A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, endêmica na América Latina, com alta prevalência no Brasil. O agente etiológico da doença são fungos do gênero Paracoccidioides. A gp43 é o antígeno principal do Pb e tem sido demonstrado que camundongos imunizados com anticorpos monoclonais anti-gp43 (MAbs) (Ab1) induzem a cascata idiotípica, produzindo anticorpos anti-Id (Ab2) e anti-anti-Id (Ab3). Observou-se que todos os Mabs Ab2 inibiram (>90%) a ligação da gp43 ao Mab 17c (Ab1) sugerindo que estes Mabs anti-Id ligam-se ao parátopo do Mab Ab1, comprovando assim que os Mabs anti-Id obtidos possuem a imagem interna da gp43. Então, nosso grupo de pesquisa construiu uma nova molécula de anticorpo à partir do Mab anti-idiotípico Ab2-β, que mimetiza o antígeno gp43 de P.brasiliensis, denominada de fragmento variável de cadeia única (scFv), e a transfecção dessa molécula em células dendríticas (DCs) mostrou ser promissora na PCM experimental. Visto que a molécula de DC-pMAC/PS-scFv, que possui a região de reconhecimento e ativação de linfócitos T, mostrou eficiência em modelo murino de terapia na PCM experimental, este trabalho teve como objetivo investigar os efeitos da terapia com o scFv em associação às nanocápsulas. Para isso, utilizando a levedura Pichia pastoris, obtivemos a expressão da molécula de scFv recombinante que foi posteriormente encapsulada em um composto a base de PLGA, na proporção 50:50 de PLA e PGA, e testada em modelo murino. Nosso modelo de terapia com scFv encapsulado mostrou-se eficiente, uma vez que observamos diminuição do CFU, maior recrutamento de células dendríticas e macrófagos nos pulmões dos animais, bem como aumento da produção de citocinas como IFN- γ e IL-12, diminuição de IL-10 para os animais tratados com o scFv encapsulado. Para as citocinas IL-4 e IL-17, não obtivemos níveis diferentes entre os grupos de tratamento. Ainda, não observamos diferença na produção de imunoglobulina IgG1. Sendo assim, nossos resultados sugerem a modulação de resposta imune para o tipo Th1, importante na proteção da PCM e diminuição da carga fúngica pulmonar. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic Mycosis, endemic in Latin America, with high prevalence in Brazil. The Etiologic Agent of disease are fungus of the genus Paracoccidioides. The main Antigen is gp43 Pb and it has been shown that mice immunized with monoclonal anti-gp43 antibodies (MAbs) (Ab1) induce the all idiotypic, producing antibodies anti-Id (Ab2) and anti-anti-Id (Ab3). It was observed that all the Mabs Ab2 inhibited (90%) the > gp43 by Mab 17 c (Ab1) suggesting that these anti-Id Mabs bind to the Mab paratopo Ab1, proving how the anti-Id Mabs obtained possess the internal image of gp43 (GESZTESI et al., 1996). So, our research group has built a new antibody molecule from Mab anti-idiotypic Ab2-b, which mimics the gp43 Antigen of p. brasiliensis, called single-chain variable fragment (scFv), and transfection of this molecule on dendritic cells (DCs) proved to be promising in the PCM. Since the molecule of DC-pMAC/PS-scFv, that has the recognition and activation of T lymphocytes, showed efficiency in murine model of therapy in experimental PCM, this study aimed to investigate the effects of therapy with the scFv in association to standard techniques. To do this, using the yeast Pichia pastoris, we obtained the expression of scFv recombinant molecule that was later encapsulated in the base compound of PLGA, 50:50 ratio of PLA and PGA, and tested in murine model. Our model of encapsulated scFv therapy proved to be efficient, since we observe reduction of CFU, greater recruitment of dendritic cells and macrophages in the lungs of animals, as well as increased production of cytokines such as IFN-γ and IL-12, IL-10 reduction for animals treated with encapsulated scFv. For the cytokines IL-4 and IL-17, we didn\'t get different levels between treatment groups. Still, it was not observed decrease of IgG1 immunoglobulin. So, our results suggest the modulation of immune response to Th1 type, important in the protection of the PCM.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química / Made available in DSpace on 2012-10-24T20:07:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 264424.pdf: 1544801 bytes, checksum: fb2f84e399cae0e641982e7165c986fa (MD5) / Polímeros naturais e sintéticos são amplamente usados no desenvolvimento de sistemas para liberação controlada e direcionada de fármacos e diversas técnicas podem ser utilizadas para produção de nanocápsulas poliméricas. A síntese de nanocápsulas via polimerização em miniemulsão apresenta como vantagem a possibilidade de se obter nanocápsulas em uma única etapa de reação e se baseia nas diferenças de tensão interfacial e do processo de separação de fases durante a polimerização. Neste trabalho foi realizado um estudo das reações de polimerização em miniemulsão visando a formação de nanocápsulas poliméricas biocompatíveis e avaliando a possibilidade de nanoencapsulação da quercetina, um antioxidante forte com capacidade de reagir com radicais livres. Inicialmente foram comparadas as reações para síntese de nanocápsulas e de nanoesferas poliméricas de poli(metacrilato de metila), respectivamente, com e sem núcleo de Miglyol 812, realizadas a diferentes temperaturas e com diferentes concentrações de iniciador. Foi observado que as reações para síntese de nanocápsulas apresentam velocidades de reação iguais as das reações para formação das nanoesferas, porém o diâmetro médio destas últimas é consideravelmente menor. Além disso, foi verificado que o aumento da temperatura e da concentração de iniciador levam a um aumento da velocidade de reação sem afetar o diâmetro médio e o número de partículas