect with hydrocortisone, with a more profound effect seen with the nano formulation.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A doença de Chagas é uma doença tropical infecciosa e negligenciada responsável por um grande número de pessoas infectadas e em risco de infecção, principalmente nas regiões pobres da América Latina. No momento, apenas duas drogas, Benzonidazol e Nifurtimox, estão disponíveis para o tratamento da doença de Chagas, mas são ineficazes por apresentarem baixa taxa de cura. O Megazol é um importante representante da classe dos nitroimidazóis e é uma alternativa promissora devido ao seu potencial tripanocida com um perfil superior de ação quando comparado ao tratamento disponível. No entanto, o Megazol não é utilizado clinicamente uma vez que possui atividade mutagênica e carcinogênica relatada. O Instituto de Tecnologia em Fármacos (Farmanguinhos) desenvolveu três análogos do Megazol: PTAL 05-02 (3-amino-5-(1-metil-5-nitro-1H-imidazol-2-il)-1H-1,2,4-triazol), PAMT 09 (2-amino-N-(1-metil-4-nitro-1H-imidazol-5-il)-5-(trifluorometil)-1H-1,2,4-triazol) e PTAL 04-09 (1-(1-metil-4-nitro-1H-imidazol-5-il)-1H-pirazol). O objetivo deste trabalho é apresentar novas moléculas análogas do Megazol com atividade tripanocida, desenvolvidas a partir de estratégias racionais de desenvolvimento de substâncias bioativas ao manter o perfil farmacodinâmico do Megazol enquanto tenta diminuir ou remover o efeito genotóxico. Testes genotóxicos na avaliação segura de novas substâncias bioativas foram utilizados, de acordo com as diretrizes da OECD. O teste da Salmonella/microssoma foi utilizado na avaliação mutagênica e citotóxica, utilizando linhagens de Salmonella enterica sorovar Typhimurium, deficientes e supercompetentes na síntese de enzimas nitroredutase e acetiltransferase. O análogo PAMT 09 não foi mutagênico em nenhuma concentração e linhagem utilizada. Os análogos PTAL 05-02 e PTAL 04-09 foram mutagênicos, na ausência de S9 mix, para a linhagem TA98/1,8-DNP6. Na avaliação de citotoxicidade, os três análogos foram citotóxicos, independente de metabolização exógena S9 mix. O teste do micronúcleo, utilizando células de macrófago de rato, foi realizado para a avaliação genotóxica dos análogos do Megazol. Os três análogos foram capazes de induzir a formação de micronúcleos e apresentaram efeito citotóxico. / Chagas disease is an infectious neglected tropical disease responsible for a large number of infected people and at risk for infection, mainly in poor areas of Latin America. At the moment, there are just two drugs, Benzonidazol and Nifurtimox, available for the Chagas disease treatment, but they are ineffective since they have low cure rates. Megazol is an important representative of nitroimidazole class and it is a promising alternative because of its trypanocidal activity with a superior profile of action compared to the available treatment for Chagas disease. However, Megazol is not used clinically since its mutagenic and carcinogenic activity was reported. The Institute of Pharmaceutical Technology (Farmanguinhos) has designed 3 analogues from Megazol: PTAL 05-02 (2-amine-5-(1-methyl-5-nitro-1H-imidazole-2-yl)-1H-1,2,4-triazole), PAMT 09 (2-amine-N-(1-methyl-4-nitro-1H-imidazole-5-yl)-5-(trifluoromethyl)-1H-1,2,4-triazole) and PTAL 04-09 (1-(1-methyl-4-nitro-1H-imidazole-5-yl)-1H-pirazole). The aim of this work is to present new Megazol analogous molecules with trypanocidal activity, similar pharmacodynamic profile and less or none genotoxic effect developed using strategies of rational drug design. Genotoxic Tests for the safe evaluation of new bioactive substances were used, according to OECD guidelines. The Salmonella/microssoma test was used in the mutagenic and citotoxic evaluation using Salmonella enterica serovar Typhimurium strains lacking and overproducing nitroreductases and acetyltransferases enzymes. The PAMT 09 analogue was not mutagenic in any concentration and strain used. The PTAL 05-02 and PTAL 04-09 analogues was mutagenic, in the absence of S9 mix, to the TA98/1,8-DNP6 strain. In the citotoxic evaluation, the three analogues were citotoxic, with and without S9 mix. The micronucleus test using rat macrophage cells was used in the genotoxic evaluation of Megazol analogous. The three analogues were capable of induce the micronuclei formation and showed citotoxic effect.

