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Programmed cell death in Plasmodium infected normal and sickle trait red blood cellsBrand, Verena Beatrice. January 2007 (has links)
Tübingen, Univ., Diss., 2007.
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Redoxnetzwerke des Malariaerregers Plasmodium Validierung von Schlüsselenzymen für neue chemotherapeutische AnsätzeBuchholz, Kathrin January 1900 (has links) (PDF)
Zugl.: Giessen, Univ., Diss., 2008
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Redoxnetzwerke des Malariaerregers Plasmodium Validierung von Schlüsselenzymen für neue chemotherapeutische Ansätze /Buchholz, Kathrin. January 2008 (has links) (PDF)
Universiẗat, Diss., 2008--Giessen.
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Untersuchungen zur simultanen Gabe von Artesunat und Mefloquin in der Behandlung der unkomplizierten Plasmodium falciparum - Malaria in Afrika und Südostasien /Müller, Edgar. January 2008 (has links)
Zugl.: Dresden, Techn. Universiẗat, Habil.-Schr., 2007.
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Charakterisierung von Adenylatkinasen aus Plasmodium falciparum und Thioredoxinreduktase-assoziierten Proteinen aus DipterenBolt-Ulschmid, Julia Katharina. January 2004 (has links) (PDF)
Würzburg, Univ., Diss., 2004.
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Antiplasmodial activity of natural products : effect of incorporation into erythrocyte membrane /Ziegler, Hanne Lindvig. January 2002 (has links)
Ph.d.
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Development of a high-throughput bioassay to determine the rate of antimalarial drug action using fluorescent vitality probesLaming, Dustin January 2016 (has links)
Malaria is one of the most prevalent diseases in Africa and the Plasmodium falciparum species is widely accepted as the most virulent, with a fatality rate of 15 – 20 % of reported cases of infection. While various treatments have been accepted into early stage clinical trials there has been little progress towards a proven vaccine. Pending a long term solution, endemic countries rely heavily on the development of innovative drugs with acute efficacy coupled with rapids mode of action. Until recently the rate of drug action has been measured by light microscopic examination of parasite morphology using blood slides of drug treated parasite cultures at regular time intervals. This technique is tedious and, most importantly, subject to interpretation with regards to distinguishing between viable and comprised parasite cells, thus making it impossible to objectively quantitate the rate of drug action. This study aimed to develop a series of bioassays using the calcein-acetoxymethyl and propidium iodide vitality probes which would allow the rate of drug action on Plasmodium falciparum malaria parasites to be assessed and ranked in relation to each other. A novel bioassay using these fluorescent vitality probes coupled with fluorescence microscopy was developed and optimized and allowed the rate of drug action on malaria parasites to be assessed i) rapidly (in relation to current assay techniques) and ii) in a semi-quantitative manner. Extrapolation to flow cytometry for improved quantification provided favourable rankings of drug killing rates in the pilot study, however, requires further development to increase throughput and approach the ultimate goal of producing a medium-throughput assay for rapidly assessing the rate of action of antimalarial drugs. Attempts to adapt the assay for use in a multiwell plate reader, as well as using ATP measurements as an indication of parasite vitality after drug treatment, was met with erratic results. The viability probes assay as it stands represents an improvement on other assay formats in terms of rapidity and quantification of live/compromised parasites in cultures.
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Organização espacial da transcrição como um potencial mecanismo de expressão gênica em Plasmodium falciparum / Spatial organization of transcription as a potential gene expression mechanism in Plasmodium falciparumMoraes, Carolina Borsoi [UNIFESP] January 2009 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-12-06T22:55:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Ministério da Educação, Ciência e Tecnologia da Coreia do Sul (MEST) / Governo da província de Gyeonggi da Coreia do Sul / Instituto Coreano de Informação Científica e Tecnológica (KISTI) / Crescentes evidências mostram que a organização espacial da
transcrição é um fator epigenético importante na regulação gênica em
eucariotos. Em células de mamíferos, os genes são transcritos em estruturas
nucleares discretas conhecidas como fábricas de transcrição, e genes com
funções relacionadas e co-regulados compartilham as mesmas fábricas de
transcrição. Plasmodium falciparum apresenta um padrão de expressão
gênica bastante complexo durante o ciclo eritrocítico, contrastando
paradoxalmente com o baixo número de putativos fatores de transcrição
codificados pelo seu genoma. Por outro lado, mecanismos epigenéticos são
importantes na regulação gênica neste parasita. Nesta tese, investigamos a
organização da transcrição em P. falciparum visando determinar se a
organização nuclear está relacionada com a expressão/regulação gênica ao
longo do desenvolvimento do parasita.
