No description available.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-29T16:30:51Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 665275 bytes, checksum: a67a50d64715c1d0468f0184e10c7224 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T16:30:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 665275 bytes, checksum: a67a50d64715c1d0468f0184e10c7224 (MD5) Previous issue date: 2001-08-03 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A bactéria Pasteuria penetrans é um parasita obrigatório do nematóide das galhas que atua prevenindo a produção de ovos pela fêmea e reduzindo a penetração dos juvenis nas raízes. Ela também produz esporos que persistem por anos no solo, e devido à sua eficiência e rusticidade, é considerada um ótimo agente de controle biológico. Sua produção in vitro ainda é inviável e a produção de inóculo requer o seu cultivo in vivo em nematóides parasitando plantas em vasos. Neste trabalho, buscou-se, mediante análise da bactéria no conteúdo do corpo da fêmea de nematóide parasitada, averiguar diferenças no desenvolvimento de Pasteuria penetrans em Meloidogyne spp. parasitando raízes de tomateiro ( Lycopersicon esculentum), tabaco (Nicotiana tabacum), maxixe (Cucumis anguria ) e camapu (Physalis angulata), e, por meio do estudo, histopatológico de raízes as possíveis razões para estas diferenças, como forma e tamanho de células gigantes. O esporângio que envolve o esporo prejudica a sua adesão à cutícula do nematóide, sendo antes conveniente utilizar algumas técnicas para sua ruptura. Testou-se a promoção de estresse ao nematóide hospedeiro através do corte da parte aérea de quatro espécies vegetais hospedeiras do nematóide e da suspensão da irrigação destas plantas para promover a ruptura dos esporângios e acelerar o aparecimento de esporos completamente maduros no interior da fêmea. Para o estudo histopatológico, foram testadas técnicas de coloração conhecidas e introduzidas adaptações que facilitassem as observações microscópicas: 1) azul de astra e fucsina básica, 2) safranina, hematoxilina e orange G com adição de ácido tânico e cloreto férrico, e 3) coloração quádrupla-triarca. Nas duas primeiras técnicas foi difícil distinguir colônias bacterianas das estruturas internas do nematóide. Na terceira técnica,as colônias bacterianas, o conteúdo do corpo do nematóide e as células vegetais, alteradas ou não pelo nematóide, apresentaram cores distintas. Desta forma, com a coloração quádrupla -triarca foi possível observar melhor as interações Pasteuria- Meloidogyne-planta hospedeira. Dentre as espécies vegetais estudadas, o maxixe foi considerado o pior hospedeiro para a produção de inóculo pois nele se encontraram células gigantes anormais e prolongou o ciclo de vida da bactéria. A anatomia de células gigantes, considerada de aspecto normal, assim como o desenvolvimento da bactéria, foram semelhantes no camapu e no tomateiro, entretanto o ciclo de vida de P. penetrans foi ligeiramente mais curto em tomate. O corte da parte aérea e suspensão da irrigação aceleraram o amadurecimento dos esporos de P. penetrans em todas as plantas, o tabaco e o tomateiro se destacaram como os melhores hospedeiros para este fim. / Pasteuria pen etrans is an obligate parasite of root-knot nematodes preventing egg production by the female and reducing root penetration by the juvenile. Its spores persist for many years in the soil, and due to efficacy and rusticity it is considered an excellent biocontrol agent. The in vitro bacterial cultivation is not feasible yet, requiring in vivo inoculum production in nematode-parasitized potted plants. In this work, differences in the development of P. penetrans in Meloidogyne spp. parasitizing roots of tomato (Lycopersicon esculentum), tobacco (Nicotiana tabacum), gherkin (Cucumis anguria) and camapu (Physalis angulata), were evaluated by observing the body contents of the paratized nematode females. Possible reasons for these differences, such as changes in the giant cell morphology, were analysed by histopathology of infected roots. The sporangial wall around the spore impairs its adhesion to the nematode cuticle, therefore it is convenient to use some technique to disrupt it. Stress induction in its host plant through removal of the aerial part and suspension