Proefschrift--Rijsuniversiteit te Groningen, 1979. / Thesis statement on title page in Dutch. Summary in Dutch. Bibliography: p. 126-146.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2000-07-05Bitstream added on 2014-06-13T18:45:14Z : No. of bitstreams: 1 moreira_mmsm_dr_arafo.pdf: 363537 bytes, checksum: 63c6ed9a8b9ecded120506264d2ecbb4 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O diagnóstico precoce das doenças periodontais é fundamental para a identificação da doença nos estágios iniciais. Com o intuito de incentivar o exame periodontal, uma nova metodologia, o Periodontal Screening and Recording (PSR) foi desenvolvida nos Estados Unidos, com o apoio da Academia Americana de Peridontologia e da Associação Dentária Americana. Este estudo foi realizado para analisar a relação entre o PSR e os principais parâmetros associados à patologia periodontal: sangramento à sondagem, presença de fatores retentivos de placa, profundidade de sondagem, recessão gengival, mobilidade dentária, envolvimento de furca, presença de placa bacteriana e perda óssea visível radiograficamente e também para comparar os dados obtidos entre o PSR e o exame convencional. 50 adolescentes com idade entre 15 a 19 anos e 50 indivíduos na faixa etária de 35 a 44 anos foram examinados clinicamente através da aplicação de índices que verificam a presença destes parâmetros e radiograficamente através das técnicas periapical e interproximal. Os resultados indicaram haver existência de uma associação significativa entre os códigos do PSR e os parâmetros clínicos e radiográficos, pois quanto maior o código do PSR, maior a probabilidade do dente apresentar um dos sinais citados acima. A comparação entre o método simplificado e o convencional mostrou haver concordância moderada e o autor conclui que o PSR deve ser usado, não como um instrumento para substituir o exame convencional e determinar o diagnóstico periodontal, mas como um exame simplificado capaz de verificar sinais associados às doenças periodontais. / The early diagnosis of periodontal pathologies is essential to identify diseases in initial stages. In order to promote periodontal examination, a new methodology, the Periodontal Screening and Recording (PSR) was developed in the USA, supported by American Academy of Periodontology and American Dental Association. This study was conducted to analyses the relationship between PSR and the main parameters related to periodontal diseases: bleeding on probing, presence of plaque retentive factors, probing depth, gingival recession, dental mobility, furcation involvement, presence of bacterial plaque and bone loss identified by radiograph and also to compare the data obtained with PSR and the conventional method. Fifty adolescents aging from 15 to 19 years old and fifty subjects aging from 35 to 44 years old were examined clinically through application of indices which verify the presence of those parameters and radiographically through periapical and bitewing techniques. The results indicated existence of a significant association between PSR codes and radiographic and clinical parameters, because the higher the PSR code, the bigger the probability of a tooth having one of the signs mentioned above. The comparison between the simplified and the conventional method of examination revealed moderate concordance, and the author concludes that PSR must be used, not as a tool to substitute conventional examination and determine periodontal diagnosis, but as a simplified examination able to identify signs related to periodontal disease.