Com este objetivo, marcamos transcritos nascentes com BrUTP em
formas eritrocíticas de P. falciparum. Assim como em mamíferos, a
transcrição no parasita também está organizada em focos nucleoplásmicos
discretos, chamados fábricas de transcrição. Análises automatizadas de
imagens em 3D mostram que o número e a intensidade das fábricas de
transcrição variam durante o ciclo eritrocítico, estando correlacionados com o
número de genes expressos em cada estágio, mas não com o volume
nuclear. O baixo número de fábricas indica que os genes ativos compartilham
as fábricas enquanto estão sendo transcritos.
Surpreendentemente, as fábricas são espacilamente redistribuídas
durante o desenvolvimento de anéis para trofozoítas, com a periferia nuclear
sendo a zona de transcrição favorita nos anéis, enquanto nos trofozoítas as
fábricas estão igualmente distribuídas por todo o nucleoplasma. Também
observamos que a transcrição por RNA polimerase I ocorre principalmente
nas áreas centrais dos núcleos em trofozoítas, sugerindo que os
componentes nucleolares podem ser dispersos devido à entrada na fase S.
Assim como nos eucariotos superiores, as fábricas de transcrição em P.
falciparum também se localizam em áreas nucleares com baixa densidade de
cromatina.
Análises de imunofluorescência combinando incorporação de BrUTP
com marcadores nucleares mostram que as fábricas de transcrição formam
um compartimento exclusivo, diferente do compartimento de silenciamento
definido por PfSir2A ou do compartimento de cromatina ativa definido por
H4ac ou H3K79me3. Para estudar a organização espacial da cromatina e
entender como os genes co-regulados interagem com as fábricas de
transcrição, decidimos realizar ensaios de hibridização fluorescente in situ
(fluorescence in situ hybridization, FISH).
Durante a realização de ensaios de FISH seguindo protocolos
publicados, observamos uma grande variação na morfologia nuclear dos
parasitas, o que nos moveu a otimizar esta técnica. Utilizando análises
automatizadas de imagens, mostramos que os parasitas desidratados por
secagem ao ar e fixados por curtos períodos de tempo à temperatura
ambiente apresentam uma variação intra-populacional maior em relação à
forma e ao volume nucleares após o ensaio de FISH, assim como valores de
volume quase duas vezes maiores, do que núcleos de parasitas fixados em
suspensão por longos períodos de tempo e em baixas temperaturas.
Também observamos que a fixação em suspensão leva a uma melhor
conservação da estrutura nuclear, e índices de colocalização mais altos para
duas sondas de repetições adjacentes das extremidades cromossômicas,
Rep20 e telômeros. Em resumo, nossos resultados mostram que o tipo de
protocolo de fixação utilizado antes da realização do desenvolvimento de
FISH é um fator crucial para a conservação apropriada da arquitetura
nuclear. / Growing evidence points that transcription spatial organization is an
important epigenetic factor for eukaryotes gene regulation. In mammalian
cells, genes are transcribed in discrete nuclear structures known as
transcription factories, and developmentally co-regulated, functionally related
genes have been shown to share factories. Plasmodium falciparum shows a
remarkably complex pattern of gene expression during the erythrocytic cycle,
paradoxically contrasting with the low number of putative transcription factors
encoded by its genome. However, epigenetic mechanisms are important for
gene regulation in this parasite. In this thesis, we investigated transcription
organization of P. falciparum in order to determine if nuclear architecture is
related with developmentally regulated gene expression.
To this aim, we have labeled nascent transcrips with BrUTP in P.
falciparum erythrocytic forms. Transcription in organized in discrete
nuceloplasmic foci, the transcription factories. Automated 3D analysis of
confocal images shows the number and intensity of transcription factories
change during the erythrocytic cycle, correlating with the number of genes
expressed at each stage but not with the nuclear volume. The low number of
factories indicates that active genes share factories while being transcribed.
