Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2013-02-15T17:56:02Z No. of bitstreams: 1 thatiane_s_simone_ioc_bcm_0011_2010.pdf: 9522536 bytes, checksum: fa6d5ea74828d496e73423373aedb60d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-02-15T17:56:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thatiane_s_simone_ioc_bcm_0011_2010.pdf: 9522536 bytes, checksum: fa6d5ea74828d496e73423373aedb60d (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / Este estudo apresenta os resultados da identificação de epitopos consecutivos responsáveis pelo desencadeamento da resposta imune humoral em todas as proteínas estruturais (C, prM / M e E) e não-estruturais (NS1, NS2a, NS2b, NS3, NS4a, NS4b e NS5) dos vírus dengue (DENV) tipos 1,2 e 3 circulantes no Brasil. A metodologia de síntese paralela de peptídeos (do inglês Spot synthesis) foi utilizada para a construção de uma biblioteca composta por 2007 peptídeos e, a tiragem utilizando pool de soros de pacientes com dengue, previamente confirmados através de técnicas laboratoriais, permitiu a identificação de 96 epitopos para os DENV-1, 103 epitopos para os DENV-2 e 106 epitopos para os DENV-3. Tais resultados foram comparados com métodos computacionais que permitem a predição de regiões imunogênicas (DNASTAR e IEDB) e demonstrou que, apesar de serem considerados bons indicadores de antigenecidade de uma proteína, os métodos computacionais requerem mais do que um parâmetro de predição para a confiabilidade dos resultados. Por sua vez, a síntese paralela provou ser altamente sensível e eficiente no mapeamento de epitopos consecutivos, permitindo a síntese em nano-escala de um grande número de peptídeos, de forma simultânea e reprodutível.. A fim de avaliar a capacidade em discriminar as infecções causadas pelos sorotipos de dengue daqueles negativos para esta patologia, foi realizado um teste de reação cruzada dos peptídeos identificados com pool de soros de pacientes com DENV-1, DENV-2 ou DENV-3, seguido pela avaliação utilizando pool de soros negativos para dengue, pool de soro de voluntários previamente vacinados para a febre amarela e pool de soros de pacientes com rubéola, sarampo, leptospirose, malária varíola e indicaram a existência de um total de 195 epitopos comuns ao grupo dengue e 3 epitopos específicos para os DENV-1, 9 para os DENV-2 e 11 para os DENV-3. A modelagem molecular das proteínas dos DENV permitiu a confirmação da localização dos epitopos na superfície da molécula. Esses resultados constituem a primeira descrição completa de epitopos contínuos dos DENV e poderão contribuir para a compreensão da interação anticorpo-epítopo em nível molecular e, conseqüentemente, a patogenicidade do dengue, bem como servir de base para a construção racional de vacinas preventivas e para o desenvolvimento de testes de diagnóstico sorológicas vírus-específicos. / This study shows the results of identification of epitopes responsible for consecutive triggering of humoral immune response in all structural proteins (C, prM / M, and E) and non-structural (NS1, NS2a, NS2b, NS3, NS4A, NS4B and NS5) of dengue virus (DENV) types 1,2 and 3 circulating in Brazil. The methodology for parallel synthesis of peptides (English Spot synthesis) was used to construct a library comprising peptides and 2007, using the pull pool of sera from patients with dengue previously confirmed by laboratory techniques allowed the identification of 96 epitopes for DENV-1, 103 epitopes for DENV-2 and 106 epitopes for DENV-3. These results were compared with computational methods which allow predicting immunogenic regions (DNASTAR and iedb) and demonstrated that, although they are considered good predictors of antigenicity of a protein, computational methods require more than one parameter for predicting the reliability of results. In turn, the parallel synthesis proved to be highly sensitive and efficient in the epitope mapping consecutive allowing the nano-scale synthesis of large numbers of peptides, simultaneously and reproducible .. In order to assess the ability to discriminate infections caused by serotypes of dengue those negative for this disease, we performed a test cross-reactivity of peptides identified with pooled sera from patients with DENV-1, DENV-2 and DENV-3, followed by evaluation using pool negative sera to Dengue, pool of serum from subjects previously vaccinated for yellow fever and pool of sera from patients with rubella, measles, leptospirosis, malaria, smallpox and indicated the existence of a total of 195 epitopes common to the group 3 and dengue-specific epitopes for DENV-1, 9 for DENV-2 and 11 for DENV-3. Molecular modeling of the proteins of DENV allowed confirmation of the location of epitopes on the surface of the molecule. These results provide the first complete description of continuous epitopes of DENV and may contribute to the understanding of the interaction of antibody-epitope at the molecular level and, consequently, the pathogenicity of dengue, as well as serve as a basis for the rational construction of preventive vaccines and to development of serological diagnostic tests virus-specific.

