A hepatite A é uma zoonose causada pelo vírus da Hepatite A (HAV), um picornavirus que tem como hospedeiros naturais os primatas humanos e não humanos. Existe apenas um sorotipo, porém várias cepas, divididas em 7 génotipos, sendo que 3 destes são estritamente de cepas humanas e 3 contêm apenas cepas símias. O genótipo III possui tanto cepas humanas como de primatas não humanos. A variação genética entre as cepas de um mesmo genótipo é de no máximo 15%. Já a variação antigênica entre todas as cepas é praticamente inexistente; por isso pode-se utilizar os testes diagnósticos empregados para humanos em primatas não humanos. A infecção pelo vírus da hepatite A se dá pela via fecal-oral, ou seja, o animal ingere o vírus por meio de alimento ou objetos contaminado e, após replicação do vírus no fígado, ele é eliminado nas fezes. A manifestação clínica da doença em primatas e crianças é geralmente assintomática; mas quando presente, é inespecífica e varia de quadros brandos até a morte do animal. O diagnóstico é feito por métodos sorológicos, através da detecção de anticorpos específicos anti-HAV, ou através da detecção de antígeno viral nas fezes durante a fase aguda da doença. A presença de IgM anti-HAV indica infecção aguda ou recente, ao contrário dos anticorpos do grupo IgG, que são encontrados a partir da fase de convalecença e permanecem presentes por vários anos. O objetivo deste trabalho foi de pesquisar a soroprevalência de anticorpos anti-HAV em primatas neotropicais, e também a presença de antígeno viral nas fezes daqueles animais que estivessem apresentando infecção aguda. Para tanto foram testadas 421 amostras de soro de primatas neotropicais de 32 espécies, além de animais de 4 grupos de diferentes híbridos. Dentre os animais estudados, 13,5% (57/421) eram de vida livre, 29,7% (125/421) eram provenientes do Centro de Primatologia do Rio de Janeiro, 4% (17/421) de criadores, 3,8% (16/421) do DEPAVE e 48,9% (206/421) de zoológicos do Estado de São Paulo. As amostras foram testadas para IgM e anti-HAV total com teste imunoenzimático. As amostras positivas ou suspeitas foram reanalisadas. Todas as amostras foram negativas para IgM, ou seja, nenhum animal testado apresentava infecção aguda, portanto a pesquisa para o antígeno viral não pode ser realizada. Em relação ao anti-HAV total, todas os animais de vida livre foram negativos, assim como os animais mantidos no Departamento de Parques e Áreas Verdes do Município de São Paulo (DEPAVE). As porcentagens de animais positivos do CPRJ e de zoológicos/criadores foram respectivamente 4% (5/125) e 7,6% (17/223), demonstrando que uma parcela da população de primatas em cativeiro já esteve em contato com este vírus. A prevalência encontrada de anticorpos anti-HAV neste trabalho ficou abaixo do esperado, pois sabe-se que o índice de animais positivos em cativeiro é bastante alto. As razões para esta baixa prevalência são discutidas. Já a menor frequência de animais positivos observada na população do CPRJ era esperada, pois como se trata de um centro de pesquisas onde não há visitação pública, os animais têm menos contato com humanos, e estes são, sabidamente, a maior fonte de infecção para os primatas não humanos mantidos em cativeiro. Estes resultados nos levam a supor que a hepatite A não é uma doença de risco para a população de primatas neotropicais, tanto de cativeiro como de vida livre. / Hepatitis A virus (HAV) is a picornavirus that causes hepatitis A, a zoonotic disease. This virus has only humans and nonhumans primates as its natural hosts. Just one serotype is known, but several strains have been recognized. Those strains are divided into 7 genotypes, 3 of them being exclusively from human strains, other 3 exclusively from Old World primates strains and the genotype III that has human and primate strains. The maximum genetic difference between strains from the same genotype is 15% and the antigenic difference between all strains is almost none. This is why it is possible to use human diagnostic tests for nonhuman primates. The infection route of the HAV is fecal-oral. After the ingestion of the virus by infected food or contaminated objects, the virus replicates in the liver of the animal and reaches the intestines through the bile, being eliminated with the feces. The disease in primates and children is assymptomatic, but when present, it is unspecific and varies from mild signs to death. The diagnosis is made by serological tests or identification from the viral antigen in sera or feces at the acute phase from the disease. The presence of anti-HAV IgM shows acute or recent infection. On the other hand, anti-HAV IgG is found from the convalescent phase of the disease on, through several years. The aim of this project was to research the seroprevalence of anti-HAV antibodies in New World primates and detect the viral antigen in feces from those animals that had acute infection. Sera from 421 animals of 32 different species were tested. From these animals, 13,5% (57/421) were wild animals, 29,7% (125/421) were from the Centro de Primatologia