Muitos países possuem estações de pesquisa instaladas na Antártica. Hidrocarbonetos de petróleo e os esgotos lançados no mar pelas estações são as fontes potenciais de poluição na Antártica. Peixes da espécie Trematomus newnesi foram utilizados para investigar o potencial genotóxico e os efeitos sobre a morfologia de fígado e brânquias da água diante dos tanques de combustível e da saída de esgoto da Estação Antártica Brasileira ?Comandante Ferraz?, em experimentos in situ e no laboratório. No Ensaio de Mn e ANE, observou-se que a freqüência de R foi, em geral, menor nos controles do que nos grupos expostos, tanto nos bioensaios como nos experimentos in situ, porém não houve diferenças estatisticamente significativas em nenhum dos experimentos. As lesões branquiais mais observadas, nos grupos expostos, foram hipertrofia do epitélio e telangiectasia lamelar. No fígado, as lesões predominantes foram a vacuolização lipídica e a presença de macrófagos, principalmente nos peixes dos experimentos in situ. Não foram verificadas diferenças significativas nos índices de lesões histopatológicas entre os grupos expostos e os controles em nenhum dos experimentos. Contudo, os resultados obtidos sugerem que dos dois locais analisados nas proximidades da Estação Brasileira, a saída de esgoto apresenta maior potencial de risco para T. newnesi. / Many countries have installed research stations in Antarctica. Petroleum hydrocarbons and the sewage disposed into the sea by the stations are potential sources of pollution in Antarctica. Trematomus newnesi specimens were used to assess genotoxic potential and histopathology of the liver and gills of the water surrounding the Brazilian Antarctic Station ?Comandante Ferraz?. Fish were exposed to seawater at the sewage outfall and in front of the fuel tanks, in both in situ and laboratory assays. The Mn and ENA assay showed that the frequency of R was, in general, lower in the control groups than in the exposed ones in both in situ and laboratory assays, however there were no statistically significative differences in any of the experiments. The most frequent branchial lesions observed in the exposed groups were epithelium hipertrophy and lamelar telangiectasis. In the liver, predominant microscopic findings included lipid vacuolization and macrophages, specially in fish from the in situ experiments. Exposed groups did not show significative differences in the histopathological indexes from those of the controls in any of the experiments. Nevertheless, our results suggest that of the places studied the sewage outlet may present a greater potential of risk to T. newnesi nearby the Brazilian Station.

Nanopartículas possuem características físico-químicas úteis para o uso humano, com aplicação na ciência, tecnologia, medicina e produtos de uso diário. A fabricação e a variedade destes produtos vêm crescendo rapidamente, gerando uma preocupação quanto ao risco de exposição aos efeitos tóxicos da contaminação por nanopartículas. Vários efeitos adversos, derivados da exposição de nanopartículas foram descritos tanto para organismos terrestres como aquáticos, porém efeitos genotóxicos ainda são pouco conhecidos para organismos marinhos. Para avaliar a citogenotoxicidade da nanopartícula de dióxido de titânio no peixe marinho T. carolinus, foram administradas injeções intraperitoneais com dosagens de 1,5 e 3,0 ?g-nano-TiO2/grama-de-peixe. Amostras de sangue foram coletadas para realização do teste de micronúcleo (MN) e outras anormalidades nucleares eritrocitárias (ANE) e ensaio cometa (pH>13), 24, 48 e 72 horas após a injeção. Foram investigadas a viabilidade de eritrócitos e a possibilidade de acumulação da nano-TiO2 nos tecidos dos peixes injetados com a maior dosagem, após 72 horas, pelo teste de exclusão do azul de tripano e por microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram que a nano-TiO2 é uma substância possivelmente capaz de entrar nas células e induzir efeito genotóxico e citotóxico para esta espécie, por provocar uma diminuição na viabilidade de eritrócitos, um aumento no dano ao DNA e formação de MN e outras ANE. De acordo com nosso conhecimento, este é o único trabalho sobre a genotoxicidade de nano-TiO2 em um peixe marinho. / Nanoparticles have physicochemical characteristics useful for human use, with applications in science, technology, medicine and everyday products. The manufacture and variety of these products have been growing rapidly, creating a concern about the risk of