DAMASCENO, Samara Rodrigues Bonfim. Efeito antinecrótico das lectinas conA e conBr na lesão de células acinares pancreáticas induzidas por sais biliares, álcool e ácido palmitoléico : envolvimento do domínio letínico. 2015. 111 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-04-10T15:50:14Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_srbdamasceno.pdf: 2942338 bytes, checksum: 66ae1fead584d61c560cf24c2074e09f (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-04-10T15:51:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_srbdamasceno.pdf: 2942338 bytes, checksum: 66ae1fead584d61c560cf24c2074e09f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-10T15:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_srbdamasceno.pdf: 2942338 bytes, checksum: 66ae1fead584d61c560cf24c2074e09f (MD5) Previous issue date: 2015 / Acute pancreatitis is an inflammatory disease of the pancreas which involves a complex sequence of pathophysiological events, many of which are still unknown. Recent data give more importance to the events that happen within the pancreatic cell. The severity and duration of the stimulus applied to pancreatic acinar cells may lead to apoptosis or necrosis. A large number of studies have demonstrated that the lectin of Canavalia ensiformis (ConA) and Canavalia brasiliensis (ConBr) induce cell death by apoptosis in various cell types. However there are no studies on its anti-necrotic effects. Thus, we investigated the effects of ConA and ConBr concerning the death of pancreatic acinar cells, induced by the main triggers of acute pancreatitis. The acinar cells were isolated from the pancreas of male Swiss mice. The cells were pre-incubated with ConA and ConBr for 1h followed by the induction of cell damage by SATC, ethanol or APO administration for 30 min (room temperature, RT). To evaluate the role of the lectin domain of ConBr and ConA, the lectins were preincubated for 1h at 37°C with its alpha-methyl-mannoside (α-MM) ligand sugar, or with a nonbinding sugar, D-galactose, both at a concentration of 0.2M, prior to experimental protocols. All groups were incubated for 5 minutes with the nuclear marker Hoechst 33342 (50 µg/ml) and with the necrosis marker, propidium iodide (PI; 10 µg/ml). In another analysis, ConA and ConBr conjugated to fluorescein isothiocyanate (FITC) were incubated for 1h (RT) with the acinar cells. To evaluate the effect of ConA and ConBr effect on mitochondrial membrane potential (ΔѰm) of pancreatic acinar cells under administration of SATC, ethanol or APO, the cells were stained with Hoechst 33342, and tetramethylrhodamine methyl ester (TMRM, fluorescent dye that is readily sequestered by active mitochondria). All analyzes were performed using confocal microscope FluoViewTM 1000 - Olympus. The results showed that the SATC, ethanol and APO groups caused significant necrosis on cells compared to control groups, and pretreatment ConBr and ConA caused a significant protection against harmful necrosis caused by all three agents. When lectins were complexed to their α-MM ligand sugar, this protective effect was significantly reversed; not being changed, however, by no specific sugar D-galactose, suggesting a participation of the lectin domain in protective effect. Lectins conjugated with FITC showed a marking on acinar cells at the level of membrane, confirming its interaction with carbohydrates present on the surface of these cells. In the analysis of mitochondrial potential, SATC, ethanol and mainly APO triggered intense depolarization of ΔѰm of pancreatic acinar cells. Pretreatment with ConA prevented mitochondrial dysfunction in all injury models, however ConBr prevented this injury caused by a dysfunction in SATC and ethanol, without changing the dysfunction caused by APO. Given the above, Con A and Con Br protect pancreatic acinar cells against necrosis induced by sulfated taurolithocholic acid, ethanol and APO with its effects mediated by lectin domain, beyond of the maintenance the integrity of the mitochondrial membrane of pancreatic cell, determinant factor to prevent the course of necrosis in acute pancreatitis. / A pancreatite aguda é uma doença inflamatória do pâncreas que envolve uma sequência complexa de eventos fisiopatológicos, muitos dos quais ainda desconhecidos. Dados recentes atribuem maior importância aos eventos que aconteceriam no interior da célula pancreática. A gravidade e a duração do estímulo aplicado às células acinares pancreáticas podem levar à apoptose ou à necrose. Um grande número de estudos demonstraram que as lectinas de Canavalia ensiformis (ConA) e Canavalia brasiliensis (ConBr) induzem morte celular por apoptose em diversos tipos de células. Contudo não há estudos sobre seus efeitos anti-necróticos. Dessa forma, investigamos os efeitos de ConA e ConBr frente à morte de células acinares pancreáticas, induzida pelos principais desencadeadores da pancreatite aguda. As células acinares foram isoladas de pâncreas de camundongos Swiss machos. As células foram previamente incubadas durante 1h com ConA (200 µg/ml) e ConBr (200 µg/ml) seguido da indução das lesões celulares pela administração de SATC (500µM), etanol (850mM) ou APO (100 µM) durante 30 min (T.A). Para avaliar a participação do domínio lectínico de ConA e ConBr, as lectinas foram previamente incubadas, durante 1h a 37ºC, com seu açúcar ligante α-metil-manosídeo (α-MM), ou com um açúcar não ligante, D-galactose, ambos na concentração de 0,2M, antes dos protocolos experimentais. Todos os grupos foram incubados por 5 minutos com o marcador nuclear Hoechst 33342 (50 µg/ml) e com o marcador de necrose iodeto de propídeo (IP; 10 µg/ml). Em outra análise, ConA e ConBr conjugadas ao isotiocianato de fluoresceína (FITC) foram incubadas durante 1h (T.A), com as células acinares. Para a avaliação do