Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T14:41:55Z No. of bitstreams: 1 Tese_TatianeTeixeiradeMelo.pdf: 3978043 bytes, checksum: 1a0b6aa00d756ed3ab737751773db659 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T14:42:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_TatianeTeixeiradeMelo.pdf: 3978043 bytes, checksum: 1a0b6aa00d756ed3ab737751773db659 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T14:42:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_TatianeTeixeiradeMelo.pdf: 3978043 bytes, checksum: 1a0b6aa00d756ed3ab737751773db659 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T14:42:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_TatianeTeixeiradeMelo.pdf: 3978043 bytes, checksum: 1a0b6aa00d756ed3ab737751773db659 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Segundo a Organização Mundial da Saúde (WHO), atualmente 200 milhões de pessoas estão infectadas por espécies do gênero Schistosoma, uma vacina, administrada sozinha ou em combinação com drogas anti-helmínticas, seria importante para o controle da esquistossomose. Recentemente, nosso grupo demonstrou que uma preparação do tegumento de esquistossômulo do S. mansoni (Smteg) é capaz de elicitar uma diminuição estatisticamente significativa na carga parasitária quando formulado com adjuvante de Freund. Neste trabalho nós avaliamos a imunoproteção induzida em camundongos pelo Smteg sem adjuvante ou Smteg associado ao Alum ou Alum + CpG. Na ausência de adjuvante não houve diminuição estatisticamente significativa da carga parasitária. Apesar disso, o Smteg foi capaz de ativar a resposta imune produzindo níveis significativos de anticorpos específicos, aumentando a porcentagem de células TCD4+IFN-γ+ e de células TCD4+IL-10+ no baço e aumentando a produção das citocinas IFN-γ e IL-10 pelas células esplênicas e IL-10 por células dendríticas,. Ao contrário, a associação Smteg/alum/CpG-ODN foi capaz de induzir uma redução parcial na carga parasitária (43,1%) além de uma reduzir significativamente o número de ovos eliminados nas fezes. Esta resposta protetora foi associada com um perfil predominantemente do tipo Th1, com o aumento na produção de IgG2c, IFN-γ e TNF-α. O papel dos anticorpos na eliminação do parasito em animais imunizados com o Smteg também foi avaliado, e demonstramos que anticorpos específicos estão envolvidos na eliminação do parasito. Uma vez observada a importância dos anticorpos na imunidade protetora, realizamos análises proteômicas e sorológicas pela técnica de Western-blotting bidimensional (2D-WB) para identificar candidatos vacinais. Uma das proteínas identificadas, a ciclofilina do S. mansoni (SmCyp), foi utilizada como antígeno em um protocolo de imunização gênica, porém não observamos redução significativa da carga parasitária e do número de ovos nas fezes e no intestino e fígado de camundongos imunizados, apesar da imunização diminuir significativamente a área dos granulomas hepáticos em animais imunizados. Nossos resultados demonstram a importância do tegumento do esquistossômulo do S. mansoni como fonte de antígenos vacinais para a esquistossomose mansoni; a importância dos anticorpos na eliminação do parasito e identifica proteínas candidatas a serem utilizadas em formulações vacinais, abrindo novas possibilidades de estudos avaliando as mesmas em diferentes formulações e estratégias vacinais em ensaios pré-clinicos / According to the World Health Organization (WHO), currently 200 million people are infected by Schistosoma species, the vaccine, administered alone or in association with antihelminthic drugs, would be important to control schistosomiasis. Recently, our group demonstrated that the schistosomula tegument preparation from S. mansoni (Smteg) is able to induce a significant reduction in worm burden when formulated to Freund adjuvant. In this work we evaluated the protection induced by Smteg without adjuvant or Smteg with Alum or Alum + CpG. Without adjuvant any significant reduction in parasite burden was observed. However, Smteg immunization activate immune response inducing significant production of specific antibody; increased percentage of TCD4+IFN-γ+ and TCD4+IL-10+ cells in spleen and increased production of IFN-γ and IL-10 cytokines by spleen cell and IL-10 by dendritic cells. On the other hand Smteg/alum/CpG-ODN formulation was able to induce partial reduction in worm burden (43.1%) and also a significant reduction in the number of eggs eliminated in the feces. This protective response was associated with a predominant Th1 type of immune response, with increased production of specific IgG2c, IFN-γ and TNF-α. The role of antibodies in the elimination of parasites in animals immunized with Smteg was also evaluated and we have demonstrated that specific antibodies are involved in the elimination of the parasite. Once we have observed the importance of antibodies in protective immunity, we performed proteomic and serological analyzes by two-dimensional Western blotting (WB 2D) technique to identify vaccine candidates. One of the identified proteins, the S. mansoni cyclophilin (SmCyp), was used as antigen in a genetic immunization protocol, although no significant reduction in parasite burden and the number of eggs in the feces and intestine and liver of immunized mice was observed, immunization significantly decrease the area of hepatic granulomas in immunized animals. Our results demonstrate the importance of S. mansoni schistosomula tegument as a source of vaccine targets for schistosomiasis; the importance of antibodies in parasite elimination and also identify proteins to be used in vaccine formulations, opening new studies possibilities in the evaluation of these candidates in different formulations and vaccination strategies in preclinical trials.

