Base Teórica O sistema purinérgico é um sistema de sinalização extracelular que influencia processos fisiológicos e patológicos. O exercício físico promove adaptações moleculares e teciduais sendo sugerido como uma conduta terapêutica em algumas patologias crônicas. Dados apontam uma possível influência do exercício físico sobre o sistema purinérgico, no entanto as bases bioquímicas desse processo ainda não estão muito bem compreendida. Objetivos Analisar a hidrólise extracelular dos nucleotídeos da adenina e quantificar os níveis dos nucleotídeos, nucleosídeos e resíduos metabólicos no soro sanguíneo de indivíduos adultos sedentários do sexo masculinos submetidos a uma sessão aguda de exercício aeróbico moderado. Métodos Indivíduos adultos sedentários do sexo masculino, sem patologia prévia, foram selecionados de acordo com critérios clínicos pré-definidos. Os sujeitos foram avaliados, responderam ao questionário PAR-Q (Instrumental Physical Activity Questionaire) e submetidos a um teste do consumo máximo de oxigênio. Sete dias após a avaliação, os indivíduos realizaram 30 minutos de exercício aeróbico moderado. Amostras de sangue foram coletadas pré e pós-exercício. Ao fim da coleta, o soro sanguíneo foi separado e a atividade enzimática foi avaliada pela liberação de fosfato inorgânico (Pi). Os nucleotídeos da adenina, nucleosídeo e resíduos metabólicos foram quantificados por cromatografia líquida de alta performace (HPLC). Os níveis de creatina quinase (CK), creatinina (CR), colesterol total (CT), triglicerídeos (TG), lipoproteína de alta densidade (HDL) e lipoproteína baixa densidade (LDL) foram avaliados por meio de kits específicos conforme instruções do fabricante. Resultados A hidrólise da adenosina 5’-trifosfato (ATP), adenosina 5’-difosfato (ADP), adenosina 5’-monofosfato (AMP) e p-nitrofenil 5’-timinidina monofosfato (p-Nph-5’-TMP) se mostrou aumentada após a realização do exercício aeróbico agudo. O nível de ATP extracelular diminuiu após a realização da sessão de exercício. As concentrações de adenosina (ADO), inosina (INO) e ácido úrico apresentaram-se aumentadas. Conclusão Nossos resultados demonstram uma modificação no perfil da atividade ectonucleotidásica e nos níveis dos nucleotídeos da adenina, nucleosídeos e metabólitos do ATP após a realização do exercício aeróbico agudo em intensidade moderado no soro sanguíneo de indivíduos sedentários, sugerindo uma possível atuação do exercício físico como modulador da sinalização purinérgica. Mais estudos são necessários para melhor compreensão das ações do exercício físico na sinalização purinérgica, e de como ocorre está interação. / Background The purinergic system is an extracellular signaling system, which affect physiological and pathological processes. Physical exercise promotes molecular and tissue adaptations, being suggested as therapeutic approach in some chronic diseases. Data indicate a possible influence of exercise on purinergic system, however the biochemical basis are not well understood. Objectives Analyze extracellular hydrolysis of adenine nucleotides and quantify nucleotides, nucleosides and metabolic residues levels in blood serum of male sedentary individuals submitted an acute session of moderate aerobic exercise. Methods Male sedentary adults, without previous disease, were selected according predefined clinical criteria. Subjects were evalauated, answered to PAR-Q questionnaire (Instrumental Physical Activity Questionaire) and performed maximum intake oxygen test. Seven days after evaluation, individuals conducted 30 minutes of aerobic moderate exercise. Blood samples was collected pre and post exercise. At the end of collection, blood serum separated and enzymatic activity measured by inorganic phosphate (Pi) release. Adenine nucleotides, nucleoside and metabolics residue were quantified using high performance liquid chromatography (HPLC). Creatine kinase (CK), creatinine (CR), total cholesterol (TC), triglycerides (TG), high density lipoprotein (HDL) and low density lipoprotein (LDL) levels were evaluated by particular kit according manufacturer´s instructions. Results Adenosine 5’-triphosphate (ATP), adenosine 5’-diphosphate (ADP), adenosine 5’-monophosphate (AMP) and p-nitrophenyl 5’-thymidine monophosphate (p-Nph-5’-TMP) hydrolysis increased after acute session of aerobic exercise. ATP extracellular levels decreased after acute exercise. ADO, inosine (INO) and uric acid concentrations increased. Conclusion Our results demonstrate modifications in ectonucleotidasic activity profile and levels of adenine nucleotides, nucleoside and ATP metabolites after performing acute aerobic exercise of moderate intensity in blood serum of sedentary male individuals, suggesting a possibly modulation of purinergic signaling from exercise. Additional studies are necessary for better understanding physical exercise actions in purinergic signaling, and how these interactions occur.