Resumo: O diagnóstico precoce das doenças periodontais é fundamental para a identificação da doença nos estágios iniciais. Com o intuito de incentivar o exame periodontal, uma nova metodologia, o Periodontal Screening and Recording (PSR) foi desenvolvida nos Estados Unidos, com o apoio da Academia Americana de Peridontologia e da Associação Dentária Americana. Este estudo foi realizado para analisar a relação entre o PSR e os principais parâmetros associados à patologia periodontal: sangramento à sondagem, presença de fatores retentivos de placa, profundidade de sondagem, recessão gengival, mobilidade dentária, envolvimento de furca, presença de placa bacteriana e perda óssea visível radiograficamente e também para comparar os dados obtidos entre o PSR e o exame convencional. 50 adolescentes com idade entre 15 a 19 anos e 50 indivíduos na faixa etária de 35 a 44 anos foram examinados clinicamente através da aplicação de índices que verificam a presença destes parâmetros e radiograficamente através das técnicas periapical e interproximal. Os resultados indicaram haver existência de uma associação significativa entre os códigos do PSR e os parâmetros clínicos e radiográficos, pois quanto maior o código do PSR, maior a probabilidade do dente apresentar um dos sinais citados acima. A comparação entre o método simplificado e o convencional mostrou haver concordância moderada e o autor conclui que o PSR deve ser usado, não como um instrumento para substituir o exame convencional e determinar o diagnóstico periodontal, mas como um exame simplificado capaz de verificar sinais associados às doenças periodontais. / Abstract: The early diagnosis of periodontal pathologies is essential to identify diseases in initial stages. In order to promote periodontal examination, a new methodology, the Periodontal Screening and Recording (PSR) was developed in the USA, supported by American Academy of Periodontology and American Dental Association. This study was conducted to analyses the relationship between PSR and the main parameters related to periodontal diseases: bleeding on probing, presence of plaque retentive factors, probing depth, gingival recession, dental mobility, furcation involvement, presence of bacterial plaque and bone loss identified by radiograph and also to compare the data obtained with PSR and the conventional method. Fifty adolescents aging from 15 to 19 years old and fifty subjects aging from 35 to 44 years old were examined clinically through application of indices which verify the presence of those parameters and radiographically through periapical and bitewing techniques. The results indicated existence of a significant association between PSR codes and radiographic and clinical parameters, because the higher the PSR code, the bigger the probability of a tooth having one of the signs mentioned above. The comparison between the simplified and the conventional method of examination revealed moderate concordance, and the author concludes that PSR must be used, not as a tool to substitute conventional examination and determine periodontal diagnosis, but as a simplified examination able to identify signs related to periodontal disease. / Orientador: Benedicto Egbert Corrêa de Toledo / Coorientador: Ercília Leal Dini / Banca: Carlos Rossa Júnior / Banca: Andréia Affonso Barretto Montandon Pompeu / Banca: Gisela Estela Rapp / Banca: Lili Luschke Bammann / Doutor

published_or_final_version / Dentistry / Master / Master of Dental Surgery

published_or_final_version / abstract / Dentistry / Master / Master of Dental Surgery

Periodontitis is a chronic inflammatory disease that affects over 116 million adults in the United States. A shift in the normal microflora occurs as periodontal disease develops resulting in a larger number of Gram-negative anaerobes and spirochetes. An increase in the oral spirochete, Treponema denticola, is highly correlated with periodontal disease progression and severity. The ability of this periopathogen to thrive in the subgingival crevice is dependent on complement evasion mechanisms. Earlier analyses demonstrated that the primary mechanism of T. denticola serum resistance is binding of the human complement regulatory protein, Factor H (FH), to the factor H-binding protein (FhbB). FH serves as cofactor in the Factor-I mediated cleavage of C3b and accelerates the decay of the C3 convertase complex, leading to downregulation of C3b production. Several pathogens bind FH, and a number of these bacterial binding proteins have been shown to bind plasminogen. Plasminogen is a plasma glycoprotein that circulates as a zymogen. Its active form, plasmin, degrades components of the extracellular matrix and cleaves complement proteins C3b and C5 inhibiting complement pathway progression. Through molecular and biochemical analyses, this study demonstrates that FhbB simultaneously binds plasminogen and FH to residues located on its positively and negatively charged surfaces, respectively, and that the two ligands do not compete for binding. This study also shows that the surface-bound plasminogen is available for proteolytic cleavage into the active serine protease plasmin. The activated plasmin could break down components of the periodontal tissue leading to increased nutrient availability and creation of a larger anaerobic environment where the bacteria can flourish, thereby promoting periodontal disease.