Made available in DSpace on 2015-05-27T13:34:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 695.pdf: 4459312 bytes, checksum: 5c20207fa2c78a768fa3f491b2525c00 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A história natural da leishmaniose tegumentar americana apresenta poucos estudos relacionados ao conhecimento dos reservatórios associados à Leishmania (Viannia) braziliensis. Com o objetivo de caracterizar a infecciosidade experimental de Necromys lasiurius, Nectomys squamipes e Rattus rattus, para incriminação de hospedeiros reservatórios de L. (V.) braziliensis, foram realizados dois experimentos, utilizando Lutzomyia longipalpis e dez animais de cada espécie, ambos colonizados em laboratório. Como grupo controle foi utilizado dois hamsters (Mesocricetus auratus) para cada grupo de dez animais. No primeiro experimento, os animais foram inoculados com 5,5x106/ml de promatigotas de fase log de L. (V.) braziliensis e o segundo com um inóculo de 2,8x105/ml, para posterior realização de xenodiagnóstico. Amostras obtidas de sangue, pele, fígado e baço dos animais e exemplares de flebotomíneos foram processadas para a visualização do parasito, através do exame direto e detecção de DNA por meio de PCR específica para o subgênero Viannia. No primeiro experimento, 570 exemplares de fêmeas foram submetidos ao xenodiagnóstico e dentre estes, 338 foram dissecados e observados formas compatíveis com promastigotas em 7,7 por cento. Dos 26 animais, 06 apresentaram resultados positivos de infectividade no teste de PCR e 08 exemplares de flebotomíneos foram positivos. No segundo experimento, 678 fêmeas foram submetidas ao xenodiagnóstico e 467 dissecadas. No exame direto, 37,3 por cento foram positivas. Foi verificada a positividade no teste de PCR em 15, dos 29 animais submetidos ao xenodiagnóstico. 27 exemplares de flebotomíneos foram positivos na PCR específica. Estes resultados sugerem que os roedores silvestre N. lasiurus, N. squamipes e o sinantrópico R. rattus são infectivos e prováveis hospedeiros reservatórios de L. (V.) braziliensis

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-14T13:27:59Z No. of bitstreams: 1 Segemar PDF Dissertacao_DIP_JosianeValadaoLopes.pdf: 2965756 bytes, checksum: 73c95fa710aaa33622a85777e6d3f780 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-14T13:28:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Segemar PDF Dissertacao_DIP_JosianeValadaoLopes.pdf: 2965756 bytes, checksum: 73c95fa710aaa33622a85777e6d3f780 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-14T13:28:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Segemar PDF Dissertacao_DIP_JosianeValadaoLopes.pdf: 2965756 bytes, checksum: 73c95fa710aaa33622a85777e6d3f780 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T13:28:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Segemar PDF Dissertacao_DIP_JosianeValadaoLopes.pdf: 2965756 bytes, checksum: 73c95fa710aaa33622a85777e6d3f780 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A proposta deste trabalho foi estudar algumas das variáveis envolvidas na transmissão da leishmaniose visceral (LV) em oito bairros do município de Sabará (MG). Para o levantamento da fauna de flebotomíneos, influência dos fatores climáticos, identificação de repasto sanguíneo e infecção natural por Leishmania, para isso foram realizadas capturas utilizando armadilhas luminosas do tipo HP, tanto no peri como no intradomicílio, nos seguintes bairros: Alvorada, Novo Alvorada, Alvorada Velho, Bom Retiro, Nova Vista, Casa Branca, Rio Negro e Ana Lúcia, no período de janeiro de 2011 a dezembro 2012. Além desses estudos, foram realizados dois inquéritos caninos censitários nos mesmos bairros, nos anos de 2011 e 2012, para o cálculo da taxa de positividade. Para análises parasitológicas e moleculares, foram selecionados aleatoriamente 50 cães soropositivos para os testes de RIFI e ELISA, que foram eutanasiados e necropsiados para obtenção de amostras de pele, linfonodo mesentérico e baço, além de aspirado de medula óssea. Com essas amostras, foram realizados os testes: exame direto (parasitológico), PCR e mielocultura visando confirmar a infecção e identificar a espécie de Leishmania circulante. A fauna flebotomínica foi constituída de quatro espécies, sendo Lutzomyia longipalpis a mais abundante, totalizando 95,0% dos exemplares capturados. Destes, 23,0% foi capturado no intradomicílio. Verificou-se uma tendência no aumento do número de espécimens após o período chuvoso. Das 28 fêmeas ingurgitadas, 67,9% se alimentaram no homem (Homo sapiens) e 25,0% tiveram como fonte alimentar a ave (Gallus gallus). Nove pools foram utilizados para verificar a infecção natural, destes três se apresentaram positivos e, após sequenciamento de DNA, foi observado que a espécie circulante nos vetores foi Leishmania infantum. A taxa média de infecção canina foi de 4,25% em 2011 e 3,34% em 2012. A positividade das amostras (pele, baço, medula e linfonodo) obtidas dos cães soropositivos foi de 100,0% pela PCR, 76,0% pela mielocultura e 66,0% pelo exame parasitológico direto. Entre os quatro tipos de amostras estudadas, o linfonodo foi o tecido que apresentou maior positividade (98,0%). O sequenciamento de DNA das amostras positivas de linfonodo indicou Le. Infantum como sendo a espécie circulante nos cães do município. Após se correlacionarem os casos humanos, caninos e a presença da espécie Lu. longipalpis, encontrada positiva para Le. infantum, pode-se sugerir que os bairros Alvorada e Nova Vista merecem atenção especial como importantes áreas de risco para LV no município. / The purpose of the present study was to investigate some epidemiological aspects related the transmission of visceral leishmaniasis (VL) in eight districts of the town of Sabará, in the Brazilian state of Minas Gerais. We surveyed the local phlebotomine sand fly fauna and the main feeding sources, analyzed the interference of climate variables on the populational fluctuation and verified the