A nutrição é um dos principais fatores que afetam a eficiência reprodutiva por influenciar o crescimento, maturação e capacidade ovulatória do folículo bem como o perfil e estado metabólico do animal, gerando cenários que prejudicam ou corroboram o desenvolvimento e estabelecimento da prenhez. Diferentes fontes energéticas utilizadas na nutrição são capazes de alterar os padrões de fermentação ruminal e causar respostas endócrinas distintas. A partir disso, os objetivos desse estudo foram avaliar de que forma duas fontes energéticas da dieta influenciam a produção embrionária, a expressão gênica de enzimas hepáticas que metabolizam progesterona (P4) e a insulinemia. Em um delineamento em crossover, 22 vacas holandesas não lactantes e não gestantes foram distribuídas em dois grupos: um recebendo milho e outro polpa cítrica como fonte de energia da dieta. A quantidade de alimento fornecida foi de 1,3% do peso corporal em matéria seca por dia. O estudo foi composto por dois períodos de 71 dias de duração e em cada um deles foram realizadas duas superovulações (aos 35 e aos 70 dias) e uma biópsia hepática (aos 71 dias). Amostras sanguíneas foram colhidas imediatamente antes do fornecimento do alimento e 4 horas após, em dias pré-determinados, para dosagem de glicose, insulina e P4. Ao final do estudo as vacas passaram por teste de tolerância à glicose (TTG). Foi quantificada a expressão gênica de enzimas que metabolizam a P4 por RT-qPCR. A análise estatística foi realizada por meio de regressão logística pelo Proc MIXED do SAS 9.3. Os dados de expressão gênica foram avaliados por meio de delta CT. Imediatamente antes do fornecimento do alimento, a insulina circulante foi maior para o grupo milho (P < 0,01) e a P4 circulante foi maior para o grupo polpa cítrica (P < 0,01). Quatro horas após a alimentação, a P4 foi igual entre os tratamentos. A relação da P4 circulante na hora 4 e 0 foi maior para o grupo milho (P < 0,01). Tanto a glicose basal como o Homa-IR (Homeostasis model assessment of insulin resistance) foram maiores para o grupo milho. No TTG, o grupo milho apresentou maior pico de glicose no momento 5 minutos, maior taxa de decaimento da glicose (P = 0,01) e menor tempo de meia vida da glicose (P = 0,05). Não houve efeito de tratamento na resposta superestimulatoria, superovulatória, produção de embriões e na expressão gênica das enzimas que metabolizam a P4, mas as superovulações realizadas aos 70 dias produziram embriões de qualidade inferior em relação às realizadas aos 35 dias, independente de tratamento. Conclui-se que, embora tenha sido possível alterar a insulina circulante através da dieta, a quantidade e qualidade de embriões produzidos não foram alteradas. O aumento pós-prandial da P4 circulante não foi relacionado a menor expressão gênica das enzimas hepáticas que metabolizam a P4. / Nutrition is one of the main factors affecting reproductive efficiency by influencing the growth, maturation and ovulatory capacity of the follicle and metabolic status of the animal, leading to scenarios that impair or corroborate the development and establishment of pregnancy. Different energy sources in the composition of the diet can alter ruminal fermentation patterns and cause different endocrine responses. The objectives of this study were to evaluate how two different energy sources in the diet can influence embryo production, gene expression of liver enzymes that metabolize progesterone (P4) and circulating insulin. In a crossover design, 22 non-lactating and non-pregnant Holstein cows were allocated into two groups: one receiving corn and other receiving citrus pulp as the energy supply of the diet. The amount of feed provided was 1.3% of body weight of dry matter per day. The study consisted of two 71-days periods and cows were superovulated twice on each period (at 35 and 70 days). Liver biopsy was performed after 71 days from the beginning of each replicate. Blood was sampled immediately before feeding and 4 hours later, at predetermined days, for measurement of glucose, insulin and P4. At the end of the study cows underwent a glucose tolerance test (GTT). Gene expression of liver enzymes that metabolize P4 was quantified by RT-qPCR. Statistical analysis was performed using logistic regression of Proc Mixed of SAS 9.3. Gene expression data were evaluated using delta CT. Immediately before feeding, the circulating insulin was greater for the corn group (P < 0.01) and circulating P4 was greater for the citrus pulp group (P < 0.01). Four hours after feeding, circulating P4 was similar. The relationship of circulating P4 between hour 4 and 0 was greater for the corn group (P < 0.01). Both basal circulating glucose and HOMA-IR (Homeostasis model assessment of insulin resistance) were greater for the corn group. The corn group had also greater glucose peak at the time 5 minutes of the GTT, greater glucose rate of decay (P = 0.01) and a shorter half-life of glucose (P = 0.05). There was no treatment effect on superstimulatory and superovulatory response, on embryo production and on gene expression of liver enzymes that metabolize P4. However, superovulations performed at 70 days produced lower embryo quality compared to those performed at 35 days, regardless of treatment. In conclusion, although it was possible to change circulating insulin by feeding different diets, the quantity and quality of embryos produced were not affected by the diets. The postprandial increase in circulating P4 was not associated with altered gene expression of hepatic enzymes that metabolize P4.

