A Pseudomonas aeruginosa é um dos principais agentes etiológicos de infecções nosocomiais em todo o mundo. A resistência aos antimicrobianos é um problema crescente na prática clínica, particularmente, com P. aeruginosa, devido a múltiplos mecanismos de resistência intrínseca e extrínseca. Como há uma escassez de novos antibióticos para o tratamento de bacilos Gram-negativos, particularmente com ação anti-Pseudomonas, houve a necessidade de resgatar antigos antibióticos, como as polimixinas. Não existem ensaios clínicos randomizados avaliando a eficácia das polimixinas contra as bactérias multirresistentes. Estes sugerem que as polimixinas tenham eficácia aceitável, porém há limitações que impedem de chegar a uma conclusão definitiva, como a co-administração de outros antibióticos e a falta de um grupo controle. Existem alguns estudos comparativos com colistina (polimixina E) e outros antibióticos. Apenas um estudo comparou ambas polimixinas (B e E) com outros antimicrobianos para o tratamento de diversas infecções causadas por Acinetobacter baumannii. As bacteremias são infecções graves com alta mortalidade e vários estudos já demonstraram que quando são causadas por P. aeruginosa a morbi-mortalidade é bastante importante. Neste estudo comparamos a eficácia da polimixina B endovenosa com outros antibióticos para o tratamento de bacteremia por Pseudomonas aeruginosa. Um total de 255 pacientes tiveram pelo menos um episódio de bacteremia, mas apenas 133 pacientes puderam ser incluídos no estudo. Vários pacientes foram excluídos porque foram ao óbito em menos de 48 horas após a coleta das hemoculturas ou receberam menos que 48 horas de tratamento. Pode-se certamente deduzir daí a gravidade deste tipo de infecção. Este estudo é o primeiro acessando a eficácia da polimixina B contra antibióticos comparadores e o primeiro a acessar apenas infecções bacterêmicas. Os pacientes tratados com polimixina B começaram tratamento apropriado mais tarde que o grupo comparador, mas esta variável não foi estatisticamente significativa. Nós também demonstramos que a terapia com polimixina B foi associada a uma maior incidência de toxicidade renal do que os antibióticos comparados (11/45, 24,4% versus 4/88, 4,5%) assim como foi mostrado num recente estudo de coorte comparativo e sugerido em outros estudos anteriores. Nosso estudo mostrou que o tratamento da bacteremia por P. aeruginosa com polimixina B tem menor eficácia, demonstrado por apresentar maior mortalidade hospitalar, comparado com outros antibióticos, 66,7% (30/45) e 28,4% (25/88), respectivamente. O risco de mortalidade hospitalar foi quase o dobro para os pacientes tratados com polimixina B. Embora não demonstrado no nosso estudo, a optimização da dosagem da polimixina B poderia diminuir este efeito prejudicial.

