Leucoplasia bucal (LB) é uma desordem potencialmente maligna, com risco de transformação maligna que varia de 0,13% a 17,5%. Muitos estudos vêm buscando estabelecer biomarcadores capazes de predizer o potencial de transformação maligna dessa lesão. O Ki-67 é uma proteína não-histônica nuclear que tem sido amplamente utilizada para avaliar proliferação celular. O BMI-1 é uma proteína considerada um marcador essencial para a manutenção das propriedades de autorrenovação e da tumorigenicidade do carcinoma espinocelular. O objetivo principal desse estudo observacional transversal foi avaliar proliferação e imortalização celulares em LB a partir da marcação imunoistoquímica do Ki-67 e do BMI-1, comparando lesões displásicas com não displásicas. Casos de LB não displásica - LBND (n=28), LB displásica - LBD (n=33) foram selecionados a partir de prontuários de pacientes e comparados com mucosa clinicamente normal - MN (n=9), hiperplasia inflamatória - HI (n=17) e carcinoma espinocelular - CEC (n=19). Os diagnósticos histopatológicos foram confirmados a partir da revisão de cortes histológicos corados por hematoxilina e eosina. Adicionalmente, cortes histológicos foram submetidos à técnica imunoistoquímica para avaliação de Ki-67 e BMI-1. Para a quantificação foi considerado o percentual de células positivas por 1000 células para o CEC e 1500 células para os demais grupos. O percentual de imunomarcação de Ki-67 e de BMI-1, quando avaliadas todas as camadas epiteliais em conjunto, foi mais alto no CEC quando comparado aos demais grupos (Kruskal-Wallis, p<0.05). A expressão de Ki-67 foi maior em LBND, LBD e HI quando comparada com MN (Kruskal-Wallis, p<0.05). Além disso, a imunomarcação de BMI-1 foi maior em LBD quando comparada com MN, quando analisadas todas as camadas em conjunto (Kruskal-Wallis, p<0.05). A partir da avaliação das camadas epiteliais separadamente, observou-se aumento da expressão de BMI-1 na camada parabasal e suprabasal em LBND quando comparada com MN. Houve correlação positiva entre Ki-67 e BMI-1 (Correlação de Spearman, R=0.37, p<0.05). Conclui-se que a proliferação e as alterações na transição epitélio-mesênquima são eventos relacionados e que estão presentes desde estágios precoces e se acentuam nos estágios mais tardios da carcinogênese. / Oral leukoplakia (OL) is potentially malignant disorder, with a risk of malignant transformation that ranges from 0.13% to 17.5%. Many biological markers have been used as an attempt to predict malignant transformation, but no reliable markers have been established so far. The Ki-67 is a nuclear non-histone regarded as reliable marker of proliferating cells .BMI-1 is a protein considered as an essential marker for maintenance of properties self-renewability and tumorigenicity of squamous cell carcinoma. The main aim this cross-sectional observational study was to evaluate cell proliferation and immortalization in oral leukoplakia, comparing non-dysplastic and dysplastic lesions. Cases of non-dysplastic – Non-dys OL (n=28), dysplastic – Dys OL (n=33) records were selected and compared with normal oral mucosa – NOM (n=9), inflammatory hyperplasia –IH (n=17), and oral squamous cell carcinoma - OSCC (n=19). The histopathological diagnosis was confirmed by the revision of Hematoxilin and Eosin stained slides. Additionally, histological sections were submitted to immunohistochemical technique for evaluation of Ki-67 and BMI-1. The labeling index was determined by counting the labeled nuclei of 1000 cells for OSCC cases and 1500 for the others comparison groups. Ki-67 and BMI-1 immunolabeling percentage were higher in OSCC in comparison of others groups when all epithelial layers were evaluated together (Kruskal-Wallis, p<0.05). Ki-67 immunolabeling increased in Non-dys OL, Dys OL and IH when compared to NOM (Kruskal-Wallis, p<0.05). Furthermore, BMI-1 immunolabeling was higher in Dys OL relation to NOM in the analysis of all epithelial layers together (Kruskal-Wallis, p<0.05). When the evaluation considered the epithelial layer separately, an increased BMI1 expression was observed in the parabasal and suprabasal layers of Non-dys OL when compared to NOM. A significant positive correlation was found between Ki-67 and BMI-1 (Spearman correlation coefficient, R=0.37, p<0.01). In conclusion, the present findings support that proliferation and changes toward epithelial-to-mesenchymal transition increase gradually since early stages of oral carcinogenesis.