poliméricas, indicando que a formação das partículas poliméricas ocorre predominantemente pelo mecanismo de nucleação das gotas submicrométricas de monômero. Em seguida foi realizado um estudo comparativo entre as reações de polimerização de metacrilato de metila e de acetato de vinila em miniemulsão usando Miglyol 812 ou óleo de rícino como coestabilizador e como núcleo das nanocápsulas poliméricas biocompatíveis. Foi observado que, apesar da constante cinética de propagação do acetato de vinila ser dez vezes maior que a constante cinética de propagação do metacrilato de metila, as velocidades de reação das reações com acetato de vinila foram muito menores do que as das reações com metacrilato de metila. As reações na presença do óleo de rícino foram mais lentas do que na presença de Miglyol 812 e não resultaram na formação de partículas com a formação preferencial da morfologia de nanocápsulas. As reações com Miglyol 812 chegaram a formar em torno de 75% de partículas com a morfologia de nanocápsulas. Na etapa seguinte foi estudado o efeito do uso de diferentes tipos de iniciadores: 2,2'- azo-bis-isobutironitrila (solúvel na fase orgânica), persulfato de potássio e o par redox (peróxido de hidrogênio e ácido ascórbico), os dois últimos solúveis na fase aquosa, sobre a morfologia das partículas formadas nas reações de polimerização de metacrilato de metila, usando lecitina como sufatante e miglyol 812 como coestabilizador. Foi observado que a formação preferencial da morfologia de nanocápsulas foi alcançada com os três sistemas de iniciação avaliados. As reações realizadas com Quercetina apresentaram velocidades de reação inferiores àquelas realizadas com formulações análogas, porém sem Quercetina, indicando que provavelmente a presença da Quercetina inibe e/ou retarda as reações de polimerização e, consequentemente, pode estar sendo parcialmente consumida nas reações. Nas reações realizadas com o par de oxi-redução composto por peróxido de hidrogênio e ácido ascórbico na presença de Quercetina foi observado que o incremento da concentração de ácido ascórbico resulta num aumento considerável da velocidade de reação sem afetar outras propriedades como o diâmetro médio, visto que o ácido ascórbico age como um redutor da oxidação da Quercetina. Este resultado é um indicativo da possibilidade de incorporação de Quercetina nas nanocápsulas sintetizadas via polimerização de metacrilato de metila miniemulsão, usando Miglyol 812 como coestabilizador das nanocápsulas e como carreador da Quercetina e o sistema de iniciação via reações de oxi-redução composto por peróxido de hidrogênio e ácido ascórbico peróxido. Natural and synthetic polymers are widely used in the development of controlled and targeted drug release systems and several techniques might be used for the production of the polymeric nanocapsules. The synthesis of nanocapsules via miniemulsion polymerization shows as advantage the possibility of forming nanocapsules in one single reaction step and is based on the differences of the interfacial tensions and on the phase separation process during the polymerization. In this work a study of miniemulsion polymerization reactions aiming the formation of biocompatible polymeric nanocapsules was carried out and the possibility of nanoencapsulation of quercetin, a strong antioxidant and radical scavenger, was verified. Initially reactions for the synthesis of poly(methyl metacrylate) nanocapsules and nanospheres, respectively, with and without a core of Miglyol 812, were compared. These reactions were conducted at different temperatures and with different initiator concentrations. It was observed that the reactions for the synthesis of nanocapsules showed the same reaction rates as the reactions for the formation of the nanoespheres, but the latter had a substantially lower average diameter. Furthermore, it was verified that the increase of temperature and of initiator concentration enhance the reaction rate without affecting the average particle diameters and numbers, indicating that the formation of polymer particles occurs predominantly by the nucleation of the submicrometric monomer droplets. In sequence, a comparative study between methyl methacrylate and vinyl acetate miniemulsion polymerization reactions using miglyol 812 or castor oil as costabilizer and as the core of biocompatible polymeric nanocapsules was carried out. It was observed that despite the kinetic propagation constant of vinyl acetate being ten times higher than that of methyl methacrylate, the reaction rates of the vinyl acetate reactions were much smaller than those of methyl methacrylate. Reactions in the presence of castor oil were slower than those with Miglyol 812 and did not result in the preferential formation of particles with the nanocapsule morphology. Reactions with Miglyol 812 resulted in the formation of around 75% of particles with the nanocapsule morphology. In the following step the effect of different types of initiator: 2,2'-azo-bis-isobutironitrile (soluble in the organic phase), potassium persulfate and a redox initiation pair (hydrogen peroxide and ascorbic acid), these last two soluble in the aqueous phase, on the morphology of the nanoparticles formed in methyl methacrylate miniemulsion polymerization reactions, using lecithin as surfactant and miglyol 812 as costabilizer was studied. The preferential formation of the nanocapsule morphology was achieved with all the three evaluated initiation systems. Reactions conducted in the presence of quercetin showed lower reaction rates than those carried out with similar formulations, but without quercetin, indicating that probably the presence of quercetin inhibits and/or retards the polymerization reaction and, consequently, quercetin may be partially consumed in the reactions. In the reactions using the redox pair composed by hydrogen peroxide and ascorbic acid in the presence of quercetin it was observed that the increment of the concentration of ascorbic acid resulted in a considerable increase of the reaction rate without influencing other properties as average diameter, due of the fact that ascorbic acid acts as a reducer of the oxidation of quercetin. This result is an indicative of the possibility of incorporating quercetin in nanocapsules synthesized via methyl methacrylate miniemulsion polymerization, using miglyol 812 as costabilizer and as quercetin carrier and the redox initiation system composed by hydrogen peroxide and ascorbic acid.