Base Teórica O sistema purinérgico é um sistema de sinalização extracelular que influencia processos fisiológicos e patológicos. O exercício físico promove adaptações moleculares e teciduais sendo sugerido como uma conduta terapêutica em algumas patologias crônicas. Dados apontam uma possível influência do exercício físico sobre o sistema purinérgico, no entanto as bases bioquímicas desse processo ainda não estão muito bem compreendida. Objetivos Analisar a hidrólise extracelular dos nucleotídeos da adenina e quantificar os níveis dos nucleotídeos, nucleosídeos e resíduos metabólicos no soro sanguíneo de indivíduos adultos sedentários do sexo masculinos submetidos a uma sessão aguda de exercício aeróbico moderado. Métodos Indivíduos adultos sedentários do sexo masculino, sem patologia prévia, foram selecionados de acordo com critérios clínicos pré-definidos. Os sujeitos foram avaliados, responderam ao questionário PAR-Q (Instrumental Physical Activity Questionaire) e submetidos a um teste do consumo máximo de oxigênio. Sete dias após a avaliação, os indivíduos realizaram 30 minutos de exercício aeróbico moderado. Amostras de sangue foram coletadas pré e pós-exercício. Ao fim da coleta, o soro sanguíneo foi separado e a atividade enzimática foi avaliada pela liberação de fosfato inorgânico (Pi). Os nucleotídeos da adenina, nucleosídeo e resíduos metabólicos foram quantificados por cromatografia líquida de alta performace (HPLC). Os níveis de creatina quinase (CK), creatinina (CR), colesterol total (CT), triglicerídeos (TG), lipoproteína de alta densidade (HDL) e lipoproteína baixa densidade (LDL) foram avaliados por meio de kits específicos conforme instruções do fabricante. Resultados A hidrólise da adenosina 5’-trifosfato (ATP), adenosina 5’-difosfato (ADP), adenosina 5’-monofosfato (AMP) e p-nitrofenil 5’-timinidina monofosfato (p-Nph-5’-TMP) se mostrou aumentada após a realização do exercício aeróbico agudo. O nível de ATP extracelular diminuiu após a realização da sessão de exercício. As concentrações de adenosina (ADO), inosina (INO) e ácido úrico apresentaram-se aumentadas. Conclusão Nossos resultados demonstram uma modificação no perfil da atividade ectonucleotidásica e nos níveis dos nucleotídeos da adenina, nucleosídeos e metabólitos do ATP após a realização do exercício aeróbico agudo em intensidade moderado no soro sanguíneo de indivíduos sedentários, sugerindo uma possível atuação do exercício físico como modulador da sinalização purinérgica. Mais estudos são necessários para melhor compreensão das ações do exercício físico na sinalização purinérgica, e de como ocorre está interação. / Background The purinergic system is an extracellular signaling system, which affect physiological and pathological processes. Physical exercise promotes molecular and tissue adaptations, being suggested as therapeutic approach in some chronic diseases. Data indicate a possible influence of exercise on purinergic system, however the biochemical basis are not well understood. Objectives Analyze extracellular hydrolysis of adenine nucleotides and quantify nucleotides, nucleosides and metabolic residues levels in blood serum of male sedentary individuals submitted an acute session of moderate aerobic exercise. Methods Male sedentary adults, without previous disease, were selected according predefined clinical criteria. Subjects were evalauated, answered to PAR-Q questionnaire (Instrumental Physical Activity Questionaire) and performed maximum intake oxygen test. Seven days after evaluation, individuals conducted 30 minutes of aerobic moderate exercise. Blood samples was collected pre and post exercise. At the end of collection, blood serum separated and enzymatic activity measured by inorganic phosphate (Pi) release. Adenine nucleotides, nucleoside and metabolics residue were quantified using high performance liquid chromatography (HPLC). Creatine kinase (CK), creatinine (CR), total cholesterol (TC), triglycerides (TG), high density lipoprotein (HDL) and low density lipoprotein (LDL) levels were evaluated by particular kit according manufacturer´s instructions. Results Adenosine 5’-triphosphate (ATP), adenosine 5’-diphosphate (ADP), adenosine 5’-monophosphate (AMP) and p-nitrophenyl 5’-thymidine monophosphate (p-Nph-5’-TMP) hydrolysis increased after acute session of aerobic exercise. ATP extracellular levels decreased after acute exercise. ADO, inosine (INO) and uric acid concentrations increased. Conclusion Our results demonstrate modifications in ectonucleotidasic activity profile and levels of adenine nucleotides, nucleoside and ATP metabolites after performing acute aerobic exercise of moderate intensity in blood serum of sedentary male individuals, suggesting a possibly modulation of purinergic signaling from exercise. Additional studies are necessary for better understanding physical exercise actions in purinergic signaling, and how these interactions occur.