rates of natural infection of vector species of VL. The entomological captures were performed with HP light traps, from January 2011 to December 2012, in both intra and peridomiciles of houses located in the following districts of Sabará: Alvorada, Novo Alvorada, Alvorada Velho, Bom Retiro, Nova Vista, Casa Branca, Rio Negro and Ana Lúcia. During our study, the plebotomine sand fly population showed a tendency to increase after the rainy period. Four species of phlebotomine sand flies were present, most of them (95.0%) being Lutzomyia longipalpis. Twenty-three percent of them was captured inside the houses. Amongst 28 engorged females, 67.9% had fed on humans (Homo sapiens) and 25% on chicken (Gallus gallus). Leishmania infantum DNA was genotyped in three of nine pooled samples of Lu. longipalpis. Two canine census surveys were performed in the same districts allowing the calculation of the average positivity rate of canine VL, in each year of study, as 4.25% in 2011 and 3.34% in 2012. Fifty among the seropositive dogs for VL faded to euthanasia were randomly selected for parasitological and molecular analyses of tissues (skin, mesenteric lymph nodes and spleen, as well as bone marrow aspirates). All those samples gave 100% of positivity by PCR, 76% positivity by myeloculture and 66% positivity by direct parasitological examination. The highest overall positivity (98%) was obtained with lymph nodes, where the infecting parasite was also genotyped as L. infantum. The combined analysis of the human and canine cases of VL and the vector population data in Sabará, allow us to suggest that Alvorada and Nova Vista districts deserve special attention as main risk areas of VL in the city.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-06-18T14:14:24Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_ChristianeSantosMatos (1).pdf: 3868787 bytes, checksum: aad780570d3b10f7014187a01c3cc982 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-06-18T14:14:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_ChristianeSantosMatos (1).pdf: 3868787 bytes, checksum: aad780570d3b10f7014187a01c3cc982 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-06-18T14:14:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_ChristianeSantosMatos (1).pdf: 3868787 bytes, checksum: aad780570d3b10f7014187a01c3cc982 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-18T14:14:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_ChristianeSantosMatos (1).pdf: 3868787 bytes, checksum: aad780570d3b10f7014187a01c3cc982 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou / Cenário de importantes atividades no controle da doença de Chagas (DCh), Bambuí foi o primeiro município brasileiro a alcançar a vigilância epidemiológica em 1974. O presente trabalho buscou caracterizar a atual situação epidemiológica da doença de Chagas no município de Bambuí, identificando principais grupos afetados, formas clínicas predominantes e grupos do parasito circulantes nos pacientes. Foram amostrados 1.782 indivíduos, dos quais 138 (7,7%) foram sororeagentes para T. cruzi. Para ambos os gêneros predominaram soros positivos acima dos 60 anos de idade, sendo detectadas duas mulheres mais jovens (32 e 40 anos) infectadas. Nos pacientes clinicamente avaliados, foi possível diagnosticar as formas clínicas digestiva (7/101), indeterminada (14/101), cardíaca (30/101) e cardiodigestiva (50/101), bem como a presença do grupo DTU TcII, excetuando apenas dois casos de infecção mista (DTU TcI e TcII). Dos 5.429 óbitos ocorridos em Bambuí ao longo de 31 anos, 638 (11,8%) foram devido à DCh, sendo 54,5% (348/638) referente ao sexo masculino, 45,1% (288/638) ao sexo feminino e 0,3% (2/638) tiveram registro de sexo ignorado. A faixa etária na qual se registrou o maior número de óbitos no município foi de 60 a 69 anos. Com relação à morbidade, observou-se um total 22 registros de internações em Bambuí pelo Sistema Único de Saúde no período de 1984 a 2007, sendo 7 (31,82%) referentes à homens e 15 (38,69%) à mulheres. Este trabalho pode servir como um alerta ao cuidado dos pacientes crônicos que ainda requerem atenção médica especializada e reforça a necessidade de constantes medidas de vigilância epidemiológica à endemia chagásica no município de Bambuí. / Recognising the importance of Chagas disease (Chd) in Brazil, Bambuí set up epidemiological surveillance in 1974 and was the first municipality to do so. This study aimed to characterize the current epidemiological situation of Chd in Bambuí, identifying main groups affected, the predominant clinical forms and the parasite groups circulating in patients. We sampled 1.782 individuals, of which 138 (7.7%) were tested positive for Trypanosoma cruzi. Both genders above 60 years of age were seropositive for Chagas disease, also being detected in two younger women (32 and 40 years of age). In patients clinically evaluated it was possible to diagnose digestive (7/101), undetermined (14/101), cardiac (30/101) and cardiodigestive clinic forms (50/101), as well as the presence of DTU TCII groups, except in only two cases of mixed infection (DTU TcI and TCII). Out of the 5.429 deaths occurring in Bambuí over 31 years, 638 (11.8%) were due to Chd, being 54.5% (348/638) for males, 45.1% (288/638) for females and 0.3% (2/638) had unknown sex registry. The age range at which the highest number of deaths in the municipality were registered was 60 to 69 years. With respect to morbidity, there was a total of 22 records of hospitalizations in Bambuí by the Brazilian Unified Health System during the period of 1984-2007, with 7 (31.82%) related to men and 15 (38.69%) to women. This study can be useful as a warning for the care of chronic patients who still require specialized medical attention and reinforces the need for constant surveillance measures for Chd in Bambuí.