Made available in DSpace on 2016-01-07T13:36:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 andressa_martorelli_ioc_mest_2014.pdf: 1406086 bytes, checksum: aa1b67f7a16391a611cf88b0ce6ca128 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-11-23 / Indivíduos infectados pelo HIV têm um risco mais elevado de serem afetados por doenças graves, tais como infecções por vírus respiratórios, incluindo o vírus da influenza. A imunossupressão desses indivíduos pode afetar a sua capacidade de resposta à imunização ativa. A vacinação contra o vírus influenza ainda representa a principal forma de reduzir o impacto deste vírus. Devido à circulação em 2009 do vírus influenza pandêmico A (H1N1) pdm09 e influenza sazonal A (H3N2) e vírus B, a composição atual vacina incluem antígenos destes três agentes em sua formulação. Assim, a análise do impacto da vacina trivalente inativada contra influenza (TIV) em indivíduos infectados pelo HIV merece mais estudos. Uma coorte de 131 indivíduos HIV- 1 positivos, com viremia controlada recebeu duas doses únicas de TIV com 21 dias de intervalo. Os títulos de anti- hemaglutinantes (HA) de seus soros foi avaliada em diferentes pontos de tempo (dias zero, 21 e 42, bem como seis meses pós- vacinação). No que diz respeito à resposta imune ao vírus A(H1N1) pdm09 , observouse que um ano depois de ter recebido a vacina monovalente contra este antígeno , 62,6% dos indivíduos permaneceram soroprotegidos, uma queda de 20% em relação à 6 meses pósvacinação monovalente no ano de 2010. Além disso, após a primeira dose de TIV, títulos soroprotetores foram encontrados em todos os indivíduos A soroproteção de baseline para os antígenos H3N2 e influenza B foi de 67,9% e 27,5%, respectivamente. Em relação à soroconversão, observamos que 19,8% e 21% dos indivíduos apresentavam títulos antihemaglutinantes para o vírus A(H1N1)pdm09, 21 e 42 dias pós-vacinação com TIV, respectivamente. A soroconversão para o antígeno H3N2 foi 15,7% e 16% aos 21 e 42 dias respectivamente. Em relação à Influenza B, 35,7% e 38,6% dos indivíduos soroconverteram aos 21 e 42 dias após a vacinação. Aos seis meses pós-vacinação, os títulos de anti \2013 hemaglutinantes dos soros caiu para abaixo 15,7% para o antígeno A(H1N1)pdm09, 14,4% para H3N2 e 29,1% para antígenos de influenza B. Observamos também que indvíduos com maiores contagem de células CD4 resposram melhor a vacinação frente ao virus influenza B. Em conjunto, nossos resultados indicam que indíviduos HIV-1 positivos apresentam melhores repostas humorais para os antígenos A(H1N1)pdm09, quando comparado com os outros dois antígenos presentes na TIV / HIV - infected individuals have a higher risk of being affected by serious illnesses , such as in fections by respiratory viruses , including influenza virus . Immunosuppression of these individuals can affect their ability to respond to active immunization . Vaccination against influenza is still the main way to reduce the impact of this virus . Due to the movement in 2009 pandemic influenza A (H1N1) pdm09 and seasonal influenza A (H3N2) and B viruses , the current vaccine composition include antigens of these three agents in their formula tion . Thus, analysis of the impact of trivalent inactivated influenza vaccine (TIV ) in HIV - infected individuals deserves further study. A cohort of 131 HIV - 1 positive individuals with controlled viremia received two single dose s of TIV 21 days apart. Th e titers of anti - hemagglutinant (HA ) of their sera was assessed at different time points (zero, 21, 42 days a nd six months post - vaccination) . With re gard to immune to the virus A (H1N1) pdm09 response , it was noted that a year af ter having received the monovalent vaccine against this antigen , 62.6 % of subjects remained seroprotection , a decrease of 20 % compared to 6 monovalent months post - vaccination in 2010 . Moreover, after the first dose of TIV , seroprotective titers were f ound in all individuals . The seroprotection baseline for H3N2 and influenza B antigens was 67.9 % and 27.5 % , respectively . Regarding to seroconversion , we found that 19.8 % and 21 % of subjects had anti - hemag glutinin titles for the A (H1N1)pdm09 , 21 and 42 days post - vaccination with TIV , respectively. Seroconversion for H3N2 antigen was 15.7% and 16 % at 21 and 42 days resp ectively. Regarding Influenza B , 35.7 % and 38.6 % of subjects seroconverted after 21 and 42 days after vaccination. At six months po st - vac cination , the titers of anti - hemagglutinin sera fe ll below 15.7 % for antigen A (H1N1)pdm09 , 14.4% to 29.1 % for H3N2 and influenza B antigens . We also observed that indvíduos with higher CD4 cell counts resposram best vaccination against the influ enza virus B. Together, our results indicate that HIV - 1 positive individuals show better humoral responses to antigens A (H1N1) pdm09 compared with others two antigens present in the TIV. / HIV - infected individuals have a higher risk of being affected by serious illnesses , such as in fections by respiratory viruses , including influenza virus . Immunosuppression of these individuals can affect their ability to respond to active immunization . Vaccination against influenza is still the main way to reduce the impact of this virus . Due to the movement in 2009 pandemic influenza A (H1N1) pdm09 and seasonal influenza A (H3N2) and B viruses , the current vaccine composition include antigens of these three agents in their formula tion . Thus, analysis of the impact of trivalent inactivated influenza vaccine (TIV ) in HIV - infected individuals deserves further study. A cohort of 131 HIV - 1 positive individuals with controlled viremia received two single dose s of TIV 21 days apart. Th e titers of anti - hemagglutinant (HA ) of their sera was assessed at different time points (zero, 21, 42 days a nd six months post - vaccination) . With re gard to immune to the virus A (H1N1) pdm09 