Periodontitis is a chronic inflammatory disease initiated by gram negative anaerobic bacteria. These bacteria possess pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) that interact with various receptors including Toll like receptors (TLRs). Bacterial DNA (bDNA) is one of the PAMPs mainly recognized by TLR9. Interaction of bDNA and its receptors leads to activation of inflammatory signaling pathways potentially resulting in periodontal bone destruction. The aim of this study was to determine the production of IL- 6 and IL-8 in response to periodontal bDNA from human osteoblastic cells (MG-63). MG- 63 cells were stimulated in duplicate for 20 hours with 100ng/μl of bDNA from various pathogens including Porhyromonas gingivalis, Esherichia coli, Streptococcus sanguinis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans as well as heat killed whole bacteria (1:100). E.coli LPS (10ng/μl) was used as a positive control in each experiment. To block TLR9 signaling, further experiments were carried out by treating MG-63 cells with chloroquine (10ng/μl) for 2 hours at 37ºC prior to stimulations. Cytokine levels were determined using enzyme linked-immunosorbent assay. Although IL-6 and IL-8 production was increased in response to periodontal bDNA in MG-63 cells, the results were not significant compared to unstimulated controls. As expected, E.coli DNA, E.coli LPS and heat killed whole bacteria stimulated significantly increased cytokine production (p<0.05). Blocking TLR9 with chloroquine did not affect the amount of cytokine production in bDNA stimulated cells suggesting that TLR9 may not be operant in triggering IL-6 and IL-8 production from MG- 63 cells. In conlusion, periodontal bDNA did not trigger significantly increased IL-6 and IL-8 production from MG-63 cells. Considering the involvement of several inflammatory mediators in periodontal bone destruction, further studies are warranted to assess the production of other cytokines in response to periodontal bDNA in human osteoblastic cells.

As histatinas são uma família de peptídeos presentes nas secreções salivares humanas tendo como membros mais importantes da família as histatinas 1, 3 e 5. Diversos trabalhos demonstraram atividade inibitória das histatinas sobre produtos bacterianos e derivados do hospedeiro envolvidos na doença periodontal, sugerindo uma função importante de defesa das histatinas na cavidade bucal na presença de doença periodontal. Este estudo teve por objetivo comparar as quantidades de histatinas 1, 3 e 5 e o total de histatinas presentes na saliva da parótida entre sujeitos com doença periodontal e sujeitos sem história prévia de doença periodontal. Participaram do estudo 20 sujeitos da pesquisa com doença periodontal e 20 sujeitos sem história prévia de doença periodontal. As coletas da secreção da parótida foram realizadas sob condições de estimulação gustativa com balas ácidas com auxílio de um coletor de saliva Carlson-Crittenden posicionado sobre o ducto de Stenson e conectado a um cilindro de borracha resfriado em gelo. A quantificação de histatinas presentes nas secreções salivares foi realizada pelo procedimento de precipitação por zinco seguido por quantificação utilizando-se cromatografia líquida de alta pressão de fase reversa. Não foram encontradas diferenças significativas nas quantidades de histatinas na saliva da parótida entre sujeitos com doença periodontal e sujeitos sem história prévia de doença periodontal, indicando que a doença periodontal não estimula o sistema não imune ou inato do hospedeiro a uma maior produção e liberação de histatinas na cavidade bucal. / Histatins are a family of peptides present in human salivary secretions. The major members of this family are histatins 1, 3, and 5. Several studies have shown inhibitory properties of histatins on bacterial and host-derived products which suggest an important role of defense for histatins in the presence of periodontal disease. This study aimed at comparing the levels of histatins 1, 3, and 5, and the total histatins in parotid saliva between periodontally healthy and compromised subjects. Twenty subjects with periodontal disease and twenty subjects with no previous history of periodontal disease had saliva samples collected from the parotid gland under gustatory stimulation using sour candies with the aid of a Carlson-Crittenden device positioned over the Stenson’s duct and connected to a polypropylene graduated cylinder chilled on ice. Histatins levels were quantified using the two-step procedure using zinc precipitation of histatins followed by reversed-phase high performance liquid chromatography. No statistical differences were found for levels of histatins 1, 3, and 5, and for the total histatins between periodontally healthy and compromised subjects, showing that the periodontal disease does not trigger a higher production and output of histatins by the innate host defense system.

