Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-10Bitstream added on 2014-06-13T20:24:20Z : No. of bitstreams: 1 fabiano_tlt_dr_jabo.pdf: 373992 bytes, checksum: 54cb0750ac5f6c1287f8733a4da8a103 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Foram coletadas 143 amostras de mãos de humanos e camas hospitalares, através de suabes em caldo BHI (Brain Heart Infusion), em um Hospital Escola de Ribeirão Preto, SP. Este trabalho teve como objetivo caracterizar as cepas de Staphylococcus sp e verificar o grau de similaridade genética entre as cepas pelo RAPD-PCR e analisar o perfil de resistência a diversos antimicrobianos. As amostras coletadas foram incubadas a 37º C por 24 horas e após este período as culturas foram semeadas em placas de Petri contendo agar “Staphylococcus Médium 110”. As colônias típicas do gênero Staphylococcus foram coletadas e estocadas a 4º C até o momento de elaboração das provas de produção de catalase e coagulase, fermentação do manitol, DNAse e hemólise. As cepas isoladas foram analisadas através da técnica de RAPD-PCR para verificar o grau de similaridade. A sensibilidade das cepas isoladas foi testada frente a 11 diferentes antibióticos. Foram isoladas 92 cepas de Staphylococcus sp sendo 67 (72,8%) cepas de Staphylococcus coagulase negativas e 25 (27,2%) cepas de Staphylococcus coagulase positivas. A análise de similaridade mostrou heterogeneidade genética entre as cepas. Foram encontradas oito (8.7%) cepas de Staphylococcus sp resistentes à vancomicina, sendo uma multirresistente a todos os antibióticos. Introduzir medidas de assepsia nas mãos de pessoal e leitos hospitalares e a racionalização do uso indiscriminado de antibióticos muito contribuirá para diminuição das infecções nosocomiais. / A total of 143 samples were analyzed in this study. These included samples from human hands and hospital beds at a Medical Teaching Hospital of Ribeirão Preto, SP. This study aimed to characterize the strains of Staphylococcus sp and verify the degree of genetic similarity between the strains by RAPD-PCR and analyse the profile of the various antimicrobial resistance. Swabs samples were collected and cultured in brain heart infusion medium at 37o C for 24 h. Further cultivation was performed on Staphylococcus medium 110 agar plates. Typical colonies representing Staphylococcus genus were collected and stored at 4º C until it was used for identification tests, which included catalase, coagulase and mannitol production, hemolysis and Dnase. Isolates were analyzed by RAPD-PCR to verify similarity level. Antibiotic susceptibility was determined using 11 different antibiotics. A total of 92 Staphylococcus sp strains were isolated, whereas 67 (72.8%) were coagulase-negative Staphylococcus strains and 25 (27,2%) were coagulase-positive Staphylococcus strains. Similarity analysis revealed a great dissimilarity among isolates. High percentage of beta-lactams resistant Staphylococcus sp was found. Eight strains (8.7%) were vancomycin-resistant. A high percentage of multiresistant strains were found. Introduce of good hygiene practices for hands and hospital beds and adequate antibiotic use, may contribute to reduction of nosocomial infection and consequently improved antibiotic treatment response.

Orientador: Fernando Antônio de Ávila / Banca: Patrícia Amoroso / Banca: Branca Maria de Oliveira Santos / Banca: Ruben Pablo Schocken-Iturrino / Banca: José Moacir Marin / Resumo: Foram coletadas 143 amostras de mãos de humanos e camas hospitalares, através de suabes em caldo BHI (Brain Heart Infusion), em um Hospital Escola de Ribeirão Preto, SP. Este trabalho teve como objetivo caracterizar as cepas de Staphylococcus sp e verificar o grau de similaridade genética entre as cepas pelo RAPD-PCR e analisar o perfil de resistência a diversos antimicrobianos. As amostras coletadas foram incubadas a 37º C por 24 horas e após este período as culturas foram semeadas em placas de Petri contendo agar "Staphylococcus Médium 110". As colônias típicas do gênero Staphylococcus foram coletadas e estocadas a 4º C até o momento de elaboração das provas de produção de catalase e coagulase, fermentação do manitol, DNAse e hemólise. As cepas isoladas foram analisadas através da técnica de RAPD-PCR para verificar o grau de similaridade. A sensibilidade das cepas isoladas foi testada frente a 11 diferentes antibióticos. Foram isoladas 92 cepas de Staphylococcus sp sendo 67 (72,8%) cepas de Staphylococcus coagulase negativas e 25 (27,2%) cepas de Staphylococcus coagulase positivas. A análise de similaridade mostrou heterogeneidade genética entre as cepas. Foram encontradas oito (8.7%) cepas de Staphylococcus sp resistentes à vancomicina, sendo uma multirresistente a todos os antibióticos. Introduzir medidas de assepsia nas mãos de pessoal e leitos hospitalares e a racionalização do uso indiscriminado de antibióticos muito contribuirá para diminuição das infecções nosocomiais. / Abstract: A total of 143 samples were analyzed in this study. These included samples from human hands and hospital beds at a Medical Teaching Hospital of Ribeirão Preto, SP. This study aimed to characterize the strains of Staphylococcus sp and verify the degree of genetic similarity between the strains by RAPD-PCR and analyse the profile of the various antimicrobial resistance. Swabs samples were collected and cultured in brain heart infusion medium at 37o C for 24 h. Further cultivation was performed on Staphylococcus medium 110 agar plates. Typical colonies representing Staphylococcus genus were collected and stored at 4º C until it was used for identification tests, which included catalase, coagulase and mannitol production, hemolysis and Dnase. Isolates were analyzed by RAPD-PCR to verify similarity level. Antibiotic susceptibility was determined using 11 different antibiotics. A total of 92 Staphylococcus sp strains were isolated, whereas 67 (72.8%) were coagulase-negative Staphylococcus strains and 25 (27,2%) were coagulase-positive Staphylococcus strains. Similarity analysis revealed a great dissimilarity among isolates. High percentage of beta-lactams resistant Staphylococcus sp was found. Eight strains (8.7%) were vancomycin-resistant. A high percentage of multiresistant strains were found. Introduce of good hygiene practices for hands and hospital beds and adequate antibiotic use, may contribute to reduction of nosocomial infection and consequently improved antibiotic treatment response. / Doutor