of irrigation were tested to promote rupturing of the sporangium and accelerate the spore development inside the female. Three histological staining techniques were compared for obtaining best contrast in the microscopic observations: 1) the astra blue plus basic fuchsin, 2) safranin, hematoxylin and orange G, with addition of tannic acid and iron chloride, and 3) the triarch quadruple stain. The former two staining techniques did not permite distinctions of bacterial colonies from the internal structures of the nematode, in the third techinique the colors were clearly distinct among bacterial colonies, nematode body contents and the plant cells, whether or not altered by the nematode. Therefore, the triarch quadruple staining should be adopted for histopathological studies involving P. penetrans.Gherkin was considered the worst among the tested hosts for inoculum production because it presented abnormal giant cells and delayed the bacterial i l fe cycle. The giant cells anatomy and the bacterium development were similar in tomato and camapu root systems, but the P. penetrans life cicle was slightly shorter in tomato than in gherkin. Removal of the aerial part and suppression of irrigation accelerated the maturing of P. penetrans spores in all the plant species evaluated, with tobacco and tomato providing better results than gherkin. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-07T16:36:33Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 356111 bytes, checksum: 463ffd65909a98e756f2e3865a90bc5e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-07T16:36:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 356111 bytes, checksum: 463ffd65909a98e756f2e3865a90bc5e (MD5) Previous issue date: 2001-10-09 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Aspectos da multiplicação ‘in vivo’ de Pasteuria penetrans foram estudados em condições de laboratório e casa de vegetação, utilizando-se uma população de Meloidogyne javanica parasitando tomateiro. Foram investigados os efeitos da matéria orgânica e da textura do solo sobre a reprodução da bactéria, sendo também realizado um estudo sobre alguns métodos utilizados no processo de produção massal, com o objetivo de otimizar a produção do antagonista. Por meio do estudo da adição do resíduo orgânico ao substrato, verificou-se que a incorporação de esterco de curral melhorou o desenvolvimento das plantas, resultando em maior peso de raiz seca; entretanto, o número de endósporos produzidos/fêmea e o número de endósporos/g de raiz foram menores quando comparados aos de plantas crescidas nos substratos sem adição do resíduo. O número de endósporos produzidos/planta foi equivalente em substratos com ou sem esterco. Embora não tenha sido detectada interação entre a concentração de inóculo do nematóide e o tipo de substrato para número de endósporos produzidos por planta, verificou-se que a inoculação de 2.000 J2/planta resultou em maior número de endósporos produzidos do que a inoculação com 1.000 J2/planta, independentemente do substrato utilizado. A produção de endósporos de P. penetrans em J2 de M. javanica parasitando tomateiro foi testada em solos com diferentes texturas e em areia. Observou-se maior número de endósporos da bactéria produzidos por planta nos solos com textura mais arenosa. Através de testes de adesão, 70 dias após a inoculação das plantas, pôde- se verificar maior número de endósporos da bactéria aderidos aos J2 de M. javanica nas amostras provenientes da camada superficial daqueles solos de textura mais leve do que os de textura mais pesada ou em areia pura. Por meio de um bioteste, observou-se que a maioria dos endósporos de P. penetrans foi carregada para o fundo dos vasos com areia, mas não em solos argilosos ou arenosos. Em um ensaio onde foi investigado o efeito de P. penetrans sobre a penetração de M. javanica em raízes de tomateiro, inocularam-se 1.000 J2 aderidos com 0, 10, 30, 60 ou 90 endósporos/J2/planta. Verificou-se que a média de 10 endósporos/J2 reduziu a penetração do nematóide nas raízes em 50%, quando comparados com J2 livres de bactérias, e que o aumento do número de endósporos aderidos aos J2 reduziu drasticamente a taxa de penetração. Para avaliar o efeito de variações da adesão da bactéria no J2, entre os J2 do inóculo, sobre