Perdas embrionárias e alterações gestacionais são frequentemente observadas em prenhezes de embriões bovinos manipulados in vitro. Sabe-se que tais anormalidades são resultantes de alterações epigenéticas ocasionadas pela manipulação dos gametas e/ou do embrião durante as técnicas de reprodução assistida (ARTs), com destaque para as técnicas de fecundação in vitro (FIV) e da clonagem por transferência nuclear de células somáticas (SCNT). Tais alterações resultam em distúrbios no desenvolvimento do concepto em algum momento crítico entre a fertilização e o parto, fornecendo bons modelos de estudos sobre a fisiopatologia de perdas embrionárias e dos distúrbios de desenvolvimento. Caracterizam-se como momentos críticos após a transferência do embrião (TE) o desenvolvimento embrionário no útero, o reconhecimento materno da gestação, a placentação e o desenvolvimento da placenta e do feto, os quais tem de ser transpassados sem nenhuma falha, permitindo um desenvolvimento normal do concepto até o termo. Sendo assim, o presente trabalho abordou três fases distintas do amplo período gestacional em prenhezes por ARTs. O Estudo 1 foi realizado durante o período peri-reconhecimento materno da gestação e objetivou descrever a abundância de expressão de genes estimulados pelo interferon tau (ISGs) de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) maternas em gestações oriundas de ARTs no primeiro mês de gestação; o Estudo 2 compreendeu os primeiros 35 dias de gestação e objetivou descrever as mudanças morfológicas e vasculares do complexo útero-concepto-ovário e o estímulo à expressão de ISGs em PBMCs em gestações de conceptos clonados por SCNT com diferentes fenótipos de desenvolvimento, sendo esses denominados gestação anembrionada e CL persistente; e o Estudo 3 foi conduzido durante o período pré-parto e objetivou descrever as alterações na produção de esteroides sexuais e corticosteroides em gestações produzidas por ARTs. Três hipóteses foram testadas: (1) Gestações de conceptos clonados por SCNT apresentam uma baixa e mais tardia estimulação de ISGs em PBMCs maternas quando comparadas com gestações de conceptos produzidos por FIV e IA; (2) O concepto clonado por SCNT apresenta um menor estímulo sobre mudanças morfológicas e vasculares do complexo útero-ovário e ISGs em PBMCs maternas durante os primeiros 35 dias de gestação, quando comparado com conceptos oriundos de IA; e (3) Gestações de embriões oriundos de ARTs apresentam alterações na dinâmica esteroidogênica no pré-parto quando comparados com gestações de IA. No estudo 1 foram coletadas amostras de sangue de gestações produzidas por inseminação artificial (IA), FIV e clonagem por SCNT, nos dias 15, 18, 20, 22, 24, 26, 28 e 31 pós-ovulação e foi realizada mensuração da abundância de transcritos de ISGs (OAS1 e ISG15) em PBMCs maternas. No estudo 2, gestações produzidas por IA e clonagem por SCNT, foram submetidas a escaneamentos ultrassonográficos dos ovários, útero e concepto a cada 3 dias do dia 14 ao 35 (dia 0 = ovulação) e amostras de sangue foram coletadas nos dias 15, 18, 20, 22, 24, 26, 28 e 31 para mensuração da abundância de transcritos de ISGs (OAS1 e ISG15) em PBMCs maternas. No estudo 3, foram coletadas amostras de sangue no último mês em gestações naturais, oriundas de FIV e de clonagem por SCNT para análise hormonal de 10 esteroides utilizando o método de espectrometria de massas multi-hormonal de alta resolução LC-MS/MS. O primeiro estudo mostrou semelhanças na expressão de genes estimulados pelo IFNT em gestações oriundas de ARTs e produzidas por IA. Entretanto, a estimulação nas gestações oriundas de ARTs aparentou ser quatro dias mais prolongada, sugerindo uma maior funcionalidade do trofectoderma em conceptos oriundos de ARTs. O segundo estudo demonstrou um aumento na expressão de ISGs em PBMCs maternas tanto em gestações de conceptos normais quanto em anormais, justificando a manutenção da função luteal mesmo na ausência de detecção do concepto por ultrasonografia. No terceiro estudo, demonstrou-se alterações na esteroidogênese nas gestações de embriões FIV e clonados no último mês de gestação, sendo essas compatíveis com a hiperativação da enzima aromatase durante todo o último mês de gestações oriundas de FIV e hiperativação das enzimas P450C11 e P450C21 trinta dias antes do parto em gestações oriundas de clonagem por SCNT. O presente estudo concluiu que conceptos oriundos de FIV e clonagem por SCNT apresentam um prolongamento no estímulo de ISGs pelo IFNT, conceptos clonados anormalos apresentam estímulo de ISGs, o que justifica a manutenção da função luteal, e, por fim, a cascata esteroidonênica que culmina com o parto apresenta-se alterada em gestações oriundas de FIV e clonagem por SCNT. / Pregnancy losses and gestational abnormalities are frequently observed in pregnancies from in vitro produced embryos in bovines. It is known that these abnormalities are due to epigenetic changes from the manipulation of gametes and/or embryo during the use of assisted reproduction techniques (ARTs), especially for the in vitro fertilization (IFV) and cloning by somatic cells nuclear transfer (SCNT). These changes results in disturbances of conceptus development in any critical stage between the fertilization and parturition, which provides good models for the study of physiopathology of embryo losses and disturbances of development. Critical stages after the embryo transfer (ET) to the uterus are characterized as the maternal recognition of pregnancy, placentation, and fetal-placental development, which needs to be surpassed without failures, in order to develop a normal conceptus until term. Therefore, the present work approached three distinct phases of the wide gestational period in pregnancies from ARTs. The Study 1 was conducted during the maternal peri-recongnition of pregnancy period and aimed to describe the expression of interferon stimulated genes (ISGs) in maternal peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in pregnancies derived of ARTs; the Study 2 comprise the first 35 days of pregnancy and aimed to describe morphological and vascular changes of the complex uterus-ovaries-conceptus, as well as the expression of ISGs in maternal PBMCs in pregnancies of conceptus cloned by SCNT with different phenotypes