Multiresistenta bakterier så som meticillinresistenta Staphylococcus aureus (MRSA), bakterier som producerar extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) och vancomycinresistenta enterokocker (VRE) är ett problem sedan årtionden tillbaka och som ökar för varje år. Idag på mikrobiologen, Unilabs Skövde, isoleras bakteriestammar från selektiva medier för just MRSA, ESBL och VRE på blodagar innan resistensbestämningarna utförs. Syftet med studien var därför att undersöka möjligheten att göra diskdiffusionstest direkt från de selektiva medierna och således kunna svara ut resultaten tidigare. Utvärdering av detta gjordes genom att undersöka om storleken på antibiotikazonerna för sammanlagt 64 isolat påverkades av att bakterierna som användes vuxit på ett selektivt agarmedium i förhållande till om de vuxit på blodagar. Resultatet visade vad som ansågs vara en normal variation på maximalt ±2 mm för alla parvisa zoner utom en på 3 mm. Av alla zoner som undersöktes för MRSA, ESBL och VRE var majoriteten identiska i antal millimeter, 62 %, 89 % och 98 % respektive. Baserat på det goda resultatet ansågs materialet vara tillräckligt stort för att göra bedömningen att metoden är utförbar. Med tanke på de positiva effekterna av att göra resistensbestämningar direkt från de selektiva agarmedierna görs rekommendationen till mikrobiologen, Unilabs Skövde, att övergå till denna metod. / Multiresistant bacteria such as methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) producing bacteria and vancomycin-resistant enterococci (VRE) have been a problem for decades with an increasing rate. Today, at mikrobiologen, Unilabs Skövde, bacterial strains are isolated from selective media for MRSA, ESBL and VRE onto blood agar before the susceptibility testing. The aim of the study was to examine the possibility of disk diffusion susceptibility testing directly from the selective media and thus be able to reply the findings earlier. The zones of inhibition were examined for a total of 64 isolates after disk diffusion testing from both the selective and blood agar plates in order to evaluate if the zone sizes were affected. The results showed what was considered a normal variation of ±2 mm for all pairwise zones except for a difference in 3 mm. The majority of all zones tested for MRSA, ESBL and VRE had equally large zones, 62%, 89% and 98% respectively. Based on the good results, the material was considered enough to make the conclusion that the method is feasible. Considering the positive effects of making susceptibility testing directly from selective agar, a change to this method is recommended to mikrobiologen, Unilabs Skövde.

A Salmonella sp permanece com um dos mais importantes patógenos transmissores de enfermidades veiculadas através dos alimentos em todo mundo. A carne de aves está entre as principais causadoras das toxinfecções alimentares quando contaminadas pelo gênero Salmonella. Neste estudo foram isolados 280 sorovares de Salmonella das carcaças de frango e peru através do Programa de Redução de Patógenos (PRP-MAPA) na região sul do país. A maior prevalência ocorreu para a Salmonella Enteritidis (55,7%). Nas carcaças de frango, a S. Enteritidis alcançou 63,3% dos isolados, porém nas carcaças de peru este sorovar não passou dos 14,0%. Entre os estados do sul (PR, SC e RS), não houve diferenças nos isolados de S.Enteritidis. Foram 25 os sorovares de Salmonella sp isolados das carcaças de aves. Destes apenas 14 em perus e 23 nos frangos. A S. Tennessee e Salmonella enterica subespecie enterica (O: 4,5), foram isoladas somente em carcaças de perus e a S. Hadar foi a mais prevalente, 18,6%. Nos testes de difusão em placas, foram desafiadas 178 cepas frente a 24 antimicrobianos. Todas as cepas de Salmonella sp foram resistentes a bacitracina e a penicilina e 78,2% apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano quando excluídas as drogas anteriormente citadas, sendo que todas as amostras foram sensíveis a amoxicilina + ácido clavulânico, polimixina B, ciprofloxacina e norfloxacina. A maior taxa de resistência das amostras foi observada frente ao ácido nalidíxico de 52,2%, seguido da nitrofurantoína (28,8%), neomicina (14,6), tetraciclina (12,4%) e canamicina (10,1%). Nas amostras isoladas de perus estes índices foram maiores para o ácido nalidíxico (62,8%), tetraciclina (34,9%) e neomicina (30,2%), havendo diferenças significativas para os dois últimos quando comparados aos isolados de frango. Embora o índice de resistência a enrofloxacina de 2,2% no segmento aves seja baixo, chama atenção que, por tratar-se de um antimicrobiano quimicamente modificado a taxa de resistência nas amostras de perus tenha sido de 9,3%.O sorovar S. Enteritidis apresentou a maior taxa de resistência ao ácido nalidíxico (72,0%) e menor para tetraciclina (1,1%). Por outro lado, foi comprovada a presença de cepas multiresistentes em 46,1% dos isolados das carcaças de aves, principalmente nas amostras de perus nos