A espectroscopia Raman é uma das tecnologias ópticas que tem ganho cada vez mais destaque na oncologia. Esta tecnologia fornece a composição molecular dos mais variados tipos de amostras, inclusive biofluidos, células e tecidos. Na tentativa de avaliar sua aplicação em lesões bucais, o objetivo deste trabalho foi obter um perfil espectral dos distúrbios epiteliais nãodisplásicos, displásicos, e do carcinoma espinocelular bucal, bem como verificar a possibilidade diagnosticar estas alterações pelos espectros. Inicialmente, foram usados 44 amostras de mucosa bucal em blocos de parafina, com diagnóstico de hiperplasia epitelial, hiperparaceratose, displasia epitelial e carcinoma espinocelular bucal. Da porção epitelial de cada uma destas amostras foram obtidos 10 espectros Raman. A média dos espectros de cada alteração gerou um perfil espectral correspondente à sua composição química. Os resultados desta análise apresentaram picos ou bandas espectrais referentes a moléculas usualmente encontradas nos tecidos biológicos: proteínas, lipídios e DNA. Em seguida, os dados espectrais foram submetidos a análise dos componentes principais (PCA) e análise discriminante linear (LDA), onde foi encontrada uma eficiência de 86,36% no uso da Espectroscopia Raman para o diagnóstico de alterações epiteliais. A validade do método foi comprovada pela Curva Roc resultando em 91% de sensibilidade e 96,9% de especificidade. Em um segundo momento, com a finalidade de avaliar a influência da fixação com formalina nas análises espectrais, a superfície epitelial de uma amostra de tecido bucal fresca ex vivo foi submetida a análise pela Espectroscopia Raman e armazenada em formalina tamponada a 10% por 24h para posteriormente se obter outro espectro. A análise comparativa entre os perfis espectrais de uma mesma amostra antes e após a fixação, demonstraram diferenças em relação aos picos de proteínas e DNA, que podem modificar o perfil espectral da alteração analisada e, portanto, gerar algum erro de classificação. De maneira geral, pelos resultados desta pesquisa, observou-se que a Espectroscopia Raman é uma tecnologia eficiente para identificar a composição molecular de amostras de tecido, seja imediatamente após a excisão cirúrgica, fixação em formalina ou emblocadas em parafina. Entretanto, deve-se considerar que estas a diferentes formas de condicionamento influenciarão diretamente no resultado dos espectros. / Raman spectroscopy (RS) is one of the optical technologies that has garnered a great deal of interest in oncology. This technology provides the molecular composition of various types of samples, including biofluids, cells and tissues. In an attempt to assess its application in oral lesions, the purpose of this study was to obtain a spectral profile of epithelial disorders non-dysplastic, dysplastic, and oral squamous cell carcinoma, as well as checking the ability to diagnose these changes by the spectra. Initially, 44 samples of oral mucosa formali-fixed paraffin embebed were used with epithelial hyperplasia, hyperparakeratosis, epithelial dysplasia and oral squamous cell carcinoma. From the epithelial area of each sample were obtained 10 Raman spectra. The average of the spectra of each change generated a spectral profile corresponding to its chemical composition. Results of this analysis showed peaks or spectral bands related to molecules generally found in biological tissues: proteins, lipids and DNA. Then the spectral data were submitted to principal component analysis (PCA) and linear discriminant analysis (LDA), which was found 86.36% efficiency in the use of Raman spectroscopy (RS) for diagnosis of epithelial changes. The validity of the method was confirmed by Roc curve resulting in 91% sensitivity and 96.9% specificity. In a second step, in order to evaluate the influence of fixation with formalin in the spectral analysis, the epithelial surface of a sample of freshly biopsied oral tissue was subjected to analysis by RS and stored in 10% formalin for 24 hours for later obtain another spectrum. The comparative analysis of the spectral profiles of the same sample, before and after fixation, shows differences relative to spectral peaks of proteins and DNA that can modify the spectral profile of the analyzed change and thus generate some misclassification. In general, the results of this research, it was observed that Raman spectroscopy is an efficient technology to identify the molecular composition of tissue samples, either immediately after surgical excision, either after fixation in formalin and embedded in paraffin. However, it should be considered that these different means of conditioning will influence the outcome of the spectra.