efeito de ConA e ConBr no potencial de membrana mitocondrial (ΔѰm) de células acinares pancreáticas sob administração de SATC, etanol ou APO, as células foram marcadas com Hoechst 33342 e tetrametilrodamina-metiléster (TMRM, corante fluorescente que é prontamente sequestrado pela mitocôndria ativa). Todas as análises foram realizadas no microscópio confocal FluoViewTM 1000 – Olympus. Os resultados mostraram que os grupos SATC, etanol e APO causaram necrose significativa às células, quando comparado com os grupos controles e que o pré-tratamento de ConA e ConBr promoveu proteção significativa (p < 0,05) contra a necrose causada pelos três agentes lesivos. Quando as lectinas foram complexadas ao seu açúcar ligante, α-MM, este efeito protetor foi significativamente revertido (p < 0,05); não sendo alterado, porém, pelo açúcar não específico D-galactose, evidenciando a participação do domínio lectínico no seu efeito protetor. As lectinas conjugadas com FITC evidenciaram uma marcação nas células acinares a nível de membrana, confirmando a sua interação com carboidratos presentes na superfície dessas células. Na análise do potencial mitocondrial, SATC, etanol e principalmente APO desencadearam intensa despolarização do ΔѰm das células acinares pancreáticas. O pré-tratamento com ConA preveniu (p < 0,05) a disfunção mitocondrial em todos os modelos de lesão, contudo ConBr preveniu essa disfunção na lesão causada por SATC e etanol (p < 0,05), sem alterar a disfunção causada por APO. Diante do exposto, ConA e ConBr protegem células acinares pancreáticas contra a necrose induzida por ácido taurolitocólico sulfatado, etanol e APO, tendo seus efeitos mediados pelo domínio lectínico, além da manutenção da integridade da membrana mitocondrial da célula pancreática, fator determinante para evitar o curso da necrose na pancreatite aguda.

MORAIS, Cecília Mendes. Avaliação das alterações inflamatórias e funcionais do pulmão no curso da pancreatite aguda experimental induzida por ceruleína. 2013. 71 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-22T13:05:26Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_cmmorais.pdf: 1163824 bytes, checksum: 4fdcef02a7a94eec09ddb4068273f114 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-22T13:25:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_cmmorais.pdf: 1163824 bytes, checksum: 4fdcef02a7a94eec09ddb4068273f114 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T13:25:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_cmmorais.pdf: 1163824 bytes, checksum: 4fdcef02a7a94eec09ddb4068273f114 (MD5) Previous issue date: 2013 / Acute pancreatitis (AP) is considered an emergency abdominal, the severe form of the disease patients develop intense systemic inflammatory response and Multiple Organ Dysfunction Syndrome (MODS). About one-third of all deaths from acute pancreatitis has been reported to occur prior to admission to hospital, and in most cases, is associated with acute lung injury (ALI) and acute respiratory distress syndrome (ARDS). Objectives: To assess the inflammatory and functional lung alterations in the course of AP induced by cerulein. Methods: Male Wistar rats (100-150g) were treated four times with one hour interval, intraperitoneally with cerulein (20 μg / kg, suspended in saline) or saline. Twenty-four hours after the first injection of cerulein, the animals were anesthetized, tracheostomized and placed in a spirometer for small animals and with following parameters evaluated: Flow, Volume(VC), Respiratory Frequency(RF) and Minute Volume(MV), and lung mechanics were observed where Dynamic Elastance (Edyn), Dynamic Compliance (Cdyn), Peak Pressure, Resistance (Raw). Bronchoalveolar lavage (BAL) was performed to count and differential cell. Arterial blood sample was drawn for assessment of pulmonary gas exchange parameters. Then the animals were sacrificed and serum amylase, lipase, EPO, TNF-α, GRO-KC, MIP-1, VEGF, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-10, IL-12, IL-17, IL-18 and malondialdehyde (MDA) were measured. Myeloperoxidase activity (MPO) and histological evaluation of pancreas and lung were determined. In addition, venous blood samples were collected for evaluation of bacterial translocation. Results: Serum levels of amylase, lipase, cytokines, MDA and MPO activity of pancreatic and lung were increased in animals with PA, there was damage to pancreatic tissue and lung histology revealed, in animals that received cerulein compared to the control group. There was an increase in the number of BAL cells, predominantly macrophages. Arterial blood gas analysis showed no significant difference between groups. Flow, and MV proved lower in animals with PA; FR remained unchanged. Edyn and pressure peak were larger and Cdyn was lower in animals with PA and no changes in Res. There was no translocation in any groups. Conclusion: Cerulein induced AP in rats with elevated serum amylase and pancreatic lipase, with histopathological changes in the pancreas and lung dependent neutrophilic infiltrate, free radicals and inflammatory cytokines. PA induces spirometric and lung mechanics alterations that are not dependent on bacterial translocation / A pancreatite aguda (PA) é considerada uma situação de emergência abdominal, na forma grave da doença os pacientes desenvolvem acentuada resposta inflamatória sistêmica e Síndrome de Disfunção de Múltiplos Órgãos (SDMO). Um terço das mortes relacionadas com PA acontecem antes da admissão hospitalar, e a maior parte dos casos estão relacionados com lesão pulmonar aguda (LPA) e síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA). Objetivos: Avaliar as alterações inflamatórias e funcionais do pulmão no curso da pancreatite aguda experimental induzida por ceruleína. Métodos: PA foi induzida em Ratos Wistar, machos pensando 