Submitted by Celso Magalhaes (celsomagalhaes@ufrrj.br) on 2017-08-18T12:40:09Z No. of bitstreams: 1 2016 - Gabriel Almeida Dutra.pdf: 941212 bytes, checksum: 83615886b763ec9a1fb70714c85ae122 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-18T12:40:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016 - Gabriel Almeida Dutra.pdf: 941212 bytes, checksum: 83615886b763ec9a1fb70714c85ae122 (MD5) Previous issue date: 2016-03-31 / CAPES / The anticipation of the breeding season has been the subject of great interest in front of their economic impact. In order to advance the first ovulation and anticipate the reproductive phase of the mares, this study aimed to evaluate if the transvaginal follicle aspiration technique guided by ultrasound during spring transition period, was able to induce cyclicity in mares. The experiment was conducted in Animal Reproduction area of DRAA / IZ / UFRRJ, located at Serop?dica-Rj, during spring transition period (August-September) and early reproductive period (October) 2015. Selected mares were randomly distributed into three groups: Group 1 Control (G1, n = 9), without hormonal treatment; Group 2 P4 + PGF2? (G2, n = 9), 1500 mg of long-acting progesterone, intramuscularly (IM), and seven days later, 7.5 mg Dinoprost (PGF2?), IM and Group 3 transvaginal follicular aspiration + PGF2? (G3, n = 9), greater follicle aspirated (>25mm) and seven days later, 7.5 mg Dinoprost (PGF2?), IM. Prior to the beginning of the experiment, all mares were evaluated by ultrasonography, and the criteria for the study was absence of corpora lutea as well as the presence of ovarian follicles larger than 25 mm. Subsequent to this evaluation, the reproductive activity was monitored every 48 hours until the second ovulation of each mare. When evaluated the number of mares ovulating within 16 days after initiation of treatment, it was observed that the groups G2 and G3 were significantly more effective (P = 0.0031) in the first ovulation of the breeding season, when compared to G1. In G1, 16 days after the start of treatment, no animal ovulated. In G2 and G3 eigh (88.9%) and six (66.7%) mares ovulated respectively. The mares were evaluated until the second subsequent ovulation treatment. All mares ovulated normally, showing that none of them returned to the transitional period and the average number of days between the first and second ovulation did not differ between the groups (P> 0.05). The results of this study allow us to conclude that follicular aspiration technique during spring transition period associated with the administration of 7.5 mg of PGF2? seven days later, was able to induce cyclicity in XI mares. This treatment was effective as the conventional protocol P4 + PGF2?, thus possible to use it in routine reproductive centers. However, more studies are needed to evaluate its effectiveness during the early spring transition period, as well as its association with ovulation inducers. / A antecipa??o da esta??o reprodutiva tem sido assunto de grande interesse frente ao seu impacto econ?mico. A fim de adiantar a primeira ovula??o e antecipar a fase reprodutiva das ?guas, o presente estudo teve como objetivo avaliar se a t?cnica de aspira??o folicular transvaginal guiada por ultrassom durante o per?odo de transi??o primaveril foi capaz de induzir a ciclicidade em ?guas. O experimento foi realizado na ?rea de Reprodu??o Animal do DRAA/IZ/UFRRJ, localizado no munic?pio de Serop?dica-RJ, durante o per?odo de transi??o primaveril (agosto-setembro) e in?cio do per?odo reprodutivo (outubro) de 2015. Foram selecionadas 27 ?guas da ra?a Mangalarga Marchador, entre 5-12 anos, pesando entre 350- 450 kg e com hist?rico de atividade reprodutiva normal. As ?guas selecionadas foram distribu?das aleatoriamente em tr?s grupos: Grupo 1- Controle (G1; n=9), sem