of development, denominated as anembryonic gestation and persistent CL; the Study 3 was conducted during the pre-partum period and aimed to describe changes in the production of sexual steroids and corticosteroids during the last month of pregnancies derived of ARTs. Three hypothesis were tested: (1) Pregnancies of conceptus cloned by SCNT presented a decrease and delay in the stimulation of ISGs in maternal PBMCs when compared with conceptuses produced by IFV and AI; (2) Stimulus from the conceptus for changes in the morphology and vasculature of the the uterus-ovarian complex, detected by ultrasonography in B and Doppler modes, and the stimulation of ISGs in maternal PBMCs during the first 35 days of pregnancy of conceptus cloned by SCNT are less intense when compared with conceptus derived from AI; and (3) Pregnancies derived of ARTs present changes in the steroidogenic dynamics in the pre-partum, when compared with pregnancies derived from AI. In Study 1 blood samples were collected from pregnancies produced by AI, IVF, and cloning by SCNT, at days 15, 18, 20, 22, 24, 26, 28, and 31 post-ovulation for the measurement of abundance of transcripts of ISGs (OAS1 and ISG15) in maternal PBMCs. In Study 2, pregnancies derived of AI and cloning by SCNT, were submitted to ultrasonographic scans for the evaluation and description of morphological and vascular changes in ovaries, uterus, and conceptus every 3 days from day 14 to 35 (day 0 = ovulation) and blood samples were collected on days 15, 18, 20, 22, 24, 26, 28 e 31 for the measurement of the abundance of transcripts of ISGs (OAS1 and ISG15) in maternal PBMCs. In Study 3, blood samples were collected during the last month of pregnancies naturally conceived, derived of IVF, and cloned by SCNT for the analysis of 10 steroids using the method of mass spectrometry high resolution LC-MS/MS. The first study showed similarities in the ISGs expression stimulation in pregnancies derived of ARTs and AI. However, the stimulation in the ART derived pregnancies was apparently 4 days longer, suggesting a greater placental function in conceptus derived of ARTs. The second study showed an increase in ISG expression in both normal and abnormal conceptus development, which justifies the maintenance of CL in the absence of a conceptus structure detected by ultrasonography. In the third study, was detected changes in the steroidogenesis of pregnancies derived of IFV and cloning by SCNT during the last month of pregnancy, which are compatible with the hyperactivation of the aromatase enzyme during the last month of IFV derived pregnancies, and hyperactivation of the enzymes P450C11 and P450C21 thirty days before parturition in pregnancies derived of cloning by SCNT. The present study concludes that conceptus derived of IFV and cloning by SCNT present a prolonged stimulus of ISGs, cloned conceptus with anomalous development presents a stimulus of ISGs, which justifies the CL function maintenance, and, ultimately, the steroidogenic cascade that culminates with the term is altered in pregnancies derived from IFV and cloning by SCNT.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GABRIELA SORIANO.pdf: 327520 bytes, checksum: ad8287a2a1dbd4d04e67e925087f4285 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / The hypothesis tested in this study was that the time of permanence of progesterone implant (short vs. long) in FTAI protocol change the characteristics of the LH surge. Thus, the aim of this study was to determine the timing, duration and amplitude of the LH peak in sheep (Santa Inês x Texel) using short FTAI protocols (6 days) or long (12 days) in cyclic sheep out of the breeding season. We used 43 sheep (Texel-Te x Santa Inês-SI), sorted into two groups according to the time of progesterone release s vaginal device 1st use (Easy-Breed CIDR®, Pfizer, Brazil). In group 12 days (G-12, n = 19) in stage random of the estrous cycle received the insertion of CIDR (D0). On the day of implant removal (D12) was administered intramuscularly, 0.075 mg cloprostenol (Veteglan®, Hertape Calier, Brazil) and 300 IU equine chorionic gonadotropin (eCG, Novormon®, MSD Animal Health, Brazil). The group 6 (G-6, n= 24) received the same protocol of G-12, however the permanence of CIDR was 6 days. Approximately 50 hours after CIDR removal, both groups were inseminated at fixed time by artificial insemination by laparoscopy with frozen semen containing 200x106 sperm of a single player of Dorper. Approximately 40 days after the artificial insemination pregnancy diagnosis was performed using ultrasound device. Blood samples were taken every 4 hours from 10 animals per group, to measure LH and progesterone plasma concentrations by radioimmunoassay (RIA). From the 20 animals used for progesterone plasma concentration, the percentage of animals showing LH surge in G-6 was 70% (7/10) and the G-12 was 90% (9/10). The maximum amplitude of the LH peak did not differ between the G-6 and G-12 groups (P> 0.05) and the lengh of LH peak was 16,60±2,76 h in the G-6 and 16,40±2,40 h in G-12 (P>0,05). The interval between the implant removal and the LH surge was (P >0.05) in the G-6 27,42±2,76 h and 28,88±5,20 h in G-12. The overall pregnancy rate per group was not different (G-6 58,33% e G-12 52,63%). It was concluded that the permanence of progesterone (6 vs 12 days) did not alter the characteristics of the LH peak in sheep (St. Agnes x Texel) in the tropics, out of the breeding season. / A hipótese testada pelo presente trabalho foi que o tempo de permanência do implante de progesterona (curto vs longo), em protocolo de IATF, altera as características do pico de LH. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi determinar o momento, duração e amplitude do pico de LH em ovelhas (Texel x Santa Inês) utilizando protocolos de IATF de curta (6 dias) ou longa duração (12 dias) em ovelhas ciclando na contra estação reprodutiva. Foram utilizadas 43 ovelhas (Texel-Te x Santa Inês-SI), divididas em dois grupos de acordo com o tempo de permanência do dispositivo vaginal de liberação de progesterona de 1° uso (Easy-Breed CIDR®, Pfizer, Brasil). No grupo 12 dias (G-12, n=19), em estádio aleatório do ciclo estral receberam a inserção do CIDR (D0). No dia da retirada do implante (D12) foram administrados, por via intramuscular, 0,075 mg de cloprostenol (Veteglan®, Hertape Calier, Brasil) e 300 UI de gonadotrofina coriônica equina (eCG, Novormon®, MSD Saúde Animal, Brasil). O grupo 6 (G-6, n=24) recebeu o mesmo protocolo do G-12, porém a permanência do CIDR foi de 6 dias. Aproximadamente 50 horas após a retirada do CIDR as ovelhas, de ambos os grupos, foram inseminadas em tempo fixo por laparoscopia com sêmen congelado contendo 200x106 espermatozóides, de um único reprodutor, da raça Dorper. Aproximadamente 40 dias após as inseminações artificiais foi realizado o diagnóstico de prenhez utilizando aparelho de ultra-som. Foram realizadas colheitas de sangue, de 4 em 4 horas em 10 animais por grupo, para mensuração das concentrações plasmáticas de LH e progesterona por radioimunoensaio (RIA). Dos 20 animais utilizados para mensuração das concentrações plasmáticas, a porcentagem de animais que apresentaram pico de LH no G-6 foi de 70% (7/10) e no G-12 foi 90% (9/10). A amplitude máxima do pico de LH não diferiu entre os grupos G-6 e G-12 (P>0,05) e a duração do pico de LH foi 16,60±2,76 h no grupo G-6 e 16,40±2,40 h no grupo G-12 (P>0,05). O intervalo entre a retirada do implante e o pico de LH foi (P>0,05) ocorreu 27,42±2,76 h no grupo G-6 e 28,88±5,20 h no G-12. A percentagem de prenhez total por grupo não diferiu (G-6 58,33% e G-12 52,63%). Conclui-se que o tempo de permanência da progesterona (6 vs 12 dias) não alterou as características do pico de LH em ovelhas (Texel x Santa Inês) nos trópicos, na contra estação reprodutiva.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GABRIELA SORIANO.pdf: 327520 bytes, checksum: ad8287a2a1dbd4d04e67e925087f4285 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / The hypothesis tested in this study was that the time of permanence of progesterone implant (short vs. long) in FTAI protocol change the characteristics of the LH surge. Thus, the aim of this study was to determine the timing, duration and amplitude of the LH peak in sheep (Santa Inês x Texel) using short FTAI protocols (6 days) or long (12 days) in cyclic sheep out of the breeding season. We used 43 sheep (Texel-Te x Santa Inês-SI), sorted into two groups according to the time of progesterone release s vaginal device 1st use (Easy-Breed CIDR®, Pfizer, Brazil). In group 12 days (G-12, n = 19) in stage random of the estrous cycle received the insertion of CIDR (D0). On the day of implant removal (D12) was administered intramuscularly, 0.075 mg cloprostenol (Veteglan®, Hertape Calier, Brazil) and 300 IU equine chorionic gonadotropin (eCG, Novormon®, MSD Animal Health, Brazil). The group 6 (G-6, n= 24) received the same protocol of G-12, however the permanence of CIDR was 6 days. Approximately 50 hours after CIDR removal, both groups were inseminated at fixed time by artificial insemination by laparoscopy with frozen semen containing 200x106 sperm of a single player of Dorper. Approximately 40 days after the artificial insemination pregnancy diagnosis was performed using ultrasound device. Blood samples were taken every 4 hours from 10 animals per group, to measure LH and progesterone plasma concentrations by radioimmunoassay (RIA). From the 20 animals used for progesterone plasma concentration, the percentage of animals showing LH surge in G-6 was 70% (7/10) and the G-12 was 90% (9/10). The maximum amplitude of the LH peak did not differ between the G-6 and G-12 groups (P> 0.05) and the lengh of LH peak was 16,60±2,76 h in the G-6 and 16,40±2,40 h in G-12 (P>0,05). The interval between the implant removal and the LH surge was (P >0.05) in the G-6 27,42±2,76 h and 28,88±5,20 h in G-12. The overall pregnancy rate per group was not different (G-6 58,33% e G-12 52,63%). It was concluded that the permanence of progesterone (6 vs 12 days) did not alter the characteristics of the LH peak in sheep (St. Agnes x Texel) in the tropics, out of the breeding season. / A hipótese testada pelo presente trabalho foi que o tempo de permanência do implante de progesterona (curto vs longo), em protocolo de IATF, altera as características do pico de LH. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi determinar o momento, duração e amplitude do pico de LH em ovelhas (Texel x Santa Inês) utilizando protocolos de IATF de curta (6 dias) ou longa duração (12 dias) em ovelhas ciclando na contra estação reprodutiva. Foram utilizadas 43 ovelhas (Texel-Te x Santa Inês-SI), divididas em dois grupos de acordo com o tempo de permanência do dispositivo vaginal de liberação de progesterona de 1° uso (Easy-Breed CIDR®, Pfizer, Brasil). No grupo 12 dias (G-12, n=19), em estádio aleatório do ciclo estral receberam a inserção do CIDR (D0). No dia da retirada do implante (D12) foram administrados, por via intramuscular, 0,075 mg de cloprostenol (Veteglan®, Hertape Calier, Brasil) e 300 UI de gonadotrofina coriônica equina (eCG, Novormon®, MSD Saúde Animal, Brasil). O grupo 6 (G-6, n=24) recebeu o mesmo protocolo do G-12, porém a permanência do CIDR foi de 6 dias. Aproximadamente 50 horas após a retirada do CIDR as ovelhas, de ambos os grupos, foram inseminadas em tempo fixo por laparoscopia com sêmen congelado contendo 200x106 espermatozóides, de um único reprodutor, da raça Dorper. Aproximadamente 40 dias após as inseminações artificiais foi realizado o diagnóstico de prenhez utilizando aparelho de ultra-som. Foram realizadas colheitas de sangue, de 4 em 4 horas em 10 animais por grupo, para mensuração das concentrações plasmáticas de LH e progesterona por radioimunoensaio (RIA). Dos 20 animais utilizados para mensuração das concentrações plasmáticas, a porcentagem de animais que apresentaram pico de LH no G-6 foi de 70% (7/10) e no G-12 foi 90% (9/10). A amplitude máxima do pico de LH não diferiu entre os grupos G-6 e G-12 (P>0,05) e a duração do pico de LH foi 16,60±2,76 h no grupo G-6 e 16,40±2,40 h no grupo G-12 (P>0,05). O intervalo entre a retirada do implante e o pico de LH foi (P>0,05) ocorreu 27,42±2,76 h no grupo G-6 e 28,88±5,20 h no G-12. A percentagem de prenhez total por grupo não diferiu (G-6 58,33% e G-12 52,63%). Conclui-se que o tempo de permanência da progesterona (6 vs 12 dias) não alterou as características do pico de LH em ovelhas (Texel x Santa Inês) nos trópicos, na contra estação reprodutiva.