a reprodução da bactéria, plantas de tomate mantidas em casa de vegetação foram inoculadas com 1.000 J2 de M. javanica contendo uma média de 10 endósporos/J2 aderidos pelo método de borbulhamento, centrifugação ou agitação. Observou-se grande variação do número de endósporos aderidos/J2 e maiores números de galhas e ovos/planta usando-se o método de borbulhamento. Apesar de o método de agitação ter proporcionado maior uniformidade na adesão, obteve-se menor número de endósporos produzidos por planta, comparado àquele obtido por centrifugação e borbulhamento (P<0,01). / Some factors affecting Pasteuria penetrans multiplication ‘in vivo’ were studied in laboratory and in greenhouse using a population of Meloidogyne javanica parasitizing tomato plants. The effects of organic amendment and soil texture on the bacterial reproduction as well as some techniques for the mass production of P. penetrans were evaluated. Cattle manure improved plant development, resulting in higher dry root weight, however, the number of endospore per female of M. javanica and the endospore/g dry root were lower than in the plants growing in the non-amended substrate. The endospore production per plant was similar in the amended and non-amended substrates. Although there was no interaction between inoculum level and organic matter content on bacterial production, the inoculation of 2000 J2/plant resulted in higher endospore production, independently of the substract, than inoculation of 1000 J2/plant. The P. penetrans endopore production in juveniles of M. javanica parasitizing tomato plants was evaluated in soils with different textures and in the river sand. Higher endospore numbers/plant were produced in sandy soils. Bioassays done seventy days after plant inoculation resulted in higher P. penetrans endospore attachment in samples from the upper layer of lighter than heavier texture soils or in the river sand. When the attachment was studied in soils from the bottom of the pots, many endospores were detected in the river sand but not in the sandy or clay soils. The effect of P. penetrans on the penetration of M. javanica J2 in tomato roots was studied inoculating 1000 J2 without endospores or with an average of 10, 30, 60 or 90 endospores attached per J2. The average of 10 endospores/J2 decreased the nematode penetration by 50% compared to penetration of bacterium-free J2, and the increase of endospore attached to J2 decreased exponentialy the penetration. The coefficient of variation (CV) of attachment among J2 was studied for the methods of air bubbling, centrifugation or shaking, and for the use of these nematodes as inoculum for the bacteria reproduction. The highest CV ocurred using the air bubbling method. Even though the shaking method gave better uniformity in the attachment, the number of endospores produced was lower than that obtained in the centrifugation and in the air bubbling methods (P<0,01).

Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2017-04-06T12:36:48Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_adinara_maria_welter.pdf: 193527 bytes, checksum: f6ee9eb7b69a39c972690a65d2001e3f (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-04-19T19:22:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_adinara_maria_welter.pdf: 193527 bytes, checksum: f6ee9eb7b69a39c972690a65d2001e3f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-04-19T20:06:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_adinara_maria_welter.pdf: 193527 bytes, checksum: f6ee9eb7b69a39c972690a65d2001e3f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-19T20:10:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertacao_adinara_maria_welter.pdf: 193527 bytes, checksum: f6ee9eb7b69a39c972690a65d2001e3f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-06-01 / Sem bolsa / O presente trabalho objetivou avaliar a eficiência de produtos com princípio ativo biológico e químico no controle de Meloidogine javanica em ensaio de casa de vegetação e in vitro. O delineamento utilizado foi inteiramente casualizado com 15 repetições cada produto para casa de vegetação e 4 parcelas para teste in vitro. Os produtos testados foram: produto 1 (sem princípio ativo) dose 0; produto 2 (Trichoderma harzianum) com dose de 20g/100kg de semente; produto 