Unexpectedly, factories spatially redistribute from ring to trophozoites,
being the nuclear periphery the preferential transcription zone in rings while in
trophozoites factories are equally distributed throughout the nucleoplasm. We
also observed that RNApolymerase I transcription occurs mostly at central
nuclear areas in trophozoites, suggesting that nucleolar components may be
dispersed upon S phase transition. Like in higher eukaryotes, in P. falciparum
transcription factories occur on nuclear areas with low chromatin density.
Immunofluorescence analysis of P. falciparum nuclear markers
combined with BrUTP incorporation show that transcription factories are a
novel and exclusive nuclear compartment, different from the silent
compartment defined by PfSir2A or the active chromatin compartment defined
by H4ac and H3K79me3. In order to study the spatial organization of
chromatin, and how co-regulated, functionally related genes interact with
transcription factories, we decided to perform fluorescence in situ
hybridization (FISH).
While performing FISH with published protocols, we observed great
variation in the parasite nuclear morphology, prompting us to optimize this
technique. Using automated image analysis, we show that parasites
dehydrated by air-drying and fixed for short periods at room temperature
present after FISH higher intra-population variation of nuclear shape and
volume, as well as almost two-times higher relative volume values, than
parasite nuclei fixed in suspension for long periods at low temperatures. We
also observe that longer fixation in suspension leads to improved
conservation of the nuclear structure, with chromosome end clusters
preferentially locating at the nuclear periphery, and higher colocalization
indexes for two adjacent chromosome end probes, Rep20 and telomere.
Overall, our results show that the type of fixation protocol applied prior to
FISH is crucial for the conservation of nuclear architecture. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Antígeno 175 de ligação ao eritrócito (eba-175) de plasmodium falciparum: determinação genotípica em isolados de indivíduos naturalmente expostos residentes em área endêmica brasileira de maláriaSilva, Daiana de Souza Perce da January 2011 (has links)
Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T00:45:49Z
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Previous issue date: 2011-04-19 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O Antígeno de Ligação ao Eritrócito de 175kDa (EBA-175) é o ligante preferencial do P. falciparum
no processo de penetração em eritrócitos sendo considerado, portanto, um importante antígeno
candidato à vacina, O EBA-175 apresenta duas regiões bem caracterizadas: a região II - conservada,
imunogênica e com 2 segmentos ricos em cisteína (F1 e F2) que estão envolvidos na ligação do parasito
à glicoforina-A da superfície dos eritrócitos e, a região III – apresentando fragmentos C (cepa CAMP) e F
(cepa FCR3), que são mutuamente exclusivos, que definem as famílias alélicas do EBA-175.
Estudos realizados em áreas hiperendêmicas de malária na África mostraram uma forte associação
entre a forma clínica da doença e o dimorfismo da região III do EBA-175. As diferenças observadas entre
áreas endêmicas em relação aos parasitos circulantes são fatores importantes em termos de estratégias
de desenvolvimento de uma vacina visto que sua eficácia pode variar em diferentes cenários
epidemiológicos.
Neste estudo avaliou-se a diversidade genética das regiões II e III do EBA-175 apresentada pelos
isolados naturais de P. falciparum provenientes de Porto Velho (RO), área de transmissão instável como
são as áreas brasileiras, associando-a as variáveis de morbidade e exposição à malaria. Os isolados,
obtidos ao longo de 13 anos, foram divididos em grupos de acordo com o ano da coleta: PV94/1994 (n=
101), PV02/2002 (n= 57) e PV07/2007 (n=30). Após a extração do DNA o polimorfismo genético foi
analisado por PCR e seqüenciamento.
Observamos na região II apenas um tipo de fragmento, com 926 pb. Na região III, observamos o
clássico dimorfismo com uma freqüência maior do fragmento-C (84.3%). A infecção mista foi observada
em 1,6% dos isolados. O fragmento-C foi amplificado em maior freqüência nos isolados das três coletas
realizadas. Não observamos diferenças nas frequências dos fragmentos C e F entre os 3 grupos
estudados. A análise do seqüenciamento da região II revelou 5 alterações nucleotídicas em 3 dos 15
isolados. Essas alterações levaram a 2 trocas de aminoácidos. A análise do seqüenciamento da região III
evidenciou: no fragmento-C, 8 trocas de nucleotídeos em 3 das 45 amostras. Essas alterações levaram a
7 mudanças de aminoácidos; no fragmento-F, 2 alterações nucleotídicas foram reveladas em 2 das 11
amostras. Estas alterações levaram a 4 trocas de aminoácidos. Esses dados sugerem que não há
diferenças significantes nas porções gênicas que codificam as regiões II e III do EBA-175 entre os
isolados de P. falciparum circulantes em Porto Velho. Além disso, observamos que a frequência do
dimorfismo alélico do EBA-175 é temporalmente estável e ausência de associação entre o polimorfismo
encontrado e as variáveis de morbidade e exposição à malária. / P. falciparum Erythrocyte Binding Antigen 175 (EBA-175) plays a central role in erythrocytes
invasion being considered, therefore, a target for malaria vaccine development.This antigen
present to well characterized regions: the region II - conserved and immunogenic, that contains
two cysteine-rich segments (F1 and F2), which are involved in binding to glycophorin-A on the
surface of erythrocytes and, the region III – that contains mutually exclusive C (strain CAMP)
and F (strain FCR3) fragments, which defines the two allelic families of EBA-175.