A Pseudomonas aeruginosa é um dos principais agentes etiológicos de infecções nosocomiais em todo o mundo. A resistência aos antimicrobianos é um problema crescente na prática clínica, particularmente, com P. aeruginosa, devido a múltiplos mecanismos de resistência intrínseca e extrínseca. Como há uma escassez de novos antibióticos para o tratamento de bacilos Gram-negativos, particularmente com ação anti-Pseudomonas, houve a necessidade de resgatar antigos antibióticos, como as polimixinas. Não existem ensaios clínicos randomizados avaliando a eficácia das polimixinas contra as bactérias multirresistentes. Estes sugerem que as polimixinas tenham eficácia aceitável, porém há limitações que impedem de chegar a uma conclusão definitiva, como a co-administração de outros antibióticos e a falta de um grupo controle. Existem alguns estudos comparativos com colistina (polimixina E) e outros antibióticos. Apenas um estudo comparou ambas polimixinas (B e E) com outros antimicrobianos para o tratamento de diversas infecções causadas por Acinetobacter baumannii. As bacteremias são infecções graves com alta mortalidade e vários estudos já demonstraram que quando são causadas por P. aeruginosa a morbi-mortalidade é bastante importante. Neste estudo comparamos a eficácia da polimixina B endovenosa com outros antibióticos para o tratamento de bacteremia por Pseudomonas aeruginosa. Um total de 255 pacientes tiveram pelo menos um episódio de bacteremia, mas apenas 133 pacientes puderam ser incluídos no estudo. Vários pacientes foram excluídos porque foram ao óbito em menos de 48 horas após a coleta das hemoculturas ou receberam menos que 48 horas de tratamento. Pode-se certamente deduzir daí a gravidade deste tipo de infecção. Este estudo é o primeiro acessando a eficácia da polimixina B contra antibióticos comparadores e o primeiro a acessar apenas infecções bacterêmicas. Os pacientes tratados com polimixina B começaram tratamento apropriado mais tarde que o grupo comparador, mas esta variável não foi estatisticamente significativa. Nós também demonstramos que a terapia com polimixina B foi associada a uma maior incidência de toxicidade renal do que os antibióticos comparados (11/45, 24,4% versus 4/88, 4,5%) assim como foi mostrado num recente estudo de coorte comparativo e sugerido em outros estudos anteriores. Nosso estudo mostrou que o tratamento da bacteremia por P. aeruginosa com polimixina B tem menor eficácia, demonstrado por apresentar maior mortalidade hospitalar, comparado com outros antibióticos, 66,7% (30/45) e 28,4% (25/88), respectivamente. O risco de mortalidade hospitalar foi quase o dobro para os pacientes tratados com polimixina B. Embora não demonstrado no nosso estudo, a optimização da dosagem da polimixina B poderia diminuir este efeito prejudicial.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4541_1.pdf: 1634859 bytes, checksum: 084e0fc19f5cc0adbde17872b16d532d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os biosurfactantes possuem diversas vantagens em relação aos surfactantes sintéticos, tais como: baixa toxicidade, biodegradabilidade, grande diversidade química e estrutural. Este estudo objetivou: 1) Isolar bactérias do gênero Pseudomonas de efluente agroindustrial; 2) Detectar a produção in vitro do biosurfactante ramnolipídico; 3) Verificar a utilização de óleo de milho na produção de biosurfactante em cultura líquida e 4) Caracterizar parcialmente o biosurfactante produzido sobre óleo de milho por cromatografia de camada delgada (CCD). Três bactérias do gênero Pseudomonas foram isoladas do efluente proveniente da lavagem de cana de açúcar da S.A. Usina Coruripe Açúcar e Álcool (Estado de Alagoas) e identificadas em nível de espécie, utilizando o kit API20E (BioMérieux, France), como sendo P. aeruginosa, P. putida e P. fluorescens. O meio de Siegmund & Wagner (SW) foi usado para caracterizar as linhagens produtoras de ramnolipídios sendo a produção deste biosurfactante in vitro evidenciada apenas para a espécie de P. aeruginosa. A produção de ramnolipídio em meio liquido pelo isolado de P. aeruginosa, tendo como fonte de carbono 1 % de óleo de milho, revelou uma maior concentração (200,58 mg/L) com 120 h de incubação, durante a fase estacionária, embora nenhuma alteração acentuada do pH tenha sido verificada. O biosurfactante foi também caracterizado por meio de técnicas de cromatografia de camada delgada, o qual foi possível ser detectado e cujos valores de Rf foram semelhantes a aqueles descritos na literatura para as diferentes formas estruturais de ramnolipídios