3 (Pasteuria penetrans) com dose de 150ml/100kg de semente; produto 4 (Trichoderma harzianum) com dose de 20g/100kg de semente; produto 5 (Purpureocillium liliacinum) com dose de 20 l/ha; produto 6 (Bacillus megaterium/Bacillus subitilis) com dose de 60 ml/100kg de semente; produto 7 (Trichoderma asperellum/Bacillus subtilis) com dose de 1g/Kg de semente; produto 8 (Abamectina) com dose de 100ml/100kg de semente. Avaliou-se peso e comprimento de raiz, galha, massa de ovos, ovos, juvenis e fator de reprodução. Na avaliação de peso de raiz os tratamentos 2, 4 (Trichoderma harzianum), e 7 (Trichoderma asperellum/ Bacillus subtilis) não diferiram entre si, mantendo-se superiores aos demais tratamentos na avaliação de galhas os produtos 3 (Pasteuria penetrans) e 8 (Abamectina) foram os que apresentaram menor número de galhas por sistema radicular; para massas de ovos o produto 1 (sem princípio ativo) foi o que apresentou maior número; o resultado de juvenis os produtos com princípio ativo destacaram-se com exceção do 2 (Trichoderma harzianum) que não apresentou controle; na avaliação de ovos os produtos 1,6,7 e 8 foram os que menos multiplicaram; quanto ao fator de reprodução, os produtos com maior controle de M. javanica foram os produtos 3 (Pasteuria penetrans) e 8 (Abamectina). Na avaliação in vitro nas doses de 1 e 2 %, todos os produtos, biológicos e o químico, mostraram controle do nematoide das galhas. Conclui-se que, produtos biológicos são eficientes no controle de M. javanica. A Pasteuria penetrans e a Abamectina foram os produtos mais eficientes. / This study aimed to evaluate the efficiency of products with biological and chemical active ingredient in control Meloidogyne javanica under greenhouse and in vitro home test. The design was completely randomized with 15 repetitions each product for greenhouse and fourth installments in vitro test. The products tested were: 1 product (no active ingredient) dose 0; Product 2 (Trichoderma harzianum) at a dose of 20g / 100kg seed; 3 product (Pasteuria penetrans) with dose of 150ml / 100kg seed; Product 4 (Trichoderma harzianum) at a dose of 20g / 100kg seed; 5 product (Purpureocillium liliacinum) at a dose of 20 l / ha; 6 product (Bacillus megaterium /Bacillus subitilis.) with dose of 60 ml / 100kg seed; product 7 (Trichoderma asperellum / Bacillus subtilis) at a dose of 1 g / kg seed; 8 product (Abamectin) with dose of 100ml / 100kg seed. It evaluated weight and root length, gall, egg mass, eggs, juveniles and reproduction factor. For root weight the product 4 (Trichoderma harzianum) obtained the highest average; to root length the product 7 (. Trichoderma asperellum / Bacillus subtilis) was highest average; the gall evaluation Products 3 (Pasteuria penetrans) and 8 (Abamectin) showed the lowest number of galls per root system; for egg masses the product 1 (no active ingredient) showed the greatest number; the result of juvenile products with active ingredient stood out except 2 (Trichoderma harzianum) that did not show control; the eggs assessment Products 1,6,7 and 8 were the least multiplied; as the reproduction factor, products with greater control of M. javanica were the products 3 (Pasteuria penetrans) and 8 (Abamectin). When evaluated in vitro at doses of 1 and 2%, all organic products and the chemical showed control of nematode galls. We conclude that both, biological and chemicals can be effective in controlling M. javanica. Since for biological tested the bacteria Pasteuria penetrans showed greater efficiency.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-27T18:33:44Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 878289 bytes, checksum: 70c4ac466fdd682cb943dce260aec8df (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T18:33:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 878289 bytes, checksum: 70c4ac466fdd682cb943dce260aec8df (MD5) Previous issue date: 2004-08-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Experimentos foram conduzidos em laboratório e casa de vegetação objetivando o aprimoramento do método clássico de multiplicação de Pasteuria penetrans ‘in vivo’, proposto em 1980 por Stirling e Wachtel. No primeiro experimento comparou-se a produção de endósporos da P. penetrans em raízes de tomateiro de crescimento indeterminado