Base Teórica O sistema purinérgico é um sistema de sinalização extracelular que influencia processos fisiológicos e patológicos. O exercício físico promove adaptações moleculares e teciduais sendo sugerido como uma conduta terapêutica em algumas patologias crônicas. Dados apontam uma possível influência do exercício físico sobre o sistema purinérgico, no entanto as bases bioquímicas desse processo ainda não estão muito bem compreendida. Objetivos Analisar a hidrólise extracelular dos nucleotídeos da adenina e quantificar os níveis dos nucleotídeos, nucleosídeos e resíduos metabólicos no soro sanguíneo de indivíduos adultos sedentários do sexo masculinos submetidos a uma sessão aguda de exercício aeróbico moderado. Métodos Indivíduos adultos sedentários do sexo masculino, sem patologia prévia, foram selecionados de acordo com critérios clínicos pré-definidos. Os sujeitos foram avaliados, responderam ao questionário PAR-Q (Instrumental Physical Activity Questionaire) e submetidos a um teste do consumo máximo de oxigênio. Sete dias após a avaliação, os indivíduos realizaram 30 minutos de exercício aeróbico moderado. Amostras de sangue foram coletadas pré e pós-exercício. Ao fim da coleta, o soro sanguíneo foi separado e a atividade enzimática foi avaliada pela liberação de fosfato inorgânico (Pi). Os nucleotídeos da adenina, nucleosídeo e resíduos metabólicos foram quantificados por cromatografia líquida de alta performace (HPLC). Os níveis de creatina quinase (CK), creatinina (CR), colesterol total (CT), triglicerídeos (TG), lipoproteína de alta densidade (HDL) e lipoproteína baixa densidade (LDL) foram avaliados por meio de kits específicos conforme instruções do fabricante. Resultados A hidrólise da adenosina 5’-trifosfato (ATP), adenosina 5’-difosfato (ADP), adenosina 5’-monofosfato (AMP) e p-nitrofenil 5’-timinidina monofosfato (p-Nph-5’-TMP) se mostrou aumentada após a realização do exercício aeróbico agudo. O nível de ATP extracelular diminuiu após a realização da sessão de exercício. As concentrações de adenosina (ADO), inosina (INO) e ácido úrico apresentaram-se aumentadas. Conclusão Nossos resultados demonstram uma modificação no perfil da atividade ectonucleotidásica e nos níveis dos nucleotídeos da adenina, nucleosídeos e metabólitos do ATP após a realização do exercício aeróbico agudo em intensidade moderado no soro sanguíneo de indivíduos sedentários, sugerindo uma possível atuação do exercício físico como modulador da sinalização purinérgica. Mais estudos são necessários para melhor compreensão das ações do exercício físico na sinalização purinérgica, e de como ocorre está interação. / Background The purinergic system is an extracellular signaling system, which affect physiological and pathological processes. Physical exercise promotes molecular and tissue adaptations, being suggested as therapeutic approach in some chronic diseases. Data indicate a possible influence of exercise on purinergic system, however the biochemical basis are not well understood. Objectives Analyze extracellular hydrolysis of adenine nucleotides and quantify nucleotides, nucleosides and metabolic residues levels in blood serum of male sedentary individuals submitted an acute session of moderate aerobic exercise. Methods Male sedentary adults, without previous disease, were selected according predefined clinical criteria. Subjects were evalauated, answered to PAR-Q questionnaire (Instrumental Physical Activity Questionaire) and performed maximum intake oxygen test. Seven days after evaluation, individuals conducted 30 minutes of aerobic moderate exercise. Blood samples was collected pre and post exercise. At the end of collection, blood serum separated and enzymatic activity measured by inorganic phosphate (Pi) release. Adenine nucleotides, nucleoside and metabolics residue were quantified using high performance liquid chromatography (HPLC). Creatine kinase (CK), creatinine (CR), total cholesterol (TC), triglycerides (TG), high density lipoprotein (HDL) and low density lipoprotein (LDL) levels were evaluated by particular kit according manufacturer´s instructions. Results Adenosine 5’-triphosphate (ATP), adenosine 5’-diphosphate (ADP), adenosine 5’-monophosphate (AMP) and p-nitrophenyl 5’-thymidine monophosphate (p-Nph-5’-TMP) hydrolysis increased after acute session of aerobic exercise. ATP extracellular levels decreased after acute exercise. ADO, inosine (INO) and uric acid concentrations increased. Conclusion Our results demonstrate modifications in ectonucleotidasic activity profile and levels of adenine nucleotides, nucleoside and ATP metabolites after performing acute aerobic exercise of moderate intensity in blood serum of sedentary male individuals, suggesting a possibly modulation of purinergic signaling from exercise. Additional studies are necessary for better understanding physical exercise actions in purinergic signaling, and how these interactions occur.