sorovares S. Hadar e S. Saintpaul, que foram resistentes no mínimo a quatro e no máximo onze antimicrobianos. Este estudo demonstrou qual a prevalência e o perfil de resistência aos antimicrobianos dos sorovares de Salmonella sp isoladas das carcaças de aves na região Sul do Brasil e devido a sua importância em saúde animal e saúde pública, pode sugerir a criação de um Programa Nacional de Monitoramento da Resistência Bacteriana aos Antimicrobianos. / Salmonella sp remains as one of the most important foodborne pathogens worldwide. Poultry meat is among the most frequently involved foods regarding human food poisoning cases. In this study, two hundred and eighty Salmonella isolates were detected from broiler and turkey carcasses submitted to the Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA)´s Pathogens Reduction Program (PRPMAPA) in Southern Brazil. Twenty five Salmonella serovars were isolated in the poultry carcasses, being 14 in turkey and 23 in broilers. The most prevalent serovar was Salmonella Enteritidis (57,7%). In broiler carcasses, S. Enteritidis reached a 63,3% prevalence, while in turkeys carcasses this serovar presented a comparatively lower index (14,0%). Among the Brazilian Southern States (PR, SC and RS) there were no significative differences in the percentage of isolated S. Enteritidis. S. Tennessee and Salmonella enterica subspecies enterica (O: 4,5) were isolated in turkeys, but not in broiler carcasses. S. Hadar was most prevailing in turkeys (18,6%). Regarding the diffusion test applied to 178 isolates, they were challenged against 24 antimicrobials. As expected, all isolates were resistant to bacitracin and penicillin, while 78,2% presented resistance to at least one antimicrobial drug when the ones above were excluded. All samples were sensitive to amoxicillin + clavulanic acid, polymixin B, cyprofloxacin and norfloxacin. The highest resistance rate was observed against nalidixic acid (52,2%), followed by nitrofurantoin (28,8%), neomycin (14,6%), tetracycline (12,4%) and canamycin (10,1%). In turkeys the rates were higher to nalidixic acid (62,8%), tetracycline (34,9%) and neomycin (30,2%) showing significant differences for the latter two when compared to the ones isolated in broilers. S. Enteriditis isolates showed a higher resistance to nalidixic acid (72,0%) and lower to tetracycline (1,1%). Presence of multiresistant isolates was proven in 46,1% of the isolated poultry carcasses, mainly in the turkey samples related to the presence of S. Hadar and S. Saintpaul serovars, which were resistant to at least four to a maximum of eleven antimicrobials. This study was able to demonstrate the prevalence and the antimicrobial resistance profile of Salmonella serovars isolated from poultry carcasses in Southern Brazil. These findings reinforce the need for the creation of a National Antimicrobial Resistance Monitoring Programme in Brazil, which will be able to contribute to an overdue controlled use of these drugs in food producing animals.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-20Bitstream added on 2014-06-13T18:45:08Z : No. of bitstreams: 1 okamoto_as_dr_botfmvz.pdf: 316486 bytes, checksum: 9da72cf8a36b7e04e7b42adc80fe9b71 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Neste trabalho foram analisadas 100 cepas de Salmonella Enteritidis (SE) isoladas de material avícola, visando à detecção dos genes de virulência spvC e invA e resistência a antimicrobianos integron classe 1. Comparando-se com a possível expressão dos fatores de virulência para sobrevivência em condições impróprias de temperatura, pH e concentração de nutrientes e o teste de inibição em placa, respectivamente. Também a capacidade de transferência horizontal do gene integron classe 1 foi avaliada em SE. Das cepas analisadas, duas apresentaram os genes spvC e invA, simultaneamente, com uma provável expressão destes sendo verificada no crescimento com pH 10,0 ou temperatura de 25ºC. Porém em relação à concentração de nutriente, ambas as cepas não cresceram na menor concentração (0,5%). Não houve relação direta entre a presença do gene integron classe 1 com a multiresistência de SE aos 14 antimicrobianos testados, já que 80% das cepas pesquisadas foram resistentes a até três antimicrobianos e não apresentaram o referido gene. Entretanto, a transferência horizontal desse gene e da resistência antimicrobiana foi realizada in vitro, de um Escherichia coli para uma Salmonella Enteritidis, demonstrando a capacidade de disseminação do gene presente em integron classe 1. / In this work, 100 strains of Salmonella Enteritidis (SE) isolated from avian material were studied, aiming to detect the genes of virulence spvC and invA, as well as the antimicrobial resistance type 1 integron genes using the polymerase chain reaction (PCR), comparing it with the possible expression of the virulence factors to survive under inappropriate conditions of temperature, pH and nutrient concentration, and the plaque inhibition assay, respectively. Capacity of horizontal transfer of type 1 0,integron gene was also evaluated in SE. Two of the analyzed strains showed spvC and InvA genes simultaneously, with a probable expression verified through growing in pH 10.0 or 25°C temperature. However, regarding to nutrient concentration, the aforementioned strains did not grow at the lowest concentration (0.5%). There was no direct relation between type 1 integron gene and the multiresistance of SE to the 14 tested antibiotics, because 80% of the strains did not showed the gen, but was resistant till three antibiotics. However, horizontal transfer of this gene was performed in vitro, showing the capacity of dissemination of the type 1 integron gene between bacteria.