response , it was noted that a year af ter having received the monovalent vaccine against this antigen , 62.6 % of subjects remained seroprotection , a decrease of 20 % compared to 6 monovalent months post - vaccination in 2010 . Moreover, after the first dose of TIV , seroprotective titers were f ound in all individuals . The seroprotection baseline for H3N2 and influenza B antigens was 67.9 % and 27.5 % , respectively . Regarding to seroconversion , we found that 19.8 % and 21 % of subjects had anti - hemag glutinin titles for the A (H1N1)pdm09 , 21 and 42 days post - vaccination with TIV , respectively. Seroconversion for H3N2 antigen was 15.7% and 16 % at 21 and 42 days resp ectively. Regarding Influenza B , 35.7 % and 38.6 % of subjects seroconverted after 21 and 42 days after vaccination. At six months po st - vac cination , the titers of anti - hemagglutinin sera fe ll below 15.7 % for antigen A (H1N1)pdm09 , 14.4% to 29.1 % for H3N2 and influenza B antigens . We also observed that indvíduos with higher CD4 cell counts resposram best vaccination against the influ enza virus B. Together, our results indicate that HIV - 1 positive individuals show better humoral responses to antigens A (H1N1) pdm09 compared with others two antigens present in the TIV

Made available in DSpace on 2015-11-18T13:20:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 debora_mattos_ioc_mest_2014.pdf: 25027935 bytes, checksum: 36794f8df745a06c2879690ef1660179 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-04-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A susceptibilidade de Rhodnius prolixus ao T. rangeli depende da cepa do parasita e das interações moleculares no intestino e na hemocele do vetor. T. rangeli pode modular a resposta imune do vetor, preparando o hospedeiro à invasão e a sobrevivência dos parasitas na hemocele, superando assim as adversidades encontradas nos diferentes órgãos do inseto. Neste trabalho, são discutidos os mecanismos destas interações, destacando também o papel da microbiota intestinal e outros mecanismos importantes para o desenvolvimento do parasita. Inicialmente nossas investigações foram realizadas para comparar aspectos da imunidade celular e humoral de ninfas de 4º e 5º estádio de R. prolixus em resposta a uma infecção oral com a cepa Macias de T. rangeli. Na infecção oral em 4º estádio (acompanhamento em longo prazo), não foi observada diferença na mortalidade e muda ao comparar com os insetos controle não infectados. Constatou-se um número aumentado de flagelados no intestino das ninfas de 5º estádio durante o curso da infecção. Também, não houve alteração significativa na contagem de microagregados hemocitários (nódulos) em infecções de 4º estádio, enquanto em ninfas infectadas em 5º estádio houve um aumento no número de nódulos. Por outro lado, não houve diferença no número de hemócitos em ambas as infecções Demonstramos nos dois tipos de infecção oral com T. rangeli em R. prolixus, em comparação com os insetos controle não infectados, que o intestino médio atenuou a atividade de fenoloxidase, aumentou as atividades antibacterianas testadas in vitro contra Serratia marcescens, e alterou a expressão relativa de genes que codificam para defensinas (DefA, DefB, DefC), prolixicina e lisozimas (LisAe LisB). Isto sugere a influência destas atividades sobre a contagem de unidades formadoras de colônias, encontradas diminuídas no trato digestivo do inseto. Em uma segunda etapa do estudo, foram comparadas as respostas de defesa em ninfas de 5º estádio de R. prolixus inoculadas com T. rangeli, cepas Macias e H14. A cepa Macias de T. rangeli não aumentou a mortalidade desses insetos, apresentou capacidade de sobreviver e se multiplicar na hemolinfa, aumentou o número de hemócitos, e induziu alta atividade de fenoloxidase. Em contraste, estes mesmos parâmetros medidos em insetos inoculados com a cepa H14 de T. rangeli foram diferentes daqueles encontrados com inoculação de insetos usando a cepa Macias. Conclui-se que R. prolixus responde de forma distinta frente a vias de infecção oral ou por inoculação com T. rangeli, sugerindo que a capacidade infectiva deste protozoário, pode ser alterada por modulação do sistema imune do vetor

A tumorigênese cutânea é determinada pela combinação de diversos fatores genéticos e ambientais, que envolvem múltiplos eventos onde as células epiteliais podem progredir e se desenvolverem. Todo esse processo é associado com alterações da imunidade celular e humoral. Muitos fatores físicos e químicos podem predispor ao câncer de pele, como o carcinógeno DMBA, com ação iniciadora e promotora. Camundongos geneticamente selecionados para a alta (High) ou baixa (Low) produção de anticorpos constituem uma excelente ferramenta para o estudo da influência da imunidade humoral no desenvolvimento de tumores. Foram avaliados camundongos das linhagens High e Low submetidos ao tratamento com o DMBA na pele após 48 horas, 120 e 240 dias. Mostramos que a linhagem selecionada para a maior produção de anticorpos (High) é a mais sensível ao tratamento com formação de lesões que progrediram para o desenvolvimento de papilomas, apresentando maior incidência e multiplicidade tumoral que os animais Low. Os machos da linhagem High também desenvolveram tumores nos pulmões em decorrência do tratamento com o DMBA na pele. O perfil de citocinas avaliado mostrou que os animais Low tem maior expressão gênica de IFN-g e IL-6 do que os animais High, e estes maior expressão de IL-1b e Cxcl2 que os animais Low após 48 horas do tratamento. A secreção de IL-6 também foi maior nos animais Low com 48 horas, sendo que a produção de TGF-b foi maior nos animais High aos 120 dias. Estes resultados sugerem que na linhagem High o perfil de resposta celular seja do tipo Th2 com produção de IL-10 e TGF-b, o que favorece o surgimento de tumores, e na linhagem Low, a resposta celular seja do tipo Th1, pela presença de IFN-g