do Rio de Janeiro (CPRJ), 4% (17/421) from breeders, 3,8% (16/421) from Departamento de Parques e Áreas Verdes (DEPAVE) and 48,9% (206/421) were zoo animals. The sera were tested, by immune-enzymatic tests, for the presence of IgM and total anti-HAV antibodies. All the sera were negative for IgM, which means that no animal had acute infection when tested. All wild animals were negative for total anti-HAV, as were the animals from DEPAVE. Four percent (5/125) from the CPRJ animals and 7,6% (17/223) from the zoos’/breeders’ animals were positive for total anti-HAV, showing that a number of captive animals have already been in contact with the virus. The prevalence of anti-HAV antibodies found in this study was lower than expected, as it is known that the number of positive animals in captivity is high. The possible reasons for such low prevalence are discussed. Since humans are the major risk factor for primate infection with HAV, the lower prevalence found at the CPRJ was predictable, because this is a research center, where visitors are not allowed, so the animals have less contact with humans in there, than they do in zoos. Our results lead us to think that hepatitis A is not a disease of high risk for either wild or zoo New World primates.

A hepatite A é uma zoonose causada pelo vírus da Hepatite A (HAV), um picornavirus que tem como hospedeiros naturais os primatas humanos e não humanos. Existe apenas um sorotipo, porém várias cepas, divididas em 7 génotipos, sendo que 3 destes são estritamente de cepas humanas e 3 contêm apenas cepas símias. O genótipo III possui tanto cepas humanas como de primatas não humanos. A variação genética entre as cepas de um mesmo genótipo é de no máximo 15%. Já a variação antigênica entre todas as cepas é praticamente inexistente; por isso pode-se utilizar os testes diagnósticos empregados para humanos em primatas não humanos. A infecção pelo vírus da hepatite A se dá pela via fecal-oral, ou seja, o animal ingere o vírus por meio de alimento ou objetos contaminado e, após replicação do vírus no fígado, ele é eliminado nas fezes. A manifestação clínica da doença em primatas e crianças é geralmente assintomática; mas quando presente, é inespecífica e varia de quadros brandos até a morte do animal. O diagnóstico é feito por métodos sorológicos, através da detecção de anticorpos específicos anti-HAV, ou através da detecção de antígeno viral nas fezes durante a fase aguda da doença. A presença de IgM anti-HAV indica infecção aguda ou recente, ao contrário dos anticorpos do grupo IgG, que são encontrados a partir da fase de convalecença e permanecem presentes por vários anos. O objetivo deste trabalho foi de pesquisar a soroprevalência de anticorpos anti-HAV em primatas neotropicais, e também a presença de antígeno viral nas fezes daqueles animais que estivessem apresentando infecção aguda. Para tanto foram testadas 421 amostras de soro de primatas neotropicais de 32 espécies, além de animais de 4 grupos de diferentes híbridos. Dentre os animais estudados, 13,5% (57/421) eram de vida livre, 29,7% (125/421) eram provenientes do Centro de Primatologia do Rio de Janeiro, 4% (17/421) de criadores, 3,8% (16/421) do DEPAVE e 48,9% (206/421) de zoológicos do Estado de São Paulo. As amostras foram testadas para IgM e anti-HAV total com teste imunoenzimático. As amostras positivas ou suspeitas foram reanalisadas. Todas as amostras foram negativas para IgM, ou seja, nenhum animal testado apresentava infecção aguda, portanto a pesquisa para o antígeno viral não pode ser realizada. Em relação ao anti-HAV total, todas os animais de vida livre foram negativos, assim como os animais mantidos no Departamento de Parques e Áreas Verdes do Município de São Paulo (DEPAVE). As porcentagens de animais positivos do CPRJ e de zoológicos/criadores foram respectivamente 4% (5/125) e 7,6% (17/223), demonstrando que uma parcela da população de primatas em cativeiro já esteve em contato com este vírus. A prevalência encontrada de anticorpos anti-HAV neste trabalho ficou abaixo do esperado, pois sabe-se que o índice de animais positivos em cativeiro é bastante alto. As razões para esta baixa prevalência são discutidas. Já a menor frequência de animais positivos observada na população do CPRJ era esperada, pois como se trata de um centro de pesquisas onde não há visitação pública, os animais têm menos contato com humanos, e estes são, sabidamente, a maior fonte de infecção para os primatas não humanos mantidos em cativeiro. Estes resultados nos levam a supor que a hepatite A não é uma doença de risco para a população de primatas neotropicais, tanto de cativeiro como de vida livre. / Hepatitis A virus (HAV) is a picornavirus that causes hepatitis A, a zoonotic disease. This virus has only humans and nonhumans primates as its natural hosts. Just one serotype is known, but several strains have been recognized. Those strains are divided into 7 genotypes, 3 of them being exclusively from human strains, other 3 exclusively from Old World primates strains and the genotype III that has human and primate