100-150g, pela administração de 4 doses de ceruleína (20µg/kg) com intervalo de uma hora e os grupos controle receberam apenas solução salina. Após 24 horas, os animais foram sedados, analgesiados e traqueostomizados e análise da função pulmonar foi realizada através da espirometria, onde foram avaliados Fluxo, Volume Corrente (VC), Frequência Respiratória (FR) e Volume Minuto (VM), e da mecânica pulmonar onde foram observados Elastância Dinâmica (Edin), Complacência Dinâmica (Cdin), Pressão de Pico, Resistência (Res). Lavado bronco-alveolar (LBA) foi realizado para contagem total e diferencial de células. Amostra de sangue arterial foi colhida para avaliação dos parâmetros gasométricos. Em seguida os animais foram sacrificados e níveis séricos de amilase, lipase, EPO, TNF-α, GRO-KC, MIP-1, VEGF, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-10, IL-12, IL-17, IL-18 e de malondialdeído (MDA) foram medidos. Atividade de mieloperoxidase (MPO) e avaliação histológica de pâncreas e pulmão foram determinadas. Além disso, amostras de sangue venoso foram colhidas para avaliação de translocação bacteriana. Resultados: Níveis séricos de amilase, lipase, citocinas, MDA e atividade de MPO pancreática e pulmonar estavam aumentados nos animais com PA; houve danos ao tecido pancreático e pulmonar, revelados na histologia, nos animais que receberam ceruleína, quando comparados ao grupo controle. O LBA dos animais tratados com ceruleína demonstrou maior quantidade de células, sendo predominantemente macrófagos. Gasometria arterial não apresentou diferença significativa entre os grupos. Fluxo, VC e VM se mostraram diminuídos nos animais com PA; FR permaneceu inalterada. Edin e Pressão de Pico estavam maiores e Cdin estava menor nos animais com PA e não houve alterações na Res. Estudo da bacteremia foi negativo em ambos grupos. Conclusão: Ceruleína induz PA em ratos com elevação dos níveis de amilase e lipase pancreática, com alterações histopatológicas no pâncreas e no pulmão dependente do infiltrado neutrofílico, radicais livres e citocinas inflamatórias. PA induz alterações espirométricas e na mecânica pulmonar que não são dependentes de processo infeccioso.

Acute pancreatitis presents high rates of morbidity and mortality, mainly when it is associated with infection of pancreatic necrosis. The mechanism of this occurrence has not been fully elucidated, but may possibly be due to the bacterial translocation caused by disruption of the intestinal barrier. The objective of the present study was to determine the effect of dietary supplementation with probiotic bacteria (PB) on acute pancreatitis (AP) induced in rats by the inoculation of 5% sodium taurocholate into the biliopancreatic duct. Fifty Sprague-Dawley rats were randomly divided into five groups: 1 sham-operated, with manipulation of intra-abdominal organs; 2 induction of AP, without supplementation with PB; 3 dietary supplementation with PB followed for induction of AP; 4 induction of AP followed by dietary supplementation with PB; and 5 dietary supplementation with PB before and after the induction of AP. 4 x 109 colony-forming units (CFU) of probiotic bacteria were directly administered into the stomach, divided into two stages per day. Blood samples were collected for the determination of serum levels of amylase, lipase, glucose, and calcium and for leukocyte counts immediately before (0 hour) and 24 and 48 hours after the surgical procedure. The animals were sacrificed and ileal lymph nodes and fragments of pancreas, spleen, and liver were obtained. Comparison of the five groups of animals revealed significant differences in leukocyte count at 24 hours and in amylasemia and lipasemia at 24 and 48 hours after AP induction. Considering only the groups with AP induction (groups 2, 3, 4, and 5), there was no difference in any of the parameters assessed or in bacterial colonization of the organs. When considering only the groups of animals that received PB (groups 3, 4, and 5), a greater occurrence of lymph node contamination and of pancreatic hemorrhage was observed compared to the other groups. The present results suggest that dietetary supplementation with this combination of PB in animals submitted to the induction of AP does not modify the profile of the biochemical markers evaluated or the leukocyte count, but increases the rate of bacterial translocation to lymph nodes and the occurrence of pancreatic hemorrhage. / A pancreatite aguda apresenta alta taxa de morbimortalidade, notadamente quando associada a infecção da necrose pancreática. O mecanismo exato para esta ocorrência ainda não foi totalmente elucidado, mas, possivelmente, é oriunda da translocação bacteriana decorrente da disfunção da barreira intestinal. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação dietética com bactérias probióticas (BP) na resposta a pancreatite aguda (PA) induzida em ratos pela inoculação de taurocolato de sódio a 5% no ducto biliopancreático. Cinqüenta ratos Sprague-Dawley foram aleatoriamente distribuídos em cinco grupos: 1 operação simulada, com manipulação de órgãos intra-abdominais; 2 indução de PA, sem suplementação de BP; 3 suplementação dietética com BP, seguida por indução de PA; 4 indução de PA, seguida por suplementação dietética com BP; e 5 suplementação dietética com BP, antes e após a indução de PA. A suplementação de BP se deu pela administração por via intragástrica de 4 x 109 unidades formadoras de colônias (UFC), divididas em duas etapas por dia. Foram coletadas amostras sangüíneas para análise das concentrações séricas de amilase, lipase, glicose e cálcio, além de contagem leucocitária, imediatamente antes do procedimento, e após 24 e 48 horas. Após a morte dos animais, seguiu-se nova laparotomia para retirada de amostras de líquido peritoneal, linfonodo ileal, pâncreas, baço