e TNF-α, favorecendo o reparo tecidual. Como não foram encontradas diferenças na via de metabolização pelas enzimas do citocromo P450 e no polimorfismo do receptor Ahr, outros fatores podem estar relacionados aos fenótipos observados. Assim, estas linhagens geneticamente selecionadas que diferem quanto à capacidade de secreção de anticorpos, representam uma nova ferramenta para o estudo de fatores genéticos que influenciam o microambiente na predisposição ao câncer. / The skin tumorigenesis is determined by the combination of various genetic and environmental factors, involving multiple events, where epithelial cells can progress and develop. This entire process is associated with changes in cellular and humoral immunity. Many physical and chemical factors may predispose to skin cancer, such as DMBA carcinogen with initiating and promoting action. Mice genetically selected for high (High) or low (Low) antibody production are an excellent tool for studying the influence of humoral immunity in the development of tumors. High and Low mice were treated with DMBA on the skin and, after 48 hours, 120 and 240 days, they were evaluated. We showed that High mice are more sensitive to DMBA treatment, presenting lesions that progressed to the development of papillomas and showing higher incidence and tumor multiplicity than Low ones. Males of High strain have also developed lung tumors as a result of treatment with DMBA on the skin. The profile of cytokines evaluated of Low animals showed that gene expression of IFN-g and IL-6 is more elevated than the one observed in High mice; on the other hand, IL- 1b and CXCL2 are increased in High animals, 48 hours after treatment. The secretion of IL-6 was also greater in Low animals, and TGF-b was higher in High animals, after 120 days of treatment. These results suggest that the High mice response has a Th2 profile with secretion of IL- 10 and TGF-b, which favors the growth of tumors; on the other hand, Low mice have a Th1 response, due to the presence of IFNg and TNFα, favoring tissue repair. As no differences were found in the enzymes of cytochrome P450 and in the polymorphism of Ahr receptor, other factors may be related to the observed phenotypes. Thus, these genetically selected mice which differ in the ability to secrete antibodies represent a new tool for the study of genetic factors influencing the microenvironment in its predisposition to cancer.

As pesquisas em nutrição de frangos de corte estão em busca de ajustes que forneçam as aves os nutrientes necessários para um ótimo desempenho do sistema imune para que isto reflita em melhor desempenho produtivo. Neste contexto a utilização de microminerais orgânicos vem ganhando força e se mostrando uma alternativa para aumentar a produção. O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos de 3 fontes e 2 níveis de selênio sobre o desempenho e a imunidade humoral de frangos de corte. Foram utilizados 1440 pintos de um dia, machos, criados até os 42 dias. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com 6 dietas experimentais (A: 0,15 mg/kg Se inorgânico; B: 0,15 mg/kg Se orgânico; C: 0,15 mg/kg Se inorg.+orgânico; D: 0,45 mg/kg Se inorgânico; E: 0,45 mg/kg Se orgânico; F: 0,45 mg/kg Se inorg.+orgânico) e 6 repetições com 40 aves cada. Foi utilizado um arranjo fatorial 3x2 e os dados obtidos foram analisados pelo PROC GLM do SAS. Quanto ao desempenho considerando o período total de criação houve efeito do nível de Se sobre o ganho de peso (GP) e ganho médio diário (GMD), houve interação entre fonte e nível para a conversão alimentar. Quanto a imunidade, a variação dos níveis e fontes de Se não demonstraram efeito sobre os parâmetros avaliados neste trabalho. Foi possível concluir que o nível de inclusão de Se na dieta interfere no ganho de peso médio, ganho médio diário de peso e no peso médio, sendo que a maior inclusão resultou em maior ganho. A interação entre fonte e nível de Se pode alterar uma das variáveis mais importantes de uma produção que é a conversão alimentar. / The research in nutrition of broiler chickens is in search of adjustments that supply to the birds the necessary nutrients an excellent performance of the immune system so that this reflects in better productive performance. In this context the use of organic minerals comes gaining force and if showing an alternative to increase the production. The present study it had as objective to evaluate the effect of 3 sources and 2 levels of selenium on the performance and the humoral immunity of broiler chickens. 1440 young chickens of one day, males had been used, created until the 42 days. The assignment was completely randomized, with 6 experimental diets (A: 0,15 mg/kg inorganic; B: 0,15 mg/kg organic; C: 0,15 mg/kg inorg.+organic; D: 0,45 mg/kg inorganic; E: 0,45 mg/kg organic; F: 0,45 mg/kg inorg.+organic) and 6 repetitions with 40 birds each. 3x2 was used an factorial arrangement and the gotten data had been analyzed by PROC GLM of SAS. The performance considering the total period (42d) had effect of the level of on the weight gain (GP) and average daily gain (GMD), it had interaction between source and level it feed conversion ratio. About the immunity, the variation of the levels and sources had not demonstrated effect on the parameters evaluated in this work. It was possible to conclude that the level of Se in the diet intervenes with the weight gain, average daily gain and in the final weight. The interaction between source and level of Se can modify the feed conversion ratio.