strains. The maximum genetic difference between strains from the same genotype is 15% and the antigenic difference between all strains is almost none. This is why it is possible to use human diagnostic tests for nonhuman primates. The infection route of the HAV is fecal-oral. After the ingestion of the virus by infected food or contaminated objects, the virus replicates in the liver of the animal and reaches the intestines through the bile, being eliminated with the feces. The disease in primates and children is assymptomatic, but when present, it is unspecific and varies from mild signs to death. The diagnosis is made by serological tests or identification from the viral antigen in sera or feces at the acute phase from the disease. The presence of anti-HAV IgM shows acute or recent infection. On the other hand, anti-HAV IgG is found from the convalescent phase of the disease on, through several years. The aim of this project was to research the seroprevalence of anti-HAV antibodies in New World primates and detect the viral antigen in feces from those animals that had acute infection. Sera from 421 animals of 32 different species were tested. From these animals, 13,5% (57/421) were wild animals, 29,7% (125/421) were from the Centro de Primatologia do Rio de Janeiro (CPRJ), 4% (17/421) from breeders, 3,8% (16/421) from Departamento de Parques e Áreas Verdes (DEPAVE) and 48,9% (206/421) were zoo animals. The sera were tested, by immune-enzymatic tests, for the presence of IgM and total anti-HAV antibodies. All the sera were negative for IgM, which means that no animal had acute infection when tested. All wild animals were negative for total anti-HAV, as were the animals from DEPAVE. Four percent (5/125) from the CPRJ animals and 7,6% (17/223) from the zoos’/breeders’ animals were positive for total anti-HAV, showing that a number of captive animals have already been in contact with the virus. The prevalence of anti-HAV antibodies found in this study was lower than expected, as it is known that the number of positive animals in captivity is high. The possible reasons for such low prevalence are discussed. Since humans are the major risk factor for primate infection with HAV, the lower prevalence found at the CPRJ was predictable, because this is a research center, where visitors are not allowed, so the animals have less contact with humans in there, than they do in zoos. Our results lead us to think that hepatitis A is not a disease of high risk for either wild or zoo New World primates.

Este trabalho investigou a ocorrência de infecções causadas por Plasmodium spp. e Leishmania spp. em primatas neotropicais mantidos em cativeiro e de vida livre, oriundos de regiões impactadas pelo homem nos biomas Mata Atlântica e Amazônia. Os agentes parasitários investigados são responsáveis por processos zoonóticos que acometem humanos, animais domésticos e selvagens, com significativas perdas ambientais e econômicas. Amostras biológicas foram colhidas e submetidas para análise parasitária por testes sorológicos e moleculares. Com relação aos plasmódios, os resultados alcançados sugerem a transmissão de Plasmodium spp. entre os primatas de cativeiro e de vida livre. No estado de São Paulo, nossos dados apontam para a circulação de P. malariae e P. simium, sendo este último encontrado em Callicebus nigrifrons. Na Amazônia, nossos dados indicam a circulação de P. brasilianum. Com relação às leishmanias, demonstramos que circula entre os primatas de cativeiro do estado de São Paulo a L. (L.) chagasi, as L. (L.) amazonenses e as leishmanias do complexo Viannia. Na região amazônica, 5,2% (1/19) foram positivos no PCR de sangue para L. (L.) chagasi. Os resultados deste trabalho podem subsidiar abordagens sanitárias públicas e veterinárias com relação aos primatas neotropicais existentes no estado de São Paulo e nas regiões Amazônicas. / This study investigated the occurrence of infections caused by Plasmodium spp. and Leishmania spp. in neotropical primates. Specimens were obtained both in captivity and in the wild in regions impacted by human activities in the Atlantic Forest and Amazon, Brazil. The pathogens investigated are responsible for significant zoonotic processes that affect humans, domestic and wild animals, with significant economic and environmental losses. The samples were collected and submitted for analysis by serological and molecular tests. The results suggest the transmission of Plasmodium spp. in primates from captive to those in the wild. In São Paulo state our data point for the presence of P. malariae and P. simium, this latter being found in Callicebus nigrifrons. In the Amazon, our data indicate the presence of P. brasilianum. Leishmania (L.) chagasi, L. (L.) amazonensis and the Leishmania Viannia complex circulates among the captive primates in São Paulo state. In the Amazon, 5.2% (1/19) of the primates sampled were detected by PCR as positive for L. (L.) chagasi. The results of this work may improve animal and public health approaches in relation to the neotropical primates in the regions studied.