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Karine Ribeiro (karinelg.ribeiro@gmail.com) on 2015-10-15T17:38:45Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_PlanejamentoExperimentalUtilizado.pdf: 4158649 bytes, checksum: 58137d6f76686411143cac0652c2ce91 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-11-04T17:14:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_PlanejamentoExperimentalUtilizado.pdf: 4158649 bytes, checksum: 58137d6f76686411143cac0652c2ce91 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-04T17:14:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_PlanejamentoExperimentalUtilizado.pdf: 4158649 bytes, checksum: 58137d6f76686411143cac0652c2ce91 (MD5) Previous issue date: 2014 / Nanopartículas poliméricas consistem em sistemas coloidais de tamanho entre 10 a 1000 nm. Uma das classes é constituída pelas nanocápsulas que são sistemas vesiculares contendo um núcleo líquido circundado por uma membrana polimérica. Um método para sua obtenção é através da polimerização in situ de monômeros contidos em uma nanoemulsão. Neste trabalho, foram realizados planejamentos experimentais multivariados para compreender e definir quais as condições reacionais dos métodos via ultrassom e via aquecimento para obtenção de nanocápsulas resultam em maiores valores de eficiência de polimerização. O método via ultrassom teve como variáveis selecionadas o tempo e o número de aplicações em ultrassom e a concentração do iniciador de KPS. A primeira mostrou exercer maior efeito na polimerização, mas foi considerada como fator limitante devido à desestabilização da formulação em longos tempos de aplicação. Aplicações subsequentes em ultrassom apresentou efeito de pequena intensidade, ineficientes para compensar o tempo. A concentração de KPS foi a variável com maior liberdade de alteração para ajuste do método. O método via aquecimento teve a temperatura, o tempo e a concentração de KPS como variáveis selecionadas. Dessas três, a primeira mostrou exercer o efeito mais elevado, com a capacidade de reduzir as condições reacionais das outras duas, apesar de também ser considerada como fator limitante por induzir a desestabilização da formulação em altas temperaturas. O tempo e a concentração de KPS apresentaram efeitos de pequena intensidade na polimerização, mas significativos para ajuste do método. A compreensão das propriedades de cada variável e dos gráficos de superfície de resposta obtidos permitiu que as condições reacionais da polimerização dos métodos via ultrassom e via aquecimento para obtenção de nanocápsulas fossem ajustadas sem a perda da integridade físico-química da formulação. ______________________________________________________________________ / ABSTRACT: Polymeric nanoparticles consist in colloidal systems with sizes in a range between 10 and 1000 nm. One class is constituted of nanocapsules which are vesicle systems with a liquid core surrounded by a polymeric membrane. Obtainment method is through monomers contained in a nanoemulsion in situ polymerization. In this present work was performed multivariate design to understand and establish the reaction conditions to obtain nanocapsules with higher polymerization efficient, using ultrasound and heating methods. Ultrasound method had as selected variables time, application number and initiator KPS concentration. The fist showed higher effect in polymerization, but was considered as limiting factor due to formulation disestablishment with long periods of time. Subsequent applications showed small intensity effect, therefore inefficient to compensate submission time. KPS concentration was the variable with higher liberty to adjust the method. Heating method had temperature, time and KPS concentration as selected variables on screening stage. The fist showed higher effect and enable to reduce the reaction conditions of the others, although was also considered limiting factor due to formulation disestablishment with high temperatures. Time and KPS concentration showed small intensity effect on polymerization but significant to adjust the method. Understanding each variable proprieties and obtained surface response graphics allowed adjust the polymerization reaction conditions of ultrasound and heating methods to obtain nanocapsules with no formulation integrity loss.