O Carcinoma de células escamosas é o tipo histológico mais comum das neoplasia esofágicas no mundo.Tem sua origem no epitélio escamoso do esôfago e é achado com maior frequência no terço médio do órgão. A carcinogênese esofágica é um processo que resulta do acúmulo de mutações envolvendo diferentes genes, como o TP53. Este está mutado em mais de 50% dos tumores esofágicos. Inúmeras pesquisas têm sido direcionadas para restaurar a função da proteína p53, as quais resultaram na descoberta da PRIMA-1. Neste estudo, foram pesquisados possíveis efeitos protetores da PRIMA-1 no epitélio do esôfago sob efeito carcinogênico químico evitando o desenvolvimento neoplásico e induzindo involução da carcinogênese. Para testar esta hipótese, realizamos estudo, com utilização da PRIMA-1, em um modelo experimental de carcinogênese esofágica por dietilnitrosamina com indução de carcinoma de células escamosas. O estudo experimental foi realizado com 6 grupos de animais, onde os grupos I e II foram considerados controles, sendo diferenciados por uso da PRIMA-1. E os grupos III e IV, e Va e Vb, foram considerados estudos, os quais receberam dietilnitrosamina por 3 dias consecutivos semanalmente. Enquanto os grupos III e IV, foram diferenciados pelo uso de PRIMA-1 prévio ao início da carcinogênese, os grupos Va e Vb, foram diferenciados pelo uso de PRIMA-1 ao final da carcinogênese. O estudo apresentou data de eutanásia com colheita de peças esofágicas, aos 150 dias, grupos I, II, III e IV, e 180 dias, grupos Va e Vb, devido ao período de observação após uso tardio da PRIMA-1. Não foram detectadas alterações histopatológicas nos grupos controles, grupo I (DEN-/PRIMA-) e II (DEN-/PRIMA+). Não foram detectadas diferenças nas alterações histopatológicas estatisticamente significativas entre os grupos III (DEN+/PRIMA-) e IV (DEN+/ PRIMA+ inicial). Foram detectadas diferenças nas alterações histopatológicas estatisticamente significativas entre os grupos Va (DEN+/PRIMA-) e Vb (DEN+/PRIMA+ tardio). A análise imunohistoquímica do p53 evidenciou diferença estatística nos grupos que utilizaram a PRIMA-1, em relação as seus controles. A análise imunohistoquímica do Ki-67 demonstrou diferença estatística somente entre os dois grupos controles. Conclue-se que a PRIMA-1 teve efeito de redução da gravidade histopatológica em esôfago de camundongos previamente induzidos a carcinogênese com dietilnitrosamina e aumento da expressão imuno-histoquímica da proteína p53. / The esophageal squamous cell carcinoma is the most common histological type in the world. It is origin in the squamous epithelium of the esophagus and is found more often in the middle third of the organ. The esophageal carcinogenesis is a process that results from the accumulation of mutations in different genes such as TP53. This is mutate in more than 50% of esophageal tumors. Numerous researches have been directed to restore the function of the p53 protein, which resulted in the discovery of PRIMA-1. In this study, we investigated the possible protective effects of PRIMA-1 in the epithelium of the esophagus under chemical carcinogenic effect preventing neoplastic development and inducing regression of carcinogenesis. To test this hypothesis, a study with use of PRIMA-1 in an experimental model of esophageal carcinogenesis induced by diethylnitrosamine with squamous cell carcinoma. The experimental study was performed wth six groups of animals, where the groups I and II were considered controls being differentiated by the use of PRIMA-1. And the groups III and IV, and Va and Vb, were considered studies, which received diethylnitrosamine for 3 consecutive days weekly. While the groups III and IV, were differentiated by the use of PRIMA-1 prior to the beginning of carcinogenesis, the Va and Vb groups were differentiated by the use of PRIMA-1 at the end of carcinogenesis. The study presented date of euthanasia with crop esophageal parts, at 150 days, groups I, II, III and IV, and 180 days, Va and Vb groups because of the observation period after late use of PRIMA-1. Histopathological changes were detected in the control groups, Group I (DEN-/PRIMA-) and II (DEN-/PRIMA+). There were no statistically significant differences in pathological changes between the groups III (DEN+/PRIMA-) and IV (DEN+/PRIMA- first). Differences were found in statistically significant histopathological changes between Va groups (DEN+/PRIMA-) and Vb (DEN+/PRIMA+ late). Immunohistochemical analysis of p53 showed a statistically significant difference in the groups using PRIMA-1, compared to their controls. Immunohistochemical analysis of Ki-67 showed statistical difference only between the two control groups. It concludes that the PRIMA-1 was reduced by histopathological effect of gravity previously induced esophageal carcinogenesis in mice diethylnitrosamine and increased immunohistochemical expression of p53 protein.

O carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço (CECP) é um problema de saúde pública que apresenta alta taxa de mortalidade, frequentemente relacionado à presença de recorrências locais e metástases. A descoberta de um pequeno subconjunto de células tumorais com características semelhantes às células-tronco, conhecidas como células-tronco tumorais (CTTs), tem sido relatadas como as principais responsáveis pelo início, progressão e recidiva do CECP. O processo de metástase nestas neoplasias é bastante complexo e envolve o desprendimento de células epiteliais tumorais do local de aparecimento primário devido à subexpressão ou superexpressão de algumas proteínas específicas nestas células, caracterizando um processo conhecido como transição epitélio-mesenquimal (EMT). A compreensão dos mecanismos envolvidos no processo de EMT têm sido investigados para o desenvolvimento de terapias específicas. O ácido retinoico (AR) vem sendo empregado em diversas terapias devido a sua capacidade de controlar a proliferação e promover diferenciação celular, entretanto, anormalidades na expressão ou função de seus receptores são relatadas em muitos tipos de células do câncer. Este estudo tem por objetivo correlacionar a expressão de marcadores do processo de EMT, marcador de célula tronco tumoral (ALDH1) e receptores do ácido retinoico e de retinoide X (isoformas α e β) em amostras teciduais provenientes de portadores de CECP primários, além, de correlacionar os resultados obtidos com os parâmetros clínicos, características histopatológicas e prognóstico destes pacientes em um período de acompanhamento de 7 anos. / The head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a public health problem that presents high mortality rates in relation to the presence of local recurrences and metastases. A finding of a small subset of tumor cells with stem like-cells characteristics, known as cancer stem cells (CTTs), has been reported as being primarily responsible for the onset, progression and recurrence of CECP. The metastasis process in these neoplasms is quite complex and involves the tumor epithelial cells detachment from the primary site of appearance due to underexpression or overexpression of some specific proteins in these cells, characterizing the epithelial-mesenchymal transition (EMT) process. An understanding of the mechanisms involved in the EMT process has been investigated for the development of specific therapies. Retinoic acid (AR) has been used in several therapies because its ability to control the proliferation and promote cell differentiation, however, abnormalities in the expression and function of its receptors are reported in many types of cancer cells. The aim of this study was to correlate the expression EMT process markers, tumor stem cell marker (ALDH1), retinoic acid and retinoic acid X receptors (α and β isoforms) in tissue samples from primary CECP, in addition, to correlate the results with the clinical parameters, histopathological and prognostic characteristics of these patients in a 7 years follow-up.

Submitted by Maykon Nascimento (maykon.albani@hotmail.com) on 2016-04-19T21:04:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Priscila Marinho.pdf: 1383745 bytes, checksum: 6b862d0e24aa8d87583921ea791aa1d4 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-05-16T14:03:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Priscila Marinho.pdf: 1383745 bytes, checksum: 6b862d0e24aa8d87583921ea791aa1d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-16T14:03:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Priscila Marinho.pdf: 1383745 bytes, checksum: 6b862d0e24aa8d87583921ea791aa1d4 (MD5) / CAPES / Biomarcadores de progressão tumoral são importantes na determinação do prognóstico e resposta ao tratamento em carcinoma de células escamosas da cavidade bucal. Este estudo teve como objetivo avaliar a frequência de infecção pelo HPV e a expressão de p16 como biomarcador de prognóstico em carcinoma de células escamosas da cavidade bucal. Dados clínico-patológicos e tecido tumoral de 90 indivíduos com carcinoma de células escamosas da cavidade bucal foram obtidos por entrevista e análise de prontuários. Detecção de HPV foi realizada à partir de amostras de tecido tumoral por PCR utilizando o conjunto de primers PGMY09/11. A seguir, as mesmas amostras foram submetidas à PCR com os primers MY09/11 e nested PCR com os primers GP5+/6+. Expressão de p16 foi detectada por imunohistoquímica. Análise estatística foi feita através de associação de variáveis, utilizando o teste de qui-quadrado e exato de Fisher. Sobrevida doença-específica (SDE) e sobrevida livre de doença (SLD) foram estimadas usando método de Kaplan-Meier. Comparação