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Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-29T16:30:51Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 665275 bytes, checksum: a67a50d64715c1d0468f0184e10c7224 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T16:30:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 665275 bytes, checksum: a67a50d64715c1d0468f0184e10c7224 (MD5) Previous issue date: 2001-08-03 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A bactéria Pasteuria penetrans é um parasita obrigatório do nematóide das galhas que atua prevenindo a produção de ovos pela fêmea e reduzindo a penetração dos juvenis nas raízes. Ela também produz esporos que persistem por anos no solo, e devido à sua eficiência e rusticidade, é considerada um ótimo agente de controle biológico. Sua produção in vitro ainda é inviável e a produção de inóculo requer o seu cultivo in vivo em nematóides parasitando plantas em vasos. Neste trabalho, buscou-se, mediante análise da bactéria no conteúdo do corpo da fêmea de nematóide parasitada, averiguar diferenças no desenvolvimento de Pasteuria penetrans em Meloidogyne spp. parasitando raízes de tomateiro ( Lycopersicon esculentum), tabaco (Nicotiana tabacum), maxixe (Cucumis anguria ) e camapu (Physalis angulata), e, por meio do estudo, histopatológico de raízes as possíveis razões para estas diferenças, como forma e tamanho de células gigantes. O esporângio que envolve o esporo prejudica a sua adesão à cutícula do nematóide, sendo antes conveniente utilizar algumas técnicas para sua ruptura. Testou-se a promoção de estresse ao nematóide hospedeiro através do corte da parte aérea de quatro espécies vegetais hospedeiras do nematóide e da suspensão da irrigação destas plantas para promover a ruptura dos esporângios e acelerar o aparecimento de esporos completamente maduros no interior da fêmea. Para o estudo histopatológico, foram testadas técnicas de coloração conhecidas e introduzidas adaptações que facilitassem as observações microscópicas: 1) azul de astra e fucsina básica, 2) safranina, hematoxilina e orange G com adição de ácido tânico e cloreto férrico, e 3) coloração quádrupla-triarca. Nas duas primeiras técnicas foi difícil distinguir colônias bacterianas das estruturas internas do nematóide. Na terceira técnica,as colônias bacterianas, o conteúdo do corpo do nematóide e as células vegetais, alteradas ou não pelo nematóide, apresentaram cores distintas. Desta forma, com a coloração quádrupla -triarca foi possível observar melhor as interações Pasteuria- Meloidogyne-planta hospedeira. Dentre as espécies vegetais estudadas, o maxixe foi considerado o pior hospedeiro para a produção de inóculo pois nele se encontraram células gigantes anormais e prolongou o ciclo de vida da bactéria. A anatomia de células gigantes, considerada de aspecto normal, assim como o desenvolvimento da bactéria, foram semelhantes no camapu e no tomateiro, entretanto o ciclo de vida de P. penetrans foi ligeiramente mais curto em tomate. O corte da parte aérea e suspensão da irrigação aceleraram o amadurecimento dos esporos de P. penetrans em todas as plantas, o tabaco e o tomateiro se destacaram como os melhores hospedeiros para este fim. / Pasteuria pen etrans is an obligate parasite of root-knot nematodes preventing egg production by the female and reducing root penetration by the juvenile. Its spores persist for many years in the soil, and due to efficacy and rusticity it is considered an excellent biocontrol agent. The in vitro bacterial cultivation is not feasible yet, requiring in vivo inoculum production in nematode-parasitized potted plants. In this work, differences in the development of P. penetrans in Meloidogyne spp. parasitizing roots of tomato (Lycopersicon esculentum), tobacco (Nicotiana tabacum), gherkin (Cucumis anguria) and camapu (Physalis angulata), were evaluated by observing the body contents of the paratized nematode females. Possible reasons for these differences, such as changes in the giant cell morphology, were analysed by histopathology of infected roots. The sporangial wall around the spore impairs its adhesion to the nematode cuticle, therefore it is convenient to use some technique to disrupt it. Stress induction in its host plant through removal of the aerial part and suspension of irrigation were tested to promote rupturing of the sporangium and accelerate the spore development inside the female. Three histological staining techniques were compared for obtaining best contrast in the microscopic observations: 1) the astra blue plus basic fuchsin, 2) safranin, hematoxylin and orange G, with addition of tannic acid and iron chloride, and 3) the triarch quadruple stain. The former two staining techniques did not permite distinctions of bacterial colonies from the internal structures of the nematode, in the third techinique the colors were clearly distinct among bacterial colonies, nematode body contents and the plant cells, whether or not altered by the nematode. Therefore, the triarch quadruple staining should be adopted for histopathological studies involving P. penetrans.Gherkin was considered the worst among the tested hosts for inoculum production because it presented abnormal giant cells and delayed the bacterial i l fe cycle. The giant cells anatomy and the bacterium development were similar in tomato and camapu root systems, but the P. penetrans life cicle was slightly shorter in tomato than in gherkin. Removal of the aerial part and suppression of irrigation accelerated the maturing of P. penetrans spores in all the plant species evaluated, with tobacco and tomato providing better results than gherkin. / Dissertação importada do Alexandria