Orientador: Ranulfo Monte Alegre / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-28T14:47:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sampaio_RomildoMartins_D.pdf: 3919745 bytes, checksum: 716e0ca6a5f49638e524df0464557d83 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: O presente trabalho trata do estudo da produção de vitamina B12, consistindo das seguintes etapas: seleção do melhor microrganismo produtor; seleção da melhor fonte de substrato, e do meia de cultura, avaliação, modelagem e otimização, das variáveis experimentais e fermentação em reator de bancada, para a obtenção das condições de operação e parâmetros cinéticos que influenciam no rendimento de produção da vitamina. A primeira fase consistiu da seleção do melhor microrganismo produtor a ser utilizado, nos estudos posteriores. Partiu-se das seguintes culturas tidas como boas produtoras de B12: Propionibacterium jensenii DSM 20274, Propionibacterium freudenreichii ATCC 9614, Propionibacterium shermanii ATCC 62Q1, Pseudomonas sp. ATCC 13867 e mais três mutantes isolados. Aqui como nas duas próximas etapas, os ensaios, foram realizados em frascos agitados, com base nos resultados, obtidos, decidiu-se pela seleção do mutante Pseudomonas P3, que chegou a uma produção máxima de 3,86 mg B12/1. A escolha da melhor fonte de substrato e do meio de cultura com composição mais indicada ocorreu paralelamente à escolha do microrganismo. Foram testadas lactose e sacarose e mais três composições de meio: meio 1, meio 2, e meio 3. A sacarose e o meio 1, associados ao mutante selecionado, proporcionaram os melhores rendimentos de B12, produção de biomassa e consumo de substrato. As culturas de. Propionibacterium mostraram maior um maior consumo de lactose do que as Pseudomonas. Na terceira etapa, estudou-se a influência de sete variáveis experimentais, previamente pesquisadas e selecionadas, na produção de B12. Foram elas: idade do inoculo, tempo de fermentação, temperatura, pH, concentração de substrato, de 5,6 DMI e de cobalto. Até a etapa de otimização, foram efetuados um planejamento fracionário, dois planejamentos com composto central e um caminho de ascendência máxima. As variáveis com seus respectivos níveis otimizados, que mais influenciaram a resposta, foram: concentração de 5,6 DMI (98,8 mg/l), temperatura (34,6 °C) e pH (7,14). O planejamento experimental permitiu um aumento de quase. 100% na produção de vitamina, alcançando um máximo de 7,57 mg BI2/1. Os ensaios no fermentador de bancada objetivaram verificar a influência do tempo de adição de 5,6 DMI, KLa e controle de pH no rendimento da vitamina. Concluiu-se que o tempo, ótima de adição, do precursor e a nível de Kls mais, indicado, foram respectivamente, 48 h e 36,8 h-1. Por outro lado, percebeu-se que o controle do pH não melhorou, a produção de vitamina nem aumentou, a velocidade de crescimento do microrganismo / Abstract: The present deals with the study of the production of vitamin B12, consisting of the following stages: selection of the best producing microorganism, selection of the best substrate, source, and the more, suitable medium of culture; evaluation, modeling and optimization of the experimental variables and; fermentation in a bench-fermentor for the obtaining of the operation, conditions and. kinetic parameters that, influence, the yield of the vitamin. The first phase consisted of the selection of the best producer microorganism to be used during the work. The following strains were used: Propionibacterium freudenreichii AICC 9614, Propiombacleruan jensenii. DSM 20274, Propianibacterium shermanii ATCC 6207, Pseudomonas sp. ATCC 13867 and more three mutants isolated. Here as in o stages, the experiments were, conducted in shake-flasks Based on the obtained results, the mutant Pseudomonas P3 was selected, producing