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-25 / Os antígenos cancer/testículo (CTAs) são considerados promissores alvos para abordagens de imunoterapia em câncer devido à sua alta imunogenicidade e padrão de expressão praticamente restrito a tecidos tumorais (estão também expressos em células germinativas do testículo, placenta e ovário fetal). Apesar do padrão de expressão dos CTAs estar bem estabelecido em carcinomas, pouco se sabe sobre a expressão desses antígenos em neoplasias linfóides como Linfomas de Hodgkin (LH) e Linfomas não-Hodgkin (LNH). Objetivo: Avaliar o potencial desses antígenos específicos tumorais como candidatos à imunoterapia em linfomas, através da análise de expressão protéica dos CTAs e avaliação da resposta imune humoral espontânea contra esses antígenos, correlacionando os achados com os dados clínicos e prognóstico. Métodos: Três blocos de Tissue Microarray (TMA) foram construídos a partir de 38 amostras teciduais de LH clássico e 106 de LNH obtidos nos arquivos do Departamento de Anatomia Patológia da UNIFESP. As lâminas de TMA foram submetidas a um painel de imunohistoquímica para 9 CTAs, a saber: MAGE-A1, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A10, CT7, CT10, NY-ESO-1, LAGE e GAGE. A avaliação da imunidade humoral espontânea foi realizada em 97 amostras de soro de pacientes com LNH ao diagnóstico (59 dos quais foram incluídos na casuística do TMA), utilizando-se a técnica de ELISA em um painel mais amplo de CTAs (MAGEA1, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A10, NY-ESO-1, CT7, CT10, CT24, CT45, CT46, CT47, CT63, CT83, SSX-1, SSX-2, SSX-4, LAGE-1, GAGE-2, SAGE-1, XAGE-1). Resultados: De forma global, houve baixa expressão de CTAs nas amostras analisadas, visto que apenas 21,1% das amostras de LH e 11,3% das amostras de LNH apresentaram positividade para pelo menos 1 dos CTAs incluídos no painel de imunohistoquímica. MAGE-A (18,4%) e CT7 (13,2%) foram os CTAs mais frequentemente expressos em LH, enquanto MAGE-A (6,6%), GAGE (5,7%) e NY-ESO-1 (4,8%) foram os mais expressos em LNH. Apesar de não ter sido encontrada diferença estatisticamente significante na expressão de CTAs entre os subgrupos clínicos de LH, houve maior frequência de positividade nos pacientes com estadiamento avançado (28,6%), comparado àqueles com estadiamento inicial (11,8%). Nos subgrupos clínicos de LNH, a frequência de expressão de CTAs foi maior nos linfomas agressivos (14,9%) em relação aos indolentes (3,1%), nos linfomas difusos de grandes células B (LDGCB) (16,1%) comparado aos não-LDGCB (6,0%) e no subgrupo que não atingiu resposta completa (15,0%) comparado àqueles que obtiveram resposta completa (6,8%). Entretanto, as diferenças não foram estatisticamente significantes em nenhum desses subgrupos. Um achado inesperado no presente estudo foi a expressão mais frequente de CTAs no subgrupo de LNH com estadiamento inicial (I e II) comparado ao subgrupo com estadiamento avançado (III e IV). Apesar da diferença encontrada na análise de sobrevida entre o grupo de pacientes que não apresentaram expressão de CTA (sobrevida mediana de 65 meses) e aqueles que apresentaram expressão de pelo menos 1 CTA (sobrevida mediana de 11 meses), a diferença não foi estatisticamente significante (p=0.0947). A resposta humoral espontânea contra pelo menos 1 CTA do painel foi encontrada em 19,6% dos pacientes com LNH. CT47 foi o CTA mais frequentemente expresso (7.2%), seguido do CT45 (5.1%), NY-ESO-1 (5.1%) e MAGE-A4 (5.1%). Os CTAs foram mais frequentemente expressos em LNH de células B (21.2%) comparado aos LNH de células T (6.2%) (p=0.048). Não houve diferença estatisticamente significante na resposta humoral anti-CTAs em qualquer dos outros subgrupos clínicos de LNH. Conclusão: De forma geral, houve baixa expressão protéica de CTAs em nossa casuística de LH e LNH com o painel utilizado. Apesar dos limitados dados disponíveis na literatura, esses achados são concordantes com a maioria dos estudos realizados utilizando RT-PCR e/ou imunohistoquímica. Não houve correlações estatisticamente significantes entre expressão de CTAs e parâmetros clínicos ou prognósticos no presente estudo. A reatividade sérica contra os CTAs testados ocorreu em níveis semelhantes ao da expressão protéica em LNH, sugerindo que os pacientes com LNH são capazes de montar resposta imune humoral específica contra CTAs. / Cancer/testis antigens (CTAs) are expressed in a variety of malignant tumors but in normal adult tissues solely in testicular germ cells. Based on this tumor-associated expression pattern, these antigens are potential targets for immunotherapy. Though carcinomas have been extensively analyzed, less is known about lymphoid malignancies such as lymphomas. Aims: To evaluate the potential of tumor specific antigens as candidates for immunotherapy in lymphomas throughout CTA protein expression and spontaneous humoral immune response analyses. We also aim to investigate clinical correlations and prognostic impact of CTAs expression in lymphomas. Methods: Tissue microarray was generated from 38 Hodgkin´s lymphoma (HL) and 106 non- Hodgkin´s lymphoma (NHL) archival cases. Immunohistochemistry (IHC) was done using a panel of 9 monoclonal antibodies against CTAs. Spontaneous humoral immune response analysis against a larger CTA panel was performed in 97 untreated NHL patient samples, including 59 cases from the TMA cohort, using ELISA technique. Results: We found overall low expression of CTAs in our series of HL (21.1%) and NHL (11.3%) TMAs, being MAGE-A (18.4%) and CT7 (13.2%) the most frequently expressed CTAs in HL, and MAGE-A (6.6%), GAGE (5.7%), NY-ESO-1 (4.8%) and CT7 (4.8%) the most frequently expressed CTAs in NHL. Although we did not find statistically significant difference in CTA expression among the clinicopathological subgroups of HL, CTA positivity was higher in advanced stage (28.6%) compared to early stage patients (11.8%). Among NHL, we found higher CTA expression in aggressive lymphomas (14.9%) compared to indolent lymphomas (3.1%), DLBCL (16.1%) compared to non-DLBCL (6.0%) and in non-complete response group (15.0%) compared to those who achieved complete response (6.8%), but it was not statistically significant. Unexpectedly, early stage disease (19.5%) had higher CTA expression than advanced