A utilização de amostras de leite para a realização do diagnóstico precoce de prenhez em bovinos tem se tornado uma alternativa relevante para propriedades produtoras de leite, principalmente nas quais o suporte técnico é limitado. Atualmente, muitas fazendas coletam amostras de leite para avaliação da sanidade da glândula mamária e/ou para controle nutricional. Eventualmente, a utilização desta mesma amostra para a realização do teste de prenhez, viabilizaria o processo de coleta e diminuiria os custos com materiais e transporte destas amostras. Porém, ainda não se tem conhecimento de como o processamento da amostra de leite, desde a coleta até a análise laboratorial, pode afetar os resultados do teste de prenhez. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos de estratégias de coleta, armazenamento, conservação e processamento das amostras de leite sobre os resultados do teste de prenhez. Para isso, foram realizados 5 experimentos. No experimento 1, que avaliou o efeito do período do dia no qual a amostra foi coletada, foram utilizadas amostras de 51 animais (duas amostras por animal, uma obtida na ordenha da manhã e outra na ordenha da tarde). No experimento 2, que avaliou a ocorrência do \"efeito de arraste\" no medidor de leite do equipamento de ordenha, foram utilizadas amostras de leite de 94 animais pertencentes a duas fazendas distintas. De cada animal foram obtidas duas amostras de leite, uma direto do teto antes do início da ordenha e outra do medidor de leite ao término desta. No experimento 3, que avaliou o impacto das condições e do tempo de armazenamento das amostras de leite, 40 amostras foram coletadas e divididas em 4 idades (0, 3, 6 e 9 dias entre a coleta e a análise) e 2 temperaturas de armazenamento (ambiente e refrigerado). No experimento 4, que avaliou o efeito do pré-aquecimento das amostras de leite, o teste de prenhez foi realizado em 14 amostras que haviam sido submetidas ao banho-maria. Enquanto que, no experimento 5, que avaliou a ocorrência do \"efeito de arraste\" nos equipamentos de análise laboratorial, amostras de leite de 11 animais foram submetidas primeiro à análise de qualidade e depois ao teste de prenhez. Para verificar a existência de impacto de todos estes fatores, o coeficiente kappa foi calculado utilizando o software R. Como resultado, a coleta da amostra de leite na ordenha da manhã ou na ordenha da tarde não afetou os resultados do teste de prenhez. As concentrações de PAG das amostras coletadas na fazenda 2 sofreram maior influência do \"efeito de arraste\" quando comparadas as amostras obtidas na fazenda 1. Os níveis de PAG não apresentaram variação quando analisadas até 9 dias após a coleta, armazenadas tanto na temperatura ambiente como na refrigerada. O pré-aquecimento das amostras no banho-maria e a submissão aos equipamentos laboratoriais para análise de qualidade também não afetaram os níveis de PAG e nem os resultados do teste de prenhez. / The use of milk samples to perform the early pregnancy diagnosis in cattle has become an important alternative for dairy farms, especially when the technical support is limited. Currently, many farms use milk samples to evaluate the health of the mammary glands and the nutritional status of dairy cows. Eventually, the use of the same sample to make the pregnancy test could facilitate the collection process and decrease costs of materials and transport of samples. However, there is not enough knowledge about how processing the samples, from collection to laboratorial analysis, can affect the results of the pregnancy test. Therefore, the objective of the present study was to evaluate the effects of strategies of collecting, storing, conserving and processing milk samples on the results of the pregnancy test. For that purpose, five experiments were carried out. In experiment 1, the effect of the period of the day when the samples were collected is evaluated, samples of 51 animals were used (two samples per animal, one from the morning milking and another from the afternoon milking). In experiment 2, it was evaluated the carryover in the milk meter of the milking equipment, milk samples of 94 animals belonging to two different farms were used. Two samples were obtained from each animal, one collected directly from the tit before milking and the other by the meter at the end of milking. In experiment 3, it was evaluated the impact of different conditions: storage time and temperature of milk samples, 40 samples were collected and divided into four ages (0, 3, 6 and 9 days between collection and analysis) and two storage temperatures (ambient and refrigerated). In experiment 4, which evaluated the effect of pre-heating the milk samples, the pregnancy test was performed on 14 samples that had been subjected to water bath. In experiment 5, it was evaluated the occurrence of the carryover in laboratory analysis equipment, samples from 11 animals were first submitted to the milk quality analysis and after to the pregnancy test. To check the impact of all these factors, the kappa was calculated using the software R. The results show that sampling the milk in the morning or afternoon did not affect the results of the pregnancy test. PAG concentrations of samples collected on farm 2 had a greater influence on carryover compared to samples from farm 1. PAG levels did not show variation when analyzed until 9 days after collection, storage in ambient temperature or refrigerated. Preheating the samples in water bath and test in laboratory equipment of quality analysis also did not affect PAG levels or the results of the pregnancy test.