e fígado, para análise microbiológica e histopatológica. Na comparação simultânea entre os cinco grupos, foram observadas diferenças significativas para contagem leucocitária, na hora 24, e para amilasemia e lipasemia, nas horas 24 e 48 após a indução da PA. Considerando-se somente os grupos de animais em que ocorreu a indução de PA (grupos 2, 3, 4 e 5), não se observou diferença para quaisquer dos parâmetros avaliados. No que concerne à colonização bacteriana dos órgãos, entre estes mesmos quatro grupos, também não se observou diferença. Quando considerados apenas os grupos de animais que receberam BP (grupos 3, 4 e 5), observou-se maior ocorrência de contaminação do linfonodo ileal e de hemorragia pancreática, em comparação aos demais grupos. Nossos resultados sugerem que a suplementação dietética com esta combinação de cepas de BP em animais submetidos a indução de PA não modifica o perfil dos marcadores bioquímicos avaliados e da contagem leucocitária, mas aumenta o índice de translocação bacteriana para o linfonodo ileal e a ocorrência de hemorragia pancreática.

Acute pancreatitis presents high rates of morbidity and mortality, mainly when it is associated with infection of pancreatic necrosis. The mechanism of this occurrence has not been fully elucidated, but may possibly be due to the bacterial translocation caused by disruption of the intestinal barrier. The objective of the present study was to determine the effect of dietary supplementation with probiotic bacteria (PB) on acute pancreatitis (AP) induced in rats by the inoculation of 5% sodium taurocholate into the biliopancreatic duct. Fifty Sprague-Dawley rats were randomly divided into five groups: 1 sham-operated, with manipulation of intra-abdominal organs; 2 induction of AP, without supplementation with PB; 3 dietary supplementation with PB followed for induction of AP; 4 induction of AP followed by dietary supplementation with PB; and 5 dietary supplementation with PB before and after the induction of AP. 4 x 109 colony-forming units (CFU) of probiotic bacteria were directly administered into the stomach, divided into two stages per day. Blood samples were collected for the determination of serum levels of amylase, lipase, glucose, and calcium and for leukocyte counts immediately before (0 hour) and 24 and 48 hours after the surgical procedure. The animals were sacrificed and ileal lymph nodes and fragments of pancreas, spleen, and liver were obtained. Comparison of the five groups of animals revealed significant differences in leukocyte count at 24 hours and in amylasemia and lipasemia at 24 and 48 hours after AP induction. Considering only the groups with AP induction (groups 2, 3, 4, and 5), there was no difference in any of the parameters assessed or in bacterial colonization of the organs. When considering only the groups of animals that received PB (groups 3, 4, and 5), a greater occurrence of lymph node contamination and of pancreatic hemorrhage was observed compared to the other groups. The present results suggest that dietetary supplementation with this combination of PB in animals submitted to the induction of AP does not modify the profile of the biochemical markers evaluated or the leukocyte count, but increases the rate of bacterial translocation to lymph nodes and the occurrence of pancreatic hemorrhage. / A pancreatite aguda apresenta alta taxa de morbimortalidade, notadamente quando associada a infecção da necrose pancreática. O mecanismo exato para esta ocorrência ainda não foi totalmente elucidado, mas, possivelmente, é oriunda da translocação bacteriana decorrente da disfunção da barreira intestinal. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação dietética com bactérias probióticas (BP) na resposta a pancreatite aguda (PA) induzida em ratos pela inoculação de taurocolato de sódio a 5% no ducto biliopancreático. Cinqüenta ratos Sprague-Dawley foram aleatoriamente distribuídos em cinco grupos: 1 operação simulada, com manipulação de órgãos intra-abdominais; 2 indução de PA, sem suplementação de BP; 3 suplementação dietética com BP, seguida por indução de PA; 4 indução de PA, seguida por suplementação dietética com BP; e 5 suplementação dietética com BP, antes e após a indução de PA. A suplementação de BP se deu pela administração por via intragástrica de 4 x 109 unidades formadoras de colônias (UFC), divididas em duas etapas por dia. Foram coletadas amostras sangüíneas para análise das concentrações séricas de amilase, lipase, glicose e cálcio, além de contagem leucocitária, imediatamente antes do procedimento, e após 24 e 48 horas. Após a morte dos animais, seguiu-se nova laparotomia para retirada de amostras de líquido peritoneal, linfonodo ileal, pâncreas, baço e fígado, para análise microbiológica e histopatológica. Na comparação simultânea entre os cinco grupos, foram observadas diferenças significativas para contagem leucocitária, na hora 24, e para amilasemia e lipasemia, nas horas 24 e 48 após a indução da PA. Considerando-se somente os grupos de animais em que ocorreu a indução de PA (grupos 2, 3, 4 e 5), não se observou diferença para quaisquer dos parâmetros avaliados. No que concerne à colonização bacteriana dos órgãos, entre estes mesmos quatro grupos, também não se observou diferença. Quando considerados apenas os grupos de animais que receberam BP (grupos 3, 4 e 5), observou-se maior ocorrência de contaminação do linfonodo ileal e de hemorragia pancreática, em comparação aos demais grupos. Nossos resultados sugerem que a suplementação dietética com esta combinação de cepas de BP em animais submetidos a indução de PA não modifica o perfil dos marcadores bioquímicos avaliados e da contagem leucocitária, mas aumenta o índice de translocação bacteriana para o linfonodo ileal e a ocorrência de hemorragia pancreática.