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 1996. / Includes bibliographical references (leaves ).

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Uppsala universitet, 2008. / Härtill 3 uppsatser.

A ritmicidade biológica pode ser entendida como a expressão cíclica de um fenômeno biológico. Marcadores fisiológicos como a melatonina e a corticosterona estão sob a influência dos relógios endógenos e respondem a diferentes variações de intensidades de luz podendo estar envolvidos com alterações de comportamento. Vários relatos têm documentado aumento em suas concentrações na presença de situações estressantes. Esta dissertação teve como objetivo avaliar o efeito do padrão temporal sobre parâmetros comportamentais e bioquímicos na resposta ao estresse por restrição em ratos. Utilizou-se ratos Wistar machos com 70 dias (150-180g), divididos em 4 grupos por Zeitgebers (ZT): 0, 6, 12 e 18, subdividindo em: controle, imediatamente, 6 e 24 horas após uma sessão de estresse por restrição. Para a avaliação comportamental utilizou-se os aparatos de campo aberto (CA) e de Labirinto em Cruz Elevado (LCE). Foram analisados os níveis séricos de: corticosterona, melatonina, glicose e das atividades das enzimas NTPDases e 5’nucleotidases. Os dados foram expressos em Média+EPM, e analisados utilizando o teste ANOVA de uma via/SNK, P<0.05. As respostas comportamentais avaliadas no LCE mostraram um padrão temporal do número de PHD e NPHD, e no tempo gasto nos braços abertos e fechados. Os dados do CA apresentaram padrão temporal apenas no número de bolos fecais. A exposição ao estresse por restrição foi capaz de romper o padrão rítmico observado nos comportamentos avaliados no LCE e CA. Quanto aos biomarcadores sistêmicos observou-se que imediatamente após estresse há uma perda do padrão temporal dos níveis de corticosterona e 6 h após o estresse há um atraso de fase de ZT0 para ZT18, enquanto que 24 horas após o estresse os níveis retornam ao padrão temporal normal; imediatamente após o estresse houve uma supressão do pico normal de melatonina (ZT18), apresentando o pico pela manhã (ZT0); 6 e 24 horas após o estresse ocorreu uma perda de padrão temporal. Os níveis de glicose tiveram o maior pico em ZT18 similar à melatonina. Observou-se uma inversão do padrão rítmico associado a uma diminuição no ZT18 que permaneceu até 6 horas após nos níveis de glicose, imediatamente após o estresse, sendo que o padrão temporal retornou 24 horas após o estresse. Quanto à atividade enzimática, observou-se que o estresse agudo provoca uma diminuição na atividade das enzimas nucleotidases dependente do período do dia em que o animal é exposto ao estresse, e esse efeito parece persistir por pelo menos 24 horas. Os resultados dessa dissertação demonstram que o horário do dia o qual o experimento é realizado altera parâmetros bioquímicos e comportamentais influenciando os resultados obtidos, o que pode ser um confundidor na interpretação dos resultados. / The biological rhythm can be understood as an expression of a cyclic biological phenomenon. Physiological markers such as melatonin and corticosterone are under the influence of endogenous clocks and respond to different variations of light intensities may be involved in behavioral changes. Several reports have documented an increase in their concentrations in the presence of stressful situations. This work aimed to evaluate the effect of the temporal pattern of behavioral and biochemical parameters in response to stress by restraint in rats. We used male Wistar rats with 70 days (150-180g) were divided into four groups by Zeitgebers (ZT) 0, 6, 12 and 18, subdivided into: control, immediately, 6 and 24 hours after a session of stress restriction. For the behavioral assessment, we used the open field apparatus (OF) and Plus Maze (PM). We analyzed the serum levels: corticosterone, melatonin, glucose and activity of the enzymes NTPDase and 5'nucleotidase. Data were expressed as Mean + SEM, and analyzed using one-way ANOVA/SNK, P <0.05. Behavioral responses measured in the PM showed a temporal pattern in the number of PHD and NPHD, and time spent in open arms and closed. Data from OF showed only temporal pattern in the number of dung pats. Exposure to restraint stress was able to break the rhythm pattern observed in the behaviors evaluated in the PM and OF. In relation the systemic biomarkers was observed immediately after stress there is a loss of temporal pattern of corticosterone levels and 6 h after stress there is a phase delay of ZT0 to ZT18, whereas 24 hours after stress levels return to standard time normal; immediately after the stress showed a suppression of normal melatonin peak (ZT18), with the peak in the morning (ZT0), 6 and 24 hours after stress was a loss of temporal pattern. Glucose levels had the highest peak at ZT18 similar to melatonin. Observed a reversal of the rhythmic pattern associated with a decrease in ZT18, held until 6 hours after glucose levels immediately after stress, and the temporal pattern returned 24 hours after stress. In enzymatic activity, we observed that acute stress causes a decrease in activity of enzymes dependent nucleotidases time of day at which the animal is exposed to stress, and this effect seems to persist for at least 24 hours. The results of this dissertation show that the time of day which the experiment is performed biochemical and behavioral changes influencing the results, which may be a confounder in the interpretation of results.