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-06-18T17:41:26Z No. of bitstreams: 1 Fábio Ribeiro Queiroz - Caracterização da maquinaria de processamento de miRNAs e piRNAs em Biomphalaria glabrata e o efeito da infecção por Schistosoma mansoni no processo - 2015.pdf: 3625694 bytes, checksum: fa248ee7f88a52b2c4f2165fa5d9b5e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-06-18T17:41:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Fábio Ribeiro Queiroz - Caracterização da maquinaria de processamento de miRNAs e piRNAs em Biomphalaria glabrata e o efeito da infecção por Schistosoma mansoni no processo - 2015.pdf: 3625694 bytes, checksum: fa248ee7f88a52b2c4f2165fa5d9b5e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-06-18T17:41:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Fábio Ribeiro Queiroz - Caracterização da maquinaria de processamento de miRNAs e piRNAs em Biomphalaria glabrata e o efeito da infecção por Schistosoma mansoni no processo - 2015.pdf: 3625694 bytes, checksum: fa248ee7f88a52b2c4f2165fa5d9b5e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-18T17:41:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fábio Ribeiro Queiroz - Caracterização da maquinaria de processamento de miRNAs e piRNAs em Biomphalaria glabrata e o efeito da infecção por Schistosoma mansoni no processo - 2015.pdf: 3625694 bytes, checksum: fa248ee7f88a52b2c4f2165fa5d9b5e4 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou / A Organização Mundial de Saúde estima que cerca de 240 milhões de pessoas, em 78 países, necessitam de tratamento para esquistossomose, uma doença crônica causada por trematódeos do gênero Schistosoma. No Brasil, o Schistosoma mansoni é o único representante deste gênero, cuja passagem pelo hospedeiro invertebrado, caramujos do gênero Biomphalaria, é obrigatória antes de infectar um hospedeiro mamífero, entre eles o homem. A interação parasito-hospedeiro invertebrado é complexa, podendo o grau de susceptibilidade do caramujo à infecção variar desde extremamente permissivo até completamente resistente. Com o genoma e transcriptoma de B. glabrata disponíveis, o estudo de genes relacionados à regulação da expressão gênica, principalmente aqueles responsáveis pela maquinaria de processamento de miRNAs e piRNAs poderão auxiliar no entendimento da biologia do vetor B. glabrata bem como sua relação como o parasito S. mansoni. Alguns aspectos da interação parasito-hospedeiro invertebrado continuam pouco explorados, incluindo a participação dos pequenos RNAs não codificadores de proteínas como miRNAs, siRNAs e piRNAs. Utilizando ferramentas de bioinformática e PCR quantitativa, buscamos identificar e caracterizar a maquinaria de processamento de miRNAs e piRNAs em B. glabrata. Nosso trabalho demonstra que a maquinaria necessária para o processamento destas moléculas está ativa em B. glabrata com expressão gênica diferencial dos genes Argonauta, Drosha, Piwi, Exportina 5 e Tudor em diferentes estágios de desenvolvimento do animal bem como durante a infecção pelo S. mansoni. As análises de bioinformática utilizadas nesse trabalho mostraram a alta conservação dos genes envolvidos na maquinaria de miRNAs e piRNAs utilizando análise e distribuição de domínios conservados, análise de resíduos do sítio catalítico bem como análise filogenética. Estes dados sugerem que a maquinaria de silenciamento mediada por miRNAs e piRNAs interferem na biologia do caramujo durante todo o seu ciclo de vida, além de contribuir, de maneira ainda indefinida, na relação B. glabrata/S. mansoni. Estudos mais detalhados necessitarão ser realizados para confirmar a participação das preditas proteínas da via de miRNAs e piRNAs na relação parasito/hospedeiro, principalmente sua participação efetiva em seus genes alvos, uma vez que o parasito S. mansoni não possui expressa a via de piRNAs em seu genoma / The World Health Organization (WHO) estimates that about 240 million people in 78 countries require treatment for schistosomiasis, a chronic disease caused by trematodes of the genus Schistosoma. In Brazil, the Schistosoma mansoni is the only representative specie, whose passage through the invertebrate host, snails of the genus Biomphalaria, is mandatory before infecting a mammalian host, including humans. The interaction between the invertebrate host and the parasite is complex and the degree of susceptibility of the snail to infection ranges from extremely permissive to completely resistant. With the genome and transcriptome of B. glabrata available, the study of genes related to the regulation of gene expression, particularly those responsible for miRNAs and piRNAs processing machinery may assist in vector biology understanding B. glabrata well as its relation to the parasite Schistosoma mansoni. Some aspects of this interaction are still poorly explored, including the participation of small RNAs not protein-coding as miRNAs, siRNAs and piRNAs. Using bioinformatics tools and quantitative PCR, we seek to identify and characterize the processing machinery of miRNAs and piRNAs in B. glabrata. Our work shows that the protein machinery required for processing these molecules are active at the level of gene transcription in B. glabrata with a differential expression of the genes Argonauta, Drosha, Piwi, Exportin 5 and Tudor in different developmental stages and also during infection with S. mansoni. The bioinformatics analysis used in this study showed the high conservation of genes involved in miRNAs and piRNAs machinery using analysis and distribution of conserved domains, the catalytic site residue analysis and phylogenetic analysis. These data suggest that the silencing machinery mediated by miRNAs and piRNAs interfere in the snail biology throughout its life cycle, and contribute, even indefinitely, in relation B. glabrata/S. mansoni. More detailed studies need to be performed to confirm the participation of the predicted proteins of miRNAs and piRNAs pathway in the parasite/host relationship, mainly their effective participation in their target genes, since the parasite S. mansoni has not expressed the piRNAs pathway in its genome.