tratamento hormonal; Grupo 2- P4 + PGF2? (G2; n=9), 1500mg de progesterona de longa a??o, por via intramuscular (IM), e sete dias ap?s, 7,5 mg de Dinoprost (PGF2?), IM e Grupo 3- Aspira??o folicular transvaginal + PGF2? (G3; n=9), maior fol?culo aspirado (>25mm) e sete dias ap?s, 7,5 mg de PGF2?, IM. Previamente ao in?cio do experimento, todas as ?guas foram avaliadas por meio da ultrassonografia, sendo crit?rio para o estudo a aus?ncia de corpo l?teo, bem como a presen?a de fol?culos ovarianos >25mm. Posteriormente a esta avalia??o, a atividade reprodutiva foi monitorada a cada 48 horas at? o momento da segunda ovula??o de cada ?gua. Quando avaliado o n?mero de ?guas que ovularam em at? 16 dias ap?s o in?cio do tratamento, observou-se que os grupos G2 e G3 foram mais eficientes (P=0,0031) em acelerar a primeira ovula??o da esta??o reprodutiva, quando comparados ao grupo G1. No grupo G1, ap?s 16 dias do in?cio do tratamento, nenhum animal ovulou. Nos grupos G2 e G3 oito (88,9%) e seis (66,7%) ?guas ovularam, respectivamente. Analisando o n?mero m?dio de dias a partir do tratamento at? a primeira ovula??o, os grupos tratados (G2 e G3) foram mais eficientes que o IX grupo controle na antecipa??o da primeira ovula??o (P<0,001). Em rela??o aos grupos tratados, n?o houve diferen?a (P>0,05) entre eles. Foi poss?vel verificar que os grupos G2 e G3 apresentaram uma antecipa??o da primeira ovula??o em rela??o ao controle em m?dia de 12,2 e 8,9 dias, respectivamente. As ?guas foram acompanhadas at? a segunda ovula??o subsequente ao tratamento. Todas ovularam normalmente, demonstrando que nenhuma delas retornou ao per?odo de transi??o e que a m?dia de dias entre a primeira e a segunda ovula??o, n?o diferiu entre os grupos (P>0,05). Os resultados do presente estudo nos permitem concluir que a t?cnica de aspira??o folicular durante o per?odo de transi??o primaveril, associado ? administra??o de 7,5 mg de PGF2? sete dias mais tarde, foi capaz de induzir a ciclicidade em ?guas. Este tratamento mostrou-se t?o eficaz quanto o protocolo convencional de P4 + PGF2?, sendo vi?vel utiliza-lo na rotina de centros reprodutivos. No entanto, mais estudos s?o necess?rios a fim de avaliar sua efic?cia em fol?culos com di?metros menores no per?odo de transi??o primaveril, assim como sua associa??o aos indutores de ovula??o.

Em programas de transferência de embriões, as perdas embrionárias após a inovulação têm sido relacionadas com uma capacidade reduzida do corpo lúteo (CL) em secretar progesterona (P4), uma vez que este hormônio prepara o endométrio para a implantação e a manutenção da prenhez. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar a eficácia da utilização de dispositivo intravaginal contendo progesterona (CIDR®) por 14 dias em receptoras de embrião, para a indução de folículos persistentes e formação de CLs maiores do que aqueles formados com a utilização de CIDR® por 8 dias. Duzentas e setenta e oito novilhas Bos taurus x Bos indicus foram divididas em 4 grupos. As receptoras do Grupo 1 (G1, n = 70) receberam 2,0 mg de BE + 50 mg de P4 por via intramuscular (IM) no dia da colocação do CIDR® (D0), oito dias depois (D8), o dispositivo foi retirado e foi aplicado um análogo da prostaglandina F2 alfa (PGF2 alfa - 0,53 mg de Cloprostenol Sódico) IM pela manhã. No D9, foi aplicado 0,5 mg de BE IM e o D17 foi o dia da inovulação. Os animais do Grupo 2 (G2, n = 71) receberam 2,0 mg de BE + 50 mg de P4 no dia da colocação do CIDR® (D0), todavia, esses animais receberam 2 aplicações de PGF2 alfa, uma no início do tratamento e outra 5 dias depois. Nestes animais, o CIDR® foi mantido por 14 dias; assim, no D15 foi aplicado 0,5 mg de BE e o dia da inovulação, foi o D23. No Grupo 3 (G3, n = 67), o tratamento foi semelhante ao do G2, no entanto a PGF2 alfa foi aplicada uma única