Os tecidos periodontais estão em confronto contínuo com microrganismos capazes de disparar mecanismos da resposta imune inata, dando origem ao infiltrado inflamatório neutrofílico. A participação dos receptores tipo Toll (TLRs) na resposta de neutrófilos frente à periodontopatógenos associados à doença periodontal precisam ser determinados. Nesse estudo procuramos caracterizar o infiltrado inflamatório presente no peritônio de animais deficientes de TLR2-/-, avaliar a atividade fagocítica, bem como a produção de óxido nítrico (NO) e a atividade de mieloperoxidase (MPO) no curso da infecção por Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa). Os resultados revelaram um menor recrutamento de leucócitos para o peritônio de animais deficientes de TLR2 (TLR2-/-), com predomínio de macrófagos no exsudato peritoneal tanto de animais selvagens (WTTLR2-/-) como nos animais nocautes. A análise da atividade fagocítica revelou uma menor taxa de fagocitose pelas células do exsudato de animais TLR2-/- e, ainda, a deficiência do receptor TLR2 inibiu a produção de NO (óxido nítrico) e aatividade de MPO (mieloperoxidase). Adicionalmente, são apresentados os resultados referentes ao protocolo de doença periodontal experimentalmente induzida (DPEI) com Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) em camundongos deficientes de TLR2. Os resultados mostraram que 100% dos animais deficientes de TLR2 sobreviveram à infecção durante o período de observação. Em relação à análise de perda óssea os dados revelaram uma maior perda progressiva de osso alveolar na região dos molares de animais deficientes de TLR2. A ausência do receptor interferiu com a disseminação da bactéria, uma vez que se observou um grande número de bacilos no linfonodo e baço dos animais que não expressaram TLR2, diferente do observado para os animais selvagens (WTTLR2-/-). Os resultados indicam a importância da sinalização via TLR2 durante a resposta imune contra Aggregatibacter actinomycetemcomitans. / Polymorphonuclear leukocytes (PMNs) are the first line of defense against bacterial infections. PMNs express a numerous pattern-recognition receptors (PRR) that facilitate identification of invading microorganisms. Toll-like receptors (TLRs) represent the main class of PRR involved to a recognize pathogenic microorganism. However, the role played by TLR-2 in the recognition and killing of Aggregatibacter actinomycentemcomitans by PMNs is unknown. Thus, we investigated the ability of TLR-2 to mediate neutrophil phagocytosis and bactericidal activity. To determine the role of A. actinomycentemcomitans in triggering neutrophil infiltration, TLR2-/- mice were infected intraperitoneally (2x109 bacteria) and sacrificed after 24 hours. Peritoneal inflammatory cells were isolated and analyzed by optical microscopy. Examination of local inflammatory infiltrates revealed that neutrophil influx into peritoneal cavity of TLR2-/- mice was similar than that observed into their littermate controls wild type C57BL/6 mice (WT). A. actinomycentemcomitans was detected in the spleen of the TLR2-/- mice but not in WT. In the phagocytic assays, TLR2-/- presented minor number of ingested inflammatory cells than WT. Peritoneal cells were stimulated with A. actinomycetemcomitans antigens, and NO and myeloperoxidase was measured after 48 hours; results showed that TLR2-/- cells produce less NO and MPO than WT. In addition, TLR2-/- deficient mice presented higher bone loss following oral infection with A. actinomycetemcomitans when compared with WT and higher tissue destruction.