Os primatas neotropicais, ou primatas do novo mundo, são pertencentes a um grupo diverso e variado de animais, com características anatômicas, comportamentais e taxonômicas próprias, que os diferem dos primatas do velho mundo. Estima-se que representem 31% dos primatas não-humanos do planeta. Têm sofrido com as altas taxas de crescimento populacional e perturbação antrópica resultante do desflorestamento, agricultura e criação de gado. Com o intuito de reverter esta situação e maximizar o potencial reprodutivo das espécies, o desenvolvimento de biotecnologias associadas à reprodução tem sido amplamente justificado nos dias de hoje, por representarem importantes ferramentas reprodutivas, contribuindo para a preservação da biodiversidade e manutenção da diversidade genética. Assim, o objetivo do presente estudo foi padronizar a colheita de sêmen de Alouatta guariba clamitans por eletroejaculação por via retal com posterior análise do sêmen fresco, procedimentos nunca descritos para a espécie, e adaptar o método de preparo de sêmen de Leontopithecus chrysomelas, Alouatta caraya e Alouatta guariba clamitans para microscopia eletrônica de transmissão, permitindo a comparação da ultraestrutura dos espermatozoides das três espécies e apresentando resultados também inéditos na literatura científica. Para este estudo, foram utilizados quatro exemplares de L. chrysomelas, dois exemplares de A. caraya e dois exemplares de A.g. clamitans, machos adultos mantidos em cativeiro. L. chrysomelas tiveram o sêmen colhido por vibroestimulação peniana, e A. caraya e A.g. clamitans foram submetidos à eletroejaculação por via retal. Após a obtenção dos ejaculados, o sêmen foi avaliado quanto ao volume, pH, concentração, motilidade, integridade de membrana plasmática, integridade de membrana acrossomal e morfologia, e posteriormente preparado para microscopia eletrônica de transmissão. A análise dos 12 espermatozoides das três espécies estudadas revelou que todos apresentam os componentes básicos descritos para o espermatozoide humano cabeça, colo e cauda, formada pelas peças intermediária, principal e terminal com variações na forma e tamanho de cada componente. As diferenças mais significativas encontradas entre os espermatozoides comparados foram extensão de acrossomo, comprimento, largura e organização de peça intermediária. O presente estudo atingiu os objetivos propostos, apresentando resultados inéditos na literatura científica / The neotropical primates, also known as primates of the new world, are a diverse and varied group of animals, with unique anatomical and taxonomic characteristics, as well a unique behaviour, that distinguish those from the old world primates. It is estimated that these present 31% of the non-human primate population of the planet. High taxes of populational growth and anthropological disturbance have been undergoing due to deforestation, agriculture and cattle farms. In order to revert this situation and maximize the reproductive potential of the species, the development of biotechnologies associated to the reproduction are widely justified nowadays, for representing important reproductive tools, contributing to the preservation of the biodiversity and maintenance of genetic diversity. Hence, the purpose of this study was to collect Alouatta guariba clamitans semen by rectal electroejaculation then analyze the fresh semen, procedures never before described for the species, and adapt the preparation method of Leontopithecus chrysomelas, Alouatta caraya and Alouatta guariba clamitans semen for electron transmission microscope, allowing the comparison of the spermatozoa ultrastructure from the three species and also presenting new results to the scientific literature. For this study, it was used four specimens of L. chrysomelas, two specimens of A. caraya and two specimens of A.g. clamitans, adult males kept in captivity. L. chrysomelas had the semen taken by penine vibratory stimulation, and A. caraya and A.g. clamitans were submitted to rectal electroejaculation. After the semen was obtained, it was evaluated regarding the volume, pH, concentration, motility, sperm membrane integrity, acrosome integrity and morphology, and then prepared for electron transmission microscopy. The analysis of the spermatozoa of the three studied species revealed that all present the basic components described for the human spermatozoa - head, neck region and tail, formed by middle, principal and terminal pieces - with variations in 14 shape and size of each component. The most significant differences found between the compared spermatozoa were the acrosome extension and middle piece length, thickness and organization. The present study attained the proposed goals, presenting unprecedented results for the scientific literature