vez, 5 dias após o início do tratamento. No Grupo 4 (G4, n = 70), o tratamento foi semelhante ao do G2, tendo os animais recebido 2 aplicações de PGF2 alfa, uma no dia da colocação do CIDR® e outra no dia da retirada. A avaliação ultrassonográfica dos ovários foi realizada um dia após a retirada do CIDR® e no dia da inovulação, quando foram colhidas amostras de sangue para dosagem de P4. O diâmetro médio do folículo dominante (FD) foi maior nos grupos G2, G3 e G4 quando comparado com o grupo G1. A área do CL, a concentração plasmática de P4 e a taxa de aproveitamento foram maiores nos grupos G2 e G3 que no grupo G1, enquanto o grupo G4 não diferiu estatisticamente dos demais. A taxa de concepção nos grupos G2 e G3 foi inferior àquela do grupo G1, mas não diferiu entre o grupo G4 e os demais. A taxa de prenhez não apresentou diferença estatística entre os grupos. Esses resultados sugerem que a utilização de CIDR® por tempo prolongado, quando associada à aplicação de PGF2 alfa no início do tratamento, é eficaz na formação de folículos persistentes, que resultam em CLs aumentados e com maior capacidade de secretar P4 . No entanto, ao contrário do esperado, a taxa de concepção foi reduzida nos grupos em que o tratamento visava a formação de folículos persistentes. / Embryo losses in cattle embryo transfer programs have been related to a corpus luteum (CL) inability to secrete progesterone (P4), necessary to endometrial preparation for embryo implantation and pregnancy maintenance. Thus the objective of this experiment was to evaluate the efficacy of a treatment with progesterone-releasing intravaginal devices (CIDR®) for a period of 14 days in order to induce the formation of a persistent follicle and a CL of larger diameter than the ones produced during the conventional 8 days CIDR® treatment. Two hundred seventy-eight cross-bred Bos taurus x Bos indicus heifers were randomly allocated in four groups. Heifers in Group 1 (G1, n = 70) received 2.0 mg estradiol benzoate (EB) + 50 mg of P4 at the moment of CIDR® insertion (D0), a 0.53 mg injection of cloprostenol (PGF2 alfa analogous) at the time of CIDR® removal (D8) and 0.5 mg EB on D9. On D17 animals received a frozen/thawed embryo by direct transfer. Heifers in Group 2 (G2, n = 71) received a CIDR® device combined with 2.0 mg of EB + 50 mg of P4 (D0). Animals of this group received 2 injections of PGF2 alfa, one on D0 and the other on D5. The CIDR® was removed on D14. A 0.5 mg injection of EB was administered on D15. The treatment in Group 3 (G3, n = 67) was similar to G2, except by the fact that a single injection of PGF2 alfa was administered on D5. Treatment performed on animals of Group 4 was similar to the one performed on G2. However, animals of this group received two injections of PGF2 alfa, one at the time of CIDR® insertion and the other at the moment of it?s removal. Ovarian ultrasonography was performed on the day after CIDR® removal and at the day of embryo transfer. Blood samples for P4 analysis were also collected on the day of embryo transfer. Mean diameter of the dominant follicle was larger in heifers in G2, G3 and G4 when compared to G1. The CL area, plasma progesterone concentrations and recipient selection rate was greater in G2 and G3 than in G1, but G4 was not different of the other groups. Conception rates were lower in G2 and G3 when compared to G1. No differences between groups were found regarding to the pregnancy rates. These results suggest that a CIDR® long-term treatment, when associated with PGF2 alfa in the beggining of the treatment is efficient to stimulate the formation of a persistent follicle, resulting in a larger CL which provides higher P4 concentration. However, the induction of a persistent follicle had a negative effect on the conception rates which was not expected.

