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1	Estrategias de cultivo para optimizar la técnica de maduración in vitro de ovocitos humanos profase I Torres, Patricia 18 June 2021 (has links) El objetivo principal de esta tesis consistió en optimizar y validar un protocolo de maduración in vitro (MIV) de ovocitos profase I (PI), con el fin de obtener mayor proporción de ovocitos maduros en las técnicas de reproducción asistida (TRA). Las condiciones de cultivo son claves en el proceso de MIV ovocitaria y los medios empleados deben proporcionar los requisitos energéticos y metabólicos necesarios. En este estudio se analizó la eficacia de distintos medios comerciales de cultivo embrionario, así como la influencia de componentes suplementados en la maduración de ovocitos PI denudados procedentes de ciclos estimulados. El trabajo de tesis se desarrolló en dos fases experimentales: 1) En la primera parte del estudio se valoró la tasa de maduración, potencial de activación y capacidad de desarrollo embrionario hasta blastocisto de los ovocitos metafase II (MII) obtenidos de cada grupo. Nuestros resultados confirman que los ovocitos PI son capaces de progresar en la meiosis hasta MII de manera similar en los diferentes sistemas de cultivo estudiados. Además, los ovocitos maduros obtenidos adquirieron similar capacidad de estímulo de activación partenogenota, independientemente del medio de incubación. No obstante, la competencia de desarrollo embrionario de los ovocitos madurados in vitro en medio SAGE 1-STEP es significativamente superior que aquellos cultivados el CCM y Sydney IVF Blastocyst médium. También se determinó la influencia de la posición de la vesícula germinal (VG) en la maduración ovocitaria, siendo favorable la localización periférica. En cambio, no se observó ningún efecto en función de la presencia/ausencia de células de la granulosa del cúmulo en la maduración ovocitaria. 2) En la segunda fase de estudio, se estudió la calidad de los ovocitos tras la MIV en base a la estructura del huso meiótico mediante marcaje inmunocitoquímico. No se encontró variación en la conformación del huso y la distribución de cromosomas en la placa metafásica según el medio comercial utilizado. Ovocito Maduración in vitro Profase I Cultivo Desarrollo embrionario Huso meiótico
2	Spindle-Localized CPE-Mediated Translation Controls Mediotic Chromosome Segregation Eliscovich, Carolina 11 June 2008 (has links) La progresión meiótica y el desarrollo embrionario temprano están programados, en parte, por la activación tradcuccional de mRNAs maternos como lo son los que codifican para las proteinas de ciclina B1 o mos. Estos mRNAs no son traducidos al mismo tiempo ni en el mismo lugar. Por lo contrario, su traducción está especificamente regulada por elementos de poliadenilación citoplasmática (CPEs) presentes en sus 3'UTRs. Los elementos CPEs reclutan a la proteina de unión a CPE (CPE-binding protein CPEB (Colegrove-Otero et al., 2005; de Moor et al., 2005; Mendez and Richter, 2001; Richter, 2007)). Esta proteina de unión al RNA no sólo determina cuándo y en qué medida un mRNA será activado traduccionalmente por poliadenilación citoplasmática (Mendez et al., 2000a; Mendez et al., 2000b; Mendez et al., 2002) sino que también participa, junto con el represor de la traducción Maskin, en el transporte y la localización de sus mRNAs diana hacia los sitios de localización subcelular donde su traducción ocurrirá (Huang et al., 2003; Huang and Richter, 2004). Durante el desarrollo embrionario de Xenopus, CPEB se encuentra localizada en el polo animal de los oocitos y más tarde, sobre el huso mitótico y centrosomas en el embrión (Groisman et al., 2000). Se ha demostrado que embriones de Xenopus inyectados con agentes que interrumpen la traducción dependiente de poliadenilación citoplasmática, detienen la división celular y presentan estructuras mitóticas anormales (Groisman et al., 2000). En este trabajo que derivó en mi tesis doctoral, hemos demostrado que la activación traduccional localizada en el huso mitótico de mRNAs regulados por CPEB que codifican para proteinas con una conocida función en aspectos estructurales del ciclo celular como la formación del huso mitótico y la segregación cromosómica, es esencial para completar la primera división meiótica y para la correcta segregación cromosómica en oocitos de Xenopus. interkinesis microtubule organizing center microtubule-cytoskeleton chromosome segregation centrosomes spindle assembly germinal vesicle breakdown prophase-I arrest meiotic cell cycle progression Poly(A) tail lengthening animal and vegetal hemispheres xenopus oocytes and development RNA-binding proteins translational activation untranslated regions (UTRs) translational repression mRNA Localization Cytoplasmic polyadenylation translation CPEB vesícula Germinal profase-I formación del huso mitótico progresión del ciclo meiótico elongamiento de la cola de poli(A) polo animal y vegetal oocitos de Xenopus al RNA proteínas de unión regiones no traducidas (UTRs) activación traduccional citoesqueleto de microtúbulos localización de mRNAs represión traduccional poliadenilación citoplasmática traducción centro organizador de microtúbulos centrosomas segregación cromosómica Xkid TPX2 interquinesis CPEB Xkid TPX2 57

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Estrategias de cultivo para optimizar la técnica de maduración in vitro de ovocitos humanos profase I

Spindle-Localized CPE-Mediated Translation Controls Mediotic Chromosome Segregation