Orientador: Edson Antunes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T04:13:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camargo_EniltonAparecido_D.pdf: 1739135 bytes, checksum: faa68531f796834af8491c48ada0ccc0 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A pancreatite aguda e uma doença inflamatória do pâncreas caracterizada por intensa necrose pancreática e efeitos sistêmicos secundários como lesão pulmonar, os quais são a principal causa da mortalidade observada nessa doença. Ha evidencia de que as fosfolipases A2 (PLA2) tem um importante papel na fisiopatologia da pancreatite aguda. O objetivo deste trabalho foi investigar a capacidade de PLA2s de induzir pancreatite em ratos e os mecanismos envolvidos nesse fenômeno. As seguintes PLA2s foram utilizadas: piratoxina-I (homologo Lys-49 de PLA2 desprovido de atividade catalitica), bothropstoxina-II (homologo Asp-49 de PLA2 com baixa atividade catalítica) e a PLA2 proveniente do veneno de Naja moçambique moçambique (que possui alta atividade catalítica). Ratos Wistar machos (200-250 g) provenientes do CEMIB/UNICAMP foram utilizados. As PLA2s foram injetadas no ducto biliopancreatico de animais anestesiados e apos diferentes tempos experimentais foram avaliados o extravasamento de proteínas plasmáticas no pâncreas, infiltrado de neutrofilos no pâncreas e pulmão e amilase serica. A analise histológica do pâncreas e pulmão também foi realizada em alguns grupos experimentais. Piratoxina-I foi capaz de causar extravasamento de proteínas plasmáticas no pâncreas, infiltrado de neutrofilos no pulmão e os níveis sericos de amilase. Alem disso, a piratoxina-I causou alterações histológicas nos tecidos pancreático (infiltrado de neutrofilos, necrose de células acinares e edema intersticial) e pulmonar (edema intersticial e diminuição do espaço alveolar), que foram mais evidentes nos tempos iniciais da pancreatite (4-12h). Bothropstoxina-II e a PLA2 do veneno de Naja moçambique moçambique, a semelhança da Piratoxina-I, também foram capazes de aumentar o extravasamento de proteínas plasmáticas e o influxo de neutrofilos no tecido pancreático por mecanismos nao relacionados a sua atividade catalítica. Entretanto, o influxo de neutrofilos para o pulmão e o aumento dos níveis sericos de amilase causados por essas PLA2s foi dependente de sua atividade catalítica. As PLA2s também causaram secreção deamilase de acinos pancreáticos isolados, que foi dependente da atividade catalítica dessas enzimas. Adicionalmente, com o objetivo de entender o mecanismo envolvido na pancreatite induzida pela PLA2 de Naja mocambique mocambique animais foram tratados com os seguintes agentes farmacológicos: pentoxifilina (inibidor da sintese de TNF-á), SR140333 (antagonista de receptor NK1), icatibant (antagonista de receptor B2), L-NAME (inibidor não seletivo das NOS), aminoguanidina (inibidor preferencial da NOS induzivel), indometacina (inibidor não seletivo de COX), celecoxib (inibidor seletivo de COX-2), PCA4248 (antagonista dos receptores de PAF) e AA861 (inibidor da 5-lipoxigenase). Em conjunto, nossos dados mostraram que os efeitos locais e secundários são multimediados, envolvendo a participação de bradicinina, substancia P, NO, TNF-á, PAF e metabolitos das COXs. Em conclusão, demonstramos que as PLA2s secretorias são capazes de induzir pancreatite aguda em ratos quando injetadas no ducto biliopancreatico, um quadro caracterizado por efeitos inflamatórios locais e secundários cuja mediação farmacológica envolve vários fatores. Alem disso, a pancreatite aguda induzida pelas PLA2s reproduz algumas alterações observadas na pancreatite aguda em humanos, representando uma nova estratégia de estudo da fisiopatologia da pancreatite aguda / Abstract: Acute pancreatitis is an inflammatory disease of the pancreas that is characterized by intense pancreatic necrosis and remote systemic effects such as the lung injury that is the main cause of death during acute pancreatitis. There are evidences that phospholipases A2 (PLA2) have an important role in the acute pancreatitis pathophysiology. The aim of this work was to investigate the ability of PLA2 to induce acute pancreatitis in rats, and the mechanisms underlying this phenomenon. The following PLA2s were used: piratoxin-I (a Lys-49 PLA2 homologue devoid of catalytic activity), bothropstoxin-II (an Asp-49 PLA2 homologue with low catalytic activity) and PLA2 from Naja mocambique mocambique venom (high catalytic activity). Male Wistar rats (200-250g) provided by CEMIBUNICAMP have been used. The PLA2s were injected into the common bile duct of anesthetized rats, after which pancreatic plasma protein extravasation, pancreatic and lung neutrophil infiltration and serum levels of amylase were measured. Histology of the pancreatic and lung tissue has also been carried out in some experimental group. Piratoxin-I was able to increase the pancreatic plasma