exposure to the toxic effects of contamination by nanoparticles. Several adverse effects of exposure to nanoparticles have been reported for both terrestrial and aquatic organisms, but genotoxic effects are still poorly known for marine organisms. To evaluate the citogenotoxicity of titanium dioxide nanoparticles (nano-TiO2) in marine fish T. carolinus, the substance was administered with intraperitoneal injections at dosages of 1,5 and 3,0 ?g-nano-TiO2/gram-of-fish. Blood samples were collected for the tests of micronucleus (MN) and other erythrocytes nuclear abnormalities (ENA) and comet assay (pH> 13), 24, 48 and 72 hours after injection. We also investigated the viability of erythrocytes and the possibility of accumulation of nano-TiO2 in the tissues of fish injected with the highest dose after 72 hours using trypan blue exclusion test and transmission electron microscopy. The results showed that the nano-TiO2 is a substance that can possibly be able to enter cells and induce cytotoxic and genotoxic effect for this species, by causing a decrease in the viability of erythrocytes, an increase in DNA damage and formation of MN and other ANE. As far as we know, this is the only work done on the genotoxicity of nano-TiO2 in a marine fish

O câncer diferenciado da tireoide (CDT) representa cerca de 90% das malignidades tireoidianas com incidência crescente nas últimas décadas. As modalidades de tratamento incluem tireoidectomia, terapia com 131I (com e sem r-hTSH), radio e quimioterapias. Pouco se sabe sobre os efeitos desses tratamentos em nível celular. O presente trabalho foi proposto com o intuito de avaliar em que extensão a terapia com radioiodo pode causar danos em linfócitos periféricos de pacientes com CDT precedidos ou não com r-hTSH, levando-se em consideração, efeitos agudos, tardios e dosimétricos do 131I (estudo in vivo). Um estudo in vitro também foi realizado em células-alvo de tumores tireoidianos (WRO) por meio de análise de citotoxicidade, genotoxicidade e captação do radioiodo. Para tanto, amostras sanguíneas de pacientes, divididos em 2 grupos (grupo A com r-hTSH + 131I e grupo B somente com 131I) foram coletadas antes, 24h, 1 semana, 1 mês e 1 ano após administração do 131I para análise de aberrações cromossômicas (AC). Curva dose-resposta para 131I in vitro foi elaborada para a estimativa de dose absorvida nos pacientes, comparando as frequências de dicêntricos obtidas in vitro com dados in vivo pelo programa Monte Carlo. A iodoterapia induziu um aumento no número de AC em linfócitos de pacientes com valor máximo 24h após o tratamento, com declínio gradativo ao longo do tempo, com mais danos cromossômicos no grupo B em relação ao grupo A, atingindo níveis similares aos basais 1 anos após a administração do radioido. A frequência de dicêntricos encontrada nos linfócitos de pacientes 24h após o tratamento foi equivalente àquela induzida in vitro (0,354 ± 0,153 MBq/mL para o grupo A e 0,309 ± 0,154 MBq/mL para o grupo B), que corresponde a dose absorvida de 0,8 ± 0,3 Gy e 0,7 ± 0,3 Gy para os grupos A e B, respectivamente, sem significância estatística entre os grupos. As células WRO mostraram um ciclo celular relativamente lento de 96,3h com um cariótipo instável. O ensaio genotóxico mostrou uma radiorresistência relativamente alta (0,07 a 3,70 MBq/mL), sem significância estatística com e sem r-hTSH. No entanto, o ensaio citotóxico, mostrou uma tendência à queda nas concentrações mais altas de 1,85 (p<0,05) e 3,70 MBq/mL (p<0,01) somente na presença de r-hTSH, coincidindo com nível mais alto de captação. Células WRO foram relativamente radiorresitentes também à irradiação externa de 60Co na faixa de dose de 0,2 a 8,3 Gy, com queda gradativa em função do tempo para doses mais altas (10, 20 e 40Gy). Dados obtidos mostraram pouco dano citogenético nos pacientes após a exposição terapêutica com radioiodo, o que sugere um tratamento seguro e eficaz para os pacientes dos dois grupos. Pacientes do grupo A, no entanto, obtiveram uma melhor qualidade de vida com o uso do r-hTSH. Estudos in vitro com irradiação interna (131I) e externa (60Co) com ou sem r-hTSH, apontam a necessidade de uma estratégia terapêutica alternativa para contornar a perda da habilidade das células tireoidianas (WRO) em concentrar o radioiodo, responsável pelo relativo insucesso da iodoterapia em pacientes com CDT. / Differentiated thyroid cancer (DTC) represents about 90% of thyroid malignancies with increasing incidence in the recent decades. Treatment