A Salmonella sp permanece com um dos mais importantes patógenos transmissores de enfermidades veiculadas através dos alimentos em todo mundo. A carne de aves está entre as principais causadoras das toxinfecções alimentares quando contaminadas pelo gênero Salmonella. Neste estudo foram isolados 280 sorovares de Salmonella das carcaças de frango e peru através do Programa de Redução de Patógenos (PRP-MAPA) na região sul do país. A maior prevalência ocorreu para a Salmonella Enteritidis (55,7%). Nas carcaças de frango, a S. Enteritidis alcançou 63,3% dos isolados, porém nas carcaças de peru este sorovar não passou dos 14,0%. Entre os estados do sul (PR, SC e RS), não houve diferenças nos isolados de S.Enteritidis. Foram 25 os sorovares de Salmonella sp isolados das carcaças de aves. Destes apenas 14 em perus e 23 nos frangos. A S. Tennessee e Salmonella enterica subespecie enterica (O: 4,5), foram isoladas somente em carcaças de perus e a S. Hadar foi a mais prevalente, 18,6%. Nos testes de difusão em placas, foram desafiadas 178 cepas frente a 24 antimicrobianos. Todas as cepas de Salmonella sp foram resistentes a bacitracina e a penicilina e 78,2% apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano quando excluídas as drogas anteriormente citadas, sendo que todas as amostras foram sensíveis a amoxicilina + ácido clavulânico, polimixina B, ciprofloxacina e norfloxacina. A maior taxa de resistência das amostras foi observada frente ao ácido nalidíxico de 52,2%, seguido da nitrofurantoína (28,8%), neomicina (14,6), tetraciclina (12,4%) e canamicina (10,1%). Nas amostras isoladas de perus estes índices foram maiores para o ácido nalidíxico (62,8%), tetraciclina (34,9%) e neomicina (30,2%), havendo diferenças significativas para os dois últimos quando comparados aos isolados de frango. Embora o índice de resistência a enrofloxacina de 2,2% no segmento aves seja baixo, chama atenção que, por tratar-se de um antimicrobiano quimicamente modificado a taxa de resistência nas amostras de perus tenha sido de 9,3%.O sorovar S. Enteritidis apresentou a maior taxa de resistência ao ácido nalidíxico (72,0%) e menor para tetraciclina (1,1%). Por outro lado, foi comprovada a presença de cepas multiresistentes em 46,1% dos isolados das carcaças de aves, principalmente nas amostras de perus nos sorovares S. Hadar e S. Saintpaul, que foram resistentes no mínimo a quatro e no máximo onze antimicrobianos. Este estudo demonstrou qual a prevalência e o perfil de resistência aos antimicrobianos dos sorovares de Salmonella sp isoladas das carcaças de aves na região Sul do Brasil e devido a sua importância em saúde animal e saúde pública, pode sugerir a criação de um Programa Nacional de Monitoramento da Resistência Bacteriana aos Antimicrobianos. / Salmonella sp remains as one of the most important foodborne pathogens worldwide. Poultry meat is among the most frequently involved foods regarding human food poisoning cases. In this study, two hundred and eighty Salmonella isolates were detected from broiler and turkey carcasses submitted to the Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA)´s Pathogens Reduction Program (PRPMAPA) in Southern Brazil. Twenty five Salmonella serovars were isolated in the poultry carcasses, being 14 in turkey and 23 in broilers. The most prevalent serovar was Salmonella Enteritidis (57,7%). In broiler carcasses, S. Enteritidis reached a 63,3% prevalence, while in turkeys carcasses this serovar presented a comparatively lower index (14,0%). Among the Brazilian Southern States (PR, SC and RS) there were no significative differences in the percentage of isolated S. Enteritidis. S. Tennessee and Salmonella enterica subspecies enterica (O: 4,5) were isolated in turkeys, but not in broiler carcasses. S. Hadar was most prevailing in turkeys (18,6%). Regarding the diffusion test applied to 178 isolates, they were challenged against 24 antimicrobials. As expected, all isolates were resistant to bacitracin and penicillin, while 78,2% presented resistance to at least one antimicrobial drug when the ones above were excluded. All samples were sensitive to amoxicillin + clavulanic acid, polymixin B, cyprofloxacin and norfloxacin. The highest resistance rate was observed against nalidixic acid (52,2%), followed by nitrofurantoin (28,8%), neomycin (14,6%), tetracycline (12,4%) and canamycin (10,1%). In turkeys the rates were higher to nalidixic acid (62,8%), tetracycline (34,9%) and neomycin (30,2%) showing significant differences for the latter two when compared to the ones isolated in broilers. S. Enteriditis isolates showed a higher resistance to nalidixic acid (72,0%) and lower to tetracycline (1,1%). Presence of multiresistant isolates was proven in 46,1% of the isolated poultry carcasses, mainly in the turkey samples related to the presence of S. Hadar and S. Saintpaul serovars, which were resistant to at least four to a maximum of eleven antimicrobials. This study was able to demonstrate the prevalence and the antimicrobial resistance profile of Salmonella serovars isolated from poultry carcasses in Southern Brazil. These findings reinforce the need for the creation of a National Antimicrobial Resistance Monitoring Programme in Brazil, which will be able to contribute to an overdue controlled use of these drugs in food producing animals.