protein extravasation, lung neutrophil infiltration and serum amylase levels. In addition, Piratoxin-I caused histological changes in the pancreatic (neutrophil infiltration, areas of acinar cell necrosis and interstitial edema) and lung (interstitial edema and diminuition of alveolar space) tissues, which were more evident in the early periods (4-12h) after the injection. Bothropstoxin-II and PLA2 from Naja mocambique mocambique venom were also able to increase the plasma protein extravasation and neutrophil influx in the pancreatic tissue by mechanisms unrelated to their catalytic activity. However, the remote lung neutrophil influx caused by these PLA2s was shown to depend on their catalytic activity. The enhancement of serum amylase levels was also dependent on the catalytic activity of these enzymes. The PLA2s also caused amylase secretion from isolated pancreatic acini, which was dependent on their catalytic activity. Next, in order to further understand the mechanisms involved in pancreatitis induced by PLA2 Naja mocambique mocambique, animals were treated with the following pharmacological agents: pentoxifylline (TNF-á synthesis inhibitior), SR140333 (NK1receptor antagonist), icatibant (B2 receptor antagonist), L-NAME (non-selective NOS inhibitor), aminoguanidine (preferential inducible NOS inhibitor), indomethacin (nonselective COX inhibitor), celecoxib (selective COX-2 inhibitor), PCA4248 (PAF receptor antagonist) and AA861 (5-lipoxygenase inhibitor). Taken together our data showed that local and remote effects are multimediated, involving the participation of bradykinin, substance P, NO, TNF-á, PAF and COXs metabolites. In conclusion, we have shown that secretory PLA2s are able to induce acute pancreatitis in rats when injected into the common bile duct. Therefore, PLA2-induce acute pancreatitis reproduces some aspects of the human disorder representing a new strategy to study the pathophysiology of acute pancreatitis / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Farmacologia

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 391279.pdf: 298165 bytes, checksum: c9ce6c428e2595e3599ded6ec2298cf2 (MD5) Previous issue date: 2007-03-26 / A insufici?ncia renal aguda que se desenvolve no curso de uma pancreatite aguda ? um fator de mal progn?stico. Os mecanismos fisiopatol?gicos da insufici?ncia renal aguda nesses pacientes n?o est?o totalmente elucidados. Como n?o h? tratamento espec?fico para a pancreatite aguda, a frutose-1,6-bisfostato foi estudada como poss?vel agente preventivo de les?es renais associadas a esta patologia, pois j? foi demonstrado o seu papel protetor sobre o rim em outras situa??es. No presente estudo, a pancreatite aguda foi induzida em ratos Wistar machos, por ligadura do ducto pancre?tico principal por um per?odo de 12 (doze) horas. Os animais foram divididos em 4(quatro) grupos: sham (somente realiza??o de laparotomia), ligadura do ducto pancre?tico, ligadura do ducto pancre?tico e administra??o de solu??o salina, ligadura do ducto pancre?tico e administra??o de frutose- 1,6-bisfosfato. A frutose-1,6-bisphosphato e a solu??o salina foram administradas por via intraperitoneal. Houve hemoconcentra??o nos animais ap?s indu??o da pancreatite e esta foi prevenida pela administra??o de solu??o salina e frutose-1,6-bisfosfato. A insufici?ncia renal aguda foi observada ap?s indu??o da pancreatite (depura??o da creatinina end?gena= 0,30 mL/min, no grupo sham= 0,66 mL/min) provavelmente devido ? necrose tubular aguda (fra??o excretada de s?dio=1,48%; sham=0,52%). A administra??o da frutose-1,6-bisfofato foi capaz de prevenir essas altera??es (depura??o da creatinina end?gena=0.50mL/min, fra??o excretada de s?dio=1,15%). No entanto, o mesmo n?o foi observado com a solu??o salina (depura??o da creatinina end?gena=0,35mL/min, fra??o excretada de s?dio=3,19%). A excre??o urin?ria da enzima N-acetil-b-D-glucosaminidase (NAG) foi utilizada como marcador de les?o renal. Sua excre??o estava elevada no grupo submetido ? ligadura do ducto pancre?tico. A administra??o de solu??o salina elevou ainda mais a sua atividade. A frutose-1,6-bisfosfato n?o foi capaz de prevenir essa eleva??o. O n?vel s?rico das subst?ncias reativas do ?cido tiobarbit?rico (TBARS), utilizadas para avalia??o do estresse oxidativo no curso da pancreatite aguda, mostrou altera??es paralelas ?s do NAG. H? a necessidade do desenvolvimento de um modelo experimental de pancreatite aguda pois h? mais perguntas do que respostas. Neste estudo foi demonstrada a reversibilidade da pancreatite aguda atrav?s do desenvolvimento de um modelo experimental de obstru??o tempor?ria do ducto pancre?tico