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3110_1.pdf: 1163998 bytes, checksum: 6732b57654145248f4defb96522c579a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo objetivou desenvolver, caracterizar e avaliar a atividade antitumoral de nanocápsulas convencionais e furtivas contendo ácido úsnico, visando uma futura aplicação terapêutica. As nanocápsulas de PLGA e PLGA-PEG contendo ácido úsnico foram obtidas pelo método de deposição interfacial do polímero pré-formado e caracterizadas através da eficiência de encapsulação, pH, tamanho de partículas, índice de polidispersão, carga de superfície e estudo de liberação in vitro. A atividade antitumoral in vivo do ácido úsnico foi avaliada em camundongos machos Swiss, onde os animais receberam doses diárias de 15 mg / kg / dia de ácido úsnico encapsulado em nanocápsulas convencionais (NC-PLGA/AU) e furtivas (NCPLGA- PEG/AU) ou ácido úsnico (AU) em suspensão por 7 dias. O pH, o tamanho e o índice de polidispersão das partículas não tiveram variações significativas durante 60 dias para as nanocápsulas em suspensão armazenadas a 4ºC, comprovando a boa estabilidade dos nanocarreadores obtidos. Além disso, as nanocápsulas convencionais e furtivas apresentaram altas eficiências de encapsulação, próximas a 100% e as cargas de superfície variaram de -18,96 a -29,42. Os perfis de liberação do ácido úsnico a partir das nanocápsulas de PLGA e PLGA-PEG apresentaram um efeito burst abaixo de 15% e um perfil de liberação gradual e controlado até 12h, atingindo um máximo de fármaco liberado em torno de 60% do seu conteúdo inicial em 48h. Nos estudos in vivo a atividade antitumoral do ácido úsnico livre foi comprovada, porém, quando nanoencapsulado o ácido úsnico promoveu uma inibição da massa tumoral acima de 50%, quando comparado ao grupo controle, e de aproximadamente 26% quando comparado com o fármaco livre. Em suma, foram obtidas nanocápsulas furtivas estáveis e com boa atividade biológica indicando que estes nanocarreadores são uma alternativa para a utilização do ácido úsnico na terapia anticancerígena

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, endêmica na América Latina, com alta prevalência no Brasil. O agente etiológico da doença são fungos do gênero Paracoccidioides. A gp43 é o antígeno principal do Pb e tem sido demonstrado que camundongos imunizados com anticorpos monoclonais anti-gp43 (MAbs) (Ab1) induzem a cascata idiotípica, produzindo anticorpos anti-Id (Ab2) e anti-anti-Id (Ab3). Observou-se que todos os Mabs Ab2 inibiram (>90%) a ligação da gp43 ao Mab 17c (Ab1) sugerindo que estes Mabs anti-Id ligam-se ao parátopo do Mab Ab1, comprovando assim que os Mabs anti-Id obtidos possuem a imagem interna da gp43. Então, nosso grupo de pesquisa construiu uma nova molécula de anticorpo à partir do Mab anti-idiotípico Ab2-β, que mimetiza o antígeno gp43 de P.brasiliensis, denominada de fragmento variável de cadeia única (scFv), e a transfecção dessa molécula em células dendríticas (DCs) mostrou ser promissora na PCM experimental. Visto que a molécula de DC-pMAC/PS-scFv, que possui a região de reconhecimento e ativação de linfócitos T, mostrou eficiência em modelo murino de terapia na PCM experimental, este trabalho teve como objetivo investigar os efeitos da terapia com o scFv em associação às nanocápsulas. Para isso, utilizando a levedura Pichia pastoris, obtivemos a expressão da molécula de scFv recombinante que foi posteriormente encapsulada em um composto a base de PLGA, na proporção 50:50 de PLA e PGA, e testada em modelo murino. Nosso modelo de terapia com scFv encapsulado mostrou-se eficiente, uma vez que observamos diminuição do CFU, maior recrutamento de células dendríticas e macrófagos nos pulmões dos animais, bem como aumento da produção de citocinas como IFN- γ e IL-12, diminuição de IL-10 para os animais tratados com o scFv encapsulado. Para as citocinas IL-4 e IL-17, não obtivemos níveis diferentes entre os grupos de tratamento. Ainda, não observamos diferença na produção de imunoglobulina IgG1. Sendo assim, nossos resultados sugerem a modulação de resposta imune para o tipo Th1, importante na proteção da PCM e diminuição da carga fúngica pulmonar. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic Mycosis, endemic in Latin America, with high prevalence in Brazil. The Etiologic Agent of disease are fungus of the genus Paracoccidioides. The main Antigen is gp43 Pb and it has been shown that mice immunized with monoclonal anti-gp43 antibodies (MAbs) (Ab1) induce the all idiotypic, producing antibodies anti-Id (Ab2) and anti-anti-Id (Ab3). It was observed that all the Mabs Ab2 inhibited (90%) the > gp43 by Mab 17 c (Ab1) suggesting that these anti-Id Mabs bind to the Mab paratopo Ab1, proving how the anti-Id Mabs obtained possess the internal image of gp43 (GESZTESI et al., 1996). So, our research group has built a new antibody molecule from Mab anti-idiotypic Ab2-b, which mimics the gp43 Antigen of p. brasiliensis, called single-chain variable fragment (scFv), and transfection of this molecule on dendritic cells (DCs) proved to be promising in the PCM. Since the molecule of DC-pMAC/PS-scFv, that has the recognition and activation of T lymphocytes, showed efficiency in murine model of therapy in experimental PCM, this study aimed to investigate the effects of therapy with the scFv in association to standard techniques. To do this, using the yeast Pichia pastoris, we obtained the expression of scFv recombinant molecule that was later encapsulated in the base compound of PLGA, 50:50 ratio of PLA and PGA, and tested in murine model. Our model of encapsulated scFv therapy proved to be efficient, since we observe reduction of CFU, greater recruitment of dendritic cells and macrophages in the lungs of animals, as well as increased production of cytokines such as IFN-γ and IL-12, IL-10 reduction for animals treated with encapsulated scFv. For the cytokines IL-4 and IL-17, we didn\'t get different levels between treatment groups. Still, it was not observed decrease of IgG1 immunoglobulin. So, our results suggest the modulation of immune response to Th1 type, important in the protection of the PCM.