Na década de 60, começaram a ser utilizadas técnicas e sincronização do estro, e durante os últimos trinta anos tem sido despertado o interesse do desenvolvimento de métodos para sincronizar o estro de ovelhas. Na maioria das vezes a IA está associada à um protocolo de sincronização do estro podendo assim ser realizada a Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF). Três experimentos foram realizados com objetivo de avaliar a influência do efeito macho e tipos de rufião, reutilização do dispositivo e o método de inseminação utilizado, na sincronização do estro através do uso de dispositivos intra-vaginais (CIDR®- Control Internal Drog Release), associado com a aplicação intramuscular de eCG e PGF2 , sobre a taxa detecção e tempo médio para aparecimento do estro, taxa de prenhez na IATF e no primeiro estro após a sincronização. Exp. I: Foram utilizadas 270 ovelhas, separadas em três tratamentos: SM = (controle) sem rufiões; DL= recebeu rufiões com Desvio lateral peniano e o VS= recebeu rufiões vasectomizados. Os tratamentos foram submetidos ao mesmo protocolo, CIDR® por 7d, aplicação de 300UI de eCG e 6,71 mg de Dinoprost trometamina, na retirada do CIDR. As ovelhas foram submetidas a IATF pelo método transcervical em 55h após a retirada do CIDR. EXP.II: Foram utilizadas 275 ovelhas, divididas em 4 tratamentos: 7N= 7d com CIDR novo; 7U= 7d com CIDR já usado por 7d; 11N= 11d com CIDR novo; 11U= 11d com CIDR já usado por 7d. No dia da retirada do CIDR (D7 ou D11) foi realizada a aplicação de 300 UI de eCG e 6,71 mg de Dinoprost trometamina. As ovelhas foram submetidas a IATF pelo método transcervical, 49h após a retirada do CIDR. Exp.III: Foram utilizadas 247 ovelhas, divididas em 4 tratamentos: MN= as ovelhas foram sincronizadas e submetidas a monta natural com carneiros; IATF = as ovelhas foram submetidas a IATF por laparoscopia 48h após a retirada do CIDR; IATF+GnRH= as ovelhas foram submetidas a IATF por laparoscopia + 0,05 mg de Gonadorelina, quando 50% das ovelhas apresentaram sinais de estro; IA= as ovelhas foram inseminadas por laparoscopia no sistema AM/PM, 12h após o início dos sinais de estro. Todos os tratamentos foram submetidos ao mesmo protocolo, CIDR por 11 dias, aplicação de 300UI de eCG e 6,31 mg de Dinoprost trometamina, na retirada do CIDR. Nos experimentos I e II as ovelhas foram submetidas ao repasse com carneiros por 20 dias. O delineamento utilizado foi de blocos incompletos ao acaso, analisados pelo teste do Qui-quadrado e Tukey (estro). A taxa de detecção de estro no tratamento IATF (exp. III) foi de 59,7% sendo menor que os demais tratamentos (P<0,05). A taxa de prenhez da sincronização do tratamento MN (61,1%), foi maior (P<0,05) que os tratamentos IATF e IATF+GnRH. A inseminação artificial transcervical apresentou resultados médios que variaram de 21 a 35% e não apresentaram diferença (P>0,05). O efeito macho e o tipo de macho não apresentaram diferença na IATF. O protocolo de 11 dias, mostrou-se eficiente em induzir o estro em 79% das ovelhas sincronizadas. A IA realizada 12h após o estro propiciou, índice de prenhez semelhante à monta natural, proveniente do estro sincronizado. / In the 60s, estrus synchronization techniques began to be used, and during the last 30 years has attracted the interest of developing new methods to synchronize estrus in ewes. Three experiments were performed to determine: I) influence of male effect and type of teaser; II) Effect of new and used CIDR® (Control Internal Drug Release) with different time of implant; III) Different time to perform IA after CIDR removal and comparison of laparoscopy method with natural breed, on heat detection and onset of estrus and pregnancy rate of ewes. Exp. I: 270 ewes were used, divided into three treatments: SM = (control) without teaser; DL = teaser with lateral penis deviation and VS = vasectomized teaser. All ewes were subjected to the same protocol: CIDR® for 7 days and received im. 300UI of eCG plus 6.71 mg tromethamine dinoprost at CIDR withdrawal. Ewes were artificially inseminated by transcervical method, 55h after CIDR removal. There was no difference on onset of estrus for LD (55.7%) and VS (50.5%). Similarly, the distribution of estrus was similar (P>0.05) between treatments, where the averages were of 45:01 ± 14:30 h for LD 12:10 h and 44:00 ± 12:10h for VS. Pregnancy rate did not differ (P> 0.05) among treatments and was 34.0, 34.4 and 35.0% for LD, VS and SM, respectively. The male effect showed no influence on pregnancy rate when fixed-time artificial insemination was used. EXP.II: 275 ewes were used and divided into 4 treatments: 7N = 7d with new CIDR; 7U = 7d with already used CIDR for 7d; 11N = 11d with new CIDR; 11U = 11d with CIDR already used for 7d. On the withdrawal of the CIDR (D7 or D11) ewes received im. 300IU of eCG plus 6.71 mg tromethamine dinoprost at the time of CIDR removal. Ewes were submitted to FTAI, using the transcervical method, 49h after CIDR withdrawal. Total pregnancy rate in treatment 11N was higher (86.6%, P = 0.03) as compared with treatment 7U (71.4%). The protocols for estrus synchronization of 7 and 11d were effective in inducing the expression of estrus. The reuse of CIDR did not influence the rate of onset and average time to onset of estrus and pregnancy rate in the FTAI. Exp.III: 247 ewes were used and divided in four treatments: MN = ewes were synchronized and exposed to males during 20d; IATF = ewes were synchronized and inseminated by laparoscopy 48h after CIDR removal; AITF+GnRH= ewes were synchronized and inseminated by laparoscopy using 0.05 mg gonadorelin, when 50% of the ewes showed signs of estrus; AI = ewes received im. 300IU of eCG plus 6.71 mg tromethamine dinoprost at the time of CIDR removal and were inseminated by laparoscopy, 12h after the onset of signs of estrus. All treatments were subjected to the same protocol: CIDR for 11 days, intramuscular injection of 300UI of eCG plus 6.31 mg tromethamine dinoprost at CIDR removal. In all experiments ewes were exposed to rams (natural breeding), 10 days after FTAI. The experimental design was an incomplete randomized block, analyzed by chi- square and Tukey (estrus). The rate of detection of estrus in the treatment AITF (exp.III) was 59.7%, being lower than the other treatments (P <0.05). The pregnancy rate of the synchronization treatment MN (61.1%) was higher (P <0.05) that the treatments AITF and AITF+GnRH.Transcervical artificial insemination had average results that ranged from 21 to 35% and showed no difference (P> 0.05). The purpose and type of ram showed no difference in the AITF. The protocol of 11d, was effective in inducing estrus in the 79% of ewes synchronized. The IA conducted 12h after estrus provided, similar to pregnancy rate of natural builders, after the synchronization of estrus.