Avaliaram-se as características bioquímicas e histológicas de um modelo experimental de pancreatite aguda necrotizante induzida por doses excessivas de arginina em ratos. A amostra constituiu-se de 105 ratos machos, da linhagem Wistar. Aos ratos do grupo experimento (n=70) administrou-se injeção intraperitoneal de 500mg/100g de peso corporal de L-Arginina dividida em doses iguais e injetada em duas etapas com intervalos de 15 minutos. No grupo controle (n=35), foi injetado solução salina isotônica por via intraperitoneal. Foram analisados 10 animais do grupo experimento e 5 do grupo controle em cada período de 6 h, 12 h, 24 h, 48 h, 72 h, 7 dias, 14 dias. Coletou-se sangue para exames laboratoriais e o pâncreas para análise em microscopia óptica. Doze a vinte e quatro horas após a injeção de arginina, os níveis séricos de amilase e lipase alcançaram valores máximos, comparados àqueles dos ratos controle, decrescendo gradualmente, alcançou-os na 48a hora sendo significativamente menor após 72 horas e sete dias. A atividade enzimática retornou a níveis basais após 14 dias. Os valores de amilase e lipase estavam normais em todos os tempos avaliados nos animais do grupo controle. À microscopia óptica, após injeção de arginina, observou-se arquitetura pancreática histologicamente preservada no período de 6 horas e evidenciando-se em 24 horas, importante edema intersticial. Após quarenta e oito horas, a arquitetura acinar estava parcialmente destruída com necrose celular focal atingindo sua máxima severidade ao ultrapassar-se 72 horas. No sétimo dia a necrose acinar e o edema haviam diminuído, iniciando-se a regeneração da arquitetura acinar. Observou-se a reconstrução estrutural pancreática após 14 dias. No grupo controle não foram encontradas alterações pancreáticas. Demonstrou-se que a Pancreatite Aguda Experimental induzida por L-Arginina é um modelo não invasivo, tecnicamente acessível, que induz a necrose pancreática. Apresenta evolução autolimitada, com recuperação do parenquimatosa e função pancreática em duas semanas.

INTRODUÇÃO: Estudos experimentais sugerem que o uso de um bloqueador seletivo das células de Kupffer, cloreto de gadolínio, utilizado como pré-tratamento, 24 horas antes da indução da pancreatite, resulta na diminuição de mortalidade e da lesão pulmonar associada. OBJETIVO: Avaliar os efeitos do uso de cloreto de gadolínio como pré-tratamento e tratamento em um modelo experimental de pancreatite em ratos induzida por tauracolato de sódio a 3%. MÉTODOS: Ratos Wistar foram divididos em 5 grupos: grupo SF – controle com solução fisiológica intra-ductal e IV; grupo TS – controle com PA induzida por tauracolato de sódio a 3% e solução fisiológica a 0,9% IV; grupo GD – controle com SF intra-ductal e cloreto de gadolínio IV; grupo GDTS – pré-tratamento com GD (24h antes da indução da PA) e grupo TSGD – tratamento com GD (1h após a indução da PA). Após a indução da pancreatite foi realizado eutanásia em 24h. Dosagem sérica de amilase, transaminases e TNF-α; dosagem da atividade da MPO no tecido pulmonar; histologia pancreática e pulmonar. RESULTADOS: O número de animais mortos antes do término previsto do experimento foi significativamente maior no grupo TSGD (p=0,046). Os escores de pancreatite e de dano pulmonar foram mais elevados nos grupos que utilizaram tauracolato em comparação aos grupos com infusão intra-ductal de solução salina. Não houve diferenças nas demais variáveis estudadas na comparação entre os grupos TS; GDTS e TSGD. CONCLUSÕES: Não foram demonstrados benefícios com o uso de cloreto de gadolínio de forma profilática e terapêutica. / BACKGROUND: Some experimental studies suggest that the use of a selective blocker of Kupffer cells, gadolinium chloride as a pre-treatment, used 24 hours before the induction of pancreatitis, results in the decrease of mortality and associated lung injury. OBJECTIVE: To evaluate the effects of the use of gadolinium chloride treatment before and after induction of acute pancreatitis with sodium taurocholate 3% in rats. METHODS: Wistar rats were divided into 5 groups: group SF - control with saline intraductal and IV, group TS - with AP control induced by sodium tauracholate to 3% and saline IV; group GD - control with saline intra-ductal and gadolinium chloride IV; group GDTS - pre-treatment with GD (24 hours before the induction of AP) and group TSGD - treatment with GD (1h after the induction of AP). Euthanasia was carried out in 24 hours after the induction of pancreatitis. Analysis was made in serum amylase, transaminases and TNF-α; determination of the MPO activity in lung tissue, lung and pancreatic histology. RESULTS: The number of dead animals before the end of the experiment was significantly higher in group TSGD (p = 0,046). The scores of pancreatitis and lung damage were higher in the groups who used sodium tauracholate compared to groups with intra-ductal infusion of saline solution. There were no differences in other variables studied in comparison between groups TS; GDTS and TSGD. CONCLUSIONS: In this study the benefits with the use of gadolinium chloride as a prophylactic and therapeutic drug were not demonstrated.