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:05:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339940.pdf: 1795412 bytes, checksum: 54c447cff9085d5c845f8d1074e5ec3b (MD5) Previous issue date: 2016 / A nanoencapsulação é utilizada para melhora da solubilidade de óleos essenciais em meios aquosos e aumentar a biodisponibilidade devido ao aumento da superfície de contato. Neste trabalho, foram produzidas nanoemulsões, nanopartículas lipídicas sólidas e nanopartículas poliméricas carregadas com óleo de cravo e avaliada a sua eficiência após o processo de encapsulação. As nanoemulsões foram formadas a partir da técnica de ultrasonicação, utilizando Crodamol, Pluronic® F-127 e diferentes concentrações de óleo de cravo, foram formadas nanopartículas esféricas de diâmetro médio entre 98 e 134 nm com a variação da concentração de óleo. As nanopartículas lipídicas sólidas foram produzidas através do método de emulsificação-ultrasonicação utilizando ácido esteárico, ou mistura de ácido esteárico com Crodamol e variação da concentração de óleo de cravo. O tamanho médio das partículas se manteve inferior a 312 nm, com formato esférico e com formação de imperfeições cristalinas na superfície das nanopartículas. As nanopartículas formadas com dois lipídios tiveram maior eficiência de encapsulação e maior retenção do óleo essencial após estocagem, em comparação às compostas por somente ácido esteárico. Análises de FT-IR e DSC comprovaram a redução da cristalinidade com a adição do lipídio líquido na formulação, devido à formação de mais imperfeições na rede cristalina do ácido graxo, consequentemente mais espaço para acomodação e retenção do composto bioativo. A formulação de nanoemulsão testada obteve um valor de Concentração Inibitória Mínima inferior às formulações testadas para nanopartículas lipídicas sólidas, e todas as formulações testadas obtiveram ótimos valores de atividade antioxidante. As nanopartículas poliméricas carregadas com óleo de cravo foram produzidas através do método de polimerização via tiol-eno em miniemulsão, utilizando um monômero dieno renovável derivado de óleo de mamona e isosorbídeo, um monômero ditiol, Lutensol AT 80 como surfactante não-iônico e diferentes concentrações de óleo de cravo. As nanopartículas produzidas apresentaram um diâmetro médio em intensidade entre 192 e 284 nm, com alta eficiência de encapsulação. A conversão final do monômero apresentou elevado decréscimo com o aumento da concentração de óleo de cravo na formulação. Este resultado é devido à reação do grupo fenol do eugenol com os radicais livres diminuindo a concentração destes no meio reacional com consequente redução da taxa de polimerização. Análises de DSC e GPC sugerem que o óleo de cravo foi parcialmente incorporado à cadeia polimérica, devido à redução do ponto de fusão eda massa molar do polímero formado na presença de óleo de cravo na formulação. A reação pode se dar devido à reação do radical tiil com a insaturação do grupo alquila da molécula de eugenol formando uma ligação covalente entre a cadeia polimérica em crescimento e o eugenol. Por conter apenas uma insaturação em sua molécula, o eugenol age com um agente terminador de cadeia deste processo de polimerização, ocasionando a redução da massa molar do polímero formado. As baixas massas molares alcançadas e a incorporação da molécula de eugenol à cadeia polimérica reduzem também a temperatura de fusão do polímero, conforme observado por DSC. Na avaliação da atividade antioxidante foi verificado que a presença de óleo de cravo elevou a atividade antioxidante das nanopartículas.<br> / Abstract: Nanoencapsulation is used to improve water solubility of essential oils in aqueous media and improve bioavailability due to the increase of contact area. In this work were produced nanoemulsions, solid lipid nanoparticles and polymeric nanoparticles loaded with clove oil and evaluated its efficiency after encapsulation process. Nanoemulsions were prepared through ultrasonication technique, using Crodamol, Pluronic® F-127 and different clove oil concentration; spherical nanoparticles were formed with average diameter between 98 and 134 nm when the oil concentration was varied. The solid lipid nanoparticles were produced using stearic acid or mixture of stearic acid and Crodamol, both cases was tested with clove oil concentration varying. The average particle size remained below 312 nm, with spherical shape and formation of crystalline imperfections on the surface of the nanoparticles. The samples tested with two lipids had higher encapsulation efficiency and better clove oil retention after storage than those composed by just one lipid. FT-IR and DSC analyses confirmed a reduction in lipid crystallinity when liquid lipid was added in formulation; it is because the liquid lipid is able to form more imperfections in the crystal lattice of fatty acid, consequently more room available to accommodation and retention of bioactive compound. The nanoemulsion formulation tested had a low Minimum Inhibitory Concentration than those formed with solid lipid, and all formulations tested showed a great antioxidant activity. Polymeric nanoparticles loaded with clove oil were produced by thiol-ene polymerization in miniemulsion, using a fully renewable diene monomer derived from castor oil and isosorbide, a dithiol monomer, Lutensol AT 80 as non ionic surfactant and different concentrations of clove oil. The polymeric nanoparticles presented an intensity average diameter between 192 and 284 nm with high encapsulation efficiency. The final polymer conversion showed a decrease with increasing concentration of clove oil in the formulation. This result could be attributed to the reaction of the phenyl group of eugenol with the free radicals decreasing their concentration in the reaction medium and thus the polymerization rate. DSC and GPC analyses suggested that the clove oil (eugenol) was partially incorporated to the polymer chain due to the decrease of the melting point and molecular weight of the polymer in the presence of clove oil in the formulation. This reaction can occur due to the reaction of the thyil radical with the double bond of the alkyl group from the molecule of eugenol creating a covalent bond between the growingpolymer chain and the eugenol. As eugenol contains just one insaturation, it acts as a capping agent for this polymerization process, resulting in the decrease of the molecular weight of the polymer that is being formed. The reduced molecular weight and the incorporation of eugenol to the polymer chain decrease the melting point as observed by DSC. The antioxidant activity evaluation showed that the presence of clove oil improve the antioxidant activity of nanoparticles.