entre as curvas de sobrevida foram realizadas com o teste Log-Rank. Comparação entre status da infecção pelo HPV e expressão de p16 foram analisadas pelo teste Cox. Todos os testes com P ≤ 0.05 foram considerados significantes. A frequência de infecção pelo HPV na população estudada foi de 3,70% detectadas apenas com a nested PCR. Expressão de p16 foi observada em 21,87% das amostras analisadas. A SDE foi de 25,5 meses (95% IC = 20,03 - 31,00), enquanto a SLD foi de 30 meses (95% IC = 25,63 – 34,48). Maior SDE foi observada em indivíduos com tumores em estádio inicial (I-II) (P=0,001), tumores < 2cm (P=0,001), sem metástase em linfonodos regionais (P=0,006) e aqueles submetidos a tratamento cirúrgico (P<0,0001). Em conclusão, o status da infecção pelo HPV não mostrou-se um bom marcador de prognóstico e parece não ser determinante na tumorigênese em CCE da cavidade bucal, uma vez que apresentou baixa frequência de infecção. A expressão de p16 não foi um indicador determinante da presença de HPV nas amostras estudadas e um maior número de casos é necessário para avaliar sua aplicabilidade como marcador de prognóstico na população estudada. / Tumor progression biomarkers are important in determining prognosis and treatment response in squamous cell carcinoma of the oral cavity. This study aimed to evaluate the frequency of HPV infection and p16 expression as a biomarker of prognosis in squamous cell carcinoma of the oral cavity. Clinicopathological data and tumor tissue of 90 patients with squamous cell carcinoma of the oral cavity were obtained by interview and review of medical records. HPV detection was performed starting from tumor tissue samples by PCR using the primer set PGMY09/11. Next, the same samples were subjected to PCR with primers MY09 / 11 primers and nested PCR with GP5+/6+ primers. P16 expression was detected by immunohistochemistry. Statistical analysis was performed using variable association, using the chi-square and Fisher exact test. Disease-specific survival (DSS) and disease-free survival (DFS) were estimated using Kaplan-Meier. Comparison between the survival curves were performed using the log-rank test. Comparison status of HPV infection and p16 expression were analyzed by Cox test. All tests with P≤0,05 were considered significant. The frequency of HPV infection in this population was 3,70% detected only with nested PCR. p16 expression was observed in 21.87% of the analyzed samples. The DSS was 25.5 months (95% CI = 20.03 to 31.00), while the DFS was 30 months (95% CI = 25.63 to 34.48). Most DSS was observed in subjects with initial stage tumors (I-II) (P=0,001), tumor <2 cm (P=0,001), without regional lymph node metastasis (P=0,006) and those undergoing surgical treatment (P<0,0001). In conclusion, the status of HPV infection not proved to be a good prognostic marker and does not seem to be decisive in tumorigenesis in SCC of the oral cavity, since it showed low frequency of infection. The expression of p16 was not a key indicator of the presence of HPV in all samples and a greater number of cases it is necessary to evaluate its applicability as a prognostic marker in this population.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_8732_Dissertação_Priscila Marinho de Abreu.pdf: 1383745 bytes, checksum: 6b862d0e24aa8d87583921ea791aa1d4 (MD5) Previous issue date: 2015-03-20 / HPV e Expressão de p16 como Biomarcadores de Prognósticos em Carcinoma de Células Escamosas da Cavidade Bucal

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FrancielliCCM.pdf: 358431 bytes, checksum: f0af96a48afbbb69eab67d73fbca381b (MD5) Previous issue date: 2004-02-17 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The utilization of the immunohistochemical/histochemical double staining technique comes permitting the analysis of two molecular parameters at the same time in an even tissue. Starting from this, the objective of this study was to investigate the existence of differences between the number of NORS/NUCLEUS between p53 positive and p53 negative cells, as well as the existence of correlation between the medium of the NORs of the p53 positive and negative cells and the histological scores of maligninancy in 16 cases of oral squamous cell carcinoma. It was first classified in agreement with the histological grade system of maligninancy proposed by Bryne (1998) and the double staining technique immunohistochemistry/histochemistry was utilized for the achievement to quantify of the NORs in p53 positive and negative cells. It had not significant differences between the medium number of NORs of the p53 positive cells and of the p53 negative cells, and they were not correlated with the histological scores of malignancy. We conclude that