modalities include thyroidectomy, 131I therapy (with or without r-hTSH), radio and chemiotherapy. Little is known about the effects of these treatments at the cellular level. This work was proposed in order to assess to what extent radioiodine therapy can cause damage in peripheral lymphocytes of patients with DTC, preceded or not by r-hTSH, taking into account acute, slow and dosimetric effectsof 131I (in vivo study). An in vitro study was also carried out on thyroid tumor target cells (WRO) by cytotoxicity and genotoxicity analysis and radioiodine uptake. For this, blood samples from patients divided into two groups (group A, r-hTSH + 131I and group B,131I only) were collected before, 24 hours, 1 week, 1 month and 1 year after 131I administration for aberration chromosome analysis (CA). A dose-response curve for 131I in vitro was developed for estmating the absorbed dose in patients, comparing the dicentric frequencies obtained in vitro with in vivo data by Monte Carlo program. Radioiodine therapy induced an increase in the number of CA in lymphocytes of patients peaking 24 hours after treatment, with gradual decline over time and with more chromosomal damage in group B than in group A, reaching baseline levels one year afterradioidine administration. The frequency of dicentric found inpatient lymphocytes, 24h after treatment, was equivalent to that induced in vitro (0.354 ± 0.153 MBq / mL for group A and 0.309 ± 0.154 MBq / mL for group B), which corresponds to absorbed doses of 0.8 ± 0.3 Gy and 0.7 ± 0.3 Gy for groups A and B, respectively, with no significant difference between the groups. WRO cells showed a cell cycle relatively slow: 96,3h with an unstable karyotype. The genotoxic test showed a relatively high radioresistance (0.07 to 3.70 MBq/mL), with no statistical significance, with or without r-hTSH. However, the cytotoxic assay, showed a tendency to decrease at higher concentrations of 1.85 (p <0.05) and 3.70 MBq/ml (p <0.01) only in the presence of r-hTSH, coincident with the highest level of uptake. WRO cells were also relatively radioresistant toexternal irradiation of 60Co in the range of 0.2-8.3 Gy, with a gradual decrease in function of time for higher doses (10,20 and 40Gy).The data obtained showed little cytogenetic damage in patients upon therapeutic exposure, suggesting a safe and effective treatment forboth groups of patients. Patients in group A, however, had a better quality of life by using r-hTSH. In vitro studies with internal (131I) and external (60Co)irradiation, with or without r-hTSH, point to the need for an alternative therapeutic strategy to overcome the loss of ability of thyroid cells (WRO) to concentrate radioiodine, wich is responsible for the failure of radioiodine therapy in patients with DTC.

A Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica (DPOC) é uma das principais causas de mortalidade em todo mundo, apesar de ser prevenível e tratável. Resultante de uma resposta inflamatória anormal as partículas tóxicas inaladas, a DPOC caracterizada pela limitação progressiva do fluxo aéreo que é pouco responsiva a terapêutica farmacológica.Neste estudo caso-controle, envolvendo 51 portadores de DPOC e 51 controles, objetivou-se avaliar e quantificar danos e capacidade de reparação no DNA, bem como avaliar o papel de polimorfismos em genes de reparaçãona modulação deste. Foram determinados os níveis de danos no DNA, endógenos em sangue periféricos pelo ensaio cometa nas versões alcalina e neutra. Também foi determinado nível de danoinduzidos pelo agente alquilante metilmetano sulfonato (MMS), por 1 e 3 horas pós tratamentopelo ensaio cometa alcalino.Odano residual após 3h de tratamento com MMS foi calculado em relação à 1h (100% dano induzido), para cada sujeito. A peroxidação lipídica foi medida pela mensuração de espécies reativas de ácido tiobarbitúrico (TBARS) em plasma sanguíneo.Teste de micronúcleos de mucosa oral com análise de citoma (BMCyt) foi utilizado para detectar o dano citogenético. Ospolimorfismos em genes de reparação de DNA (XRCC1 Arg399Gln, OGG1 Ser326Cys, XRCC3 Thr241Met and XRCC4 Ile401Thr) foram identificados por PCR/RFLP.Os resultados do ensaio cometa revelaram que o dano basal no DNA em portadores de DPOC foi mais elevado, comparado aos controles, como mensurado pelo ensaio cometa alcalino e neutro. O dano residual, detectado pós-tratamento com MMS, foi maior nos portadores de DPOC, quando comparados aos controles. Os resultados demonstraram claramente uma