A ritmicidade biológica pode ser entendida como a expressão cíclica de um fenômeno biológico. Marcadores fisiológicos como a melatonina e a corticosterona estão sob a influência dos relógios endógenos e respondem a diferentes variações de intensidades de luz podendo estar envolvidos com alterações de comportamento. Vários relatos têm documentado aumento em suas concentrações na presença de situações estressantes. Esta dissertação teve como objetivo avaliar o efeito do padrão temporal sobre parâmetros comportamentais e bioquímicos na resposta ao estresse por restrição em ratos. Utilizou-se ratos Wistar machos com 70 dias (150-180g), divididos em 4 grupos por Zeitgebers (ZT): 0, 6, 12 e 18, subdividindo em: controle, imediatamente, 6 e 24 horas após uma sessão de estresse por restrição. Para a avaliação comportamental utilizou-se os aparatos de campo aberto (CA) e de Labirinto em Cruz Elevado (LCE). Foram analisados os níveis séricos de: corticosterona, melatonina, glicose e das atividades das enzimas NTPDases e 5’nucleotidases. Os dados foram expressos em Média+EPM, e analisados utilizando o teste ANOVA de uma via/SNK, P<0.05. As respostas comportamentais avaliadas no LCE mostraram um padrão temporal do número de PHD e NPHD, e no tempo gasto nos braços abertos e fechados. Os dados do CA apresentaram padrão temporal apenas no número de bolos fecais. A exposição ao estresse por restrição foi capaz de romper o padrão rítmico observado nos comportamentos avaliados no LCE e CA. Quanto aos biomarcadores sistêmicos observou-se que imediatamente após estresse há uma perda do padrão temporal dos níveis de corticosterona e 6 h após o estresse há um atraso de fase de ZT0 para ZT18, enquanto que 24 horas após o estresse os níveis retornam ao padrão temporal normal; imediatamente após o estresse houve uma supressão do pico normal de melatonina (ZT18), apresentando o pico pela manhã (ZT0); 6 e 24 horas após o estresse ocorreu uma perda de padrão temporal. Os níveis de glicose tiveram o maior pico em ZT18 similar à melatonina. Observou-se uma inversão do padrão rítmico associado a uma diminuição no ZT18 que permaneceu até 6 horas após nos níveis de glicose, imediatamente após o estresse, sendo que o padrão temporal retornou 24 horas após o estresse. Quanto à atividade enzimática, observou-se que o estresse agudo provoca uma diminuição na atividade das enzimas nucleotidases dependente do período do dia em que o animal é exposto ao estresse, e esse efeito parece persistir por pelo menos 24 horas. Os resultados dessa dissertação demonstram que o horário do dia o qual o experimento é realizado altera parâmetros bioquímicos e comportamentais influenciando os resultados obtidos, o que pode ser um confundidor na interpretação dos resultados. / The biological rhythm can be understood as an expression of a cyclic biological phenomenon. Physiological markers such as melatonin and corticosterone are under the influence of endogenous clocks and respond to different variations of light intensities may be involved in behavioral changes. Several reports have documented an increase in their concentrations in the presence of stressful situations. This work aimed to evaluate the effect of the temporal pattern of behavioral and biochemical parameters in response to stress by restraint in rats. We used male Wistar rats with 70 days (150-180g) were divided into four groups by Zeitgebers (ZT) 0, 6, 12 and 18, subdivided into: control, immediately, 6 and 24 hours after a session of stress restriction. For the behavioral assessment, we used the open field apparatus (OF) and Plus Maze (PM). We analyzed the serum levels: corticosterone, melatonin, glucose and activity of the enzymes NTPDase and 5'nucleotidase. Data were expressed as Mean + SEM, and analyzed using one-way ANOVA/SNK, P <0.05. Behavioral responses measured in the PM showed a temporal pattern in the number of PHD and NPHD, and time spent in open arms and closed. Data from OF showed only temporal pattern in the number of dung pats. Exposure to restraint stress was able to break the rhythm pattern observed in the behaviors evaluated in the PM and OF. In relation the systemic biomarkers was observed immediately after stress there is a loss of temporal pattern of corticosterone levels and 6 h after stress there is a phase delay of ZT0 to ZT18, whereas 24 hours after stress levels return to standard time normal; immediately after the stress showed a suppression of normal melatonin peak (ZT18), with the peak in the morning (ZT0), 6 and 24 hours after stress was a loss of temporal pattern. Glucose levels had the highest peak at ZT18 similar to melatonin. Observed a reversal of the rhythmic pattern associated with a decrease in ZT18, held until 6 hours after glucose levels immediately after stress, and the temporal pattern returned 24 hours after stress. In enzymatic activity, we observed that acute stress causes a decrease in activity of enzymes dependent nucleotidases time of day at which the animal is exposed to stress, and this effect seems to persist for at least 24 hours. The results of this dissertation show that the time of day which the experiment is performed biochemical and behavioral changes influencing the results, which may be a confounder in the interpretation of results.