the related phenotype to the p53 immunohistochemical expression did not influence the average of NORS/NUCLEUS and this medium, in both positive and negative cells, is not correlated with the degree of histological aggressivity of the oral squamous cell carcinoma / A utiliza??o da t?cnica de dupla marca??o imuno-histoqu?mica /histoqu?mica vem permitindo a an?lise de dois par?metros moleculares ao mesmo tempo em um mesmo tecido. Partindo deste princ?pio, o objetivo deste estudo foi pesquisar em carcinoma epiderm?ide oral o n?mero m?dio de NORs/n?cleo entre c?lulas p53 positivas e p53 negativas por interm?dio da dupla marca??o imuno-histoqu?mica/histoqu?mica, bem como a correla??o do n?mero m?dio de NORs/n?cleo das c?lulas p53 positivas e negativas com os escores histol?gicos de malignidade. Foram estudados 16 casos de carcinoma epiderm?ide, que foram classificados de acordo com o sistema de grada??o histol?gica de malignidade proposto por Bryne (1998). A t?cnica de dupla marca??o imuno-histoqu?mica/histoqu?mica foi utilizada para a realiza??o da contagem das NORs em c?lulas p53 positivas e negativas. N?o houve diferen?a estatisticamente significante entre o n?mero m?dio de NORs/n?cleo das c?lulas p53 positivas e negativas. Tamb?m n?o houve correla??o entre o n?mero m?dio de NORs/n?cleo das c?lulas p53 positivas e negativas e os escores histol?gicos de malignidade. Conclu?mos, ent?o, que o fen?tipo relacionado ? express?o imuno-histoqu?mica do p53 n?o influi na m?dia de NORs/n?cleo e esta m?dia, tantos das c?lulas positivas quanto das negativas, n?o se correlaciona com o grau de agressividade histol?gica do carcinoma epiderm?ide oral

O carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço (CECP) é um problema de saúde pública que apresenta alta taxa de mortalidade, frequentemente relacionado à presença de recorrências locais e metástases. A descoberta de um pequeno subconjunto de células tumorais com características semelhantes às células-tronco, conhecidas como células-tronco tumorais (CTTs), tem sido relatadas como as principais responsáveis pelo início, progressão e recidiva do CECP. O processo de metástase nestas neoplasias é bastante complexo e envolve o desprendimento de células epiteliais tumorais do local de aparecimento primário devido à subexpressão ou superexpressão de algumas proteínas específicas nestas células, caracterizando um processo conhecido como transição epitélio-mesenquimal (EMT). A compreensão dos mecanismos envolvidos no processo de EMT têm sido investigados para o desenvolvimento de terapias específicas. O ácido retinoico (AR) vem sendo empregado em diversas terapias devido a sua capacidade de controlar a proliferação e promover diferenciação celular, entretanto, anormalidades na expressão ou função de seus receptores são relatadas em muitos tipos de células do câncer. Este estudo tem por objetivo correlacionar a expressão de marcadores do processo de EMT, marcador de célula tronco tumoral (ALDH1) e receptores do ácido retinoico e de retinoide X (isoformas α e β) em amostras teciduais provenientes de portadores de CECP primários, além, de correlacionar os resultados obtidos com os parâmetros clínicos, características histopatológicas e prognóstico destes pacientes em um período de acompanhamento de 7 anos. / The head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a public health problem that presents high mortality rates in relation to the presence of local recurrences and metastases. A finding of a small subset of tumor cells with stem like-cells characteristics, known as cancer stem cells (CTTs), has been reported as being primarily responsible for the onset, progression and recurrence of CECP. The metastasis process in these neoplasms is quite complex and involves the tumor epithelial cells detachment from the primary site of appearance due to underexpression or overexpression of some specific proteins in these cells, characterizing the epithelial-mesenchymal transition (EMT) process. An understanding of the mechanisms involved in the EMT process has been investigated for the development of specific therapies. Retinoic acid (AR) has been used in several therapies because its ability to control the proliferation and promote cell differentiation, however, abnormalities in the expression and function of its receptors are reported in many types of cancer cells. The aim of this study was to correlate the expression EMT process markers, tumor stem cell marker (ALDH1), retinoic acid and retinoic acid X receptors (α and β isoforms) in tissue samples from primary CECP, in addition, to correlate the results with the clinical parameters, histopathological and prognostic characteristics of these patients in a 7 years follow-up.