O objetivo do experimento I foi avaliar a redução do tempo de permanência do dispositivo de P4 de 9 para 7 dias sob parâmetros reprodutivos de vacas Nelore. Foram utilizadas 674 vacas lactantes entre 40-60 dias pós parto que receberam no início do protocolo (d0) BE + CIDR. No momento da retirada do CIDR foi administrado PGF2 &#945;, ECP e eCG. A IATF ocorreu 55 e 48 horas após a retirada do dispositivo nos tratamentos 7d-CIDR e 9d-CIDR, respectivamente. Dez dias após a IA foi realizada colheita de sangue para dosagem de P4 sérica e confirmação da ovulação. Vacas tratadas com 7d-CIDR apresentaram menor (p < 0,01) folículo ovulatório em relação ao 9d-CIDR. No entanto, a concentração de P4 pós-IA, taxas de ovulação, detecção de estro e prenhez não foram influenciadas pelo tempo de permanência do CIDR. Assim, o uso do CIDR por 7 dias promoveu desempenho reprodutivo semelhante em vacas Nelore comparado ao protocolo com 9 dias. O experimento II teve o objetivo de avaliar os efeitos da reutilização do CIDR por até 35 dias de uso em vacas e 42 dias em novilhas Nelore. Utilizou-se 749 vacas lactantes 40-60 dias pós parto e 92 novilhas púberes. No d0 os animais receberam BE + CIDR novo (CIDR1) ou previamente usado por 7 (CIDR2), 14 (CIDR3), 21 (CIDR4), 28 (CIDR5) e 35 (CIDR6) dias. No momento da retirada do CIDR (d7) foi administrado PGF2 &#945;, ECP, eCG e exame de US para mensuração do maior folículo (FD), além de colheita de sangue para dosagem de P4. A IATF ocorreu 55 horas após a retirada do dispositivo. O diâmetro do FD foi maior (p < 0,01) de acordo com o maior número de usos do CIDR nas vacas, a concentração de P4 reduziu nos CIDRs reutilizados porém se mantiveram acima de 1,5 ng/ml e a taxa de prenhez não foi afetada pela reutilização do dispositivo por até 5 vezes em vacas e o sexto uso em novilhas. O protocolo com 7 dias de permanência permite a reutilização do CIDR por até 6 vezes mantendo a mesma eficiência reprodutiva. No experimento III o objetivo foi avaliar se a aplicação do eCG dois dias antes da retirada do dispositivo aumenta o tamanho do FO, CL e taxa de prenhez. Foram utilizadas 681 vacas lactantes 40-60 dias pós parto e 182 novilhas púberes. Os animais foram distribuídos em dois tratamentos com aplicação de eCG no quinto (5d-eCG) ou sétimo dia (7d-eCG). No d0, os animais receberam BE + CIDR e no dia 7 o CIDR foi retirado e administrado PGF2 &#945; e ECP. Dez dias após a IA foi realizada US para mensuração do CL e colheita de sangue para dosagem de P4. A IATF ocorreu 55 horas após a retirada do dispositivo. O tratamento 5d-eCG aumentou (p < 0,01) o FO nas vacas em relação ao grupo 7deCG e o mesmo ocorreu nas novilhas. Em vacas, a concentração de P4 pós IA foi mais alta (p = 0,04) no 5d-eCG. Em novilhas o diâmetro do CL pós-IA foi maior (p < 0,01) no 5d-eCG. No entanto, a antecipação da aplicação do eCG foi eficiente em aumentar o folículo ovulatório no momento da IATF, mas não aumentou a taxa de prenhez / The aim of the experiment I was to evaluate the reduction of the time of P4 device from 9 (9d-CIDR) to 7 (7d-CIDR) days and its impacts on reproductive parameters of Nellore cows. Six hundred and seventy-four suckling cows 40-60 days postpartum received EB + CIDR at d0 of the protocol. At CIDR removal, there were administered PGF2 &#945;, ECP, eCG. The FTAI occurred 55 and 48 hours after device removal in the treatment 7d-CIDR and 9d-CIDR, respectively. Ten days after AI blood samples were collected for P4 analysis and ovulation rate. Cows of treatment 7d-CIDR showed lower (p <0.01) ovulatory follicle (OF) than 9d-CIDR. The CIDR length in cows and heifers did not influence concentration of P4, ovulation rate, estrus detection rate and pregnancy rate. Thus, the use of CIDR by 7 days did not impacted reproductive result in suckling cows and Nellore heifers. The aim of experiment II was to evaluate the effects of the CIDR reuse up to 35 days in cows and heifers on reproductive characteristics. We used 749 suckling cows 40-60 days postpartum and 92 pubertal heifers. In d0 animals received EB + new CIDR (CIDR1) or previously used by 7 (CIDR2), 14 (CIDR3), 21 (CIDR4), 28 (CIDR5) and 35 (CIDR6) days. At CIDR removal were administered PGF2 &#945;, ECP, eCG and US to measure the largest follicle (LF), and blood collection for P4 analysis. The TAI occurred 55 hours after device removal. The LF diameter was greater (p <0.01) in CIDR reused in cows. P4 concentration was lower in CIDR reused, but was higher than 1.5 ng / mL, and the device reused up to 5 times in cows and 6 times heifers did not affect pregnancy rate. The 7d-CIDR protocol allowed the reuse of CIDR up to 6 times keeping the same efficiency of CIDR new. In the experiment III the objective was to evaluate whether the application of eCG two days before the device removal increases the size of OF, CL and pregnancy rates. Six hundred and eighty-one suckling cows 40-60 days postpartum and 182 pubertal heifers were used. The animals were divided into two treatments with eCG application in fifth (5d-eCG) or seventh day (7d-eCG) of protocol. In d0, the animals received EB + CIDR and day 7 CIDR was removed and administered PGF2 and ECP. Ten days after AI, US was performed to measure the size of CL and blood collection for P4 analysis. The TAI occurred 55 hours after CIDR removal. The treatment d5 eCG increased (p < 0.01) OF. In cows, the concentration of P4 after AI was higher (p = 0.04) in 5d-eCG. In heifers, the CL diameter was higher in 5d-eCG. However, the 5d-eCG did not increase (p > 0.1) pregnancy rate. The strategy of eCG application in d5 was efficient to increase ovulatory follicle, but did not increase pregnancy rate

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da administração de hCG na indução de ovulação e estudo da dinâmica folicular no protocolo de nove dias de sincronização de estros em ovelhas cíclicas da raça Santa Inês. O experimento foi dividido em duas etapas consecutivas. Na primeira etapa, em dia aleatório do ciclo estral (D0), 9 ovelhas receberam um novo dispositivo intravaginal de progesterona (Primer-PR®, Tecnopec, Brasil). Nove dias após (D9) o dispositivo foi retirado, administraram-se 30 µg de d-cloprostenol (Prolise®, Syntex, Argentina) e 250 UI de eCG (Folligon®, Intervet, Holanda). A partir deste momento, as ovelhas foram alocadas, aleatoriamente, a um de dois tratamentos: Grupo controle (GC) e Grupo hCG (GhCG). No GC, as ovelhas não receberam nenhum tipo de indutor de ovulação. No GhCG, 24 horas após a retirada do dispositivo, foram administrados, via i.m.,. 500 UI de hCG (Vetecor®,HertapeCalier, Espanha). Após um intervalo de 30 dias foi realizada uma réplica alternada do experimento (etapa 2), ou seja, as ovelhas que na primeira etapa estavam no grupo controle foram alocadas no grupo hCG e vice-versa. O delineamento estatístico utilizado foi o inteiramente casualizado com medidas repetidas no tempo. Houve regressão de todos os folículos presentes no início do tratamento e emergência da onda ovulatória, em média, 3,54±1,5 e 7.88±1.05 dias da colocação do dispositivo, respectivamente. Não houve diferença entre os grupos quanto ao diâmetro do primeiro folículo pré-ovulatório (GC: 5,78±0,30 mm vs. GhCG: 5,36±0,69 mm; P=0,09) e segundo folículo pré-ovulatório (GC: 5,41±0,85 vs. GhCG: 4,71±0,50; P=0,08) em ovelhas com ovulações duplas. Observou-se maior proporção (P=0.009) de comportamento de estro nos animais do GC (9/9) quando comparado ao GhCG (3/8). Não houve diferença significativa entre os grupos no intervalo médio entre retirada do dispositivo e início (47.4±15.0 no GC e 32.0±0.0 no GhCG, P=0.11) ou na duração do estro (36.22±18.57 h no GC e 38.6±30.6 h no GhCG, P=0.72). A concentração de progesterona sérica entre os dias D0 e D8 não diferiu estatisticamente (P=0.49) entre os grupos (CG:11.06±4.82 ng/ml vs GhCG: 9.74±4.37 ng/ml). As ovelhas do grupo hCG apresentaram menor intervalo entre retirada do dispositivo e ovulação (GC: 79,9±15,4 h vs. GhCG: 54,7±4,9 h; P=0,001). Além disso, os animais que receberam hCG tiveram as ovulações mais sincronizadas. Conclui-se que a administração de hCG antecipa e promove ovulações mais sincronizadas, o que pode ser importante para aumentar a eficiência da inseminação em tempo fixo. / The aim of this study was to evaluate the effect of hCG administration