Orientador: Raphael Lucio Andreatti Filho / Banca: Edna Teresa de Lima / Banca: Noeme Sousa Rocha / Banca: Julio Lopes Sequeira / Banca: Marcelo Vasconcelos Meireles / Resumo: Neste trabalho foram analisadas 100 cepas de Salmonella Enteritidis (SE) isoladas de material avícola, visando à detecção dos genes de virulência spvC e invA e resistência a antimicrobianos integron classe 1. Comparando-se com a possível expressão dos fatores de virulência para sobrevivência em condições impróprias de temperatura, pH e concentração de nutrientes e o teste de inibição em placa, respectivamente. Também a capacidade de transferência horizontal do gene integron classe 1 foi avaliada em SE. Das cepas analisadas, duas apresentaram os genes spvC e invA, simultaneamente, com uma provável expressão destes sendo verificada no crescimento com pH 10,0 ou temperatura de 25ºC. Porém em relação à concentração de nutriente, ambas as cepas não cresceram na menor concentração (0,5%). Não houve relação direta entre a presença do gene integron classe 1 com a multiresistência de SE aos 14 antimicrobianos testados, já que 80% das cepas pesquisadas foram resistentes a até três antimicrobianos e não apresentaram o referido gene. Entretanto, a transferência horizontal desse gene e da resistência antimicrobiana foi realizada in vitro, de um Escherichia coli para uma Salmonella Enteritidis, demonstrando a capacidade de disseminação do gene presente em integron classe 1. / Abstract: In this work, 100 strains of Salmonella Enteritidis (SE) isolated from avian material were studied, aiming to detect the genes of virulence spvC and invA, as well as the antimicrobial resistance type 1 integron genes using the polymerase chain reaction (PCR), comparing it with the possible expression of the virulence factors to survive under inappropriate conditions of temperature, pH and nutrient concentration, and the plaque inhibition assay, respectively. Capacity of horizontal transfer of type 1 0,integron gene was also evaluated in SE. Two of the analyzed strains showed spvC and InvA genes simultaneously, with a probable expression verified through growing in pH 10.0 or 25°C temperature. However, regarding to nutrient concentration, the aforementioned strains did not grow at the lowest concentration (0.5%). There was no direct relation between type 1 integron gene and the multiresistance of SE to the 14 tested antibiotics, because 80% of the strains did not showed the gen, but was resistant till three antibiotics. However, horizontal transfer of this gene was performed in vitro, showing the capacity of dissemination of the type 1 integron gene between bacteria. / Doutor

A Salmonella sp permanece com um dos mais importantes patógenos transmissores de enfermidades veiculadas através dos alimentos em todo mundo. A carne de aves está entre as principais causadoras das toxinfecções alimentares quando contaminadas pelo gênero Salmonella. Neste estudo foram isolados 280 sorovares de Salmonella das carcaças de frango e peru através do Programa de Redução de Patógenos (PRP-MAPA) na região sul do país. A maior prevalência ocorreu para a Salmonella Enteritidis (55,7%). Nas carcaças de frango, a S. Enteritidis alcançou 63,3% dos isolados, porém nas carcaças de peru este sorovar não passou dos 14,0%. Entre os estados do sul (PR, SC e RS), não houve diferenças nos isolados de S.Enteritidis. Foram 25 os sorovares de Salmonella sp isolados das carcaças de aves. Destes apenas 14 em perus e 23 nos frangos. A S. Tennessee e Salmonella enterica subespecie enterica (O: 4,5), foram isoladas somente em carcaças de perus e a S. Hadar foi a mais prevalente, 18,6%. Nos testes de difusão em placas, foram desafiadas 178 cepas frente a 24 antimicrobianos. Todas as cepas de Salmonella sp foram resistentes a bacitracina e a penicilina e 78,2% apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano quando excluídas as drogas anteriormente citadas, sendo que todas as amostras foram sensíveis a amoxicilina + ácido clavulânico, polimixina B, ciprofloxacina e norfloxacina. A maior taxa de resistência das amostras foi observada frente ao ácido nalidíxico de 52,2%, seguido da nitrofurantoína (28,8%), neomicina (14,6), tetraciclina (12,4%) e canamicina (10,1%). Nas amostras isoladas de perus estes índices foram maiores para o ácido nalidíxico (62,8%), tetraciclina (34,9%) e neomicina (30,2%), havendo diferenças significativas para os dois últimos quando comparados aos isolados de frango. Embora o índice de resistência a enrofloxacina de 2,2% no segmento aves seja baixo, chama atenção que, por tratar-se de um antimicrobiano quimicamente modificado a taxa de resistência nas amostras de perus tenha sido de 9,3%.O sorovar S. Enteritidis apresentou a maior taxa de resistência ao ácido nalidíxico (72,0%) e menor para tetraciclina (1,1%). Por outro lado, foi comprovada a presença de cepas multiresistentes em 46,1% dos isolados das carcaças de aves, principalmente nas amostras de perus nos sorovares S. Hadar e S. Saintpaul, que foram resistentes no mínimo a quatro e no máximo onze antimicrobianos. Este estudo