Made available in DSpace on 2015-11-18T13:20:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 debora_mattos_ioc_mest_2014.pdf: 25027935 bytes, checksum: 36794f8df745a06c2879690ef1660179 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-04-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A susceptibilidade de Rhodnius prolixus ao T. rangeli depende da cepa do parasita e das interações moleculares no intestino e na hemocele do vetor. T. rangeli pode modular a resposta imune do vetor, preparando o hospedeiro à invasão e a sobrevivência dos parasitas na hemocele, superando assim as adversidades encontradas nos diferentes órgãos do inseto. Neste trabalho, são discutidos os mecanismos destas interações, destacando também o papel da microbiota intestinal e outros mecanismos importantes para o desenvolvimento do parasita. Inicialmente nossas investigações foram realizadas para comparar aspectos da imunidade celular e humoral de ninfas de 4º e 5º estádio de R. prolixus em resposta a uma infecção oral com a cepa Macias de T. rangeli. Na infecção oral em 4º estádio (acompanhamento em longo prazo), não foi observada diferença na mortalidade e muda ao comparar com os insetos controle não infectados. Constatou-se um número aumentado de flagelados no intestino das ninfas de 5º estádio durante o curso da infecção. Também, não houve alteração significativa na contagem de microagregados hemocitários (nódulos) em infecções de 4º estádio, enquanto em ninfas infectadas em 5º estádio houve um aumento no número de nódulos. Por outro lado, não houve diferença no número de hemócitos em ambas as infecções Demonstramos nos dois tipos de infecção oral com T. rangeli em R. prolixus, em comparação com os insetos controle não infectados, que o intestino médio atenuou a atividade de fenoloxidase, aumentou as atividades antibacterianas testadas in vitro contra Serratia marcescens, e alterou a expressão relativa de genes que codificam para defensinas (DefA, DefB, DefC), prolixicina e lisozimas (LisAe LisB). Isto sugere a influência destas atividades sobre a contagem de unidades formadoras de colônias, encontradas diminuídas no trato digestivo do inseto. Em uma segunda etapa do estudo, foram comparadas as respostas de defesa em ninfas de 5º estádio de R. prolixus inoculadas com T. rangeli, cepas Macias e H14. A cepa Macias de T. rangeli não aumentou a mortalidade desses insetos, apresentou capacidade de sobreviver e se multiplicar na hemolinfa, aumentou o número de hemócitos, e induziu alta atividade de fenoloxidase. Em contraste, estes mesmos parâmetros medidos em insetos inoculados com a cepa H14 de T. rangeli foram diferentes daqueles encontrados com inoculação de insetos usando a cepa Macias. Conclui-se que R. prolixus responde de forma distinta frente a vias de infecção oral ou por inoculação com T. rangeli, sugerindo que a capacidade infectiva deste protozoário, pode ser alterada por modulação do sistema imune do vetor

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-23T13:09:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_ClariceCarvalhoAlves.pdf: 3366605 bytes, checksum: 500faa250a99b7c383180d2bec4de2e8 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-23T13:09:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_ClariceCarvalhoAlves.pdf: 3366605 bytes, checksum: 500faa250a99b7c383180d2bec4de2e8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-23T13:09:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_ClariceCarvalhoAlves.pdf: 3366605 bytes, checksum: 500faa250a99b7c383180d2bec4de2e8 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brazil / O desenvolvimento de uma vacina para a esquistossomose, juntamente com a quimioterapia, seria de grande impacto para o controle e eliminação da doença. Nesse sentido, vários antígenos do parasito já foram testados a fim de avaliar a capacidade dos mesmos em induzirem proteção contra a infecção pelo Schistosoma mansoni. Porém, apesar de alguns antígenos apresentarem bons resultados na proteção contra a infecção, esses nunca foram testados em modelos experimentais previamente expostos a antígenos do parasito. No caso da esquistossomose, isso seria importante já que os moradores de áreas endêmicas, população alvo de uma vacina para a doença, passam por repetidas infecções ao longo de suas vidas. Diante dessa necessidade, duas proteínas de tegumento de Schistosoma mansoni, Sm22.6 e Sm29, merecem destaque já que têm sido associadas à resistência à infecção e reinfeção em moradores de áreas endêmicas, e por terem induzido proteção parcial em ensaios envolvendo a imunização de camundongos C57BL/6 naïve. Portanto, este trabalho objetivou avaliar a habilidade das proteínas recombinantes, Sm22.6 e Sm29, em induzirem proteção em animais BALB/c que já tenham sido previamente infectados e tratados. Nós também avaliamos a capacidade das proteínas Sm22.6r e Sm29r em induzirem proteção em camundongos BALB/c naïve, já que nos trabalhos anteriores essas foram testadas em animais da linhagem C57BL/6. Nossos resultados demonstraram que, diferentemente dos trabalhos anteriores, a imunização de animais BALB/c naïve com Sm22.6r ou Sm29r não foi capaz de induzir proteção. Apesar disso, através de um ensaio de imunofluorescência, foi possível observar que os anticorpos produzidos, em resposta à imunização com Sm22.6r ou Sm29r, foram capazes de reconhecer a forma nativa dessas proteínas, na superfície do parasito. A imunização de animais, infectados e tratados, com Sm22.6r+Freund, embora tenha desencadeado uma resposta imune robusta, também não foi capaz de conferir imunidade protetora. Por outro lado, camundongos, infectados/tratados, imunizados com Sm29r+Freund apresentaram significativa redução da carga parasitária (proteção de 26%-48%) após três doses da vacina. Esta formulação vacinal induziu uma produção significativa das citocinas IL-2, IFN-γ, IL-17 e IL-4; uma resposta humoral vigorosa com produção de IgG, IgG1, IgG2a e IgE específicos; e um aumento significativo no percentual de células TCD4+ de memória central. Os adjuvantes Alum e MPL também foram formulados juntamente com a Sm29r. Os resultados demonstraram que somente a formulação vacinal Sm29r+Alum foi capaz de conferir proteção (29%-37%), desencadeando uma produção significativa de IL-2, IL-17 e IL-10, e um aumento do percentual de células TCD4+ produtoras de IFN-γ. Além disso, esses animais apresentaram níveis significativos de anticorpos específicos IgG, IgG1, IgG2a e IgE e um aumento significativo no percentual