stage NHL (6.2%). Despite the difference found in survival analysis between NHL patients that presented no CTAs expression (median OS 65 months) and those who expressed at least one CTA (median OS 11 months), it did not reach statistically significant difference (p=0.0947). Serum reactivity against at least 1 CTA was observed in (19.6%) of NHL patients, being more frequent in B-cell lymphomas (21.2%) then T-cell lymphomas (6.2%) (p=0.048). CT47 was the most frequently expressed CTA (7.2%), followed by CT45 (5.1%), NY-ESO-1 (5.1%) and MAGE-A4 (5.1%). Grouping the MAGE-A family similarly to the TMA analysis, we found positivity in 8.2% of NHL serum samples. Among DLBCL, CT45 and NY-ESO-1 were the most frequently expressed CTAs, being positive in 4/50 (8.0%) and 3/50 (6.0%), respectively. Conclusion: We found overall low expression of CTAs in our series of HL and NHL TMAs, and low reactivity against CTA in our serum samples. Our results demonstrated a slightly higher frequency of humoral response against most CTAs included in both TMA and ELISA panel compared to their expression by TMA. Considering that generally a small proportion of patients expressing CTAs develop specific humoral response, it is possible that CTA expression by TMA could be underestimated due to the focal expression pattern in some patients. Therefore, using an extensive panel of antibodies and large TMA and serum cohorts of lymphoma patients, we could not identify CTA candidates for immunotherapy in HL and NHL. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-06-28T14:37:59Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE_FABIANA_LETICIA_DIGITAL.pdf: 2539644 bytes, checksum: ffb2ea48912cab654c0a8e8bdc397ac2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-28T14:37:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE_FABIANA_LETICIA_DIGITAL.pdf: 2539644 bytes, checksum: ffb2ea48912cab654c0a8e8bdc397ac2 (MD5) Previous issue date: 2014-08-27 / FACEPE / O contato prévio com o leite de mães esquistossomóticas induziu, em camundongos adultos, potencialização da produção de anticorpos e aumento da capacidade de apresentação de antígeno pelos linfócitos B, em resposta ao antígeno heterólogo ovalbumina (OVA). Considerando a imunização com OVA um modelo vacinal, as reações inflamatórias e a produção de anticorpos em resposta a esse antígeno são importantes para o desenvolvimento de uma imunidade satisfatória do hospedeiro. Nesse sentido, as células Th1 e Th17 são importantes fatores para o desenvolvimento dessas respostas. Dessa forma, os camundongos deficientes na produção de IL-12/IL-23 (12p40 knockout-KO) são predispostos a desenvolverem uma resposta Th2 polarizada, tornando-se menos responsivos às vacinações. Diante disso, o presente trabalho investigou o efeito da amamentação em mães infectadas pelo Schistosoma mansoni sobre as imunidades humoral e celular de camundongos adultos C57BL/6 12p40 KO, em resposta ao modelo vacinal acima citado. Foram avaliados: a cinética das reações de hipersensibilidade in vivo; os níveis plasmáticos das imunoglobulinas IgG1 e IgG2a; a produção das citocinas IFN-γ, IL-17, IL-5, IL-6, IL-10 e TGF- pelas células esplênicas e a reação inflamatória provocada no coxim plantar. Para isso, camundongos machos, deficientes na produção de IL-12 e IL-23 (IL-12p40 KO) e camundongos selvagens (wild-type/WT) foram divididos nos seguintes grupos: camundongos IL-12p40 KO amamentados em mães infectadas (AI IL-12p40 KO); camundongos IL-12p40 KO amamentados em mães sem infecção (NANI IL-12p40 KO); camundongos selvagens amamentados em mães infectadas (AI WT) e camundongos selvagens amamentados em mães sem infecção (NANI WT). Cinquenta por cento dos animais de cada grupo foram imunizados com OVA em adjuvante. Os outros 50% porcento restantes permaneceram sem imunização. No grupo AI WT houve aumentado de produção de IgG2a, IL-5, TGF-β e IL-6, com baixos níveis de IL-17, em comparação ao NANI WT. Nos animais AI IL-12p40 KO, a produção de IgG2a, IL-5 e TGF-β foi mais alta do que o grupo NANI IL-12p40 KO e similar ao grupo AI WT, mas a produção de IL-6 foi mais baixa. O grupo AI WT mostrou intenso infiltrado inflamatório de eosinófilos na reação de hipersensibilidade tardia (RHT), com acentuado edema em comparação com o edema menos intenso e infiltrado inflamatório de neutrófilos do grupo NANI WT. Os animais NANI IL-12p40 KO e AI IL-12p40 KO não apresentam RHT, porém a reação inflamatória no AI IL-12p40 KO foi menos intensa que nos NANI IL-12p40 KO. Em conclusão, o contato com antígenos do parasito, através da amamentação, induziu, no descendente adulto, uma melhor resposta de anticorpo neutralizante, mesmo diante da deficiência na produção de IL-12e IL-23. Nesta condição, embora tenha havido uma notável produção de IL-5, a lactação em mães infectadas atenuou a reação inflamatória, provavelmente através da regulação cruzada entre TGF-β e IL-6, modulando, desta forma, o status de hiperativação desses animais. / The previous contact with mothers milk schistosomiasis induced in adult mice enhancement of antibody production and increased antigen presentation capacity by B lymphocytes in response to the heterologous antigen ovalbumin (OA). Considering immunization with OA one vaccine model, inflammatory reactions and antibody production in response to antigen are important for the development of a suitable host immunity. In this sense, the Th1 and Th17 cells are important factors for the development of these responses. Thus, mice deficient in IL-12/IL-23 (12p40 knockout-KO) are likely to develop a polarized Th2 response, making it less responsive to vaccination. Therefore, the present study investigated the effect of breastfeeding in mothers infected with Schistosoma mansoni on the humoral and cellular adult C57BL/6 12p40 KO in response to vaccination model mentioned above. Were evaluated: the kinetics of in vivo hypersensitivity reactions; plasma