relação entre os níveis de danos induzidos no DNA e os níveis de TBARSindicando alta suscetibilidade para dano alquilante e/ou inibição do reparo decorrente do estress oxidativo. Além disso, os pacientes apresentaram uma menor capacidade de reparação aos danos induzidos pelo MMS, quando comparados com os controles. Esta investigação ainda sugere um incremento do dano basal no DNA em portadores de DPOC, como analisado pelo ensaio cometa, nos sujeitos que possuem o alelo de risco dos polimorfismos genéticos XRCC1 (Arg399Gln) and XRCC3 (Thr241Met). O dano residual também foi mais elevado nos portadores de DPOC que possuíam o alelo de risco para os quatro genes estudados. Correlações negativas entre BMCyt (células binucleadas, broto nuclear, células com cromatina condensada e cariorrética) e função pulmonar foram observadas para os genótipos variantes.Os resultados do ensaio cometa e BMCyt estratificadospara a prática de exercício físico regular (EF-DPOC) ou não (DPOC)revelaram que o dano basal no DNA do grupo EF-DPOC foi maior que o observado nos grupos de DPOC e nos controles. O dano residual foi similar entre os grupos de EF-DPOC e controles, em contraste com o grupo DPOC que permaneceu elevado, indicando deficiência na reparação do DNA e morte celular precoce por apoptose das células danificadas. Os valores de TBARS foram menores no grupo EF-DPOCindicando resistência ao dano oxidativo. Em conclusão, portadores de DPOC apresentam elevado dano basal no DNA e são mais susceptíveis para danos exógenos no DNA, como o ocasionado pelo agente alquilante MMS. Esta susceptibilidade para dano exógeno, por correlacionar positivamente com o TBARS, sugere o envolvimento do estresse oxidativo na indução do dano e/ouinibição da reparação. A presença do genótipo variante XRCC1 (Arg399Gln), OGG1 (Ser326Cys), XRCC3 (Thr241Met) e XRCC4 (Ile401Thr) modula o dano do DNA nos portadores de DPOC e incrementa o risco de desenvolvimento de câncer. O exercício físico frequente realizado pelos portadores de DPOCdiminuios níveis de peroxidação lipídica em plasma sanguíneo, a susceptibilidade para danos exógenos e a formação de anomalias celulares como broto nuclear e cromatina condensada. / Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) is a major cause of mortality worldwide, despite being preventable and treatable. Resulting from an abnormal inflammatory response to inhaled toxic particles, COPD is characterized by progressive airflow limitation which has poor responsiveness to pharmacological therapy. In this case-control study, involving 51 patients with COPD and 51 controls, we aimed to assess and to quantify DNA damage and repair capacity as well as the role of genetic polymorphisms in the modulation of DNA damage. Endogenous DNA damage levels were determined in peripheral blood by comet assay in alkaline and neutral versions. DNA damage-induced version with alkylating methylmethane sulfonate agent (MMS) was evaluated for 1 and 3 hours by comet assay in alkaline version. The residual damage after the 3-hour MMS treatment was calculated related to 1 hour (100% damage induced), for each subject. Lipid peroxidation was assessed by measuring thiobarbituric acid reactive species (TBARS) in blood plasma. The cytogenetic damage was evaluated by the buccal micronucleus cytome assay. The genetics polymorphisms in DNA repair genes (XRCC1 Arg399Gln, OGG1 Ser326Cys, XRCC3 Thr241Met and XRCC4Ile401Thr) were evaluated by PCR/RFLP respectively. The results of the comet assay showed that basal DNA damage in COPD patients was significantly higher compared to controls, as measured by the alkaline and neutral comet assay. The residual damage percentage, detected after the MMS treatment, increased in COPD patients than control group. The results clearly demonstrated a relationship between levels of DNA damage induced with higher levels of TBARS, indicating high susceptibility to alkylating damage and/ or repair inhibition resulting from oxidative stress. In addition, the patients showed a lower capacity to repair the damage induced by MMS, when compared with controls. This study suggests an increase in basal DNA damage in COPD patients, as analyzed by comet assay, in subjects having the risk allele of genetic polymorphisms XRCC1 (Arg399Gln) and XRCC3 (Thr241Met). The residual damage was higher in COPD patients who had the risk allele in the four genes analyzed. Negative correlations between BMCyt (binucleated, bud muclear, condensed chromatin and kariorrética cells) and