de células B de memória. Nossos resultados confirmam o papel imunoprotetor da proteína Sm29r, reforçando seu potencial como candidata vacinal. / The development of a vaccine against schistosomiasis together with chemotherapy would have a great impact in the disease control and elimination. In this sense, several parasite antigens have been tested in order to assess its ability to induce protection against Schistosoma mansoni infection. Despite the great results observed after mice immunization with those antigens, they have never been tested in mice previously exposed to the parasite antigens. In the case of schistosomiasis, this is an important assessment to be done, since the residents of endemic areas, target population of a schistosomiasis vaccine, are exposed to several infections through life. In this context, two parasite tegument proteins, Sm22.6 and Sm29, are promising candidates, that have been associated with resistance to infection and reinfection in individuals living in endemic areas, and also induce partial protection against schistosomiasis in immunization trials using C57BL/6 naïve mice. Therefore, this work aimed to evaluate Sm22.6r and Sm29r ability to induce protection in BALB/c mice previously infected with S. mansoni and treated with Praziquantel. We also evaluated the Sm22.6r and Sm29r ability to induce protection in BALB/c naïve mice, since, previous studies were performed in C57BL/6 strain. Unlike previous works, our results showed that neither immunization with Sm29r nor immunization with Sm22.6r induced reduction in parasite burden in BALB/c naïve mice. Nevertheless, an immunofluorescence staining assay demonstrated that antibodies produced in response to mice immunization with rSm22.6 or rSm29 were able to recognize the native proteins in the parasite surface. In infected and treated mice, the immunization with Sm22.6r plus Freund failed to induce protection, despite the robust immune response observed. In the other hand, infected and treated mice, immunized with Sm29r+Freund, presented a significant reduction in parasite burden (26%- 48% of protection). This immunization trial induced a significant production of IL-2, IFN-γ, IL-17 and IL-4 cytokines; a vigorous humoral response with a production of increased levels of specific IgG, IgG1, IgG2a and IgE antibodies; and a significant increase in the percentage of TCD4+ memory cells. Sm29r were also formulated with Alum and MPL adjuvants. The results of trials using these formulations demonstrated that only Sm29r+Alum vaccine formulation was able to confer protection (29%-37%), inducing a significant production of IL-2, IL-17 and IL-10 cytokines, and an increase in the percentage of TCD4+ IFN-γ + cells. Moreover, these animals produced higher levels of specific IgG, IgG1, IgG2a and IgE, and a significant increase in the percentage of B memory cells. Our results demonstrated that Sm29r retains its ability to induce protection in previously infected/treated mice, reinforcing its potential as a vaccine candidate.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-30T12:31:35Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_WanderdeJesusJeremias.pdf: 10066652 bytes, checksum: ebdb6e40220315595222399b0ea10c0c (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-30T12:31:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_WanderdeJesusJeremias.pdf: 10066652 bytes, checksum: ebdb6e40220315595222399b0ea10c0c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-30T12:31:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_WanderdeJesusJeremias.pdf: 10066652 bytes, checksum: ebdb6e40220315595222399b0ea10c0c (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Dentre as formas evolutivas do Schistosoma mansoni, o esquistossômulo é uma das mais estudadas para desenvolvimento de novos fármacos e sistemas diagnósticos. Embora a transformação in vitro seja vantajosa, é importante discutir as limitações do uso de resultados obtidos a partir de parasitos cultivados in vitro em relação aos obtidos no processo natural de infecção. No presente trabalho, esquistossômulos obtidos in vivo e in vitro foram comparados em relação a capacidade de captar sondas fluorescentes, específicas para estruturas internas celulares ou membranas superficiais do parasito. As sondas empregadas para membranas e estruturas internas mostraram marcação similar entre parasitos obtidos in vitro, por transformação mecânica (Mec) e por penetração em pele (Pel). No entanto, diferenças foram observadas quando estes parasitos foram comparados a outros obtidos in vivo pelo método de Clegg (Clegg et al, 1965), sendo detectado um aumento da permeabilidade de membranas. Os dados sugerem que nos esquistossômulos cultivados in vivo o metabolismo é mais ativo nas células superficiais e que durante sua permanência por até 72 horas na pele há um extenso turnover da superfície do parasito, envolvendo moléculas internas e um aumento da liberação de imunógenos. A aumentada permeabilidade pode permitir ainda a captação de moléculas, capazes de estimular o crescimento do parasito. Além disso, bibliotecas de esquistossômulos Mec cultivados em soro portal (SPO3h e SPO12h) e soro periférico de hamster (SPE3h, SPE12h) foram comparadas utilizando sequenciamento de nova geração (NGS) e análise da expressão de genes específicos. Após o sequenciamento e análise dos genes expressos uma alta similaridade entre as réplicas foi encontrada. Comparando as amostras SPO3h versus SPO12h 58 transcritos se mostraram diferencialmente expressos. De acordo com as anotações de termos de ontologia gênica (GO) os genes diferencialmente expressos após 12 horas de contato com o soro portal de hamster, estão ligados a processos importantes ao desenvolvimento até vermes adultos. Assim, este estudo viabilizou um maior entendimento de mecanismos de controle sobre a internalização de moléculas pelo parasito no estádio larvário intravascular, bem como da regulação de sua expressão de genes quando o mesmo se encontra no sistema porta hepático do hospedeiro, onde as formas adultas são essenciais para desenvolvimento da doença. / Among the different forms of the Schistosoma mansoni, the schistosomulum is widely explored in a broad range of survey, aiming to the development of new drugs and diagnostic methods. In spite of the advantages inherent to in vitro transformation, it is important to discuss the limitations in take the results achieved from parasites cultured in vitro as representative of those obtained from the