levels of IgG1 and IgG2a immunoglobulins; the production of the cytokines IFN-γ, IL-17, IL-5, IL-6, IL-10 and TGF-β by spleen cells and the inflammatory reaction induced in the footpad. To this end, male mice deficient in IL-12 and IL-23 (IL-12p40 KO) and wild-type mice (Wild-type/WT) were divided into the following groups: IL-12p40 KO mice suckled by infected mothers (IL-12p40 KO- SIM); IL-12p40 KO mice suckled by uninfected mothers (IL-12p40 KO); Wild-type mice suckled by infected mothers (SIM) and wild-type mice suckled by uninfected mothers (CONTROL). Fifty percent of animals in each group were immunized with OA in adjuvant. The other 50% remaining percent remained without immunization. In the SIM group was increased production of IgG2a, IL-5, TGF-β and IL-6, IL-17 with low levels compared to CONTROL. In animals IL-12p40 KO-SIM the production of IgG2a, IL-5 and TGF-β was higher than the IL-12p40 KO similar to group SIM, but IL-6 production was lower. The SIM group showed intense inflammatory infiltrate of eosinophils in the delayed hypersensitivity reaction (DTH), with severe edema compared with the less intense edema and inflammatory infiltration of neutrophils CONTROL group. The animals IL-12p40 KO and IL-12p40KO-SIM not have DTH, but the inflammatory reaction in the IL-12p40KO-SIM was less intense than in IL-12p40 KO. In conclusion, contact with parasite antigens, through breastfeeding, induced in adult offspring, better neutralizing antibody response, despite the deficiency in the production of IL-12 and IL-23. In this condition, though there has been a remarkable IL-5 production in lactating mothers infected with attenuated inflammatory response, probably via cross regulation between TGF-β and IL-6 modulate thereby the status of hyperactivation of these animals.

A tumorigênese cutânea é determinada pela combinação de diversos fatores genéticos e ambientais, que envolvem múltiplos eventos onde as células epiteliais podem progredir e se desenvolverem. Todo esse processo é associado com alterações da imunidade celular e humoral. Muitos fatores físicos e químicos podem predispor ao câncer de pele, como o carcinógeno DMBA, com ação iniciadora e promotora. Camundongos geneticamente selecionados para a alta (High) ou baixa (Low) produção de anticorpos constituem uma excelente ferramenta para o estudo da influência da imunidade humoral no desenvolvimento de tumores. Foram avaliados camundongos das linhagens High e Low submetidos ao tratamento com o DMBA na pele após 48 horas, 120 e 240 dias. Mostramos que a linhagem selecionada para a maior produção de anticorpos (High) é a mais sensível ao tratamento com formação de lesões que progrediram para o desenvolvimento de papilomas, apresentando maior incidência e multiplicidade tumoral que os animais Low. Os machos da linhagem High também desenvolveram tumores nos pulmões em decorrência do tratamento com o DMBA na pele. O perfil de citocinas avaliado mostrou que os animais Low tem maior expressão gênica de IFN-g e IL-6 do que os animais High, e estes maior expressão de IL-1b e Cxcl2 que os animais Low após 48 horas do tratamento. A secreção de IL-6 também foi maior nos animais Low com 48 horas, sendo que a produção de TGF-b foi maior nos animais High aos 120 dias. Estes resultados sugerem que na linhagem High o perfil de resposta celular seja do tipo Th2 com produção de IL-10 e TGF-b, o que favorece o surgimento de tumores, e na linhagem Low, a resposta celular seja do tipo Th1, pela presença de IFN-g e TNF-α, favorecendo o reparo tecidual. Como não foram encontradas diferenças na via de metabolização pelas enzimas do citocromo P450 e no polimorfismo do receptor Ahr, outros fatores podem estar relacionados aos fenótipos observados. Assim, estas linhagens geneticamente selecionadas que diferem quanto à capacidade de secreção de anticorpos, representam uma nova ferramenta para o estudo de fatores genéticos que influenciam o microambiente na predisposição ao câncer. / The skin tumorigenesis is determined by the combination of various genetic and environmental factors, involving multiple events, where epithelial cells can progress and develop. This entire process is associated with changes in cellular and humoral immunity. Many physical and chemical factors may predispose to skin cancer, such as DMBA carcinogen with initiating and promoting action. Mice genetically selected for high (High) or low (Low) antibody production are an excellent tool for studying the influence of humoral immunity in the development of tumors. High and Low mice were treated with DMBA on the skin and, after 48 hours, 120 and 240 days, they were evaluated. We showed that High mice are more sensitive to DMBA treatment, presenting lesions that progressed to the development of papillomas and showing higher incidence and tumor multiplicity than Low ones. Males of High strain have also developed lung tumors as a result of treatment with DMBA on the skin. The profile of cytokines evaluated of Low animals showed that gene expression of IFN-g and IL-6 is more elevated than the one observed in High mice; on the other hand, IL- 1b and CXCL2 are increased in High animals, 48 hours after treatment. The secretion of IL-6 was also greater in Low animals, and TGF-b was higher in High animals, after 120 days of treatment. These results suggest that the High mice response has a Th2 profile with secretion of IL- 10 and TGF-b, which favors the growth of tumors; on the other hand, Low mice have a Th1 response, due to the presence of IFNg and TNFα, favoring tissue repair. As no differences were found in the enzymes of cytochrome P450 and in the polymorphism of Ahr receptor, other factors may be related to the observed phenotypes. Thus, these genetically selected mice which differ in the ability to secrete antibodies represent a new tool for the study of genetic factors influencing the microenvironment in its predisposition to cancer.