A ritmicidade biológica pode ser entendida como a expressão cíclica de um fenômeno biológico. Marcadores fisiológicos como a melatonina e a corticosterona estão sob a influência dos relógios endógenos e respondem a diferentes variações de intensidades de luz podendo estar envolvidos com alterações de comportamento. Vários relatos têm documentado aumento em suas concentrações na presença de situações estressantes. Esta dissertação teve como objetivo avaliar o efeito do padrão temporal sobre parâmetros comportamentais e bioquímicos na resposta ao estresse por restrição em ratos. Utilizou-se ratos Wistar machos com 70 dias (150-180g), divididos em 4 grupos por Zeitgebers (ZT): 0, 6, 12 e 18, subdividindo em: controle, imediatamente, 6 e 24 horas após uma sessão de estresse por restrição. Para a avaliação comportamental utilizou-se os aparatos de campo aberto (CA) e de Labirinto em Cruz Elevado (LCE). Foram analisados os níveis séricos de: corticosterona, melatonina, glicose e das atividades das enzimas NTPDases e 5’nucleotidases. Os dados foram expressos em Média+EPM, e analisados utilizando o teste ANOVA de uma via/SNK, P<0.05. As respostas comportamentais avaliadas no LCE mostraram um padrão temporal do número de PHD e NPHD, e no tempo gasto nos braços abertos e fechados. Os dados do CA apresentaram padrão temporal apenas no número de bolos fecais. A exposição ao estresse por restrição foi capaz de romper o padrão rítmico observado nos comportamentos avaliados no LCE e CA. Quanto aos biomarcadores sistêmicos observou-se que imediatamente após estresse há uma perda do padrão temporal dos níveis de corticosterona e 6 h após o estresse há um atraso de fase de ZT0 para ZT18, enquanto que 24 horas após o estresse os níveis retornam ao padrão temporal normal; imediatamente após o estresse houve uma supressão do pico normal de melatonina (ZT18), apresentando o pico pela manhã (ZT0); 6 e 24 horas após o estresse ocorreu uma perda de padrão temporal. Os níveis de glicose tiveram o maior pico em ZT18 similar à melatonina. Observou-se uma inversão do padrão rítmico associado a uma diminuição no ZT18 que permaneceu até 6 horas após nos níveis de glicose, imediatamente após o estresse, sendo que o padrão temporal retornou 24 horas após o estresse. Quanto à atividade enzimática, observou-se que o estresse agudo provoca uma diminuição na atividade das enzimas nucleotidases dependente do período do dia em que o animal é exposto ao estresse, e esse efeito parece persistir por pelo menos 24 horas. Os resultados dessa dissertação demonstram que o horário do dia o qual o experimento é realizado altera parâmetros bioquímicos e comportamentais influenciando os resultados obtidos, o que pode ser um confundidor na interpretação dos resultados. / The biological rhythm can be understood as an expression of a cyclic biological phenomenon. Physiological markers such as melatonin and corticosterone are under the influence of endogenous clocks and respond to different variations of light intensities may be involved in behavioral changes. Several reports have documented an increase in their concentrations in the presence of stressful situations. This work aimed to evaluate the effect of the temporal pattern of behavioral and biochemical parameters in response to stress by restraint in rats. We used male Wistar rats with 70 days (150-180g) were divided into four groups by Zeitgebers (ZT) 0, 6, 12 and 18, subdivided into: control, immediately, 6 and 24 hours after a session of stress restriction. For the behavioral assessment, we used the open field apparatus (OF) and Plus Maze (PM). We analyzed the serum levels: corticosterone, melatonin, glucose and activity of the enzymes NTPDase and 5'nucleotidase. Data were expressed as Mean + SEM, and analyzed using one-way ANOVA/SNK, P <0.05. Behavioral responses measured in the PM showed a temporal pattern in the number of PHD and NPHD, and time spent in open arms and closed. Data from OF showed only temporal pattern in