Este trabalho investigou a ocorrência de infecções causadas por Plasmodium spp. e Leishmania spp. em primatas neotropicais mantidos em cativeiro e de vida livre, oriundos de regiões impactadas pelo homem nos biomas Mata Atlântica e Amazônia. Os agentes parasitários investigados são responsáveis por processos zoonóticos que acometem humanos, animais domésticos e selvagens, com significativas perdas ambientais e econômicas. Amostras biológicas foram colhidas e submetidas para análise parasitária por testes sorológicos e moleculares. Com relação aos plasmódios, os resultados alcançados sugerem a transmissão de Plasmodium spp. entre os primatas de cativeiro e de vida livre. No estado de São Paulo, nossos dados apontam para a circulação de P. malariae e P. simium, sendo este último encontrado em Callicebus nigrifrons. Na Amazônia, nossos dados indicam a circulação de P. brasilianum. Com relação às leishmanias, demonstramos que circula entre os primatas de cativeiro do estado de São Paulo a L. (L.) chagasi, as L. (L.) amazonenses e as leishmanias do complexo Viannia. Na região amazônica, 5,2% (1/19) foram positivos no PCR de sangue para L. (L.) chagasi. Os resultados deste trabalho podem subsidiar abordagens sanitárias públicas e veterinárias com relação aos primatas neotropicais existentes no estado de São Paulo e nas regiões Amazônicas. / This study investigated the occurrence of infections caused by Plasmodium spp. and Leishmania spp. in neotropical primates. Specimens were obtained both in captivity and in the wild in regions impacted by human activities in the Atlantic Forest and Amazon, Brazil. The pathogens investigated are responsible for significant zoonotic processes that affect humans, domestic and wild animals, with significant economic and environmental losses. The samples were collected and submitted for analysis by serological and molecular tests. The results suggest the transmission of Plasmodium spp. in primates from captive to those in the wild. In São Paulo state our data point for the presence of P. malariae and P. simium, this latter being found in Callicebus nigrifrons. In the Amazon, our data indicate the presence of P. brasilianum. Leishmania (L.) chagasi, L. (L.) amazonensis and the Leishmania Viannia complex circulates among the captive primates in São Paulo state. In the Amazon, 5.2% (1/19) of the primates sampled were detected by PCR as positive for L. (L.) chagasi. The results of this work may improve animal and public health approaches in relation to the neotropical primates in the regions studied.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Brown howler monkeys (Alouatta guariba clamitans) occur in the Brazilian Atlantic Forest from the states of Minas Gerais and Rio de Janeiro to Rio Grande do Sul, and in a small area in northestern Argentina. They are classified as Vulnerable in the state of Rio Grande do Sul due especially to the loss and fragmentation of their natural habitats, and also due to the deaths caused by the recent outbreak of sylvatic yellow fever (2008/2009). The intense human activities on natural habitats, besides the habitat loss, can favor the spread of pathogenic agents such as bacteria and other parasites which affect men and domestic animals, and which can also occur in wildlife animals. This study aimed at verifying the occurrence of Enterobacteriaceae and Cryptosporidium sp. in feces of free-ranging brown howler monkeys in Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil, and understanding the influence of ecological and environmental factors (group size, howler population density, fragment size, distance to the nearest human settlement, distance to the nearest river and seasonality) on the richness of such organisms. The samples were analyzed at the Center for Studies and Research on Wild Animals (NEPAS / LCDPA) of the Federal University of Santa Maria. Twenty Enterobacteriaceae species were detected, and with the techniques employed, the samples were negative for Salmonella spp. and Cryptosporidium sp. None of the environmental variables had significant influence on the wealth of Enterobacteriaceae. Considering that howler populations at CISM (Campo de Instrução de Santa Maria) fell dramatically due to yellow fever, and that some organisms found in this study may interact with other factors and affect the population dynamics of the howler. We believe that it is fundamental to continue monitoring the health of these populations in order to better understand disease mechanisms, as well as conserve this species. / O bugio-ruivo (Alouatta guariba clamitans) ocorre na Mata Atlântica