A periodontite é uma doença bucal infecto-inflamatória resultante da quebra da homeostase entre biofilme dentário e o hospedeiro. Diversos estudos tem mostrado que a obesidade e o sobrepeso são importantes fatores de risco para o desenvolvimento da doença periodontal. O tecido adiposo representa um reservatório de mediadores inflamatórios. A chemerin é uma adipocina secretada pelo tecido adiposo e atua em numerosos processos fisiológicos, como metabolismo, proliferação e diferenciação celular. Levando em consideração que alterações de adiposidade, observadas por medidas antropométricas, estão relacionadas com maior incidência de periodontite, e que chemerin, uma citocina produzida por adipócitos, está envolvida na resposta inflamatória, nota-se uma lacuna na literatura que correlacione o papel de chemerin na progressão da doença periodontal. Portanto, o presente projeto tem como objetivo avaliar a participação da adipocina chemerin no desenvolvimento da doença periodontal em camundongos hiperlipidêmicos e avaliar o efeito desta adipocina sobre a diferenciação e ativação de células ósseas. No estudo in vivo, os animais foram submetidos ao modelo experimental de hiperlipidemia e/ou periodontite e divididos em 4 grupos: Grupo I: camundongos controle. Grupo II: camundongos controle infectados pela Porphyromonas gingivalis (Pg). Grupo III: camundongos hiperlipidêmicos não infectados. Grupo IV: camundongos hiperlipidêmicos infectados pela Pg. As amostras foram coletadas depois de 15, 30 e 60 dias. No estudo in vivo, o modelo de dieta hiperlipidêmica adotado foi eficaz em aumentar os níveis circulantes de colesterol e chemerin, embora não tenha alterado o peso dos animais. Observa-se ainda maior adiposidade corporal mostrada pelo aumento de peso dos tecidos adiposos retroperitoneal e epididimal dos animais hiperlipidêmicos. Na análise morfométrica foi observada uma maior perda óssea no grupo hiperlipidêmico quando comparado ao controle e essa perda óssea foi semelhante ao observado no animal infectado por Pg. Foi observado que a expressão de chemerin na gengiva e plasma se correlacionam com marcadores de osteoclastos no tecido gengival e com a reabsorção alveolar. No estudo in vitro, foi observado que chemerin leva à maior formação de depósitos mineralizados em cultura de osteoblastos e maior reabsorção óssea em cultura de osteoclastos. Conclui-se que a hiperlipidemia provoca reabsorção óssea alveolar semelhante ao observado com infecção oral com P. gingivalis. Chemerin participa da reabsorção óssea alveolar visto que os níveis desta adipocina na gengiva e plasma se correlacionam com marcadores de osteoclastos no tecido gengival e com a reabsorção alveolar. Chemerin aumenta atividade de osteoblastos e osteoclastos in vitro. / Periodontitis is an infectious inflammatory oral disease resultant from the breaking of homeostasis between biofilm and the host. Several studies have shown that overweight and obesity are major risk factors for the development of periodontal disease. Adipose tissue is a reservoir of inflammatory mediators. The chemerin is an adipokine secreted by adipose tissue and acts in numerous physiological processes, such as metabolism, proliferation and differentiation. Considering that adiposity changes, observed by anthropometric measurements, are related to higher incidence of periodontitis, and chemerin, a cytokine produced by adipocytes, is involved in the inflammatory response, there is a gap in the literature that correlates the paper chemerin in the progression of periodontal disease. Therefore, this project aims to evaluate the participation of chemerin adipokine in the development of periodontal disease in hyperlipidemic mice and evaluate the effect of this adipokine on the differentiation and activation of bone cells. In the in vivo study, the animals underwent to the experimental model of hyperlipidemia and / or periodontitis and divided into 4 groups: Group I: control mice. Group II: control mice infected with Porphyromonas gingivalis (Pg). Group III: hyperlipidemic mice not infected. Group IV: hyperlipidemic mice infected by Pg. Samples were collected after 15, 30 and 60 days. In the in vivo study, the model of hyperlipidemic diet adopted was effective in increasing circulating levels of cholesterol and chemerin, although it has not changed the weight of the animals. Greater body adiposity shown by the increased weight of the retroperitoneal and epididymal adipose tissues of hyperlipidemic animals was observed. In morphometric analysis, we observed an increased bone loss in hyperlipidemic group compared to the control and that this bone loss was similar to the observed in animals infected with Pg. It was observed that the gum chemerin expression and plasma correlate with markers of osteoclast in the gingival tissue and alveolar resorption. In the in vitro study, it was observed that chemerin leads to increased formation of mineralized deposits in cultured osteoblasts and increased bone resorption in osteoclast culture. It concludes that hyperlipidemia causes alveolar bone resorption similar to that observed on oral infection with P. gingivalis. Chemerin participates in alveolar bone resorption, at the levels of this adipokine gum and plasma correlate with osteoclast markers in gingival tissue and alveolar resorption. Chemerin increases osteoblast activity and osteoclasts in vitro.