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Análises Moleculares de Linhagens selvagens e mutantes de Pestalotiopsis spp. associadas a plantas e basidiomicetos da Amazônia Brasileira.Banhos, Elissandro Fonseca dos, 93-99160-6499 06 July 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-07-06 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Fungi genus Pestalotiopsis can be found as parasites or endophytes, being quite disseminated to
the various habitats. Bioprospecting of Pestalotiopsis spp. have demonstrated the potential of
this strains in obtaining bioactive compounds as anticancer or antimicrobial, that due the
diversity of secondary metabolites are capable of producing. At work we have expanded
knowledge about genomics, proteomics and metabolomics Pestalotiopsis strains isolated from
Amazonian environments. They were reactivated 33 Pestalotiopsis strains of LaBMicra
collection of the Federal University of Amazonas - UFAM. Were evaluated about their
morphological diversity (conidia structure), genetic (Its1 and Its2 / AFLP), protein (SDS-PAGE)
and they secondary metabolites were evaluated for chemical profile obtained by mass
spectrometry (APCI-MS ). Secondary metabolites were tested against tumor cells SKMEL-19,
CAL-27, ACP02 and against strain of C. albicans CFAM - 1342, associating the results with
yours metabolomic profile. The most promising strain was subjected to mutagenesis by UV
(UVC) light induction. The 33 strains of Pestalotiopsis spp. were isolated from nine plant genera
as Euterpe sp., Gustavia spp., Myrcia sp. Duguetia sp., Rollinia sp., Arrabidaea sp. Victoria sp.,
Pinus sp., and associated Basidiomycetes. The most representative species were P. mangiferae,
P. microspora and P. clavispora with eight, seven and six strain respectively. The extracts did
not showed promising results against any of the tumor cells and nine extracts showed activity
against C. Albicans. The chemical profile assessed over 60 days showed that the strain P.
microspora (P12 / AnspCg1.1.3a) isolated of Rollinia sp. initiates the stationary growth phase of
20 days of cultivation, and the cultivation time best for obtaining bioactive compounds is 30
days. The analyzes of the reduction of the carbon source, growth of mycelial mass and the pH of
the fortified protein profile results confirmed that the strain arrive the metabolic apex with 25
days.The production of mutant strains PX was efficient, but the strains did not show anticandida
activity in their extracts. The secreted protein profile was also modified proteins of 50 to 140
kDa being expressed with greater intensity. Through large-scale cultivation was possible positive
evaluation by bioautography and CCDP isolation subfractions which analyzed by 1H and 13C
NMR showed the presence of 3-phenyl-propionic acid molecule known for its ecological role in
protecting the host against plant pathogens. / Fungos do gênero Pestalotiopsis podem ser encontrados como parasitas ou endófitos, sendo
bastante disseminados aos diversos habitats. A bioprospecção de Pestalotiopsis spp. têm
demonstrado o potencial deste gênero na obtenção de compostos bioativos como
anticancerígenos e antimicrobianos, isso por conta da diversidade de metabólitos secundários
que são capazes de produzir. No trabalho ampliou-se o conhecimento a cerca da genômica,
proteômica e metabolômica de linhagens de Pestalotiopsis isolados de ambientes Amazônicos.
Foram reativadas 33 linhagens do gênero Pestalotiopsis da Coleção do LaBMicra da
Universidade Federal do Amazonas - UFAM. Foram avaliadas com relação a sua diversidade
morfológica (estrutura de conídios), genética (Its1 e Its2/AFLP), proteica (SDS-PAGE) e seus
metabólitos secundários foram avaliados através do perfil químico obtido por espectrometria de
massas (APCI-MS). Os metabólitos secundários foram ensaiados frente a células tumorais
SKMEL-19, CAL-27, ACP02 e frente a cepa de C. albicans CFAM – 1342, associando os
resultados ao perfil metabolômico. A linhagem mais promissora foi submetida a mutagênese por
indução de luz ultravioleta (UVC). As 33 linhagens de Pestalotiopsis spp. foram isoladas de
nove gêneros vegetais como Euterpe sp., Gustavia spp., Myrcia sp. Duguetia sp., Rollinia sp.,
Arrabidaea sp. Victoria sp., e Pinus sp., além de associadas a Basidiomycetes. As espécies mais
representativas foram P. mangiferae, P. microspora e P. clavispora, com oito, sete e seis
linhagens respectivamente. Os extratos das linhagens não apresentaram resultado promissor
contra nenhuma das células tumorais e nove extratos apresentaram atividade frente a C. albicans.