dos estados de Minas Gerais e Rio de Janeiro ao Rio Grande do Sul e em pequena porção do nordeste da Argentina. É classificado como vulnerável no Rio Grande do Sul devido principalmente à perda e fragmentação de habitat e ao recente surto de febre amarela silvestre (2008/2009). As intensas atividades antrópicas no meio selvagem, além da perda de habitat, podem favorecer a disseminação de agentes patogênicos como bactérias e parasitos, que ocorrem em animais domésticos e em humanos e que podem acometer também os animais selvagens. O objetivo deste estudo foi verificar a ocorrência de bactérias da família Enterobacteriaceae e do protista Cryptosporidium sp. em fezes de bugios-ruivos de vida livre no município de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil, bem como relacionar a riqueza de enterobactérias nas amostras com fatores ecológicos e ambientais como tamanho do grupo, tamanho do fragmento florestal, densidade de populações de bugios, distância com núcleos humanos mais próximos, distância para cursos d água e sazonalidade. As amostras foram analisadas no Núcleo de Estudos e Pesquisas em Animais Silvestres (NEPAS/LCDPA) da Universidade Federal de Santa Maria. Foram detectadas vinte espécies de enterobactérias, e com as técnicas empregadas, as amostras foram negativas para Salmonella spp. e Cryptosporidium sp.. Nenhuma das variáveis ambientais analisadas teve influência sobre a riqueza das enterobactérias. Considerando que as populações de bugios do Campo de Instrução de Santa Maria (CISM) sofreram uma drástica redução devida à febre amarela, e que alguns organismos encontrados nesse estudo podem estar interagindo com outros fatores e assim afetar a dinâmica populacional dos bugios. Acredita-se que a continuidade do monitoramento da saúde destas populações seja fundamental para melhorar a compreensão dos mecanismos das doenças, assim como para a conservação dessa espécie.

Os primatas neotropicais, ou primatas do novo mundo, são pertencentes a um grupo diverso e variado de animais, com características anatômicas, comportamentais e taxonômicas próprias, que os diferem dos primatas do velho mundo. Estima-se que representem 31% dos primatas não-humanos do planeta. Têm sofrido com as altas taxas de crescimento populacional e perturbação antrópica resultante do desflorestamento, agricultura e criação de gado. Com o intuito de reverter esta situação e maximizar o potencial reprodutivo das espécies, o desenvolvimento de biotecnologias associadas à reprodução tem sido amplamente justificado nos dias de hoje, por representarem importantes ferramentas reprodutivas, contribuindo para a preservação da biodiversidade e manutenção da diversidade genética. Assim, o objetivo do presente estudo foi padronizar a colheita de sêmen de Alouatta guariba clamitans por eletroejaculação por via retal com posterior análise do sêmen fresco, procedimentos nunca descritos para a espécie, e adaptar o método de preparo de sêmen de Leontopithecus chrysomelas, Alouatta caraya e Alouatta guariba clamitans para microscopia eletrônica de transmissão, permitindo a comparação da ultraestrutura dos espermatozoides das três espécies e apresentando resultados também inéditos na literatura científica. Para este estudo, foram utilizados quatro exemplares de L. chrysomelas, dois exemplares de A. caraya e dois exemplares de A.g. clamitans, machos adultos mantidos em cativeiro. L. chrysomelas tiveram o sêmen colhido por vibroestimulação peniana, e A. caraya e A.g. clamitans foram submetidos à eletroejaculação por via retal. Após a obtenção dos ejaculados, o sêmen foi avaliado quanto ao volume, pH, concentração, motilidade, integridade de membrana plasmática, integridade de membrana acrossomal e morfologia, e posteriormente preparado para microscopia eletrônica de transmissão. A análise dos 12 espermatozoides das três espécies estudadas revelou que todos apresentam os componentes básicos descritos para o espermatozoide humano cabeça, colo e cauda, formada pelas peças intermediária, principal e terminal com variações na forma e tamanho de cada componente. As diferenças mais significativas encontradas entre os espermatozoides comparados foram extensão de acrossomo, comprimento, largura e organização de peça intermediária. O presente estudo atingiu os objetivos propostos, apresentando resultados inéditos na literatura científica / The neotropical primates, also known as primates of the new world, are a diverse and varied group of animals, with unique anatomical and taxonomic characteristics, as well a unique behaviour, that distinguish those from the old world primates. It is estimated that these present 31% of the non-human primate population of the planet. High