O experimento foi conduzido com o objetivo de avaliar o desempenho corporal e reprodutivo de 120 novilhas de corte de um rebanho comercial Braford do desmame ao fim do período reprodutivo aos 14/15 meses de idade, quando submetidas a três sistemas alimentares: pastagem de aveia preta (Avena strigosa Schreb.) e azevém (Lolium multiflorum Lam.) (AV+AZ), pastagem de aveia e azevém mais 1% do peso corporal de farelo de trigo (FT), pastagem de aveia e azevém mais 1% de peso corporal de farelo de trigo e 200ml/cabeça/dia de glicerina bruta (FTG) e da prenhez das novilhas aos 14/15 meses de idade ao fim da prenhez quando primíparas aos 24/25 meses de idade, quando submetidas a dois sistemas alimentares: pastagem de azevém (Lolium multiflorum Lam.) por 22 dias pós-parto e mais 22 dias em pastagem natural (PSS), pastagem de azevém por 22 pós-parto recebendo 1% de peso corporal de farelo de trigo e por mais 22 dias em pastagem natural (PCS). O delineamento experimental foi o inteiramente ao acaso, com medidas repetidas no tempo. Sem limitações na oferta forrageira, as suplementações não afetaram a taxa de prenhez, mas determinaram maior concepção nos primeiros 21 dias da temporada Novilhas prenhes, independentes dos tratamentos, têm melhores características fenotípicas de conformação, precocidade, musculatura e tamanho já ao desmame, têm maiores ganhos de peso e condição corporal até o início e ao fim dos tratamentos alimentares e início da temporada reprodutiva, o que permite uma seleção prévia, à idades menores, das bezerras a serem postas em sistemas para prenhez aos 14/15 meses de idade. Rebanhos com prenhez estabilizada aos dois anos de idade necessitam de seleção para maior precocidade sexual e prenhez aos 14/15 meses de idade, não somente ter pesos e condições corporais. Novilhas prenhas aos 14/15 meses de idade têm bom desenvolvimento em pastagem de tifton 85 nos meses de outono com a oferta de 2.500kg de MS/ha. Primíparas suplementadas por 44 dias no pré-serviço têm significativo maior ganho de peso, maior prenhez, com menores intervalo parto-concepção e intervalo entre partos do que as não suplementadas, porém ainda cerca de trinta dias a mais do que o recomendado em sistemas de cria de maior produtividade e eficiência. / This study aimed to evaluate the body development and reproductive performance of 120 Braford heifers from a commercial beef herd from the weaning to first breeding at 14/15 months of age, when submitted to three different feeding systems: black oat (Avena strigosa Schreb.) and Italian ryegrass (Lolium multiflorum Lam.) pastures (AV+AZ), black oat and Italian ryegrass plus supplementation with wheat bran at 1% of the body weight (FT), and black oat and Italian ryegrass plus supplementation with wheat bran at 1% of the body weight plus 200 mL head-1 day-1 of crude glycerol (FTG). We also evaluated the reproductive performance of primiparous cows first bred with 14/15 months of age at their second calving, when submitted to two feeding systems prior to the second breeding season: Italian ryegrass pasture for 22 days postpartum following another 22 days in natural pasture (PSS), and Italian ryegrass pasture for 22 days postpartum receiving 1% of the body weight of wheat bran, following another 22 days in natural pasture (PCS). Treatments were arranged in a completely randomized design with repeated measures in time. Without limitations on herbage allowance from the pasture, supplementation did not affect the pregnancy rate, but increased conception on the first 21 days of the breeding season Heifers that conceived, regardless of the treatments, had better phenotypic characteristics of body conformation, precocity, musculature and frame size at weaning. These animals also had greater average daily gain and body condition at the beginning and at the end of the feeding treatments, and at the beginning of the breeding season. Those traits could be used as indicators for an early selection of heifers to be designated to breeding programs at 14/15 months of age. Herds with stabilized conception at two years of age require selection for greater sexual precocity and conception at 14/15 months of age, and not only have adequate body weight and condition at the time of breeding. Heifers that conceived at 14/15 months of age with forage allowance of 2,500 kg DM ha-1 present good development in tifton 85 pasture during the autumn months. Primiparous supplemented for 44 days prior to breeding had greater weight gain and conception, with shorter calving-to-conception interval and shorter interval between calving than those not supplemented, but still about thirty days longer than recommended to calving systems with higher productivity and reproductive efficiency.

Orientador: José Ricardo de Arruda MIranda / Resumo: A contração uterina é um processo fisiológico espontâneo com impacto direto no ciclo menstrual/estral e na gestação. Disfunções na atividade uterina estão relacionadas com infertilidade, abortos e partos prematuros, sendo este último a maior causa de mortalidade e morbidade infantil no mundo. Sendo assim, se faz necessário o desenvolvimento de metodologias in vivo para monitorar o processo mecânico uterino. O objetivo deste trabalho foi aplicar a técnica de Biosusceptometria de Corrente Alternada para avaliação in vivo da atividade mecânica uterina em ratas prenhes. Foram utilizadas 40 ratas fêmeas Wistar prenhes com idade entre 10 e 15 semanas e com peso médio de 250 g. Através da Biosusceptometria de Corrente Alternada, 18 animais foram utilizados para avaliação da contratilidade uterina durante a prenhez e 8 foram usadas para avaliação da atividade uterina frente à ação da ocitocina. Na primeira etapa foi realizada uma cirurgia de fixação do marcador magnético em três posições da serosa uterina: próximo ao ovário; na região média entre o ovário e a cérvice; e próximo à cérvice. A atividade uterina foi monitorada nos dias 0, 7, 14, 20 e 21 de prenhez para cada posição do marcador. Na segunda etapa, foi realizado o implante do marcador magnético somente próximo à cérvice, e a atividade foi avaliada antes e depois da administração de ocitocina no dia 20 de prenhez. Os resultados obtidos foram perfis de contração para cada situação proposta, os quais apresentaram contrações ba... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Uterine contraction is a spontaneous physiologic process with direct impact on menstrual/estrous cycle and pregnancy. Uterine activity dysfunction are related with infertility, abortion and premature birth, in which the last is the major cause of childish mortality and morbidity in the world. Therefore, in vivo methods to assess the mechanical process of the uterus under real physiologic condition remains necessary to be developed. The aim of this study was to apply Alternate Current Biosusceptometry to assess in vivo mechanical uterine activity of pregnant rats. Forty Wistar female pregnant rats with 10 to 15 weeks age and weighing 250 g were used. Through Alternate Current Biosusceptometry, 30 animals were used for uterine contraction analysis during pregnancy and 10 were used to evaluate uterine contractility due to oxytocin action. On the first part, an implant surgery was performed to fix the magnetic marker on uterus serous at three different position: near ovary; middle distance between ovary and cervix, and near cervix. Uterine peristalsis were measured at days 0, 7, 14, 20 and 21 of pregnancy. On the second part, magnetic marker was implanted only on near cervix and uterine activity was evaluated before and after the oxytocin administration on day 20 of pregnancy. Contraction profiles were obtained as results to each proposed analysis, in which presented high frequency and low frequency basal contraction and intense contractions. During pregnancy evolution, was obser... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Débora Cristina Damasceno / Abstract: Maternal exposure to the high-fat diet (HFD) during gestation or lactation can be harmful to both mother and offspring. The objective of this systematic review was to synthesize the available data on the effects of maternal HFD on the reproductive parameter and biochemical profile in rodents. The electronic search was performed in the PUBMED (Public/Publisher MEDLINE), EMBASE (Ovid) and Web of Science databases. Data from 76 studies showed that change in biochemical and reproductive parameters is dependent on the experimental design. Furthermore, the heterogeneity found in the studies makes it impossible to comparisons. In addition, studies often omit or neglect important information, such as a description of the diet or methodological details. These factors make it difficult to affirm the true effect of maternal HFD consumption for both mother and offspring. / Resumo: A exposição materna à dieta hiperlipídica (DHL) durante a gestação ou lactação pode ser prejudicial tanto para a mãe quanto para seus descendentes. O objetivo desta revisão sistemática foi sintetizar os dados da literatura referente aos efeitos do consumo materno de DHL sobre os parâmetros reprodutivos e perfil bioquímico em roedores. A busca eletrônica foi realizada nos bancos de dados PUBMED (Public / Publisher MEDLINE), EMBASE (Ovid) e Web of Science. Dados de 76 estudos mostraram que a mudança nos parâmetros bioquímicos e reprodutivos é dependente do design experimental. A heterogeneidade encontrada nos estudos impossibilita as comparações. Além disso, os estudos frequentemente omitem ou negligenciam informações importantes, como a descrição da dieta ou detalhes metodológicos. Esses fatores dificultam a afirmação do verdadeiro efeito do consumo materno de DHL para a mãe e a prole. / Doutor

Resumo: Este estudo avaliou o efeito dos níveis de energia (NDT) e proteína bruta (PB) consumidos por vacas de corte durante a gestação sobre o peso dos fetos aos quatro (PF4) e oito meses (PF8) e dos bezerros ao nascimento (PN); sobre o peso pós-natal aos 60 (PV60), 100 (PV100), 180 (PV180) e 205 (PV205) dias de vida; sobre o peso, a idade, o ganho médio diário (GMD), a área de olho de lombo (AOL), o marmoreio e a espessura de gordura (EG) ao abate. Foi conduzida uma revisão sistemática da literatura e uma metanálise (MA) a partir de duas bases de dados eletrônicas (Scopus e Web of Science). A MA para efeitos randomizados foi realizada para cada resultado com as médias do grupo controle e tratado, conduzida com os níveis de NDT e PB em relação às exigências das vacas (NRC, 1996). Foram avaliadas 46 publicações, correspondentes a 50 estudos, 135 ensaios e 9.379 animais. Não houve efeito do consumo de PB e NDT pelas vacas sobre o PF4. Quando as vacas consumiram PB e NDT em níveis iguais às suas exigências, no primeiro (1TRI) e segundo trimestre (2TRI) da gestação, houve redução no PF8 (DM= 2,236kg; P<0,001). O PN reduziu nos bezerros filhos de vacas que consumiram PB igual ou acima das suas exigências no terceiro trimestre da gestação (3TRI) (DM= -2,954kg; P<0,001 e DM= -0,453kg; P=0,045, respectivamente) ou 140% das exigências de NDT (DM= -2,709; P = 0,001). Quando o consumo de NDT foi igual à recomendação do NRC (1996), observou-se aumento de 2,029kg no PN dos bezerros (P<0,001). O PV60 foi inferior quando as vacas consumiram PB (DM= -1,923kg; P<0,001) e NDT (DM= -1,676kg; P<0,001) acima de suas exigências no 3TRI. O PV205 foi 3,122kg inferior (P<0,001) quando as vacas consumiram até 120% de NDT no 2TRI e 3TRI. Os novilhos cujas mães consumiram PB e NDT acima de suas demandas, no 3TRI, foram abatidos 5,5 dias antes (P= 0,015) que os demais. O GMD, o marmoreio e a EG foram superiores em vacas que consumiram NDT e PB acima das suas exigências no 3TRI (P<0,05). Em síntese, os níveis de PB e NDT, consumidos pelas vacas, acima das recomendações do NRC, estão negativamente relacionados com o desenvolvimento dos fetos e com o PN, sendo que esse efeito permanece até os 205 dias de idade. Por outro lado, na fase de terminação o excesso de PB e NDT passa a contribuir com o GMD, o marmoreio e a EG da carcaça das progênies. / Abstract: This study evaluated the effect of total digestible nutrients (TDN) and crude protein (CP) levels, consumed by cows during gestation, on fetal and postnatal development and on carcass traits. We conducted a systematic review of the literature and a metanalysis (MA) on two electronic databases (Scopus and Web of Science). Inclusion criteria were complete studies using pregnant beef cows receiving different diets that analysed fetus weight at four (FW4) and eight months (FW8), and birth weight of calves (BW); postnatal weight at 60 days (PW60), 100 days (PW100), 180 days (PW180) and 205 days (PW205) of life; and on weight, age, mean daily gain (ADG), loin eye area (LEA), marbling and fat thickness (FT) at slaughter. Random effect MA were conducted for each indicator separately with the mean of control and treated group. The analysis was conducted with the TDN and CP levels in relation to cows’ requirements (NRC, 1996). We evaluated 46 publications, reporting 50 studies, 135 trials and 9,379 animals. The CP and TDN level consumed by pregnant cows showed no change on FW4. Cows that consumed CP and TDN in a level equal to their requirements, in the first (1TRI) and second trimester (2TRI) of gestation, showed a reduction in FW8 (DM= 2,236kg; P<0.001). The BW reduced in cows that consumed CP equal to or above their requirements in the third trimester of gestation (3TRI) (DM= -2.954kg, P<0.001 and DM= -0,453kg, P=0.045, respectively), or 140% of TDN requirements (DM= -2.709, P=0.001). The calves of cows that consumed TDN equal to NRC (1996) requirements, increased the BW in 2,029kg (P<0.001). The PW60 was lower when cows consumed CP (DM= -1.923kg; P<0.001) and TDN (DM= -1.676kg; P<0.001) above their requirements in the 3TRI. The PW205 was lower (DM= 3.12kg; P<0.001) when cows consumed 120% of TDN in the 2TRI and 3TRI. Steers whose mothers consumed CP and TDN above their requirements in the 3TRI were slaughtered 5.5 days earlier (P= 0.015) than the others. The ADG, marbling and FT were higher when cows consumed TDN and CP above the NRC (1996) requirements in the 3TRI (P<0.05). In summary, the CP and TDN levels, consumed by cows, above the NRC recommendations, are negatively associated to fetal development and birth calf weight, and this effect remains until 205 days of age. Alternatively, in the feeder phase, CP and TDN in excess contribute to average daily gain, marbling and fat thickness of the progeny.