for ovulation induction and assessment of follicular dynamics on a nine day estrus synchronization protocol in Santa Ines cycling ewes. The experiment was conducted in two consecutive steps. In a random oestrus cycle day (D0), 9 ewes received a new intravaginal progesterone device (Primer-PR®, Tecnopec, Brasil). Nine days after (D9), 30 µg of d-cloprostenol (Prolise®, Syntex, Argentina ) and 250 IU of eCG (Folligon®, Intervet, Holanda) were administered and the progesterone device was removed. After this procedure, the ewes were randomly assigned to one of two treatments: Control Group (CG) and hCG Group (hCGG). In CG, ewes did not receive any ovulation inductor. In hCGG, 500 IU were administered (Vetecor®,HertapeCalier-Spain), intramuscular, 24 hours after device removal. After a 30 day interval, a replicate of the experiment was performed (phase 2), in which control group animals were allocated into hCG group and vice versa. In this study a randomized experimental design was used with repeated measures over time. In the present study it was observed regression of all follicles present on the day of device insertion and follicular wave emergence occurred averagely 3,54±1,5 and 7.88±1.05 days after device insertion, respectively. There was no difference between groups regarding the first preovulatory follicle diameter (CG: 5.78±0.30 mm vs. hCGG: 5.36±0.69 mm; p=0.09) and the second preovulatory follicle (CG: 5.41±0.85 vs. hCGG: 4.71±0>0.50; P=0.08) for ewes with double ovulations. CG animals showed a higher proportion of estrus behavior (P=0.009) than hCGG. There was no difference between groups regarding average interval from device removal and estrus onset (CG:47.4±15.0 and hCGG: 32.0±0.0, P=0.11) or on estrus duration (36.22±18.57 h on CG and 38.6±30.6 h on hCGG, P=0.72). Serum progesterone concentration between D0 and D8 did not differ (P=0.49) between groups (CG: 11.06±4.82 ng/ml and hCGG: 9.74±4.37 ng/ml). hCG group ewes had smaller interval between device removal and ovulation (CG: 79.9±15.4 h vs. hCGG: 54.7±4.9 h; P=0.001). Animals given hCG had more synchronized ovulations. It can be concluded that hCG administration hastens and improves ovulatory synchronization, which could be important to increase fixed time insemination efficiency.

Bovine reproductive performance is one of the most important factors influencing dairy farm profitability. Present-day techniques for oestrus- and pregnancy-detection are unreliable and labour-intensive. Although measuring milk-progesterone at regular intervals allows the fertility status of a cow to be determined reliably, the labour cost of collecting and analysing samples is prohibitive. This project aimed to develop a progesterone sensing system that could be automated and integrated with the milking unit, thus minimising labour costs. The proposed system involved mixing the milk sample with an enzyme-antibody conjugate and then passing the sample through a column containing immobilised progesterone. Any progesterone in the milk would inhibit conjugate binding to the column. An enzyme substrate would then flow through the column and bound conjugate would be detected as a colour change at the column's outlet. Periodate-coupling was used to attach horseradish peroxidase enzyme to anti-progesterone antibody, and progesterone-3-carboxymethyloxime was immobilised on the polystyrene bead surface using amine-coupling. Both techniques are widely used. Initial experiments attempted to verify the success of these two reactions simultaneously, whereas later experiments focused on the bead-coating. Beads were suspended in a specially-constructed syringe and the antibody activity of the eluted solution was measured by SPR. However, a combination of non-specific binding and antibody stability and activity issues meant neither reaction was conclusively verified. Many trials were done to investigate how to overcome the problems encountered but a suitable, workable procedure was not developed. Despite poor progress, the problems encountered did not undermine the project's potential. There remains optimism of developing an on-line method if research were to continue.