taxes of populational growth and anthropological disturbance have been undergoing due to deforestation, agriculture and cattle farms. In order to revert this situation and maximize the reproductive potential of the species, the development of biotechnologies associated to the reproduction are widely justified nowadays, for representing important reproductive tools, contributing to the preservation of the biodiversity and maintenance of genetic diversity. Hence, the purpose of this study was to collect Alouatta guariba clamitans semen by rectal electroejaculation then analyze the fresh semen, procedures never before described for the species, and adapt the preparation method of Leontopithecus chrysomelas, Alouatta caraya and Alouatta guariba clamitans semen for electron transmission microscope, allowing the comparison of the spermatozoa ultrastructure from the three species and also presenting new results to the scientific literature. For this study, it was used four specimens of L. chrysomelas, two specimens of A. caraya and two specimens of A.g. clamitans, adult males kept in captivity. L. chrysomelas had the semen taken by penine vibratory stimulation, and A. caraya and A.g. clamitans were submitted to rectal electroejaculation. After the semen was obtained, it was evaluated regarding the volume, pH, concentration, motility, sperm membrane integrity, acrosome integrity and morphology, and then prepared for electron transmission microscopy. The analysis of the spermatozoa of the three studied species revealed that all present the basic components described for the human spermatozoa - head, neck region and tail, formed by middle, principal and terminal pieces - with variations in 14 shape and size of each component. The most significant differences found between the compared spermatozoa were the acrosome extension and middle piece length, thickness and organization. The present study attained the proposed goals, presenting unprecedented results for the scientific literature

Many Neotropical primate species are endangered of extinction. Reproductive biotechnologies can consistently contribute to species conservation, being among them the genetic resource banks. However, success in the use of such technologies relies on advances in the knowledge of basic reproductive biology of a given species. During these processes, assessment of sperm quality is of supreme importance. We focused our work in captive golden-headed lion tamarins (Leontopithecus chrysomelas), housed at São Paulo Zoological Park Foundation. Leontopithecus sp. is a very important target for the development of reproductive techniques aiming conservation, as all species from this genus are classified as endangered or critically endangered of extinction by IUCN. For the evaluation of sperm quality in L. chrysomelas, techniques like sperm-binding assay, and the non-fluorescent staining for evaluation of acrosome integrity fast-green/rose-bengal, plasma membrane integrity eosin-nigrosin and mitochondrial activity 3.3 diaminobenzidine were validated for fresh semen. We have also validated an acrosome integrity evaluation technique coomassie blue staining, for thawed samples due to the inadequacy of the method used for fresh semen. Some Neotropical primates species show variation in semen quality over the year. In order to assess semen quality for this species and to verify if golden-headed lion tamarin presents this variation, we collected semen in dry and rainy seasons, during different periods of breeding season in the interval of conceptive periods and in the end of the second conceptive period. Testicular measurements were taken prior each semen collection, and a significant difference was found in total testicular volume between seasons, with major volumes found during dry season (p = 0.0011). Samples collected during rainy season showed higher percentage of total motility (x = 93.85) and intact plasma membrane (x = 95.54) (p = 0.0149 and p = 0.0279, respectively), in comparison with dry season (total motility x = 90.96 and intact plasma membrane x = 92.46). Even with those differences, semen from both seasons presented good quality. The success rate for collection with penile vibrostimulation technique was of 100%, and all samples obtained were constituted by only a coagulated fraction. Despite not achieving coagulum dissolution, we were able to access a high number of spermatozoa by adding Biggers-Whitten-Whittingham (BWW) medium to the coagulum for 30 min at 37°C, and performed all proposed analyzes. The same samples used of fresh analyzes were subsequently submitted to cryopreservation using two different commercial extenders BotuBOV® (BB) and Freezing Medium