O perfil químico avaliado ao longo de 60 dias demonstrou que a linhagem P. microspora (P12/
AnspCg1.1.3a) isolada de Rollinia sp. chega a fase estacionária de crescimento com 20 dias de
cultivo, e que o melhor tempo de cultivo para a obtenção dos compostos bioativos é 30 dias. As
análises da redução da fonte de carbono, crescimento da massa micelial e pH do meio
fortaleceram os resultados do perfil proteico confirmando que a linhagem chega ao ápice
metabólico com 25 dias. A produção de linhagens PX mutantes foi eficiente, mas as linhagens
não apresentaram atividade anticandida em seus extratos. O perfil de proteínas secretadas
também foi modificado com proteínas de 50 a 140kDa sendo expressas com maior intensidade.
Através do cultivo em larga escala foi possível a avaliação positiva por bioautografia e por
CCDP o isolamento de subfrações que analisadas por RMN de 1H e 13C revelaram a presença do
ácido 3-fenil-propanóico, molécula conhecida por sua função ecológica na proteção da planta
hospedeira contra patógenos.
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Fungos associados a sementes de pau-brasil: efeito de local, colheita e armazenamento, prejuízos e controle com fungicidas / Fungi associated to brazilian-wood seeds: place effect, harvest and storage, damages and fungicide controlPadulla, Tathiana Lisbôa 28 September 2006 (has links)
Os objetivos deste trabalho foram efetuar o levantamento de fungos presentes nas sementes de pau-brasil coletadas em dois locais, no momento da coleta e após o armazenamento; verificar o efeito desses fungos na germinação das sementes antes e durante o período de armazenamento; avaliar a transmissão de fungos encontrados em maior incidência nas sementes e comparar o tratamento de sementes com fungicidas como forma de controle de fungos. Para tanto, o trabalho foi dividido em quatro partes: (1) utilização de sementes do campus da ESALQ/USP, em Piracicaba (SP), coletadas diretamente das árvores e após queda ao solo, armazenadas por 15 dias em ambiente de laboratório e câmara fria; (2) utilizar sementes coletadas diretamente das árvores e após queda ao solo, no campus da ESALQ/USP, em Piracicaba (SP), e coletadas do solo na Reserva Biológica e Estação Experimental de Moji-Guaçu, em Mogi-Guaçu (SP), armazenadas em ambiente e em câmara fria e seca, por 15 e 30 dias; (3) comparar o tratamento de sementes com carboxim+tiram, benomil e captam, a fim de determinar a eficiência no controle dos fungos incidentes; (4) verificar a transmissão de fungos por sementes transplantando plântulas para vasos, avaliando diariamente os sintomas e identificando os patógenos associados. Os resultados mostraram que os fungos incidentes foram Pestalotiopsis sp., Cladosporium cladosporioides, Penicillium sp., Aspergillus sp., Phoma sp., Epicoccum sp. e Alternaria spp. Não houve diferença na incidência de fungos e na porcentagem de plântulas normais entre as sementes coletadas em Piracicaba e em Mogi-Guaçu. A melhor coleta de sementes de pau-brasil no campus da ESALQ/USP foi diretamente das árvores, quando estas tinham aproximadamente 65 dias pós-antese, e foram capazes de originar maior porcentagem de plântulas normais. Em relação ao armazenamento, as sementes mantiveram a germinação até 15 dias de armazenamento em laboratório e os fungos de armazenamento incidentes foram Aspergillus sp. e Penicillium sp. No tratamento com fungicidas, captam foi o fungicida que mais reduziu a incidência dos fungos e preservou a qualidade fisiológica das sementes de pau-brasil, embora seja necessário acertar a dose do fungicida, diminuindo a porcentagem de plântulas anormais e sementes mortas, colaborando para o aumento de plântulas normais capazes de originar mudas sadias. Foi evidenciada a patogenicidade e transmissão de Pestalotiopsis sp. e Cladosporium cladosporioides, causando lesões em cotilédones e hipocótilos de plântulas anormais. / The