cv. Santa Clara e determinado cv. TRural 1. Maiores pesos de matéria fresca e seca e número de endósporos foram observados em tomateiro cv. Santa Clara. O segundo experimento foi realizado para determinar a concentração ideal de endósporos de P. penetrans na suspensão e o tempo de agitação necessário para adesão adequada de endósporos aos nematóides para multiplicação da bactéria. Para que se obtenham seis endósporos, em média, por juvenil de segundo estádio (J2) de Meloidogyne javanica, verificou-se serem necessárias suspensões contendo 3,3 x 10 5 endósporos/mL, agitadas por 10 a 20 minutos, ou 3,3 x 10 4 endósporos/mL por 50 minutos. Em outro ensaio, comparou-se a multiplicação de P. penetrans em população pura de M. incognita ou em população composta de M. incognita e M. javanica oriunda de um campo de cultivo de tomate. A produção de endósporos de P. penetrans em tomateiro inoculado com M. incognita foi aproximadamente três vezes superior àquela em plantas inoculadas com população mista. Realizou-se também um teste de adesão de P. penetrans às duas populações do nematóide. Foi observado maior número de endósporos aderidos aos J2 de M. incognita. A produção de endósporos da P. penetrans em plantas de tomateiro cv. Santa Clara com 15, 30, 45 ou 60 dias de idade e inoculadas com 5.000, 15.000 ou 25.000 J2 foi avaliada. As plantas com 30 e 45 dias de idade inoculadas com 25.000 J2 permitiram a multiplicação de P. penetrans cerca de 19 vezes maior àquela obtida em plantas inoculadas com 5.000 J2. Com o objetivo de determinar se maiores níveis de matéria orgânica adicionada ao substrato provocavam alterações fisiológicas nos nematóides ou nas plantas de tomate, estudou-se a influência de diferentes proporções de solo, areia e esterco de curral (1:1:0, 2:2:1, 1:1:1 ou 1:1:2 (V:V:V), respectivamente) e três níveis de inóculo de espécies de Meloidogyne (3.000, 6.000 e 9.000 J2) sobre a concentração de fenóis em raízes de tomateiro, no teor de lipídios de espécies de Meloidogyne, e em possíveis alterações em células gigantes induzidas por esses nematóides. Não se observou efeito dos tratamentos no teor de lipídios dos nematóides. A concentração de fenóis nas raízes aumentou à medida que se acrescentou mais esterco de curral ao substrato ou quando as plantas foram inoculadas com mais nematóides (9.000 J2). As células gigantes em raízes de plantas cultivadas nos substratos 1:1:0 e 2:2:1 (solo:areia:esterco) foram mais numerosas, maiores e com maior número de núcleos. Por outro lado, as células gigantes de plantas cultivadas no substrato 1:1:1 e 1:1:2, além de menos numerosas, apresentaram alterações no tamanho e formato, demonstrando o efeito deletério das maiores doses de esterco sobre esses sítios de alimentação. O último ensaio foi conduzido para avaliar o efeito de crescentes quantidades de esterco de curral nos substratos e níveis de inóculo de espécies de Meloidogyne na reprodução de P. penetrans. Maior percentual de fêmeas infectadas por P. penetrans foi observado quando se utilizou o substrato 1:1:0 em relação aos substratos 1:1:1 e 1:1:2 ou quando as plantas foram inoculadas com 3.000 J2. O experimento foi repetido uma vez e na primeira condução do experimento, plantas cultivadas no substrato 1:1:0 ou inoculadas com 9.000 J2 apresentaram maior número de endósporos; entretanto, na segunda condução do experimento as plantas inoculadas com 9.000 J2 e cultivadas no substrato 2:2:1 foram as que permitiram maior reprodução de P. penetrans. / Greenhouse and laboratory experiments were conducted to improve the classical method of multiplying P. penetrans ‘in vivo’, proposed by Stirling & Wachtel in 1980. In the first experiment, the mass production of P. penetrans in tomatoes of indeterminated and determinated growth, cv. Santa Clara and Trural I, respectively, was compared. Higher fresh and dry root weight and endospore number were observed in ‘Santa Clara’ tomato. The second experiment was conducted to determine the best endospore concentration of P. penetrans in the aqueous suspension and the time of shaking necessary to obtain adequate attachment of endospores on the nematodes, as the first step for P. penetrans multiplication. To obtain an average of six endospores per second stage juvenile (J2) of M. javanica, it is