Several studies performed in high endemicity malaria area in Africa have shown the
influence of this dimorphism on clinical disease and outcome. The differences observed between
different endemic areas in relation to exposed individuals and the circulating parasites are
important factors in terms of vaccine strategies since the efficacy of a potential vaccine may vary
in different epidemiological scenarios. The goal of this study was to evaluate the genetic
diversity of regions II and III of EBA-175 in P. falciparum isolates from Porto Velho (RO), a
region of malaria unstable transmission, and the influence of this diversity on malaria morbidity
and exposure variables. The blood samples were collected in three time points between 1994,
2002 and 2007 (PV94 group, n=101; PV02 group, n=57; PV07 group, n=30, respectively). The
genetic polymorphism was analyzed by PCR and sequencing.
We observed in the region II only one type of fragment with 926 bp. In the region III we
observed the classic dimorphism with a higher frequency of the C-fragment (84.3%). The mixed
infection was observed in 1.6% of isolates. There were no differences in the frequency of
fragments C and F among the 3 groups. Sequencing of region II revealed 5 nucleotide changes
in 3 of 15 isolates, leading to 2 amino acids replacements. Sequencing of region III revealed
that: in the C-fragment there were 8 nucleotide changes in 3 of 45 samples, leading to 7 amino
acids replacements; in the fragment-F there were 2 nucleotide changes , in 2 of 11 samples,
leading to 2 amino acids replacements.
Our results showed: reduced genetic diversity in P. falciparum EBA-175 isolates circulating
in Porto Velho; predominance of C-fragment and temporal stability of allelic dimorphism of the
EBA-175. Moreover, no association was observed between the EBA-175 dimorphism and
malaria morbidity and exposure variables.
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Caracterização do papel da integrina CD11d/CD18 na injúria pulmonar aguda durante a malária experimentalAzevedo, Isaclaudia Gomes de January 2012 (has links)
Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-20T15:55:54Z
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Isaclaudia Gomes de Azevedo.pdf: 1665691 bytes, checksum: ee1af0ea03f6788f85de4a97da24c983 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-20T15:55:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Isaclaudia Gomes de Azevedo.pdf: 1665691 bytes, checksum: ee1af0ea03f6788f85de4a97da24c983 (MD5)
Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A malária é uma doença parasitária causada pelo protozoário do gênero Plasmodium e é um
grande problema de saúde pública. Por volta de 40% da população mundial está em área de risco
de malária. A malária cerebral é a principal complicação, mas o edema pulmonar e a injúria
pulmonar (ARDS) podem ser desencadeadas pela infecção com P. falciparum, P. vivax e P.
knowlesi, e ocorrem frequentemente durante ou após o início do tratamento antimalárico. Os
mecanismos moleculares e celulares de indução de injúria pulmonar, como da malária cerebral
permanecem indefinidos. Previamente, nós encontramos que a deleção genética da integrina
CD11d/CD18, que é expressa em leucócitos mieloides, desencadeia uma maior sobrevida no
animais infectados com Plasmodium berghei Anka (PbA), que é uma modelo de malária grave.