objectives of this work were carry out the survey of fungi associated with brazilian-wood seeds collected in two places, in the collected moment and during the storage; verify the effect of these fungi in seed germination before and during the storage period; realize the transmission test for the fungi found in higher incidence in seeds and utilize the seed chemical treatment like a way of fungi control. For this, the work had been divided in four parts: (1) utilization of seeds from ESALQ/USP, in Piracicaba (SP), recently collected, collected directly from trees and after drop to soil, stored for 15 days in laboratory environmental and cold chamber; (2) seeds collected directly from trees and after drop to soil, in ESALQ/USP, in Piracicaba (SP), and collected from soil in Biological Forest and Experimental Station of Moji-Guaçu, in Mogi-Guaçu (SP), stored in laboratory and cold chamber, for 15 and 30 days; (3) carry out the seeds treatment with carboxin+thiram, benomyl and captan, to determine the control efficiency in incident fungi; (4) effectuate the fungi transmission test by brazilian-wood seeds, transplanting seedlings to pots and evaluating the symptoms daily, identifying the pathogens associated with them. The results showed that the associated fungi were Pestalotiopsis sp., Cladosporium cladosporioides, Penicillium sp., Aspergillus sp., Phoma sp., Epicoccum sp. e Alternaria spp. There was no difference in fungi incidence and in the normal seedlings percentage between seeds collected in Piracicaba and in Mogi-Guaçu The best collect brazilian-wood seeds in ESALQ/USP was directly from trees, when this had approximately 65 days after anthesis and, originating a higher percentage of normal seedlings. In relation to storage, the seeds kept the germination till 15 days in laboratory and storage fungi associated with seeds was Aspergillus sp. And Penicillium sp. In fungicide treatment, captan was the fungicide that showed a higher reduction in the fungi incidence and preserved the physiological quality of brazilian-wood seeds, however it is necessary adjust the fungicide dose, decreasing the percentage of abnormal seedlings and dead seeds, collaborating for the increase of normal seedlings capable of originate healthy seedlings. The pathogenicity and transmission of Pestalotiopsis sp. and Cladosporium cladosporioides, causing lesions in cotyledons and hypocotylous of abnormal seedlings were evident
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Fungos associados a sementes de pau-brasil: efeito de local, colheita e armazenamento, prejuízos e controle com fungicidas / Fungi associated to brazilian-wood seeds: place effect, harvest and storage, damages and fungicide controlTathiana Lisbôa Padulla 28 September 2006 (has links)
Os objetivos deste trabalho foram efetuar o levantamento de fungos presentes nas sementes de pau-brasil coletadas em dois locais, no momento da coleta e após o armazenamento; verificar o efeito desses fungos na germinação das sementes antes e durante o período de armazenamento; avaliar a transmissão de fungos encontrados em maior incidência nas sementes e comparar o tratamento de sementes com fungicidas como forma de controle de fungos. Para tanto, o trabalho foi dividido em quatro partes: (1) utilização de sementes do campus da ESALQ/USP, em Piracicaba (SP), coletadas diretamente das árvores e após queda ao solo, armazenadas por 15 dias em ambiente de laboratório e câmara fria; (2) utilizar sementes coletadas diretamente das árvores e após queda ao solo, no campus da ESALQ/USP, em Piracicaba (SP), e coletadas do solo na Reserva Biológica e Estação Experimental de Moji-Guaçu, em Mogi-Guaçu (SP), armazenadas em ambiente e em câmara fria e seca, por 15 e 30 dias; (3) comparar o tratamento de sementes com carboxim+tiram, benomil e captam, a fim de determinar a eficiência no controle dos fungos incidentes; (4) verificar