the number of dung pats. Exposure to restraint stress was able to break the rhythm pattern observed in the behaviors evaluated in the PM and OF. In relation the systemic biomarkers was observed immediately after stress there is a loss of temporal pattern of corticosterone levels and 6 h after stress there is a phase delay of ZT0 to ZT18, whereas 24 hours after stress levels return to standard time normal; immediately after the stress showed a suppression of normal melatonin peak (ZT18), with the peak in the morning (ZT0), 6 and 24 hours after stress was a loss of temporal pattern. Glucose levels had the highest peak at ZT18 similar to melatonin. Observed a reversal of the rhythmic pattern associated with a decrease in ZT18, held until 6 hours after glucose levels immediately after stress, and the temporal pattern returned 24 hours after stress. In enzymatic activity, we observed that acute stress causes a decrease in activity of enzymes dependent nucleotidases time of day at which the animal is exposed to stress, and this effect seems to persist for at least 24 hours. The results of this dissertation show that the time of day which the experiment is performed biochemical and behavioral changes influencing the results, which may be a confounder in the interpretation of results.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Metabolic syndrome (MetS) is characterized by the presence of set cardiovascular risk factors such as hypertension, hyperglycemia, dyslipidemia and abdominal obesity. This pathology has been widely discussed due to the impact of cardiovascular disease (CVD), has been a concern for public health. In addition to the classic risk factors of this syndrome, has been indicated the presence of a low-grade chronic inflammation in their patients, which is considered a key point in the development of atherosclerosis and CVD. Some inflammatory markers has been used in order to diagnose cardiovascular asymptomatic patients at risk, as the levels of C-reactive protein (CRP) and uric acid and the activity of myeloperoxidase enzyme (MPO). In addition, studies have shown close relation of the purinergic and cholinergic systems in control of the inflammatory process. The ATP molecule has been considered a pro-inflammatory, while adenosine, which is the end product of ATP hydrolysis, appears to play protective action and anti-inflammatory. Acetylcholine (ACh), in turn, performs anti-inflammatory functions to inhibit secretion of cytokines by immune cells. In this context, the objective of this study was to investigate in serum and lymphocytes of 20 patients with MetS, the activity of the enzymes nucleoside triphosphate diphosphohydrolase (NTPDase), ectonucleotídeo pyrophosphatase / phosphodiesterases (E-NPP), adenosine deaminase (ADA), which control ATP and adenosine extracellular levels, and to analyze the activity of acetylcholinesterase (AChE) and butyrylcholinesterase (BuChE) enzymes, which control the extracellular ACh level in order to effect the purinergic and cholinergic systems in patients with inflammatory action MetS. The results showed a decreased activity of the enzymes NTPDase and ADA in lymphocytes from patients with MetS. Moreover, we observed an increase in activity of the E-NPP and ADA in the serum of these patients. In addition, an increase in activity of both cholinesterase AChE and BuChE was observed in lymphocytes and serum, respectively. Finally, patients with MetS showed higher levels of CRP and uric acid as well as increased activity of MPO. Thus, the present results show the presence of an inflammatory state in patients with MetS by both the increase in inflammatory markers classics, and by immunomodulation triggered by purinergic and cholinergic systems. The lower activity of NTPDase in lymphocytes results in increased availability of extracellular ATP to stimulate inflammation and to influence the activity of other enzymes purinergic. Likewise, the high cholinesterase activities results in decreased availability of ACh extracellular, reducing the anti-inflammatory cholinergic effect. Thus, one may indicate that the purinergic and cholinergic systems have important effects in modulating the inflammatory process present in MetS, and the parameters mentioned in this research can useful in clinical medicine, to monitor the disease. / A Síndrome Metabólica (SMet) caracteriza-se pela presença de um conjunto de fatores de risco cardiovasculares, como hipertensão, hiperglicemia, dislipidemia e obesidade abdominal. Essa patologia tem sido amplamente discutida em virtude do impacto das doenças cardiovasculares (DCVs), já sendo uma preocupação