demonstrou qual a prevalência e o perfil de resistência aos antimicrobianos dos sorovares de Salmonella sp isoladas das carcaças de aves na região Sul do Brasil e devido a sua importância em saúde animal e saúde pública, pode sugerir a criação de um Programa Nacional de Monitoramento da Resistência Bacteriana aos Antimicrobianos. / Salmonella sp remains as one of the most important foodborne pathogens worldwide. Poultry meat is among the most frequently involved foods regarding human food poisoning cases. In this study, two hundred and eighty Salmonella isolates were detected from broiler and turkey carcasses submitted to the Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA)´s Pathogens Reduction Program (PRPMAPA) in Southern Brazil. Twenty five Salmonella serovars were isolated in the poultry carcasses, being 14 in turkey and 23 in broilers. The most prevalent serovar was Salmonella Enteritidis (57,7%). In broiler carcasses, S. Enteritidis reached a 63,3% prevalence, while in turkeys carcasses this serovar presented a comparatively lower index (14,0%). Among the Brazilian Southern States (PR, SC and RS) there were no significative differences in the percentage of isolated S. Enteritidis. S. Tennessee and Salmonella enterica subspecies enterica (O: 4,5) were isolated in turkeys, but not in broiler carcasses. S. Hadar was most prevailing in turkeys (18,6%). Regarding the diffusion test applied to 178 isolates, they were challenged against 24 antimicrobials. As expected, all isolates were resistant to bacitracin and penicillin, while 78,2% presented resistance to at least one antimicrobial drug when the ones above were excluded. All samples were sensitive to amoxicillin + clavulanic acid, polymixin B, cyprofloxacin and norfloxacin. The highest resistance rate was observed against nalidixic acid (52,2%), followed by nitrofurantoin (28,8%), neomycin (14,6%), tetracycline (12,4%) and canamycin (10,1%). In turkeys the rates were higher to nalidixic acid (62,8%), tetracycline (34,9%) and neomycin (30,2%) showing significant differences for the latter two when compared to the ones isolated in broilers. S. Enteriditis isolates showed a higher resistance to nalidixic acid (72,0%) and lower to tetracycline (1,1%). Presence of multiresistant isolates was proven in 46,1% of the isolated poultry carcasses, mainly in the turkey samples related to the presence of S. Hadar and S. Saintpaul serovars, which were resistant to at least four to a maximum of eleven antimicrobials. This study was able to demonstrate the prevalence and the antimicrobial resistance profile of Salmonella serovars isolated from poultry carcasses in Southern Brazil. These findings reinforce the need for the creation of a National Antimicrobial Resistance Monitoring Programme in Brazil, which will be able to contribute to an overdue controlled use of these drugs in food producing animals.

Orientador: Domingos da Silva Leite / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T00:21:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Domingos_DanielaFerreira_M.pdf: 1627311 bytes, checksum: ba7a6545a75d72a741bfe8d1cda234f4 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O número de animais de companhia tem crescido substancialmente na sociedade atual, com estimativas de 48 milhões de cães e gatos no Brasil. A relação entre animais de companhia e os humanos mudou radicalmente nos últimos anos, esses estão em contato mais próximo com humanos. Como consequência dessas mudanças, agentes antimicrobianos, incluindo antibióticos usados no tratamento de infecções humanas, tem sido utilizados em cães. O objetivo deste trabalho foi investigar fenotipicamente a ocorrência de ß-lactamase de espectro estendido (ESBL) em amostras de Escherichia coli isoladas de cães e identificar os genes de resistência nestas amostras. A presença e variedade de integrons nas amostras de E. coli foi analisada. A classificação das amostras nos grupos filogenéticos A, B1, B2 e D também foram investigadas. Dentre 158 amostras de E. coli isoladas de cães sendo 51 de ITU (infecção do trato urinário), 52 de piometra e 55 de fezes de cães sadios, foram selecionadas 67 amostras que apresentavam pelo menos uma marca de resistência aos ß-lactâmicos. As amostras selecionadas: 41 isoladas de ITU, 20 isoladas de piometra e seis isoladas de fezes de animais sadios, foram submetidas a testes de sensibilidade microbiana pelo método de difusão de disco. A produção de ESBL foi verificada pelo método de aproximação de disco. A identificação dos genes das ß-lactamases foi realizada em ensaios de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) com primers específicos para os genes blaTEM, blaSHV, blaCTX-M, blaGES-1, blaOXA-10, ampC e cmy. A classificação filogenética (chuA, yjaA, TspE4.C2), bem como a detecção de integrons das classes 1 e 2 (intI1 e intI2) também foram realizadas por PCR. Os resultados dos antibiogramas mostraram elevada resistência aos ß-lactâmicos de 1ª geração, ampicilina (82,0%) e cefalexina (62,7%) entre as amostras selecionadas. Resistência aos antimicrobianos ß-lactâmicos de 3ª e 