necessary to shake suspension of 3,3 x 10 5 endospores/mL per 10 to 20 minutes or to shake 3,3 x 10 4 endospores/mL for 50 minutes. In another experiment, the reproduction of P. penetrans in pure population of M. incognita and in a mixed population of M. incognita and M. javanica, originated from the field, was studied. The endospore production of P. penetrans in tomato plants inoculated with M. incognita was approximately three times higher than in plants inoculated with the field population. An attachment test of P. penetrans on the two populations was performed and higher number of endospores attached to J2 of M. incognita was observed. The multiplication of P. penetrans in 15, 30, 45 or 60 day-old ‘Santa Clara’ tomato plants inoculated with 5,000, 15,000 or 25,000 J2, was also evaluated. The 30 and 45 days old plants inoculated with 25,000 J2 provided P. penetrans multiplication up to nineteen times more than plants inoculated with 5,000 J2 in the first experimental run. To determine if high cow manure levels added to substrate promote physiological changes on the nematodes or on the tomato plants, the influence of cow manure amendment to mixtures of soil and sand giving rates of 1:1:0; 2:2:1; 1:1:1 and 1:1:2 (V:V:V) of soil, sand and manure, respectively, and three inoculum levels of Meloidogyne species, i.e., 3,000; 6,000 and 9,000 J2 on the phenolic content in the tomato roots, changes in nematode lipid content and possible alterations in the giant cells induced by the nematodes, were studied. No conclusion could be drawn about the effect of manure on the nematode lipid content. The phenolic content in the roots increased as more cow manure was added to the substrate or when the plants were inoculated with more nematodes (9,000 J2). The giant cells in the roots of plants cultivated in the substrates 1:1:0 and 2:2:1 were more numerous, bigger and with more nuclei. On the other hand, the giant cells of plants cultivated on 1:1:1 and 1:1:2 substrates were less numerous, showed changes on their format and were smaller, demonstrating the deleterious effect of organic amendments to these feeding sites. A subsequent experiment was carried out to evaluate the effect of the interaction of increasing rates of cow manure in the substrates and of nematode levels on the reproduction of Pasteuria penetrans. Higher perceptual of infected females by P. penetrans was observed when the plants grew in the substrate 1:1:0 than in the substrates 1:1:1 and 1:1:2, or when plants were inoculated with 3,000 J2. The experiment was repeated once and in the first run, plants cultivated on substrate 1:1:0 or inoculated with 9,000 J2 had higher endospore number. However, in the second run, plants inoculated with 9,000 J2 and cultivated on substrate 2:2:1 yielded more endospores per root system. / Tese importada do Alexandria

Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-09-18T13:33:07Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2023955 bytes, checksum: c00bada9d7cdc721128642c40a1fc2a1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-18T13:33:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2023955 bytes, checksum: c00bada9d7cdc721128642c40a1fc2a1 (MD5) Previous issue date: 2017-03-31 / Na natureza, um fitopatógeno geralmente está sob influência de um complexo de microrganismos, que associados garantem o equilibrio ecológico estável. Com foco no fungo nematófago Pochonia chlamydosporia, começamos investigando sua compatibilidade com Bradyrhizobium japonicum em soja e a influência dessa interação sobre o controle do nematoide das galhas e sobre a absorção de nutrientes pela planta. Constatou-se que a aplicação conjunta desses dois organismos não prejudica a ação de controle de nematoides por P. chlamydosporia e nem a fixação de N 2 por B. japonicum. Adicionalmente, quando os dois agentes estavam juntos, ocorreu maior produção de nódulos da bactéria nas raízes e aumento do conteúdo de Fe na parte aérea das plantas de soja. No segundo capítulo, a compatibilidade dos agentes de controle biológico de nematoides, P. chlamydosporia e P. penetrans foi avaliada. A co-aplicação dos microrganismos possibilitou maior redução do número de ovos do nematoide do que a aplicação em separado e foi possível observar a associação do fungo nas