em termos de saúde pública. Além dos fatores de riscos clássicos dessa síndrome, indica-se a presença de uma inflamação crônica de baixo grau nos seus portadores, a qual é considerada ponto chave no desenvolvimento de aterosclerose e de DCVs. Alguns marcadores inflamatórios têm sido utilizados com o intuito de diagnosticar pacientes assintomáticos sob risco cardiovascular, como os níveis de proteína C-reativa (PCR) e de ácido úrico, bem como a atividade da enzima mieloperoxidase (MPO). Além disso, pesquisas têm demonstrado estreita relação dos sistemas purinérgico e colinérgico com o controle do processo inflamatório. O ATP tem sido considerado uma molécula pró-inflamatória, enquanto que a adenosina, produto final da hidrólise do ATP, parece desempenhar ações protetoras e anti-inflamatórias. A acetilcolina (ACh), por sua vez, desempenha funções anti-inflamatórias por inibir a secreção de citocinas pelas células imunes. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi verificar, em soro e linfócitos de 20 pacientes com SMet, a atividade das enzimas nucleotídeo trifosfato difosfoidrolase (NTPDase), ectonucleotídeo pirofosfatase/fosfodiesterases (E-NPP), adenosina desaminase (ADA), as quais controlam os níveis de ATP e adenosina extracelulares, assim como analisar a atividade das enzimas acetilcolinesterase (AChE) e butirilcolinesterase (BuChE), as quais controlam o nível extracelular de ACh, tendo em vista o efeito dos sistemas purinérgico e colinérgico nas ações inflamatórias dos pacientes com SMet. Os resultados obtidos demonstraram uma diminuição da atividade das enzimas NTPDase e ADA em linfócitos de pacientes com SMet. Por outro lado, observou-se um aumento na atividade da E-NPP e ADA em soro desses pacientes. Em adição, um aumento na atividade de ambas as colinesterases AChE e BuChE foi observado em linfócitos e soro , respectivamente. Além disso, os pacientes com SMet apresentaram níveis maiores de PCR e ácido úrico, bem como maior atividade da enzima MPO. Com isso, os resultados deste trabalho evidenciam a presença de um estado inflamatório nos pacientes com SMet tanto pelo aumento dos marcadores inflamatórios clássicos, quanto pela imunomodulação desencadeada pelos sistemas purinérgico e colinérgico. A menor atividade da NTPDase em linfócitos resulta em maior disponibilidade de ATP extracelular para estimular a inflamação, influenciando a atividade das demais enzimas purinérgicas. Da mesma forma, uma maior atividade das colinesterases resulta em menor disponibilidade de ACh extracelular, diminuindo o efeito colinérgico anti-inflamatório. Dessa forma, pode-se indicar que os sistemas purinérgico e colinérgico apresentam importantes efeitos na modulação do processo inflamatório presente na SMet, podendo ser úteis na clínica médica e no monitoramento da patologia.

<p>5’-Nucleotidases (5’NTs) are catabolic enzymes of the nucleotide metabolism. They catalyze dephosphorylation of deoxyribo- and ribonucleoside monophosphates and constitute an important control point in the regulation of intracellular nucleotide pools for the maintenance of correct DNA and RNA synthesis.</p><p>By removing the alfa-phosphate group from a nucleotide, the 5’NTs release the nucleoside to pass the plasma membrane by facilitated diffusion. Depending on the cellular need for nucleotides, the nucleosides can either exit the cell for reuse elsewhere or be imported and subsequently phosphorylated by nucleoside and nucleotide kinases.</p><p>The knowledge of how nucleotides are metabolized has been used for rational design of nucleoside analogues that are used in treatment of cancer and viral diseases. These drugs are phosphorylated within the cell to become active. Their dephosphorylation by 5’NTs might be one of the mechanisms behind the resistance experienced by patients towards such drugs.</p><p>This thesis describes structure-function studies on four of the seven known human 5’-NTs. The focus of the work is on the substrate specificity and regulation of these enzymes. Inactive variants of the mitochondrial and cytosolic deoxynucleotidases and the cytosolic 5’-nucleotidase II were used to characterize the structural basis for their substrate specificity in high detail.</p><p>Based on structures of the apoprotein and activator/activator+substrate complexes of cytosolic 5’-nucleotidase II, a mechanism for the allosteric activation of this enzyme was presented. In this mechanism, the activator induces a conformational change that involves conserved residues of the active site. The conformational change drastically increases the enzyme affinity for the phosphate moiety of the substrate.</p>