4ª geração e ao monobactam foi observada em 7,5% das amostras. As amostras também apresentaram resistência aos antimicrobianos tetraciclina (82,0%), trimetoprim-sulfametoxazol (62,7%), enrofloxacina (35,8%), florfenicol (34,3%) e ciprofloxacina (32,3%). A expressão fenotípica de ESBL foi observada em duas amostras (3,3%), ambas isoladas de animais sadios. Na análise genotípica, foram identificados os genes blaTEM, (98,5%), ampC (95,5%), blaCTX-M (35,8%), blaSHV (6%) e cmy (2,9%) destacando que os genes blaCTX-M, blaSHV e cmy apresentaram-se associados ao blaTEM e ao ampC. Pelo sequenciamento foi possível identificar as ß-lactamases do tipo TEM-1 e CTX-M-2. Na classificação filogenética as amostras foram agrupadas nos grupos B2 (59,7%), B1 (25,4%) e A (14,9%). Dentre as 67 amostras com marcas de resistência aos ß-lactâmicos, o gene int foi detectado em 26,9% , das quais 71,4% da classe 1 e 28,6% da classe 2. Por outro lado, dentre as 91 amostras sem marcas de resistência a à ß-lactâmicos, somente 3,3% apresentaram integrons, sendo todos da classe 1. As amostras com integrons foram mais comumente alocadas nos grupos filogenéticos A e B1. A presença de ESBL, de genes de resistência e integrons em E. coli isoladas de cães é um achado importante, uma vez que o contato íntimo entre humanos e cães oferece condições para a transmissão das amostras e ainda, que estes animais podem servir de reservatórios de genes de resistência. Esses resultados reforçam a necessidade de controle no uso de antimicrobianos em animais de companhia e bem como o papel dos animais domésticos como reservatório de genes de resistência bacteriana, precisa ser melhor investigado / Abstract: The number of cats and dogs has substantially increased in modern society, with an estimated population of above 48 million in Brazil. The relationship between companion animals and humans has radically changed throughout the years, and animals have become in closer contact with humans. As a consequence of these changes, antimicrobial agents, including antimicrobial preparations licensed for human use, are frequently used in dogs. The aim of this study was to investigate, in Escherichia coli strains isolated from dogs, the occurrence of ß-extended-spectrum ß-lactamase (ESBL) phenotype and to identify resistance genes in these samples. The presence and diversity of integrons in strains of E. coli was analyzed. The classification of microorganisms in the phylogenetic groups A, B1, B2 and D was also determined. Among 158 E.coli strains isolated from dogs (51 from UTI [urinary tract infection], 52 from piometra and 55 from faeces of healthy dogs) 67 strains were selected that had at least one sign of resistance to ß-lactams. The strains selected: 41 isolated from UTI, 20 isolated from piometra and six isolated from the faeces of healthy dogs, were tested for antibiotic sensitivity by the disk diffusion method. ESBL production was screened by the double-disk synergy method. The identification of ß-lactamases was performed by PCR (Polymerase Chain Reaction) using specific primers for blaTEM, blaSHV, blaCTX-M, blaGES-1, blaOXA-10, ampC and cmy and, subsequently, sequencing of the PCR product of strains showing the ESBL phenotype was performed. The phylogenetic classification (chuA, yjaA, TspE4.C2), as well as the detection of class 1 and class 2 integrons, were also determined by PCR. The results of susceptibility tests showed high resistance to 1st generation ß lactams, ampicillin (82.0%) and cephalexin (62.7%), among the selected strains. Resistance to 3rd and 4th generation ß-lactam antibiotics and monobactam was observed in 7.5% of isolates. The strains also showed resistance to antimicrobial tetracycline (82%), trimethoprim-sulfamethoxazole (62.7%), enrofloxacin (35.8%), florfenicol (34.3%) and ciprofloxacin (32.3%). Phenotypic expression of ESBL was observed in 2 samples (3.3%), both isolated from healthy animals. In the genotypic analysis, were identified the genes, blaTEM, (98.5%), ampC (95.5%), blaCTX-M (35.8%), blaSHV (6%) and cmy (2.9%); the genes blaCTX-M, blaSHV and cmy were shown to be associated with blaTEM and ampC. By sequencing, it was possible to identify the TEM-1 and CTX-M-2 ß-lactamases. In the phylogenetic classification, strains were classified B2 (59.7%), B1 (25.4%) and A (14.9%) groups. Among the 67 strains with resistance markers to ß-lactams, the int gene was detected in 26.9% of the strains (71.4% of class 1 and 28.6% of Class 2). Moreover, among the 91 samples without a trace of resistance to ß-lactams, only 3.3% had integrons, all of class 1. Strains with integrons were more commonly housed in the phylogenetic groups A and B1. The presence of ESBL, resistance genes and integrons in E. coli isolated from dogs is an important finding, due to close contact between humans and dogs provides conditions for the transmission of microorganisms and these animals may also serve as reservoirs of isolates harboring resistance genes. These results emphasize the need to control the use of antimicrobials in companion animals and the role of livestock as a