Orientador: Fernando Lucas Primo / Banca: Alberto Colli Badino Júnior / Banca: Ariela Veloso de Paula / Resumo: O controle da qualidade dos resultados de análises químicas tem sido cada vez mais exigido devido ao grande prejuízo que dados analíticos não confiáveis podem gerar, principalmente quando se diz respeito à segurança do produto, e às consequências financeiras irreversíveis que pode causar. Para garantir a confiabilidade dos resultados obtidos durante as etapas analíticas é necessário que o método empregado seja validado. Neste contexto, o presente trabalho visa desenvolver e validar um método espectroanalítico para determinação de corantes vermelho e derivados livre e nanoencapsulado, por espectroscopia de absorção e emissão de fluorescência no UV-Vis, como métodos alternativos aos cromatográficos tradicionais. A partir da espectroscopia de absorção e emissão de fluorescência no UV-visível utilizando-se o espectrofotômetro modelo Genesys 10s da Thermo Scientific e espectrofluorímetro Shimadzu RF6000 desenvolveu-se um protocolo experimental para determinação da curva de correlação entre máximo de emissão de absorção e emissão de fluorescência em função de diferentes concentrações de quinizarina. O método foi determinado com número de repetição (n) igual a 3. Os parâmetros de aquisição dos espectros de fluorescência foram fixados com um comprimento de onda de excitação igual a 480 nm, fendas de excitação e emissão igual a 10/10 nm, respectivamente, com emissão na faixa de 520 a 680 nm. As amostras foram preparadas com auxílio de uma micropipeta (10,0 uL Eppendorf) a partir de di... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Quality control of chemical analysis results has been increasingly required because of the great harm that unreliable analytical data can generate, especially when it comes to product safety, and the irreversible financial consequences it can cause. To guarantee the reliability of the results obtained during the analytical steps it is necessary that the method employed be validated. In this context, the present work aims to develop and validate a spectroanalytical method for the determination of red dyes and free and nanoencapsulated derivatives, by absorption spectroscopy and UV-Vis fluorescence emission, as alternative methods to traditional chromatographic methods. UV-visible fluorescence emission and absorption spectroscopy using the Genesys 10s spectrophotometer from Thermo Scientific and Shimadzu RF6000 spectrofluorimeter was developed an experimental protocol for determination of the correlation curve between maximum emission of absorption and emission of fluorescence as a function of different concentrations of quinizarin. The method was determined with repeat number (n) equal to 3. The acquisition parameters of the fluorescence spectra were set with an excitation wavelength equal to 480 nm, excitation and emission slots equal to 10/10 nm, respectively, with emission in the range of 520 to 680 nm. The samples were prepared using a micropipette (10.0 μL Eppendorf) from infinite dilution in acetonitrile (2.0 mL), directly into a 10 mm optical path quartz cuvette, starting with an initial solution of quinizarin 1.00 mg / mL in dimethylsulfoxide. The methods showed linearity in the range of... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2012 / Made available in DSpace on 2013-12-05T22:14:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012 / Nanocápsulas poliméricas apresentam grande potencial para a liberação controlada de compostos ativos em uma variedade de produtos. A polimerização em miniemulsão é uma técnica versátil, com alta eficiência de nanoencapsulação e pode ser obtida em uma única etapa. Quando materiais biocompatíveis e biodegradáveis são usados, a aplicabilidade das nanocápsulas pode ser ampliada, principalmente nas áreas cosmética, alimentícia e farmacêutica. Na indústria têxtil, a morfologia e o tamanho das nanocápsulas podem garantir que estas penetrem facilmente nos espaços entre as fibras de algodão e então sejam fixadas, possibilitando a liberação controlada do composto encapsulado para atender uma finalidade específica. Em particular, a adição de fragrâncias com duração cada vez mais longa vem sendo um desafio e uma grande meta das indústrias têxteis. Devido à sua hidrofobicidade, óleos vegetais são apropriados para serem utilizados como co-estabilizador nas miniemulsões, reduzindo a degradação difusional das gotas de monômero. Por apresentarem diversas propriedades interessantes, tais como emolientes, umectantes e antioxidantes, o uso dos óleos vegetais como composto a ser encapsulado também deve ser explorado. Dessa forma, o presente trabalho visa estudar a obtenção de nanocápsulas contendo óleos vegetais e fragrâncias via polimerização em miniemulsão e o controle da liberação do aroma encapsulado. Na etapa de nanoencapsulação, foram estudados os efeitos de diferentes co-monômeros hidrofílicos, co-estabilizadores, aromas e concentrações de iniciador. Os métodos aplicados proporcionaram a obtenção de nanopartículas de, aproximadamente, 140 nm e a técnica de polimerização em miniemulsão se apresentou versátil na nanoencapsulação de óleos vegetais e fragrâncias. As nanocápsulas contendo aroma foram submetidas à impregnação em tecidos de algodão e a liberação do aroma foi monitorada. Os resultados obtidos revelaram que, após 10 dias, a perda do aroma não encapsulado foi de 85,7%, enquanto para o aroma encapsulado foi de apenas 38,2% nos quatro primeiros dias e manteve-se constante até o 10º dia de análise, evidenciando a eficácia das nanocápsulas na liberação controlada da fragrância.