a maximum of 3.86 mg BJ2/L. The selection of the best, substrate source, and medium composition was done parallelly to the microorganism selection. Were tested sucrose, lactose and three compositions of medium: medium 1 medium 2 and medium 3. The sucrose and medium 1, associated to the mutant P. P3, provided the best yields of B12, biomass production and substrate consumption. The strains of Propionibacterium showed larger ability in the lactose degradation than Pseudomonas and its mutants. In the third stage it was studied the influence of seven experimental variables in the production of vitamin B12: age of inoculum, time of fermentation, temperature, pH, substrate concentration, 5,6 Dimethylbenzimidazole (DMT> concentration and cobalt concentration. Up to the optimization step were realized a fractional factorial design, a steepest ascent path and two central composite design The most significant parameters, with respective optimized levels, were: 5,6 DMI (98.8 mg/L), temperature (34.6 °C) and pH (7-14)-. The experimental design allowed an. increase of almost 100% in. the Vitamin production, reaching a maximum of 7.57 mg B12/L. The experiments in the bench-fermentor were done to verify, the influence of the time of addition of 5,6 DMI, Kla and pH control in the yield of vitamin B12. The better time of addition and level of KLa, were respectively 48 hr and 36.8 hr-1. The control of pH did not improve the vitamin production / Doutorado / Doutor em Engenharia de Alimentos

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:59:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo372_1.pdf: 1424769 bytes, checksum: b93a14ffc416b9f2e4e209057cf11851 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A eficiência de tratamentos de biorremediação utilizando fertilizantes e um biossurfactante na redução da toxicidade de sedimento contaminado por petróleo e um derivado, ao longo do tempo, foi avaliada no presente trabalho por meio de bioensaios com o copépodo Tisbe biminiensis. O sedimento utilizado foi coletado no estuário do rio São Paulo-BA, área com histórico de contaminação por derivados de petróleo e na baía de Suape-PE. Em laboratório, os sedimentos foram acondicionados em provetas de vidro acomodadas em aquários. Para cada tratamento foram utilizados 3 aquários sujeitos à renovação de 1/3 da água a cada 12 horas. O sedimento do estuário do rio São Paulo foi homogeneizando e recebeu os fertilizantes NPK e OMOCOTE, aplicados em 3 vezes de 1,5 g em cada proveta. O sedimento de Suape foi contaminado com óleo diesel (40 g. kg-1) e recebeu biossurfactante ramnolipídeo (0,04 g. kg-1), produzido pela bactéria Pseudomonas aeruginosa. Os sedimentos contaminados por petróleo e derivado sujeitos à biorremediação foram comparados ao sedimento controle, proveniente de uma área sem contaminação. As coletas das provetas de sedimento para a avaliação ecotoxicológica foram realizadas 6 vezes durante os 90 dias do experimento com fertilizantes e 5 vezes durante os 111 dias do experimento com biossurfactante. Durante os bioensaios, cinco réplicas contendo sedimento controle, coletada em uma área livre de contaminação, foram utilizados para comparar o efeito tóxico. Os testes de toxicidade tiveram duração de 7 dias. Para cada réplica de sedimento foram utilizadas 10 fêmeas ovígeras, colocadas em recipientes-teste contendo 2g do sedimento em estudo e 20 ml de suspensão de diatomácea a uma concentração de 0,2μg Clorofila a. mL-1. A adição de alimento era realizada a cada dois dias. Ao término de cada experimento as fêmeas eram coradas com Rosa de Bengala e fixadas em formol para contagem e análise dos efeitos letais e sub-letais (sobre a prole). O sedimento coletado no estuário do Rio São Paulo, testado inicialmente após homogeneização não apresentou toxicidade letal às fêmeas de Tisbe biminiensis, porém reduziu significativamente a fecundidade total dos organismos expostos. A introdução do fertilizante NPK interferiu na sobrevivência das fêmeas nas coletas realizadas com 1 e 8 dias após o início do experimento, contudo este sinal de letalidade desaparece no decorrer do período de biorremediação com os fertilizantes. A fecundidade dos organismos