natural infection. In present work, schistosomula obtained in vivo and in vitro were compared in their ability to capture fluorescent probes for specific internal structures or surface membranes. The probes showed similar staining in parasite obtained by both methods, mechanical transformation (Mec) and by active skin penetration (Pel). However, differences were observed when those parasites were compared to other obtained in vivo, through the Clegg’s method (Clegg et al., 1965). The membrane permeability was shown to be increased. The data suggest that in schistosomula obtained in vivo and kept inside the skin for a period of time up to 72 hours the metabolism is more active in cells of the surface and, further there is a huge turnover in the surface of the parasite, involving internal molecules and increasing in immunogens release. The increased permeability can also allow it to capture molecules, capable of stimulate the parasite growing. Furthermore, replicates of cDNA libraries obtained from mechanical schistosomula cultured in presence of serum from portal blood (SPO3h, SPO12h) and serum from peripheral blood (SPE3h, SPE12h) of hamster were also compared by using next generation sequencing (NGS) and gene expression analysis of specific genes. After sequencing and statistical analysis of gene expression, it was observed a high similarity among the libraries. When comparing the samples from SPO3h versus SPO12h libraries, 58 genes were found differentially expressed. According to the annotation data of the gene ontology (GO), the differentially expressed genes in schistosomula, after 12 hours of the contact with serum from hamster portal blood, are related to processes important to its development to adult worm. Thereby, this work improved the knowledge of mechanisms evolved in internalization of molecules by the parasite of the intravascular stage, as well as highlighted the regulation of the gene expression when it is within portal venous system of the host, where adult forms are essential for the disease development.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-04-11T16:10:17Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_LaraSaraiva.pdf: 5064404 bytes, checksum: 0de0a8fd07fbd0e6a577f8be885ebb1b (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-04-11T16:10:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_LaraSaraiva.pdf: 5064404 bytes, checksum: 0de0a8fd07fbd0e6a577f8be885ebb1b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-11T16:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_LaraSaraiva.pdf: 5064404 bytes, checksum: 0de0a8fd07fbd0e6a577f8be885ebb1b (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / O município de Belo Horizonte e sua região metropolitana ilustram o mais sério exemplo de expansão da leishmaniose visceral no sudest e do Brasil. O município e o parque Estadual do Sumidouro localizam-se no bioma cerrado, segundo ma ior bioma terrestre da América do Sul. Os objetivos deste projeto foram: estudar a variação sazonal da fauna flebotomínica no DS Venda Nova (Belo Horizonte) e no PES; descrever os padrões de riqueza e diversidade fauna flebotomínica nas formações vegetais do PES e no DS Venda Nova; de terminar a taxa de infecção natural de fêmeas capturadas; est udar a variação morfológica das populações de Lu. longipalpis coletadas nos diferentes ambientes; aval iar os impactos das ações de controle realizadas no DS Venda Nova nas taxas de oc orrência sazonal e dens idade das populações de flebotomíneos. Foram realizadas coletadas mensais no pe ríodo de agosto de 2011 a agosto de 2013. Os insetos foram identificados de acordo com Galati 2003. As fêmeas coletadas não ingurgitadas foram submetidas à extração de DNA e reações de PCR e de PCR-RFLP para a averiguação da infecção natural por espécies de Leishmania. Para comparação das localidades de estudo foi utilizada análise descritiva e índices ecológicos. Para a comparação morfológica trinta casais (quinze proveni ente do DS Venda Nova e quinze do PES) da espécie Lu. longipalpis foram medidos, e foram comparados tantos as médias como as variâncias dos caracteres entre os grupos. As ações de contro le da LV no DS Venda Nova realizadas nos período de janeiro de 2011 a dezembro de 2013 foram analisadas descritivamente e relacionadas à curva sazonal de Lu. longipalpis . A riqueza, a diversidade e a equitabilidade da fauna de flebotomíneos foram marcadamente dife rentes entre o DS Venda Nova e o PES. Na área urbana foram coletados 2.247 espécimes pertencentes a cinco gênero s e oito espécies, a curva de acumulação de espécies atingiu a satu ração na 19º amostragem. No DS Venda Nova a curva de variação sazonal foi delineada principalmente por Lu. longipalpis e 95,3% dos espécimes pertenciam a esta espécie. Lu. longipalpis apresentou taxas de infecção natural de 1,01% para Leishmania infantum e 1,77% para Leishmania braziliensis . No PES foram coletados 4.675 espécimes pertencentes a ci nco gêneros e 25 esp écies e a curva de acumulação atingiu a saturação na 16º amostragem. No PES não houve uma única espécie que apresentasse padrão tão pronunciado de dominância. Lu. longipalpis correspondeu a 5,35% dos espécimes. Diversas espécies com envolvi mento (suspeito ou comprovado) nos ciclos de LTA foram registradas. Uma fêmea do comple xo cortellezzi apresent ou detecção positiva para Le. braziliensis. A comparação morfométrica e de co mposição de feromônios indicou grande similaridade entre as duas populações de Lu. longipalpis avaliadas. A análise realizada para co rrelação das ações de controle com a variação sazonal de Lu. longipalpis indicam a necessidade de estudos pormenorizados para inferências mais robustas. Os resultados evidenciam a dominância da espécie Lu. longipalpis no ambiente urbano, e indicam que as mudanças antrópicas no cerrado podem a lterar a composição das populações de flebotomineos e os ciclos de tran smissão de patógenos aos humanos. / The municipality of Belo Horizonte and its me tropolitan region illustrate the most serious example of the expansion of leishmaniasis in southeast Brazil. The m unicipality of Belo Horizonte, its metropolitan region, and th e Sumidouro State Park, are in the Brazilian Savannah biome (Cerrado). This is the second la rgest terrestrial biome in South America. The aims of this project were: to study the seasona l variation of sand flies in SD Venda Nova (Belo Horizonte) and in the PES; to describe the ric hness and diversity pa tterns of sand flies in the vegetable