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Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-07T16:36:33Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 356111 bytes, checksum: 463ffd65909a98e756f2e3865a90bc5e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-07T16:36:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 356111 bytes, checksum: 463ffd65909a98e756f2e3865a90bc5e (MD5) Previous issue date: 2001-10-09 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Aspectos da multiplicação ‘in vivo’ de Pasteuria penetrans foram estudados em condições de laboratório e casa de vegetação, utilizando-se uma população de Meloidogyne javanica parasitando tomateiro. Foram investigados os efeitos da matéria orgânica e da textura do solo sobre a reprodução da bactéria, sendo também realizado um estudo sobre alguns métodos utilizados no processo de produção massal, com o objetivo de otimizar a produção do antagonista. Por meio do estudo da adição do resíduo orgânico ao substrato, verificou-se que a incorporação de esterco de curral melhorou o desenvolvimento das plantas, resultando em maior peso de raiz seca; entretanto, o número de endósporos produzidos/fêmea e o número de endósporos/g de raiz foram menores quando comparados aos de plantas crescidas nos substratos sem adição do resíduo. O número de endósporos produzidos/planta foi equivalente em substratos com ou sem esterco. Embora não tenha sido detectada interação entre a concentração de inóculo do nematóide e o tipo de substrato para número de endósporos produzidos por planta, verificou-se que a inoculação de 2.000 J2/planta resultou em maior número de endósporos produzidos do que a inoculação com 1.000 J2/planta, independentemente do substrato utilizado. A produção de endósporos de P. penetrans em J2 de M. javanica parasitando tomateiro foi testada em solos com diferentes texturas e em areia. Observou-se maior número de endósporos da bactéria produzidos por planta nos solos com textura mais arenosa. Através de testes de adesão, 70 dias após a inoculação das plantas, pôde- se verificar maior número de endósporos da bactéria aderidos aos J2 de M. javanica nas amostras provenientes da camada superficial daqueles solos de textura mais leve do que os de textura mais pesada ou em areia pura. Por meio de um bioteste, observou-se que a maioria dos endósporos de P. penetrans foi carregada para o fundo dos vasos com areia, mas não em solos argilosos ou arenosos. Em um ensaio onde foi investigado o efeito de P. penetrans sobre a penetração de M. javanica em raízes de tomateiro, inocularam-se 1.000 J2 aderidos com 0, 10, 30, 60 ou 90 endósporos/J2/planta. Verificou-se que a média de 10 endósporos/J2 reduziu a penetração do nematóide nas raízes em 50%, quando comparados com J2 livres de bactérias, e que o aumento do número de endósporos aderidos aos J2 reduziu drasticamente a taxa de penetração. Para avaliar o efeito de variações da adesão da bactéria no J2, entre os J2 do inóculo, sobre a reprodução da bactéria, plantas de tomate mantidas em casa de vegetação foram inoculadas com 1.000 J2 de M. javanica contendo uma média de 10 endósporos/J2 aderidos pelo método de borbulhamento, centrifugação ou agitação. Observou-se grande variação do número de endósporos aderidos/J2 e maiores números de galhas e ovos/planta usando-se o método de borbulhamento. Apesar de o método de agitação ter proporcionado maior uniformidade na adesão, obteve-se menor número de endósporos produzidos por planta, comparado àquele obtido por centrifugação e borbulhamento (P<0,01). / Some factors affecting Pasteuria penetrans multiplication ‘in vivo’ were studied in laboratory and in greenhouse using a population of Meloidogyne javanica parasitizing tomato plants. The effects of organic amendment and soil texture on the bacterial reproduction as well as some techniques for the mass production of P. penetrans were evaluated. Cattle manure improved plant development, resulting in higher dry root weight, however, the number of endospore per female of M. javanica and the endospore/g dry root were lower than in the plants growing in the non-amended substrate. The endospore production per plant was similar in the amended and non-amended substrates. Although there was no interaction between inoculum level and organic matter content on bacterial production, the inoculation of 2000 J2/plant resulted in higher endospore production, independently of the substract, than inoculation of 1000 J2/plant. The P. penetrans endopore production in juveniles of M. javanica parasitizing tomato plants was evaluated in soils with different textures and in the river sand. Higher endospore numbers/plant were produced in sandy soils. Bioassays done seventy days after plant inoculation resulted in higher P. penetrans endospore attachment in samples from the upper layer of lighter than heavier texture soils or in the river sand. When the attachment was studied in soils from the bottom of the pots, many endospores were detected in the river sand but not in the sandy or clay soils. The effect of P. penetrans on the penetration of M. javanica J2 in tomato roots was studied inoculating 1000 J2 without endospores or with an average of 10, 30, 60 or 90 endospores attached per J2. The average of 10 endospores/J2 decreased the nematode penetration by 50% compared to penetration of bacterium-free J2, and the increase of endospore attached to J2 decreased exponentialy the penetration. The coefficient of variation (CV) of attachment among J2 was studied for the methods of air bubbling, centrifugation or shaking, and for the use of these nematodes as inoculum for the bacteria reproduction. The highest CV ocurred using the air bubbling method. Even though the shaking method gave better uniformity in the attachment, the number of endospores produced was lower than that obtained in the centrifugation and in the air bubbling methods (P<0,01).

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