pulmonary function were observed for COPD patients with genotype variants. The stratified results (comet assay and BMCyt) related to regular exercise practice (PE-COPD) or not (COPD) showed that basal DNA damage in the PE-COPD group was significantly higher than in the COPD and controls groups. Residual damage was similar between the controls and PE-COPD group; in contrast COPD residual damage remained high indicating deficiency in DNA repair and premature cell death by apoptosis of damaged cells. TBARS values were lower in PE-COPD indicating resistance to oxidative damage. In conclusion, COPD patients have higher basal DNA damage and are more susceptible to exogenous DNA damage, as caused by the alkylating agent MMS. This susceptibility to exogenous damage, being correlated positively with the TBARS, suggests the involvement of oxidative stress-induced damage and/or repair inhibition. This research suggests an increase in DNA damage in COPD patients with the risk allele of genetic polymorphisms XRCC1(Arg399Gln), OGG1 (Ser326Cys), XRCC3 (Thr241Met) and XRCC4 (Ile401Thr), analyzed by comet assay and BMCyt, and increased risk of developing cancer. Regular physical exercise performed by COPD patients significantly decreases lipid peroxidation in the blood plasma as well as susceptibility to exogenous damage and formation of cellular abnormalities, such as condensed chromatin and nuclear bud cells.

Nanopartículas possuem características físico-químicas úteis para o uso humano, com aplicação na ciência, tecnologia, medicina e produtos de uso diário. A fabricação e a variedade destes produtos vêm crescendo rapidamente, gerando uma preocupação quanto ao risco de exposição aos efeitos tóxicos da contaminação por nanopartículas. Vários efeitos adversos, derivados da exposição de nanopartículas foram descritos tanto para organismos terrestres como aquáticos, porém efeitos genotóxicos ainda são pouco conhecidos para organismos marinhos. Para avaliar a citogenotoxicidade da nanopartícula de dióxido de titânio no peixe marinho T. carolinus, foram administradas injeções intraperitoneais com dosagens de 1,5 e 3,0 ?g-nano-TiO2/grama-de-peixe. Amostras de sangue foram coletadas para realização do teste de micronúcleo (MN) e outras anormalidades nucleares eritrocitárias (ANE) e ensaio cometa (pH>13), 24, 48 e 72 horas após a injeção. Foram investigadas a viabilidade de eritrócitos e a possibilidade de acumulação da nano-TiO2 nos tecidos dos peixes injetados com a maior dosagem, após 72 horas, pelo teste de exclusão do azul de tripano e por microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram que a nano-TiO2 é uma substância possivelmente capaz de entrar nas células e induzir efeito genotóxico e citotóxico para esta espécie, por provocar uma diminuição na viabilidade de eritrócitos, um aumento no dano ao DNA e formação de MN e outras ANE. De acordo com nosso conhecimento, este é o único trabalho sobre a genotoxicidade de nano-TiO2 em um peixe marinho. / Nanoparticles have physicochemical characteristics useful for human use, with applications in science, technology, medicine and everyday products. The manufacture and variety of these products have been growing rapidly, creating a concern about the risk of exposure to the toxic effects of contamination by nanoparticles. Several adverse effects of exposure to nanoparticles have been reported for both terrestrial and aquatic organisms, but genotoxic effects are still poorly known for marine organisms. To evaluate the citogenotoxicity of titanium dioxide nanoparticles (nano-TiO2) in marine fish T. carolinus, the substance was administered with intraperitoneal injections at dosages of 1,5 and 3,0 ?g-nano-TiO2/gram-of-fish. Blood samples were collected for the tests of micronucleus (MN) and other erythrocytes nuclear abnormalities (ENA) and comet assay (pH> 13), 24, 48 and 72 hours after injection. We also investigated the viability of erythrocytes and the possibility of accumulation of nano-TiO2 in the tissues of fish injected with the highest dose after 72 hours using trypan blue exclusion test and transmission electron microscopy. The results showed that the nano-TiO2 is a substance that can possibly be able to enter cells and induce cytotoxic and genotoxic effect for this species, by causing a decrease in the viability of erythrocytes, an increase in DNA damage and formation of MN and other ANE. As far as we know, this is the only work done on the genotoxicity of nano-TiO2 in a marine fish