formations of PES and SD Venda Nova; to determine the natural infection rate of females captured; to study the morphological variation of Lu. longipalpis populations from different environments; to evaluate the im pacts of LV control actio ns carried out in DS Venda Nova in seasonal occurr ence of sandflies. Sampling was performed every month over three consecutive days using HP light trap s form August 2011 to August 2013. The insects were identified according to Galati 2003. Th e non-engorged females were subjected to DNA extraction and PCR reactions and the PCR-RFLP for the investigation of natural infection with Leishmania species. To compare the study sites was used descriptive analysis and ecological indexes. In the morphological comp arison thirty couples (fifteen from the DS Venda Nova and fifteen PES) of Lu. longipalpis species were measured and the means and variances were compared. The LV control actions in DS Venda Nova conducted in the period from January 2011 to December 2013 were analyzed descriptively and related to seasonal curve Lu. longipalpis. Richness, diversity and evenness in the study areas, urban and park protected area, were distinct. In Venda Nova SD 2.427 sand flies specimen s belonging to five genera and eight species were collected and the species accumulation curve reached saturation in the 19º sampling. In Sumidouro State Park a total of 4,675 sand flie s specimens belonging to nine genera and 25 species were collected and the species accumulation curve reached the saturation in the 16º sampling. In Venda Nova SD the species seasonal variation curve is predominantly determined by Lu. longipalpis . In Venda Nova 95.3% of the collected specimens belonged to the species Lu. longipalpis and this species exhibited a natural infection rate of 1.01% for Le. infantum and 1.77% for Le. braziliensis . In the Sumidouro State Park a total of 4,675 sand fly specimens of 25 species bel onging to nine genera were collected. The seasonal curve is not delineated by a unique species. In the park area, Lu. longipalpis accounted for only 5.35% of the collect ed specimens. The main vector of Le. infantum , Lu. longipalpis, accounted for only 5.35% of the specimens collected. Proven or suspected vectors of Le. braziliensis were recorded, and one female of the cortellezzii complex tested positive for Le. braziliensis DNA. The results make evident the Lu. longipalpis dominance in the urban environment. Our d ata demonstrate that anthropic modifications in the savannah studied area sign ificantly altered the sandflies populations and the Leishmania transmission cycles.

Made available in DSpace on 2016-04-15T12:52:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 24.pdf: 2181333 bytes, checksum: f782aa57a38656ecb9bf08d98d4bfbb0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / A paleoepidemiologia utiliza como fonte de estudo, remanescentes de corpos humanos provenientes de série esquelética. Destas séries, são utilizados como instrumento de estudo a análise de aparatos dentários/dentes para melhor compreensão da saúde oral de povos pré-históricos, principalmente no que se refere à exposição ambiente biológico, patógenos, práticas alimentares e padrões nutricionais. Estes fatores contribuem para melhor compreensão de aspectos culturais e ambientais para obter resultados consistentes sobre modo de vida e saúde das populações no passado.Neste trabalho foram utilizados 19 dentes provenientes da série esquelética do Sambaqui de Cabeçuda, sítio arqueológico qual o povo que ali habitava possui uma característica singular, em comparação aos demais sítios estudados no que se refere a saúde oral: dentes com ausência do processo cariogênico. É sabido que povos sambaqueiros possuem uma alta exposição ao ambiente marinho, o qual, bactérias de Vibrio são universalmente presentes. Estes cenários, motivaram a presente pesquisa, o qual problematizou tal ausência do processo cariogênico e levantou a hipótese da possível presença de bactérias do tipo Vibrio de água salina na cavidade oral dos povos de sambaquieiros, especialmente aqueles cujo estilo de vida fosse mais intimamente relacionada à questão do uso e exposição ao ambiente aquático litorâneo, expresso no uso e consumo de materiais oriundos das lagunas e do mar. O presente trabalho, objetivou de forma geral, investigar a presença de vibriões, pela documentação e interpretação da morfologia dos microfósseis bacterianos encontrados nos cálculos dentários provenientes de esqueletos humanos do sambaqui de Cabeçuda.A análise dos microfósseis bacterianos, propôs uma primeira interpretação sobre a constituição dos biofilmes que originaram os cálculos dentários e sua possível relação com a ausência de cáries dentárias naquele grupo pré-histórico. / The paleoepidemiology uses as a source of study, remains of human bodies from skeletal series. Of these series are used as tool to study the analysis of dental apparatuses / teeth for a better understanding of prehistoric oral health, especially with regard to exposure biological environment, pathogens, food and nutritional practices standards. These factors contribute to better understanding of cultural and environmental aspects for consistent results on lifestyle and health of populations in the past.In this study was used 19 teeth from skeletal series of Sambaqui de Cabeçuda, archaeological site that has a unique feature compared to the other sites studied in relation to oral health: teeth with lack of cariogenic process. It is known that sambaqueiros groups have a high exposure to the marine environment, which, Vibrio bacteria are universally present. This scenarios have motivated this research, which problematized such absence of cariogenic process and hypothesized the possible presence of bacteria Vibrio, type of saline water in the oral cavity of the sambaquis groups, especially those whose lifestyle was more closely related to question of the use and exposure to coastal aquatic environment, expressed in the use and consumption of materials from the lagoons and the sea. This study aimed in general, investigate the presence of Vibrio, the documentation and interpretation of the morphology of bacterial microfossils found in dental calculus from human skeletons sambaqui of Cabeçuda.The analysis of bacterial microfossils, proposed an initial interpretation of the constitution of biofilms that originated dental calculus and the possible relation with absence of dental caries in that prehistoric group. (AU)^ien