<br> / Abstract : Polymeric nanocapsules show a strong potential for controlled and targeted delivery of active compounds in a variety of products. Miniemulsion polymerization is a versatile technique with high encapsulation efficiency that can be obtained in a single step. When biodegradable and biocompatible materials are used, the applicability of nanocapsules can be enhanced, mostly in cosmetics, food and pharmaceutical fields. In the textile industry, nanocapsules size and morphology ensure that they can easily penetrate the spaces between cotton fibers and then be fixed, allowing the controlled delivery of the encapsulated compound to meet a specific purpose. Particularly, the addition of fragrances with a longer duration is becoming a challenge and a great goal for the textile industries. Due to its high hydrofobicity, vegetable oils are very suitable as costabilizers in miniemulsions, decreasing the diffusional degradation of monomer droplets. Because they have different interesting properties, such as emollient, wetting and antioxidant, vegetable oils use as encapsulated compounds should be explored. Thus, this paper aims to study the nanoencapsulation of vegetable oils and fragrances via miniemulsion polymerization and the control of the encapsulated scent duration. In the nanoencapsulation step, the effect of different hydrophilic monomers, costabilizers, scents and initiator concentrations were studied. The applied methods produced nanoparticles with 140 nm and the miniemulsion polymerization technique was versatile for the nanoencapsulation of vegetable oils and fragrances. Nanocapsules containing scents were impregnated in cotton fabrics and the scent loss was monitored. The results revealed that, after ten days, the loss of non-encapsulated scent was about 85,7%, while the fragrance release of encapsulated scent was only 38,2% during the first four days and remained unchanged until the 10th day. This fact demonstrates the effectiveness of nanocapsules in the controlled liberation of the fragrance.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-06-13T18:51:55Z No. of bitstreams: 1 2017_JanaínaMoreiraCoelho.pdf: 4112557 bytes, checksum: b0f62a77d0c9b0c1e874699c9e11c4a9 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-06-27T20:30:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_JanaínaMoreiraCoelho.pdf: 4112557 bytes, checksum: b0f62a77d0c9b0c1e874699c9e11c4a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-27T20:30:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_JanaínaMoreiraCoelho.pdf: 4112557 bytes, checksum: b0f62a77d0c9b0c1e874699c9e11c4a9 (MD5) Previous issue date: 2017-06-27 / Doxorrubicina (DOX) é um fámaco altamente utilizado no tratamento de diversos tipos de câncer, porém apresenta efeitos adversos, tais como cardiotoxicidade irreversível. O óleo de rícino, um triacilglicerídeo natural vem sendo investigado como veículo de fármacos. O objetivo geral deste trabalho consistiu em desenvolver nanocápsulas com núcleo de óleo de rícino e DOX e avaliar sua atividade contra células de câncer de mama humano e murino in vitro. Foram obtidas nanocápsulas com núcleo de óleo de rícino e doxorrubicina com invólucro de poli (metil vinil-éter co-anidrido maléico) modificado com n-octadecilamina. As nanocápsulas apresentaram-se estáveis e monodispersas. Nos ensaios in vitro, foram utilizadas as células de adenocarcinoma mamário murino (4T1), fibroblasto murino (NIH-3T3), adenocarcinoma mamário humano (MCF-7) e célula de epitélio mamário humano (MCF-10A). O tratamento com NCR-DOX (nanocápsulas com invólucro de PVM/MA e núcleo contendo óleo de rícino e DOX) diminuiu a viabilidade e a adesão de células tumorais. NCR-DOX foi mais interiorizada que DOX livre em células tumorais. A distribuição intracelular da NCR-DOX foi identificada no citoplasma e no núcleo. Os tratamentos com DOX e NCR-DOX em 4T1 e MCF-7 alteraram os padrões morfológicos e diminuíram a confluência de células cancerosas, além disso, provocaram despolarização da membrana e causaram necrose e apoptose tardia. NCR-DOX causou menos fragmentação de DNA do que DOX. Concluiuse que nanocápsulas com núcleo de óleo de rícino e doxorrubicina são eficazes contra células tumorais MCF-7 e 4T1. / Doxorubicin (DOX) is an often used drug for the treatment of several types of cancer, but it has adverse side effects such as irreversible cardiotoxicity. Castor oil, a naturally occurring triacylglyceride, has been investigated as a drug vehicle. The overall objective of this work was to develop nanocapsules with castor oil nuclei containing DOX and evaluate its activity against human and murine breast cancer cells in vitro. Nanocapsules were obtained using with castor oil core and doxorubicin with noctadecylamine modified poly (methyl vinyl ether co-anhydride) casing. The nanocapsules were stable and monodisperse. In the in vitro assays, murine mammary adenocarcinoma (4T1), murine fibroblast (NIH-3T3), human mammary adenocarcinoma (MCF-7) and human mammary epithelial cells (MCF-10A) were used. NCR-DOX treatment decreased the viability and adhesion of tumor cells. NCR-DOX was more internalized than free DOX in tumor cells. The intracellular distribution of NCR-DOX was identified in the cytoplasm and nucleus. The DOX and NCR-DOX treatments in 4T1 and MCF-7 altered the morphological patterns and decreased the confluence of cancer cells. In addition, they provoked depolarization of the membrane and caused necrosis and late apoptosis. NCR-DOX caused less DNA fragmentation than DOX. It was concluded that castor oil core doxorubicin nanocapsules is effective against MCF-7 and 4T1 tumor cells.