Graduation date: 2003

Objectives were to determine: 1) whether estradiol benzoate (EB) provides a superior alternative to GnRH for synchronizing emergence, growth and maturation of a new follicular wave for fixed timed AI (TAI) in Bos indicus-influenced cattle using CIDR-based protocols, 2) the effect of 48 h calf removal at CIDR removal on the rate of maturational synchrony of the dominant follicle and 3) the effect of varying the magnitude of peak plasma progesterone (P4) concentrations following CIDR insertion on the suppression of FSH and LH secretion in a CIDR-based protocol using EB. In experiment 1, sixty-four Braford (F-1) females were stratified by BCS, parity and days postpartum and assigned randomly to one of four groups in a 2 x 2 factorial arrangement of treatments: 1) Select-Synch + CIDR, 2) Select-Synch + CIDR with 48 h calf removal, 3) E-Synch + CIDR or 4) E-Synch + CIDR with 48 h calf removal. A greater number of cattle in the EB treated group exhibited NFWE compared to the GnRH group, 29 vs 17 cows for EB and GnRH respectively, (P<0.0006). Intervals to NFWE were also greater in EB treated cattle than in GnRH treated cattle, 4.2 vs 2.7 d for EB and GnRH treated cattle respectively, (P<0.0001). Proportions of GnRH- and EB-treated cows ovulating after CIDR removal did not differ. Post-CIDR suckling status did not affect ovulation frequency or interval to ovulation. In experiment 2, eight pubertal (F-1) heifers were used in a Latin Square design with four treatment levels of P4: 1) EB only, 2) EB and new CIDR, 3) EB and new autoclaved CIDR, 4) EB, new autoclaved CIDR and P4 injection at CIDR insertion. Treatments 2 through 4 increased (P < 0.01) mean plasma P4 concentrations compared to treatment 1, with treatment 4 creating the greatest increase in P4 with the longest duration. Suppression of plasma FSH was greatest in group 4 (P<0.08), with mean 60 h concentrations less than in all other groups. Mean concentrations of LH were lesser in group 4 than groups 1 and 2. Frequencies of occurrence of NFWE and ovulation and intervals to NFWE did not differ among treatments. Results indicate that the use of EB and CIDR to synchronize Brahman x Hereford females may provide better synchronization for TAI compared to GnRH and CIDR based protocols.

The objective was to investigate the effects of progesterone (P4) on luteinizing hormone (LH) release, follicle development, and oocyte competence in cattle. We tested the general hypotheses that: 1) The suppressive effect of P4 on gonadotrophin releasing hormone (GnRH)-mediated LH release can be overcome by increasing GnRH dose or pre-treatment with estradiol (E2); and 2) a shorter period of P4 exposure during the growing phase of the ovulatory follicle improves oocyte competence and fertility after fixed-time artificial insemination or superstimulation in cattle. <p>In the first experiment, heifers (n=22) were treated with 100 or 200 µg of GnRH or pretreated with E2 prior to administration of GnRH during high or low circulating P4 concentrations to characterize LH release (Chapter 2). Increasing the dose of GnRH did not alter LH secretion; however, E2 pretreatment overcame the suppressive effect of high P4 on LH secretion. Cattle with lower (n=11) P4 concentrations had higher circulating LH concentrations than those with higher P4 concentrations (n=11), and tended to have higher ovulation rates. <p>Two experiments were conducted to determine the effect of the duration of P4 exposure during the ovulatory wave on fertility followed fixed-time artificial insemination or superstimulation. In the first experiment (Chapter 3), the dominant follicle was allowed to grow for 3 days (n=181) or 6 days (n=184). Six days of growth resulted in a larger dominant follicle, but in both groups, ovulatory follicles had similar capacities to ovulate and establish pregnancy. In the second experiment (Chapter 4), multiple follicles were allowed to grow for 3 or 6 days by 8 or 14 injections of FSH (at 12-hour intervals). There was no difference between groups for ovulation rate or total ova/embryo recovery rate. Although the 3-day group had higher embryo quality at slaughter (4 days after insemination), further development (7, 9, and 10 days after insemination) did not differ among groups. The effect of FSH starvation following 4 days of FSH treatment (Chapter 4) resulted in loss of ovulatory capability. Overall, a shorter duration of P4 exposure during ovulatory follicle growth did not improve fertility after fixed-time AI or oocyte competence after superstimulation.

Graduation date: 1992