raízes infectadas por nematoides colonizados por P. penetrans. Pesquisamos ainda, no terceiro capítulo, a presença de vírus em isolados de P. chlamydosporia. Dos dezoito isolados avaliados, apenas um (Pc-M4) estava infectado por dois virus, um com genoma de RNA fita dupla (dsRNA) e outro de RNA fita simples sentido negativo (-ssRNA). Os nomes propostos para os micovírus são Pochonia chlamydosporia chrysovirus 1 (PcCV1) e Pochonia chlamydosporia negative-stranded RNA virus 1 (PcNSRV1). Ensaios biológicos do isolado fúngico Pc-M4 revelaram que este foi capaz de parasitar ovos, produzir metabólitos e proteases letais aos juvenis e reduzir a reprodução do nematoide de galhas M. javanica. Os resultados apresentados indicam que o fungo P. chlamydosporia é capaz de interagir com diferentes organismos sem perder a capacidade de controlar o nematoide de galhas e de promover o crescimento vegetal, o que faz dele um excelente agente de biocontrole de nematoides. / In nature, a plant pathogen is usually under the influence of a complex of microorganisms, which guarantees stable ecological balance. Focusing on the nematophagous fungus Pochonia chlamydosporia, we started investigating its compatibility with Bradyrhizobium japonicum in soybean. We also looked at the influence of this interaction on the control of the root knot nematode and on the nutrient uptake by the plant. It was found that the joint application of these two organisms does not affect the action of control of nematodes by P. chlamydosporia nor the fixation of N 2 by B. japonicum. In addition, when the two agents were together, there was a higher production of nodules of the bacteria in the roots and an increase in the Fe content in the aerial part of the soybean plants. In the second chapter, the compatibility of biological control agents of nematodes, P. chlamydosporia and P. penetrans was evaluated. The co-application of the microorganisms allowed a greater reduction in the number of nematode eggs than the separate application. It was possible to observe the association of the fungus in the roots infected by nematodes colonized by P. penetrans. We also investigated the presence of viruses in isolates of P. chlamydosporia in the third chapter. Of the eighteen isolates evaluated, only one (Pc-M4) was infected by two viruses, one with double-stranded RNA genome (dsRNA) and the other with RNA single-stranded sense negative (-ssRNA). The proposed names for the mycoviruses are Pochonia chlamydosporia chrysovirus 1 (PcCV1) and Pochonia chlamydosporia negative-stranded RNA virus 1 (PcNSRV1). Biological assays of the fungal isolate Pc-M4 revealed that it was able to parasitize eggs, produce metabolites, lethal proteases to juveniles and reduce reproduction of M. javanica. The results indicated that the fungus P. chlamydosporia is capable of interacting with different organisms without losing the ability to control the root knot nematode and to promote plant growth. This makes it an excellent biocontrol agent for plant parasitic nematodes.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-27T13:11:40Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 832503 bytes, checksum: c9ddb50df4ac046edfb1b18f02406400 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T13:11:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 832503 bytes, checksum: c9ddb50df4ac046edfb1b18f02406400 (MD5) Previous issue date: 2004-03-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Extratos enzimáticos de diferentes fungos foram avaliados quanto à maceração de raízes, a fim de se extrair mais fácil e rapidamente fêmeas de Meloidogyne spp. para estudos de controle biológico e para a identificação de espécies por eletroforese de isoenzimas. Raízes de tomateiro infectadas por Meloidogyne javanica foram imersas em extrato enzimático produzidas pelos fungos Aspergillus niger, Penicillium griseoroseum ou Penicillium italicum, separadamente ou em mistura de 50% de enzimas de cada fungo, em combinações de dois a dois, ou em tampão fosfato (testemunha), e incubadas a 30oC/24h. As enzimas produzidas pelo fungo P. griseoroseum foram as mais eficientes na degradação da parede das células das raízes de tomateiro, equiparando-se às enzimas comerciais importadas, pectinase + celulase (Clarex, Miles do Brasil - 15.000 ajdv/g; Sigma Chemical Ltda- 5.000 un.), utilizadas para a extração de fêmeas de Meloidogyne spp. Raízes com galhas parasitadas com as espécies M. incognita, M. javanica ou M. arenaria foram imersas em tampão de acetato de sódio apenas ou com enzimas liofilizadas de P. griseoroseum, em diferentes concentrações, e incubadas a 40°C/24h. A atividade de 200 U/mL proporcionou maior liberação de fêmeas, e essas foram submetidas à eletroforese de isoenzimas. Não foram observadas bandas, em gel de poliacrilamida, de fêmeas retiradas pela incubação em enzimas fúngicas, mas bandas foram vistas quando as fêmeas foram retiradas manualmente. Para avaliar o efeito das enzimas na adesão de endósporos aos juvenis de M. javanica, fêmeas foram retiradas manualmente e por maceração enzimática a 200 U/mL. Os endósporos de fêmeas extraídas por digestão enzimática apresentaram maior adesão a J2 de M. javanica em relação à testemunha. A reprodução dos endósporos de P. penetrans em fêmeas de M. javanica não foi afetada pela enzima. Para melhorar a quantificação de endósporos de P. penetrans em pó de raiz utilizado como inóculo para aplicação da bactéria no campo, as enzimas a 2% e 20% foram adicionadas a 2g do pó de raiz com P. penetrans e incubados a 40°C. O extrato enzimático na concentração de 20%, independente do tempo de incubação, possibilitou observar maior número de endósporos. O uso de enzimas fúngicas para a extração de fêmeas de Meloidogyne spp., demonstrou ser bastante eficiente e vantajoso, sem prejudicar a adesão e multiplicação de P. penetrans no nematóide; porém, não é recomendada para a identificação de M. javanica, M. incognita e M. arenaria por eletroforese de isoenzimas. / Enzymatic extracts from different fungi were evaluated for root maceration as an easier and faster way of extracting Meloidogyne spp. females from roots, to be used in biological control studies and in species identification by isozyme electrophoresis. Tomato roots infected by M. javanica were immersed in enzymatic extracts produced by Aspergillus niger, Penicillium griseoroseum or P. italicum, separately or in mixtures of 50% of enzymatic extracts of each fungus, two by two, or in phosphate buffer (control), and incubated at 30oC/24h. The enzymes produced by the fungus P. griseoroseum were the most efficient in the degradation of the tomato root cell walls, being comparable to the imported commercial enzymes pectinase + celulase (Clarex, Miles do Brasil - 15.000 ajdv/g; Sigma Chemical Ltda- 5.000 un.) used for Meloidogyne spp. females extraction. Galled roots parasitized by M. incognita, M. javanica or M. arenaria were immersed in sodium acetate buffer alone or with lyophilized enzymes of P. griseoroseum in different concentrations and incubated at 40°C/24h. The number of 200 U/mL of enzyme preparation provided the best female release, and the females attained using this concentration were subjected to isozyme electrophoresis analysis. No bands could be seen from the females extracted by incubation in fungal enzymes, in the poliacrilamide gel, but typic bands formed from females extracted manually. In order to evaluate the effect of enzymatic extraction on the attachment of endospores on second-stage juveniles (J2) of M. javanica, nematode females parasitized with Pasteuria penetrans were extracted from the roots manually or by maceration in enzyme extract at 200 U/mL. The endospores from females extracted by enzimatic digestion attached in higher number to the M. javanica J2 when compared to the control treatment. The endospore production in M. javanica females was not affected by the enzymes. To improve the endospore counting in root powder used as carrier for field applications, the enzymes at 2% and 20% were added to 2g of root powder containing P. penetrans endospores, and incubated at 40 °C. The enzyme extract at 20%, independent of the incubation time, allowed to observe a higher number of endospores. The use of fungal enzymes to extract Meloidogyne spp. showed to be very efficient and advantageous, without disturbing attachment or reproduction of P. penetrans in the nematode, however, it is not recommended for the identification of M. javanica, M. incognita nor M. arenaria by isozyme electrophoresis. / Dissertação importada do Alexandria