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-03-28T20:26:57Z No. of bitstreams: 1 2016_RayaneGanassin.pdf: 5116718 bytes, checksum: 6bf106395a30603681f312e0e0583e9c (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-03-30T10:52:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_RayaneGanassin.pdf: 5116718 bytes, checksum: 6bf106395a30603681f312e0e0583e9c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-30T10:52:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_RayaneGanassin.pdf: 5116718 bytes, checksum: 6bf106395a30603681f312e0e0583e9c (MD5) / A doxorrubicina (DOX) tem se mostrado eficaz no tratamento de cânceres sólidos e hematológicos, mas a sua potencial cardiotoxicidade irreversível, limita o sucesso do tratamento, levando a um baixo índice terapêutico. O selol, mistura de selenitotriacilglicerídeos, mostrou atividade citostática em ensaios in vitro e demonstrou habilidade em reduzir a viabilidade de células resistentes à DOX. Os objetivos gerais do presente trabalho foram: 1) desenvolver uma nanocápsula contendo selol e doxorrubicina com diâmetro próximo a 200 nm, 2) avaliar sua atividade anticâncer in vitro e in vivo, e 3) verificar o seu potencial cardiotóxico. A formulação obtida consistiu de nanocápsulas com núcleo de selol e com invólucro de poli(metil vinil-éter co-anidrido maléico) conjugado à doxorrubicina. As nanocápsulas apresentaram-se estáveis e monodispersas. Para os testes in vitro, foram utilizadas as células de adenocarcinoma mamário murino (4T1) e células de fibroblasto murino como célula não tumoral (NIH-3T3). Os tratamentos DOX (doxorrubicina), NCS-DOX (nanocápsulas de selol contendo doxorrubicina) e Pol-DOX (produto da reação entre PVM/MA e doxorrubicina) provocaram significativa redução na viabilidade de células 4T1. Ensaios de interiorização mostraram que NCS-DOX e Pol-DOX são mais interiorizadas do que DOX livre em células 4T1. NCS-DOX manteve o potencial da DOX em expor a fosfatidilserina na face externa da membrana em células 4T1, sendo este evento um dos que indica a ocorrência de apoptose. NCS-DOX apresentou maior capacidade de provocar fragmentação de DNA, além de provocar maior alteração na polarização mitocondrial do que DOX. NCS-DOX também foi capaz de gerar maior produção de EROs em tempos de 3 e 24 horas de exposição do que DOX. NCS-DOX e Pol-DOX alteraram a distribuição intracelular da DOX quando comparados com a exposição à DOX livre, do núcleo para a mitocôndria. Em estudos in vivo a NCS-DOX apresentou mesma habilidade da DOX em reduzir o crescimento do tumor de células 4T1, além de apresentar a mesma biodistribuição em camundongos BALB/c. A NCS-DOX não elevou os níveis de CK-MB quando comparado ao controle, o mesmo efeito não foi observado para DOX livre. Portanto, conclui-se que a NCS-DOX é eficaz contra células cancerosas 4T1 in vitro e in vivo, e menos cardiotóxica que a DOX in vivo. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Doxorubicin (DOX) has shown to be effective in the treatment of solid and haematological cancers, but its potential irreversible cardiotoxicity limits the success of the treatment, lowering its therapeutic index. The selol, selenitotriacylglicerides mixture, has shown cytostatic activity in in vitro tests and ability to reduce the viability of doxorubicin-resistant cells. The general goals of this study were: 1) to develop nanocapsules containing selol and doxorubicin with diameter close to 200 nm, 2) to evaluate its in vitro and in vivo anticancer activity, and 3) to check its cardiotoxicity. The formulation consisted of nanocapsules with a core of selol and a shell of poly (methyl vinyl ether-co-maleic anhydride) conjugated to doxorubicin. The nanocapsules were stable and monodisperse. For in vitro tests, murine mammary adenocarcinoma cells (4T1) and fibroblast murine as non-tumor cell (NIH-3T3) were used. The treatments DOX (doxorubicin), NCS-DOX (nanocapsules of selol containing doxorubicin) and Pol-DOX (product of the reaction between PVM/MA and doxorubicin) caused a significant reduction in the viability of 4T1 cells. Internalization assays showed that NCS-DOX and Pol-DOX are more internalized than free DOX by 4T1 cells. NCS-DOX, similarly to free DOX, expose phosphatidylserine on the outside face membrane in 4T1 cells, this is an event that indicate apoptosis. NCS-DOX showed an increased ability to cause DNA fragmentation and to disturb the mitochondrial membrane polarization in comparison to free DOX. NCS-DOX was also able to induce higher production of ROS, at 3 and 24 hours of exposure. NCS-DOX and Pol-DOX altered intracellular distribution of doxorubicin when compared to free DOX alone, from the nuclei to the mitochondria. In in vivo studies, NCS-DOX and free DOX showed the same ability to reduce 4T1 tumor growth, and presented the same biodistribution in BALB/c mice. The NCS-DOX did not increase CK-MB levels when compared to the control. Free DOX significantly increased CK-MB activity. Therefore, it is concluded that the NCS-DOX is effective against 4T1 cancer cells in vitro and in vivo, and less cardiotoxic than free DOX in vivo.