aumenta gradativamente tanto nos tratamentos em que houve adição de fertilizantes quanto no tratamento sujeito apenas à atenuação natural, não havendo diferenças significativas entre tais tratamentos. O tratamento com biossurfactante apresentou efeito tóxico sub-letal na fecundidade do copépodo na primeira avaliação após a adição deste composto, aos 21 dias de experimento, possivelmente pela disponibilização do óleo, pela presença de metabólitos gerados após a degradação ou ainda pela toxicidade do biossurfactante. Este tratamento não demonstrou superioridade quanto à eficiência em relação ao sedimento sujeito apenas à atenuação natural. Desta forma, a adição de fertilizantes, bem como o uso de biossurfactante, nas concentrações utilizadas, não acelerou a redução da toxicidade dos sedimentos contaminados do estuário do rio São Paulo e da baía de Suape, respectivamente. Nestas circunstâncias, a atenuação natural dos hidrocarbonetos liberados por derivados do petróleo no sedimento resultará em uma degradação sem maiores prejuízos à biota

The biocatalytic conversion of 5-monosubstituted hydantoin derivatives to optically pure amino acids involves two reaction steps: the hydrolysis of hydantoin to N-carbamylamino acid by an hydantoinase or dihydropyrimidinase enzyme, followed by conversion of the Ncarbamylamino acid to the corresponding amino acid by an N-carbamoylase enzyme. This biocatalytic process has been successfully applied in several industrial processes for the production of enantiomerically pure amino acids used in the synthesis of pharmaceuticals, insecticides, hormones, and food additives. P. putida RU-KM3S was selected for study based on inherent high levels of hydantoinase and N-carbamoylase activity. Subsequent biocatalytic analysis of the enzyme activity within this strain revealed unique properties thus prompting further characterization. The main focus of this research was the isolation of the genes encoding the hydantoin-hydrolysing pathway in RU-KM3S. A genomic library was constructed and screened for heterologous expression of the hydantoin-hydrolysing enzymes. However, this approach was unsuccessful prompting the use of transposon mutagenesis in order to circumvent the drawbacks associated with complementation studies. The enzymes responsible for hydantoin-hydrolysis were identified by insertional inactivation as a dihydropyrimidinase and b-ureidopropionase encoded by dhp and bup respectively. A third open reading frame, encoding a putative transport protein, was identified between the dhp and bup genes and appeared to share a promoter with bup. Analysis of the amino acid sequence deduced from bup and dhp substantiated the distinctive properties and potential industrial application of the L-enantioselective b-ureidopropionase and provided targets for potential optimisation of the substrate-selectivity and activity of the dihydropyrimidinase by site directed mutagenesis. Several transposon-generated mutants with an altered phenotype for growth on minimal medium with hydantoin as the sole source of nitrogen were also isolated. Analysis of the insertion events in these mutants revealed disruptions of genes encoding key elements of the Ntr global regulatory pathway. However, inactivation of these genes had no effect on the dihydropyrimidinase and b-ureidopropionase activity levels. An additional mutant in which the gene coding for the dihydrolipoamide succinyltransferase, which is involved in the TCA cycle, was isolated with reduced levels of both dihydropyrimidinase and b-ureidopropionase activities. These results indicated that the hydantoin-hydrolysis pathway in RU-KM3S is regulated by carbon rather than nitrogen catabolite repression. This was confirmed by the reduction of hydantoin-hydrolysis in cells grown in excess carbon as opposed to nitrogen. Identification of a putative CRP-binding site within the promoter region of these enzymes further supported the regulatory role of carbon catabolite repression (CCR). As CCR in Pseudomonads is poorly understood, elucidation of the mechanism by which the hydantoinhydrolysing pathway in RU-KM3S is regulated would provide valuable insight into this complex process.