As pesquisas em nutrição de frangos de corte estão em busca de ajustes que forneçam as aves os nutrientes necessários para um ótimo desempenho do sistema imune para que isto reflita em melhor desempenho produtivo. Neste contexto a utilização de microminerais orgânicos vem ganhando força e se mostrando uma alternativa para aumentar a produção. O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos de 3 fontes e 2 níveis de selênio sobre o desempenho e a imunidade humoral de frangos de corte. Foram utilizados 1440 pintos de um dia, machos, criados até os 42 dias. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com 6 dietas experimentais (A: 0,15 mg/kg Se inorgânico; B: 0,15 mg/kg Se orgânico; C: 0,15 mg/kg Se inorg.+orgânico; D: 0,45 mg/kg Se inorgânico; E: 0,45 mg/kg Se orgânico; F: 0,45 mg/kg Se inorg.+orgânico) e 6 repetições com 40 aves cada. Foi utilizado um arranjo fatorial 3x2 e os dados obtidos foram analisados pelo PROC GLM do SAS. Quanto ao desempenho considerando o período total de criação houve efeito do nível de Se sobre o ganho de peso (GP) e ganho médio diário (GMD), houve interação entre fonte e nível para a conversão alimentar. Quanto a imunidade, a variação dos níveis e fontes de Se não demonstraram efeito sobre os parâmetros avaliados neste trabalho. Foi possível concluir que o nível de inclusão de Se na dieta interfere no ganho de peso médio, ganho médio diário de peso e no peso médio, sendo que a maior inclusão resultou em maior ganho. A interação entre fonte e nível de Se pode alterar uma das variáveis mais importantes de uma produção que é a conversão alimentar. / The research in nutrition of broiler chickens is in search of adjustments that supply to the birds the necessary nutrients an excellent performance of the immune system so that this reflects in better productive performance. In this context the use of organic minerals comes gaining force and if showing an alternative to increase the production. The present study it had as objective to evaluate the effect of 3 sources and 2 levels of selenium on the performance and the humoral immunity of broiler chickens. 1440 young chickens of one day, males had been used, created until the 42 days. The assignment was completely randomized, with 6 experimental diets (A: 0,15 mg/kg inorganic; B: 0,15 mg/kg organic; C: 0,15 mg/kg inorg.+organic; D: 0,45 mg/kg inorganic; E: 0,45 mg/kg organic; F: 0,45 mg/kg inorg.+organic) and 6 repetitions with 40 birds each. 3x2 was used an factorial arrangement and the gotten data had been analyzed by PROC GLM of SAS. The performance considering the total period (42d) had effect of the level of on the weight gain (GP) and average daily gain (GMD), it had interaction between source and level it feed conversion ratio. About the immunity, the variation of the levels and sources had not demonstrated effect on the parameters evaluated in this work. It was possible to conclude that the level of Se in the diet intervenes with the weight gain, average daily gain and in the final weight. The interaction between source and level of Se can modify the feed conversion ratio.

Agamaglobulinemia ligada ao X (XLA) é uma imunodeficiência primária caracterizada por ausência ou número reduzido de células B maduras em sangue periférico, de todos os isotipos de imunoglobulina e um aumento da susceptibilidade a infecções bacterianas e enterovirais graves. XLA é causada por mutações no gene Bruton\'s tirosino quinase, que codifica um membro da proteína da família das tirosino quinases citoplasmáticas que tem papel vital na modulação de muitos processos celulares. Neste estudo foram analisados trinta e três pacientes quanto à presença de mutações de BTK, por SSCP/HA e seqüenciamento. A análise da expressão foi realizada pela técnica por PCR em tempo real. Foram encontradas mutações do tipo stop codons, substituições de aminoácido, defeitos de splicing, pequenas deleções/inserções e frameshift nestes pacientes afetando os domínios PH, SH3, SH2 e o domínio da quinase da proteína. A análise da expressão mostrou níveis baixos nos pacientes com mutação do tipo stop codon, e nas outras mutações, os níveis de expressão foram de aproximadamente 15% e se correlacionaram com os tipos de mutação. / X-linked Agammaglobulinemia (XLA) is a primary immunodeficiency characterized by the absence or decreased numbers of mature B cells in peripheral blood, and by a lack of all immunoglobulin isotypes, leading to an increased susceptibility to severe bacterial and enteroviral infections. XLA is caused by mutations in the gene encoding for Bruton\'s tyrosine kinase (BTK), a protein member of the Tec family of cytoplasmic tyrosine kinases and plays a vital modulation role in many cellular processes. In this study thirty-three patients were analyzed for the presence of BTK mutations by SSCP/HA and sequencing. The expression analysis was carried out by the technique of Real-Time PCR. It was found mutations of the stop codons type, amino acid substitutions, splice defects, small deletions/insertions and frameshift in these patients affecting the PH, SH3, SH2 and tyrosine kinase domains of protein. The expression levels were very low in the patients with stop codon mutations, and in the other mutations, the expression levels were about 15% and were correlated with the mutation types.