with Glycerol and Gentamicin Test Yolk Buffer® (TYB). Thawed semen samples were analyzed with the same methods previously validated and were also evaluated for the susceptibility to oxidative stress through quantification of induced thiobartituric acid reactive substances (TBARS). For all seminal parameters assessed, no significant difference was observed between BB and TYB, except that BB presented a higher percentage of intact acrosome (p = 0.0101) and concentration of TBARS (p = 0.0005). Despite those differences, thawed semen from both extenders performed similarly at spermegg binding assay. From our work, we observed that the proposed methods were successfully validated for L. chrysomelas. Fresh semen quality was very high and both extenders were successful in cryopreserving semen. / Muitas espécies de primatas neotropicais são ameaçadas de extinção. As biotecnologias da reprodução podem contribuir consistentemente para a conservação das espécies, estando entre elas os bancos de recurso genético. Entretanto, o sucesso no uso de tais tecnologias depende de avanços no conhecimento da biologia reprodutiva básica de uma certa espécie. Durante esse processo, a avaliação da qualidade espermática é de suprema importância. Nós concentramos nosso trabalho em micos-leões-de-cara-dourada (Leontopithecus chrysomelas), mantidos na Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Leontopithecus sp. é um alvo importante para o desenvolvimento de técnicas reprodutivas com o propósito da conservação, sendo que todas as espécies do gênero são classificadas como ameaçadas ou criticamente ameaçadas de extinção pela IUCN. Para a avaliação da qualidade espermática em L. chrysomelas, técnicas como o teste de ligação do espermatozoide, e as colorações não fluorescentes para a avaliação de integridade de acrossomo fast-green/rosa bengala, integridade de membrana plasmática eosina-nigrosina e atividade mitocondrial 3,3 diaminobenzidina foram validados para sêmen fresco. Nós também validamos uma técnica de avalição de integridade de acrossomo corante azul de coomassie, para amostras descongeladas devido a inadequação do método utilizado em sêmen fresco. Algumas espécies de primatas neotropicais apresentam variação na qualidade seminal ao longo do ano. Para avaliar a qualidade do sêmen para essa espécies e para verificar se mico-leão-de-cara-dourada possui essa variação, nós colhemos sêmen nas estações de seca e chuva, durante diferentes períodos da estação reprodutiva no intervalo dos períodos conceptivos e no final do segundo período conceptivo. As medições dos testículos foram realizadas previamente a cada colheita de sêmen, e uma diferença significativa foi encontrada no volume testicular total entre as estações, com maiores volumes encontrados durante a estação de seca (p = 0,0011). As amostras colhidas durante a estação de chuva mostraram uma maior porcentagem de motilidade total (x = 93,85) e integridade de membrana plasmática (x = 95,54) (p = 0,0149 e p = 0,0279, respectivamente), em comparação com a estação seca (motilidade total x = 90,96 e integridade de membrana plasmática x = 92,46). Mesmo com essas diferenças, sêmen de ambas as estações apresentaram boa qualidade. A taxa de sucesso das colheitas com a técnica de vibroestimulação peniana foi de 100%, e todas as amostras eram constituídas de somente uma fração coagulada. Apesar de não obtermos a dissolução completa do coágulo, nós pudemos acessar um grande número de espermatozóides pela adição do meio Biggers-Whitten-Whittingham (BWW) ao coágulo por 30 minutos a 37°C, e realizamos todas as análises propostas. As mesmas amostras usadas nas avaliações do sêmen fresco foram subsequentemente submetidas à criopreservação usando dois diluidores comerciais diferentes BotuBOV® (BB) e Freezing Medium with Glycerol and Gentamicin Test Yolk Buffer® (TYB). As amostras descongeladas foram analisadas com os mesmos métodos previamente validados e também foram avaliadas para a suscetibilidade ao estresse oxidativo pela quantificação de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Para todos os parâmetros seminais avaliados, não houveram diferenças significativas entre BB e TYB, exceto que o BB apresentou porcentagem de acrossomos íntegros (p = 0.0101) e concentração de TBARS (p = 0.0005) maiores. Apesar dessas diferenças, as amostras descongeladas de ambos diluidores mostraram resultados similares no ensaio de ligação do espermatozoide à membrana perivitelínica do ovo de galinha. Do nosso trabalho, podemos observar que os métodos propostos foram validados com sucesso para L. chrysomelas. A qualidade do sêmen fresco foi muito alta e ambos diluidores obtiveram sucesso na criopreservação do sêmen.