O objetivo foi avaliar, por meio de uma abordagem meta-analítica, quais os principais fatores que influenciam no desempenho produtivo e reprodutivo de novilhas e vacas primíparas de corte. Para tanto, foram utilizados, de forma agregada, dados de 3.933 novilhas e vacas primíparas de corte, provenientes de 29 estudos (dissertações e teses) e 43 experimentos. As informações relacionadas à metodologia e aos resultados de cada trabalho foram tabuladas em planilha, constituindo a sistematização dos dados. Por meio dos dados disponibilizados, três artigos foram realizados. No primeiro deles, as variáveis independentes analisadas foram: idade das novilhas (14 ou 24 meses de idade) e vacas primíparas (24 ou 36 meses de idade) no momento em que foram expostas à reprodução, tipo de pastagem (pastagens de ciclo hiberno-primaveril ou natural) e tipo racial (taurinas ou mestiças). As variáveis respostas foram os pesos e escores de condição corporal ao início e final do período reprodutivo e a taxa de prenhez. Maiores pesos corporais ao início do acasalamento e taxa de prenhez foram observados nas novilhas expostas à reprodução aos 24 meses (325,25±1,55 kg e 73,84±1,41%), nas mestiças (321,41±2,15 kg e 70,88±1,63%) e nas que pastejaram pastagens de ciclo hiberno-primaveril no pré-acasalamento (318,34±2,01 kg e 82,43±1,60%). Maiores pesos corporais foram observados nas vacas primíparas expostas à reprodução aos 36 meses de idade (376,09±1,55 kg), nas mestiças (373,56±1,54 kg) e nas que pastejaram pastagens de ciclo hiberno-primaveril (377,80±2,29 kg). A maior prenhez foi observada nas primíparas aos 24 meses de idade (83,44±3,03%, nas taurinas (88,53±2,61%) e nas que pastejaram pastagens de ciclo hiberno-primaveril (77,68±1,93%). No segundo trabalho, a taxa de prenhez foi considerada a variável resposta. Foram realizadas análises de sub-grupos entre categoria animal (novilhas e vacas primíparas), idade das fêmeas no momento em que foram expostas à reprodução (14, 24 ou 36 meses de idade), tipo de pastagem (pastagens de ciclo hiberno-primaveril ou natural) e tipo racial (taurinas ou mestiças). Novilhas e vacas primíparas, expostas à reprodução apresentaram maior taxa de prenhez (80,24%). No terceiro trabalho, a variável resposta foi a taxa de prenhez.Fatores explanatórios foram categoria animal (novilhas ou vacas primíparas), peso corporal ao início do período reprodutivo, ganho médio diário durante a reprodução, tipo racial (taurinas e mestiças) e taxa de lotação. O peso ao início da reprodução influenciou 93,1% da taxa de prenhez. Por meio da presente meta-análise, a idade à qual as fêmeas foram expostas à reprodução, a raça, o tipo de pastagem utilizada no pré-acasalamento, o peso corporal ao início da reprodução e a taxa de lotação são fatores que influenciam o desempenho produtivo e reprodutivo de novilhas e vacas primíparas de corte no sul do Brasil. / The aim was to evaluate, through a meta-analytical approach, the main factors that influence the productive and reproductive performance of heifers and primiparous cows. We used, in aggregate, data from 3,933 heifers and primiparous cows from 29 studies (dissertations and theses) and 43 experiments. The information related to the methodology and the results of each work were tabulated in a spreadsheet, constituting the systematization of the data. Through the available data, three articles were made. In the first one, the independent variables analyzed were: age of heifers (14 or 24 months of age) and primiparous cows (24 or 36 months of age) at the time they were exposed to reproduction, type of pasture (winter-spring cycle or natural pasture) and breed (Taurine or crossbred). The variables responses were the weight and body condition scores at the beginning and end of the reproductive period and the pregnancy rate. Larger body weights at the beginning of the breeding season and pregnancy rate were observed in heifers exposed to reproduction at 24 months (325.25±1.55 kg and 73.84±1.41%), in crossbreed (321.41±2,15 kg and 70.88±1.63%) and in those that grazed winter-spring cycle pastures in pre-mating (318.34±2.01 kg and 82.43±1.60%). Higher body weights were observed in the primiparous cows exposed to the breeding season at 36 months of age (376.09±1.55 kg), in the crossbreed (373.56±1.54 kg) and in those that grazed hiberno-spring cycle (377.80±2.29 kg). The highest pregnancy was observed in the primiparous cows at the 24 months of age (83.44±3.03%), in the taurine (88.53±2.61%) and in those that grazed winter-spring cycle pastures (77.68±1.93%). In the second study, the pregnancy rate was considered the response variable. Was evaluated analysis of subgroups between animal categories (heifers and primiparous cows), age of females at the time of the breeding season (14, 24 or 36 months of age), type of pasture (winter-spring cycle or natural pasture) and breed (Taurine or crossbreed). Heifers and primiparous cows, exposed to reproduction, had a higher pregnancy rate (80.24%). In the third study, the response variable was the pregnancy rate. Explanatory factors were animal category (heifers or primiparous cows), body weight at the beginning of the breeding season, average daily gain during the breeding season, breed (Taurine and crossbreed) and stocking rate. Through the present meta-analysis, the age at the which females were exposed to the breeding season, breed, type of pasture used in pre-mating, body weight at the beginning of the breeding season and stocking rate are factors that influence productive performance and reproductive performance of heifers and primiparous beef cattle in southern Brazil.