Identifica los tipos de RL contenidos en las bandas de un halo revelado en agar CTAB/MB. Desarrolla una técnica para extraer RL a partir del agar CTAB/MB implementando, además, una metodología de superficie de respuesta Box-Behnken que maximizó las separaciones entre las 4 bandas de un patrón de RL producidos por P. aeruginosa 6K-11. Identifica, mediante UPLC-MS/MS, 9 congéneres de RL en la banda 1 (RC8C10, RC10C8, RC10C10, RRC8C10, RRC10C8, RRC10C10, RRC10C12:1, RRC12C10 y RRC10C12), 7 en la banda 2 (RC8C10, RC10C8, RC10C10, RRC8C10, RRC10C8, RRC10C10 y RRC10C12:1), 4 en la banda 3 (RC10C10, RRC8C10, RRC10C8 y RRC10C10) y 3 en la banda 4 (RRC8C10, RRC10C8, RRC10C10). La estructura molecular es probablemente el factor más importante en la migración de los RL puesto que se observa que la relación de la presencia de isómeros se mantiene en las cuatro bandas. Además de existir predominancia de diRL. Concluye que la cantidad y la diversidad de tipos de RL disminuye en la migración de cada banda según su complejidad estructural (cantidad de ramnosas, isomería y masa) lo que comprueba las diferencias en cuanto a composición química y abundancia de los RL que se encuentran dentro de cada banda. / Tesis

Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al grado académico de Magíster en Bioquímica, área de especialización Toxicología y Diagnóstico Molecular y Memoria para optar al Título de Bioquímico / Las bacteriocinas son péptidos antimicrobianos de síntesis ribosomal producidos por microorganismos, principalmente del dominio bacteria. Las bacteriocinas producidas por bacterias Gram positivo o Gram negativo, presentan una actividad tóxica sobre especies bacterianas estrechamente relacionadas con la bacteria productora. Para ejercer su acción antimicrobiana las bacteriocinas utilizan receptores específicos localizados exclusivamente en la bacteria blanco, por lo tanto raramente se observa actividad citotóxica sobre células eucariontes. No obstante, algunas bacteriocinas inhiben específicamente el crecimiento de líneas celulares neoplásicas. Debido a estas propiedades, las bacteriocinas tienen una potencial aplicación biotecnológica por su posible uso como alternativa a los tratamientos con antibióticos tradicionales, o como nuevos antibióticos contra patógenos multirresistentes, como preservantes o desinfectantes en la industria alimenticia, y en el área biomédica como antineoplásicos para combatir algunos tipos de cáncer. En nuestro laboratorio encontramos un nuevo compuesto antimicrobiano del tipo bacteriocina producido por la cepa de Pseudomonas aeruginosa O400, al que hemos denominado gicina A. Este compuesto es capaz de inhibir, selectivamente, el crecimiento de bacterias Gram positivo. Debido a que no existen informes en la literatura de bacteriocinas producidas por bacterias Gram negativo que presenten actividad antimicrobiana solamente sobre bacterias Gram positivo, el estudio del mecanismo de acción y las propiedades bioquímicas de gicina A constituye un valioso aporte en la búsqueda de nuevas sustancias antimicrobianas. El objetivo general de esta tesis fue “Purificar, caracterizar bioquímicamente, y evaluar tanto el mecanismo de acción antibacteriano de gicina A, como su toxicidad in vitro sobre líneas celulares eucariontes”. Para lograr este objetivo se realizó la purificación de gicina A mediante cromatografías en columnas hidrofóbicas y HPLC. Mediante electroforesis de proteínas y espectrometría de masas se determinó que esta proteína tiene una masa molecular de 7925 Da. La evaluación de sus propiedades bioquímicas demostró que la actividad de gicina A es estable a un amplio rango de temperaturas, conserva su actividad al ser solubilizada en una amplia gama de solventes y presenta una mayor actividad al ser solubilizada a un pH neutro. Por otra parte empleado gicina A purificada se confirmó que esta posee una actividad antibacteriana selectiva por bacterias Gram positivo. Estudios de alteración de la cinética de crecimiento de la bacteria blanco y ensayos de microscopía de fluorescencia indicaron que gicina A posee un efecto bactericida sobre bacterias Gram positivo y que este efecto es producido por una permeabilización en la membrana celular. La evaluación de la citotoxicidad in vitro de gicina A sobre células eucariontes mostró que esta bacteriocina ejerce una leve toxicidad en las líneas de origen tumoral, sin embargo no se observó efecto citotóxico sobre las