Tal resultado sugere que a molécula CD11d/CD18 tenha um papel determinante na
imunopatogênese da malária. Perguntamos se CD11d/CD18 determina eventos fisiopatológicos na
ARDS desencadeadas por infecção PbA. Realizamos análises da expressão da subunidade CD11d
e de parâmetros inflamatórios, como da permeabilidade da barreira vascular por exclusão do
corante azul de Evans, e citocinas por ELISA. Proteínas e leucócitos foram mensurados no lavado
broncoalveolar (LAB). A migração celular foi medida pela contagem de células ao microscópio e
por citometria de fluxo. Também foi avaliada a expressão do ligante de CD11d, VCAM-1 e a
função respiratória dos animais. A Análise da expressão do mRNA da subunidade CD11d sugere
um acúmulo de leucócitos e/ou que a expressão da subunidade CD11d é aumentada em
macrófagos pulmonares e/ou em outras células mieloides pulmonares após a infecção. Nós
também observamos um acumulo de leucócitos, hemácias e fluido nos pulmões de CD11d+/+
mice. A inflamação e a hemorragia foram menos intensas nos pulmões dos animais CD11d-/-. Em
paralelo, a integridade da barreira vascular foi prejudicada nos animais CD11d+/+, enquanto os
animais CD11d-/- tinham menor extravazamento de azul de Evans no tecido pulmonar e níveis
mais baixos de proteína no LAB em comparação com CD11d+/+, apesar de o número total de
leucócitos no LBA ter sido semelhante. Observamos níveis mais baixos de citocinas inflamatórias
que estavam associadas com a malária experimental e clínica, em amostras de animais CD11d-/-
quando comparados com os animais CD11d+/+. A maior parte dos leucócitos dos camundongos
CD11d-/- ficavam retidos na medula óssea e também havia menos células CD14+ no sangue
periférico, quando comparado com os camundongos CD11d+/+. Os nossos resultados demonstram
que a ausência da subunidade CD11d não interfere na expressão de VCAM-I e acarreta uma
melhor função respiratória após a infecção. Podemos observar que a integrina CD11d/CD18
influência nos principais eventos fisiopatológicos na ARDS desencadeada pela malária
experimental, incluindo ruptura da barreira vascular pulmonar, inflamação e hemorragia. / Malaria is a parasitic disease caused by protozoa of the genus Plasmodium and is a major public
health problem. 40% or more of the global population is at risk for malaria. Cerebral malaria is
the most feared complication, but pulmonary edema and lung injury (ARDS) are also triggered by
the infection with Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, and Plasmodium knowlesi, and
often occur during or after the begin of anti-malarial therapy. The molecular and cellular
mechanisms of pulmonary injury, like those of CM, remain incompletely defined. Previously, we
found that genetic deletion of integrin CD11d/CD18, which is expressed on myeloid leukocytes,
improves survival in mice infected with P. berghei Anka (PbA), a model of severe malarial
infection. Thus, CD11d/CD18 may be a critical determinant in injurious innate immune responses
to malarial parasites. We asked if CD11d/CD18 is involved in pathophysiologic events in ARDS
triggered by PbA infection. We measured CD11d subunit expression, vascular barrier function by
Evans blue dye (EBD) exclusion, and cytokines by ELISA. Protein and leukocytes were measured
in bronchoalveolar lavage (BAL) samples. Cell migration was measured by microscope counting
and flow cytometry. We also analyzed the expression of the ligand to CD11d, VCAM-1, and
respiratory function of animals. Analysis of CD11d mRNA suggested that CD11d subunit
expressing leukocytes accumulate and/or that CD11d subunit expression is increased in lung
macrophages or other pulmonary myeloid cells early after infection. We showed a dramatic
accumulation of leukocytes, red blood cells, and fluid in the lungs of CD11d+/+ mice.
Inflammation and hemorrhage were reduced in the lungs of CD11d-/- animals. In parallel, vascular
barrier integrity was impaired in CD11d+/+ animals; once CD11d-/- animals had less accumulation
of EBD in extravascular lung tissue and lower levels of BAL protein compared to CD11d+/+,
although the total number of BAL leukocytes was similar. Compared to CD11d+/+, there were
lower levels of inflammatory cytokines that are associated with experimental and clinical malaria
in samples from CD11d-/- mice. Most of the leukocytes in CD11d-/- mice are retained in the bone
marrow and also there is less CD14+ in the peripheral blood when compared to CD11d+/+ mice.
Our findings demonstrate that the absence of CD11d integrin does not interfere in VCAM-I
expression and correlates with a better respiratory function in infected CD11d-/- when compared to
CD11d+/+ mice. We observed that CD11d/CD18 influences key pathophysiologic events in ARDS
in experimental malaria, including pulmonary vascular barrier disruption, inflammation, and
hemorrhage.
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