Avaliaram-se as características bioquímicas e histológicas de um modelo experimental de pancreatite aguda necrotizante induzida por doses excessivas de arginina em ratos. A amostra constituiu-se de 105 ratos machos, da linhagem Wistar. Aos ratos do grupo experimento (n=70) administrou-se injeção intraperitoneal de 500mg/100g de peso corporal de L-Arginina dividida em doses iguais e injetada em duas etapas com intervalos de 15 minutos. No grupo controle (n=35), foi injetado solução salina isotônica por via intraperitoneal. Foram analisados 10 animais do grupo experimento e 5 do grupo controle em cada período de 6 h, 12 h, 24 h, 48 h, 72 h, 7 dias, 14 dias. Coletou-se sangue para exames laboratoriais e o pâncreas para análise em microscopia óptica. Doze a vinte e quatro horas após a injeção de arginina, os níveis séricos de amilase e lipase alcançaram valores máximos, comparados àqueles dos ratos controle, decrescendo gradualmente, alcançou-os na 48a hora sendo significativamente menor após 72 horas e sete dias. A atividade enzimática retornou a níveis basais após 14 dias. Os valores de amilase e lipase estavam normais em todos os tempos avaliados nos animais do grupo controle. À microscopia óptica, após injeção de arginina, observou-se arquitetura pancreática histologicamente preservada no período de 6 horas e evidenciando-se em 24 horas, importante edema intersticial. Após quarenta e oito horas, a arquitetura acinar estava parcialmente destruída com necrose celular focal atingindo sua máxima severidade ao ultrapassar-se 72 horas. No sétimo dia a necrose acinar e o edema haviam diminuído, iniciando-se a regeneração da arquitetura acinar. Observou-se a reconstrução estrutural pancreática após 14 dias. No grupo controle não foram encontradas alterações pancreáticas. Demonstrou-se que a Pancreatite Aguda Experimental induzida por L-Arginina é um modelo não invasivo, tecnicamente acessível, que induz a necrose pancreática. Apresenta evolução autolimitada, com recuperação do parenquimatosa e função pancreática em duas semanas.

INTRODUÇÃO: Estudos experimentais sugerem que o uso de um bloqueador seletivo das células de Kupffer, cloreto de gadolínio, utilizado como pré-tratamento, 24 horas antes da indução da pancreatite, resulta na diminuição de mortalidade e da lesão pulmonar associada. OBJETIVO: Avaliar os efeitos do uso de cloreto de gadolínio como pré-tratamento e tratamento em um modelo experimental de pancreatite em ratos induzida por tauracolato de sódio a 3%. MÉTODOS: Ratos Wistar foram divididos em 5 grupos: grupo SF – controle com solução fisiológica intra-ductal e IV; grupo TS – controle com PA induzida por tauracolato de sódio a 3% e solução fisiológica a 0,9% IV; grupo GD – controle com SF intra-ductal e cloreto de gadolínio IV; grupo GDTS – pré-tratamento com GD (24h antes da indução da PA) e grupo TSGD – tratamento com GD (1h após a indução da PA). Após a indução da pancreatite foi realizado eutanásia em 24h. Dosagem sérica de amilase, transaminases e TNF-α; dosagem da atividade da MPO no tecido pulmonar; histologia pancreática e pulmonar. RESULTADOS: O número de animais mortos antes do término previsto do experimento foi significativamente maior no grupo TSGD (p=0,046). Os escores de pancreatite e de dano pulmonar foram mais elevados nos grupos que utilizaram tauracolato em comparação aos grupos com infusão intra-ductal de solução salina. Não houve diferenças nas demais variáveis estudadas na comparação entre os grupos TS; GDTS e TSGD. CONCLUSÕES: Não foram demonstrados benefícios com o uso de cloreto de gadolínio de forma profilática e terapêutica. / BACKGROUND: Some experimental studies suggest that the use of a selective blocker of Kupffer cells, gadolinium chloride as a pre-treatment, used 24 hours before the induction of pancreatitis, results in the decrease of mortality and associated lung injury. OBJECTIVE: To evaluate the effects of the use of gadolinium chloride treatment before and after induction of acute pancreatitis with sodium taurocholate 3% in rats. METHODS: Wistar rats were divided into 5 groups: group SF - control with saline intraductal and IV, group TS - with AP control induced by sodium tauracholate to 3% and saline IV; group GD - control with saline intra-ductal and gadolinium chloride IV; group GDTS - pre-treatment with GD (24 hours before the induction of AP) and group TSGD - treatment with GD (1h after the induction of AP). Euthanasia was carried out in 24 hours after the induction of pancreatitis. Analysis was made in serum amylase, transaminases and TNF-α; determination of the MPO activity in lung tissue, lung and pancreatic histology. RESULTS: The number of dead animals before the end of the experiment was significantly higher in group TSGD (p = 0,046). The scores of pancreatitis and lung damage were higher in the groups who used sodium tauracholate compared to groups with intra-ductal infusion of saline solution. There were no differences in other variables studied in comparison between groups TS; GDTS and TSGD. CONCLUSIONS: In this study the benefits with the use of gadolinium chloride as a prophylactic and therapeutic drug were not demonstrated.