O Carcinoma de células escamosas é o tipo histológico mais comum das neoplasia esofágicas no mundo.Tem sua origem no epitélio escamoso do esôfago e é achado com maior frequência no terço médio do órgão. A carcinogênese esofágica é um processo que resulta do acúmulo de mutações envolvendo diferentes genes, como o TP53. Este está mutado em mais de 50% dos tumores esofágicos. Inúmeras pesquisas têm sido direcionadas para restaurar a função da proteína p53, as quais resultaram na descoberta da PRIMA-1. Neste estudo, foram pesquisados possíveis efeitos protetores da PRIMA-1 no epitélio do esôfago sob efeito carcinogênico químico evitando o desenvolvimento neoplásico e induzindo involução da carcinogênese. Para testar esta hipótese, realizamos estudo, com utilização da PRIMA-1, em um modelo experimental de carcinogênese esofágica por dietilnitrosamina com indução de carcinoma de células escamosas. O estudo experimental foi realizado com 6 grupos de animais, onde os grupos I e II foram considerados controles, sendo diferenciados por uso da PRIMA-1. E os grupos III e IV, e Va e Vb, foram considerados estudos, os quais receberam dietilnitrosamina por 3 dias consecutivos semanalmente. Enquanto os grupos III e IV, foram diferenciados pelo uso de PRIMA-1 prévio ao início da carcinogênese, os grupos Va e Vb, foram diferenciados pelo uso de PRIMA-1 ao final da carcinogênese. O estudo apresentou data de eutanásia com colheita de peças esofágicas, aos 150 dias, grupos I, II, III e IV, e 180 dias, grupos Va e Vb, devido ao período de observação após uso tardio da PRIMA-1. Não foram detectadas alterações histopatológicas nos grupos controles, grupo I (DEN-/PRIMA-) e II (DEN-/PRIMA+). Não foram detectadas diferenças nas alterações histopatológicas estatisticamente significativas entre os grupos III (DEN+/PRIMA-) e IV (DEN+/ PRIMA+ inicial). Foram detectadas diferenças nas alterações histopatológicas estatisticamente significativas entre os grupos Va (DEN+/PRIMA-) e Vb (DEN+/PRIMA+ tardio). A análise imunohistoquímica do p53 evidenciou diferença estatística nos grupos que utilizaram a PRIMA-1, em relação as seus controles. A análise imunohistoquímica do Ki-67 demonstrou diferença estatística somente entre os dois grupos controles. Conclue-se que a PRIMA-1 teve efeito de redução da gravidade histopatológica em esôfago de camundongos previamente induzidos a carcinogênese com dietilnitrosamina e aumento da expressão imuno-histoquímica da proteína p53. / The esophageal squamous cell carcinoma is the most common histological type in the world. It is origin in the squamous epithelium of the esophagus and is found more often in the middle third of the organ. The esophageal carcinogenesis is a process that results from the accumulation of mutations in different genes such as TP53. This is mutate in more than 50% of esophageal tumors. Numerous researches have been directed to restore the function of the p53 protein, which resulted in the discovery of PRIMA-1. In this study, we investigated the possible protective effects of PRIMA-1 in the epithelium of the esophagus under chemical carcinogenic effect preventing neoplastic development and inducing regression of carcinogenesis. To test this hypothesis, a study with use of PRIMA-1 in an experimental model of esophageal carcinogenesis induced by diethylnitrosamine with squamous cell carcinoma. The experimental study was performed wth six groups of animals, where the groups I and II were considered controls being differentiated by the use of PRIMA-1. And the groups III and IV, and Va and Vb, were considered studies, which received diethylnitrosamine for 3 consecutive days weekly. While the groups III and IV, were differentiated by the use of PRIMA-1 prior to the beginning of carcinogenesis, the Va and Vb groups were differentiated by the use of PRIMA-1 at the end of carcinogenesis. The study presented date of euthanasia with crop esophageal parts, at 150 days, groups I, II, III and IV, and 180 days, Va and Vb groups because of the observation period after late use of PRIMA-1. Histopathological changes were detected in the control groups, Group I (DEN-/PRIMA-) and II (DEN-/PRIMA+). There were no statistically significant differences in pathological changes between the groups III (DEN+/PRIMA-) and IV (DEN+/PRIMA- first). Differences were found in statistically significant histopathological changes between Va groups (DEN+/PRIMA-) and Vb (DEN+/PRIMA+ late). Immunohistochemical analysis of p53 showed a statistically significant difference in the groups using PRIMA-1, compared to their controls. Immunohistochemical analysis of Ki-67 showed statistical difference only between the two control groups. It concludes that the PRIMA-1 was reduced by histopathological effect of gravity previously induced esophageal carcinogenesis in mice diethylnitrosamine and increased immunohistochemical expression of p53 protein.