reservoir for genes of resistance should be further investigated / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Em estudo anterior, as espécies de enterobactérias apresentando perfis variados de resistência aos antimicrobianos foram detectadas em 20% dos sítios com lesões periodontais de pacientes sadios do ponto de vista sistêmico. Tais cepas microbianas foram submetidas a investigações com o intuito de determinar à expressão de enzimas hidrolíticas para substratos diversos, a multirresistência aos agentes antimicrobianos e os mecanismos de resistência aos antimicrobianos da classe dos β lactâmicos. A maioria das amostras expressou atividade de gelatinase (65%), caseinase (30%) e elastase (10%). Lipase, lecitinase e DNase foram observadas apenas para Serratia marcescens. A multirresistência (considerado como a resistência a pelo menos dois agentes antimicrobianos de famílias diferentes) foi observada em 56% das amostras isoladas. A maioria das cepas foi resistentes à ampicilina (93,75%) e amoxicilina/ácido clavulânico (81,25%). Investigações sobre a resistência aos antibióticos β-lactâmicos mostraram que três amostras resistentes à cefalosporinas de 2 geração, apresentaram perfis plasmidiais de diferentes pesos moleculares. A expressão fenotípica de β-lacatamases, foi detectada nas cepas de Enterobacter cloacae (PcOM46 e PcOM5) e S. marcescens (PcOM63). No entanto, na análise molecular, não foi possível confirmar a expressão fenotípica de diferentes β-lactamases, com exceção do E. cloacae PcOM46, que apresentou amplificação para AmpC e blaTEM. Embora sensível à maioria dos antibióticos β-lactâmicos (exceção feita à ampicilina e amoxicilina / ácido clavulânico), amostra de S. marcescens PcOM68 apresentou amplificação para o gene blaSHV. Os experimentos de conjugação não detectaram a transferência de plasmídios para uma cepa de Escherichia coli K12 sensívei aos β-lactâmicos, o mesmo ocorreu nos procedimentos de transformação por eletroporação e por CaCl2, sugerindo uma resistência dependente de genes cromossomiais. A expressão de diferentes atividades enzimáticas, juntamente com a resistência aos antimicrobianos, aponta estes grupos de bactérias como agentes patogênicos potenciais capazes de contribuir para a patogênese e resposta à quimioterapia antimicrobiana nas doenças periodontais, além da disseminação sistêmica para outros locais do corpo, especialmente em indivíduos imunocomprometidos. A colonização prévia de lesões periodontais por espécies resistentes aos β-lactâmicos, pode contribuir para a disseminação destes genes relacionados à resistência aos antimicrobianos em ambientes hospitalares. / In a previous study, the enterobacterial species were detected in 20% of systemically healthy patients presenting periodontal lesions, with different profiles of antimicrobial resistance. These microbial strains were investigated in view to determine the expression of hydrolytic enzymes for diverse substrates, multiresistance to antimicrobial agents, and the mechanisms of resistance to beta-lactam antibiotics. The enzymes related to bacterial virulence were detected phenotypically in 90% isolates. The proteolytic activity displayed by the isolates against gelatin, casein and elastin was detected in 65%, 30% and 10%, respectively. Lipase, lecithinase, and DNase were observed only for Serratia marcescens strains. Multi-resistant phenotypes (considered as the resistance to at least two antimicrobial agents from different families) were observed for 56% enterobacterial isolates. Most of the strains were resistant to ampicillin (93.75%) and amoxicillin/clavulanic acid (81.25%). Investigations concerned to the resistance to beta-lactam antibiotics demonstrated that three bacterial strains resistant to penicilins and 2nd generation cephalosporins, had detectable plasmids. The extended resistance to β-lactams was detected phenotypically for E. cloacae PcOM46 and PcOM5) and S. marcescens (PcOM63) strains. However, the molecular detection of extended spectrum beta-lactamase failed to confirm the phenotypic expression of different β-lactamases, with exception to the E. cloacae PcOM46 isolate, which presented amplification for both ampC and blaTEM. Although sensitive to most of the β-lactam antibiotics (exception made to ampicilin and ampicilin/clavulanate), the strain S. marcescens PcOM68 was shown to amplify the blaSHV gene. Plasmid transference by both conjugation and transformation procedures failed to detect the resistance by a β-lactam-sensitive strain (E. coli K12), suggesting a chromosomal dependent resistance. The expression of varied enzymatic activities along with the resistance to antimicrobial agents point these group of bacteria as potential pathogens that may contribute to both pathogenesis and antimicrobial management of periodontal diseases, and systemic dissemination to other body sites, specially in immunocompromised host. The previous colonization of periodontal lesions by β-lactam resistant species may represent a threat for dissemination of genes related to antimicrobial resistance inside hospital environments.