líneas celulares no tumorales. / Bacteriocins are antimicrobial peptides ribosomally synthesized produced by microorganisms, mainly from Bacteria domain. Bacteriocins produced by Gram positive or Gram negative bacteria, present a toxic activity on bacterial species closely related to the bacteriocin producing bacteria. To exert its antimicrobial action, bacteriocins use specific receptors exclusively located in the target bacteria, therefore rarely cytotoxic activity on eukaryotic cells can be observed. However, some bacteriocins specifically inhibit growth of neoplastic cell lines. Because of these properties, bacteriocins have a potential for biotechnological application for its possible use as an alternative to the traditional antibiotic treatments, or as new antibiotics against multi-resistant pathogens, also as preservatives or disinfectants in food industry, and in biomedical field as antineoplastics. In our laboratory we have found a new antibacterial compound with bacteriocin properties produced by the Pseudomonas aeruginosa O400 strain, which we called gicin A. This compound is able to selectively inhibit the growth of Gram positive bacteria. Because there are no reports in the literature of bacteriocins produced by Gram negative bacteria that have antimicrobial activity only on Gram-positive bacteria, the study of the mechanism of action and biochemical properties of gicin A is a very valuable contribution to the search of new antimicrobial substances. The overall aim of this thesis was to “Purify, characterize biochemically, and assess both the antibacterial action mechanism of gicin A, and its in vitro toxicity on eukaryotic cell lines”. To achieve this objective the purification of gicin A was performed by a hydrophobic column chromatography and HPLC. Protein electrophoresis and mass spectrometry determined that this protein has a molecular mass of 7925 Da. The evaluation of its biochemical properties showed that the activity of gicin A is stable at a wide temperature range, it retains its activity when is solubilized in a wide range of solvents and has a higher activity when is solubilized at a neutral pH. Moreover, employing purified gicin A was confirmed that it has a selective antibacterial activity against Gram positive bacteria. Alteration studies of the growth kinetics of the target bacteria and fluorescence microscopy indicated that gicin A has a bactericidal effect on Gram positive bacteria and that this effect is produced by cell membrane permeabilization. The evaluation of cytotoxicity in vitro of gicin A on eukaryotic cells shows that this bacteriocin has a mild toxicity on tumoral origin cell lines, however we noticed no cytotoxic effect on non tumoral origin cell lines.

Please read the abstract in the section 00front of this document / Dissertation (MSc(Microbiology))--University of Pretoria, 2005. / Microbiology and Plant Pathology / unrestricted

Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic pathogen capable of infecting the human cornea. Such infections are difficult to treat, and are often fulminative, in that the infected eye is lost, or severely scarred. The use of alternative therapeutic agents has been necessitated by the frequent failure of conventional antibiotic therapy. Equine hyperimmune antilipopolysaccharide plasma (Anti-LPS) was obtained by the plasmapheresis of suitably immunized horses. The plasma contained 1,O- 1 ,5g/ml of LPS-precipitible IgG antibodies. Topical administration of Anti-LPS as a lavage was shown to be effective against Pseudomonas keratitis in rabbits and guinea pigs. Subsequent use of topical corticosteroids was found to further reduce corneal pathology. The improvement noted in these experimental infections involved all three parameters measured, area of keratitis, depth of lesion, and degree of vascularization. In vitro , Anti-LPS was shown to be rapidly bactericidal for Gram negative bacteria. The plasma can therefore be said to have a dual mechanism of action: antitoxic, and antibacterial. Ocular administration of Anti-LPS, by both the topical and subconjunctival routes, was well tolerated by both rabbits and baboons. In conclusion, Anti-LPS is a potentially useful immunotherapeutic agent with many applications in both veteriary and human medicine, particularly in the treatment of surface infections involving antibiotic-resistant Gram negative bacteria / KMBT_363 / Adobe Acrobat 9.53 Paper Capture Plug-in