Leucoplasia bucal (LB) é uma desordem potencialmente maligna, com risco de transformação maligna que varia de 0,13% a 17,5%. Muitos estudos vêm buscando estabelecer biomarcadores capazes de predizer o potencial de transformação maligna dessa lesão. O Ki-67 é uma proteína não-histônica nuclear que tem sido amplamente utilizada para avaliar proliferação celular. O BMI-1 é uma proteína considerada um marcador essencial para a manutenção das propriedades de autorrenovação e da tumorigenicidade do carcinoma espinocelular. O objetivo principal desse estudo observacional transversal foi avaliar proliferação e imortalização celulares em LB a partir da marcação imunoistoquímica do Ki-67 e do BMI-1, comparando lesões displásicas com não displásicas. Casos de LB não displásica - LBND (n=28), LB displásica - LBD (n=33) foram selecionados a partir de prontuários de pacientes e comparados com mucosa clinicamente normal - MN (n=9), hiperplasia inflamatória - HI (n=17) e carcinoma espinocelular - CEC (n=19). Os diagnósticos histopatológicos foram confirmados a partir da revisão de cortes histológicos corados por hematoxilina e eosina. Adicionalmente, cortes histológicos foram submetidos à técnica imunoistoquímica para avaliação de Ki-67 e BMI-1. Para a quantificação foi considerado o percentual de células positivas por 1000 células para o CEC e 1500 células para os demais grupos. O percentual de imunomarcação de Ki-67 e de BMI-1, quando avaliadas todas as camadas epiteliais em conjunto, foi mais alto no CEC quando comparado aos demais grupos (Kruskal-Wallis, p<0.05). A expressão de Ki-67 foi maior em LBND, LBD e HI quando comparada com MN (Kruskal-Wallis, p<0.05). Além disso, a imunomarcação de BMI-1 foi maior em LBD quando comparada com MN, quando analisadas todas as camadas em conjunto (Kruskal-Wallis, p<0.05). A partir da avaliação das camadas epiteliais separadamente, observou-se aumento da expressão de BMI-1 na camada parabasal e suprabasal em LBND quando comparada com MN. Houve correlação positiva entre Ki-67 e BMI-1 (Correlação de Spearman, R=0.37, p<0.05). Conclui-se que a proliferação e as alterações na transição epitélio-mesênquima são eventos relacionados e que estão presentes desde estágios precoces e se acentuam nos estágios mais tardios da carcinogênese. / Oral leukoplakia (OL) is potentially malignant disorder, with a risk of malignant transformation that ranges from 0.13% to 17.5%. Many biological markers have been used as an attempt to predict malignant transformation, but no reliable markers have been established so far. The Ki-67 is a nuclear non-histone regarded as reliable marker of proliferating cells .BMI-1 is a protein considered as an essential marker for maintenance of properties self-renewability and tumorigenicity of squamous cell carcinoma. The main aim this cross-sectional observational study was to evaluate cell proliferation and immortalization in oral leukoplakia, comparing non-dysplastic and dysplastic lesions. Cases of non-dysplastic – Non-dys OL (n=28), dysplastic – Dys OL (n=33) records were selected and compared with normal oral mucosa – NOM (n=9), inflammatory hyperplasia –IH (n=17), and oral squamous cell carcinoma - OSCC (n=19). The histopathological diagnosis was confirmed by the revision of Hematoxilin and Eosin stained slides. Additionally, histological sections were submitted to immunohistochemical technique for evaluation of Ki-67 and BMI-1. The labeling index was determined by counting the labeled nuclei of 1000 cells for OSCC cases and 1500 for the others comparison groups. Ki-67 and BMI-1 immunolabeling percentage were higher in OSCC in comparison of others groups when all epithelial layers were evaluated together (Kruskal-Wallis, p<0.05). Ki-67 immunolabeling increased in Non-dys OL, Dys OL and IH when compared to NOM (Kruskal-Wallis, p<0.05). Furthermore, BMI-1 immunolabeling was higher in Dys OL relation to NOM in the analysis of all epithelial layers together (Kruskal-Wallis, p<0.05). When the evaluation considered the epithelial layer separately, an increased BMI1 expression was observed in the parabasal and suprabasal layers of Non-dys OL when compared to NOM. A significant positive correlation was found between Ki-67 and BMI-1 (Spearman correlation coefficient, R=0.37, p<0.01). In conclusion, the present findings support that proliferation and changes toward epithelial-to-mesenchymal transition increase gradually since early stages of oral carcinogenesis.