a transmissão de fungos por sementes transplantando plântulas para vasos, avaliando diariamente os sintomas e identificando os patógenos associados. Os resultados mostraram que os fungos incidentes foram Pestalotiopsis sp., Cladosporium cladosporioides, Penicillium sp., Aspergillus sp., Phoma sp., Epicoccum sp. e Alternaria spp. Não houve diferença na incidência de fungos e na porcentagem de plântulas normais entre as sementes coletadas em Piracicaba e em Mogi-Guaçu. A melhor coleta de sementes de pau-brasil no campus da ESALQ/USP foi diretamente das árvores, quando estas tinham aproximadamente 65 dias pós-antese, e foram capazes de originar maior porcentagem de plântulas normais. Em relação ao armazenamento, as sementes mantiveram a germinação até 15 dias de armazenamento em laboratório e os fungos de armazenamento incidentes foram Aspergillus sp. e Penicillium sp. No tratamento com fungicidas, captam foi o fungicida que mais reduziu a incidência dos fungos e preservou a qualidade fisiológica das sementes de pau-brasil, embora seja necessário acertar a dose do fungicida, diminuindo a porcentagem de plântulas anormais e sementes mortas, colaborando para o aumento de plântulas normais capazes de originar mudas sadias. Foi evidenciada a patogenicidade e transmissão de Pestalotiopsis sp. e Cladosporium cladosporioides, causando lesões em cotilédones e hipocótilos de plântulas anormais. / The objectives of this work were carry out the survey of fungi associated with brazilian-wood seeds collected in two places, in the collected moment and during the storage; verify the effect of these fungi in seed germination before and during the storage period; realize the transmission test for the fungi found in higher incidence in seeds and utilize the seed chemical treatment like a way of fungi control. For this, the work had been divided in four parts: (1) utilization of seeds from ESALQ/USP, in Piracicaba (SP), recently collected, collected directly from trees and after drop to soil, stored for 15 days in laboratory environmental and cold chamber; (2) seeds collected directly from trees and after drop to soil, in ESALQ/USP, in Piracicaba (SP), and collected from soil in Biological Forest and Experimental Station of Moji-Guaçu, in Mogi-Guaçu (SP), stored in laboratory and cold chamber, for 15 and 30 days; (3) carry out the seeds treatment with carboxin+thiram, benomyl and captan, to determine the control efficiency in incident fungi; (4) effectuate the fungi transmission test by brazilian-wood seeds, transplanting seedlings to pots and evaluating the symptoms daily, identifying the pathogens associated with them. The results showed that the associated fungi were Pestalotiopsis sp., Cladosporium cladosporioides, Penicillium sp., Aspergillus sp., Phoma sp., Epicoccum sp. e Alternaria spp. There was no difference in fungi incidence and in the normal seedlings percentage between seeds collected in Piracicaba and in Mogi-Guaçu The best collect brazilian-wood seeds in ESALQ/USP was directly from trees, when this had approximately 65 days after anthesis and, originating a higher percentage of normal seedlings. In relation to storage, the seeds kept the germination till 15 days in laboratory and storage fungi associated with seeds was Aspergillus sp. And Penicillium sp. In fungicide treatment, captan was the fungicide that showed a higher reduction in the fungi incidence and preserved the physiological quality of brazilian-wood seeds, however it is necessary adjust the fungicide dose, decreasing the percentage of abnormal seedlings and dead seeds, collaborating for the increase of normal seedlings capable of originate healthy seedlings. The pathogenicity and transmission of Pestalotiopsis sp. and Cladosporium cladosporioides, causing lesions in cotyledons and hypocotylous of abnormal seedlings were evident
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