En una primera parte de la Tesis se ha conseguido establecer la validez de los radicales 1-carbamoildiclorometilo para reaccionar con cualquier tipo de alquenos (empobrecidos, enriquecidos y no activados). De esta forma se ha desarrollado una nueva metodología para la síntesis de 2-azabiciclo(3.3.1)nonanos. La aplicación de esta a la síntesis de productos naturales ha permitido la preparación de los alcaloides Melinonina-E y Estriono-xantina, para los cuales no había precedente de síntesis.Por otro lado, gracias al uso de ésteres de selenio como precursores radicalarios se ha desarrollado un nuevo método de generación de 1-aminorradicales, lo que ha permitido la síntesis de 6-azabiciclo (3.2.1)octanos.Además, se ha establecido una nueva estrategia para descarboxilación de alfa-aminoácidos y derivados.

Durante la realización de la presente Tesis Doctoral se ha establecido que el método más eficiente para la síntesis de la (4ªS,5R)-4a,5-dimetil-4,4a,5,6,7,8-hexahidronaftalen-2(3H)-ona (-)-3 desarrollado hasta el presente consiste en la doble alquilación de la (R)-3-metilciclohexanona para generar un precursor de la lactona de enol bicíclica de Piers. La apertura de la misma por reacción con el derivado lítico del metilfosfonato de dimetilo y subsiguiente reacción de Wadsworth-Emmons intramolecular rinde la enona (-)-3 de manera satisfactoria. Por contra, para el acceso al enantiómero (+)-3, el método más eficiente consiste en la preparación de la cetona de Wieland-Miescher y la transformación del grupo carbonilo aislado en un grupo metilo mediante un proceso de integración diastereoselectivo.Se ha establecido la configuración relativa del C13 y la configuración absoluta del diterpenoide (+)-nakamurol A, mediante síntesis total del (-)-nakamurol A. La identificación de los datos de RMN (1H y 13C) comparando los descritos para el producto natural y el sintetizado así como la medida del poder rotatorio del producto sintetizado permiten elucidar en base al proceso de síntesis la configuración absoluta del producto natural. Se ha determinado de forma inequívoca la configuración del C13 mediante un proceso de síntesis enantioespecífico que tiene como etapa clave una epoxidación asimétrica de Sharpless. La configuración queda establecida no sólo en base de la esperada selectividad en base al reactivo empleado, sino también por análisis pormenorizado de los datos de RMN. La primera síntesis total del nakamurol A, consta de 20 etapas. También se ha establecido un ruta más corta (16 etapas) pero que carece de estereoselectividad en la formación del centro estereogénico en C13.Se ha establecido la configuración absoluta del sesquiterpenoide xilarenal A mediante síntesis total y comprobación de la identidad en los datos de RMN y poder rotatorio entre los registrados a partir de la muestra sintetizada y los descritos para el producto natural. Se ha establecido la estereoselectividad en las reacciones de gamma-oxidación y alfa'-alquilación en el compuesto bicíclico intermedio 3.ENGLISH ABSTRACT / This PhD was initially directed to establishing an efficient method for the synthesis of enantiomerically pure (4aS,5R)-hexahydro-4a,5-dimethyl-2(3H)-naphthalenone (-)-3. The synthesis was started from (R)-3-methylcyclohexanone and involved the preparation of the Piers enol lactone in enantiopure form as the key intermediate. Treatment of this lactone with lithium salt of dimethyl methylphosphonate gave the bicyclic enone (-)-3. Alternatively, enantiomerically pure (+)-3 was prepared using the Wieland-Miescher ketone as the starting material. The transformation of the isolated ketone to the methyl group was carried out in a diasterioselective manner.The total synthesis of the enantiomer of the marine sponge diterpenoid Nakamurol A and determination of the absolute configuration of this natural product are reported. This first synthetic entry to thelepogane-type diterpenoids involves the use of the bicyclic enone (-)-3, which after a tandem difunctionalization process and elongation of the side chain leads to the formation of an advanced intermediate incorporating a methylketone. From the latter, two approaches to ent-Nakamurol A are reported: the straightforward but nonselective way, by reaction with vinylmagnesium bromide, and a longer but stereocontrolled route, through the primary allylic alcohol, which is submitted to a Sharpless epoxidation followed by a tellurium-promoted reductive-epoxide ring-opening cascade reaction.The total synthesis of the sesquiterpenoid Xylarenal A is reported. This first synthetic entry to this eremophylan terpenoid with an exocyclic vinyl aldehyde unit involves the use of the bicyclic enone (+)-3, with after an '-alpha alkylation and a gamma-oxidation leads to the formation of a new bicyclic ketone. From the latter, sequential acylation, ozonolysis of the allyl side chain and alpha-methylenation of the resulting aldehyde gives Xylarenal A.

Las lepadinas son alcaloides de origen marino de interesantes propiedades farmacológicas aislados entre 1991 y 2002 de los ascidios tunicados "Clavelina lepadiformis", "Didemnum" y "Aplidium Tabascum". Su estructura se caracteriza por contener un esqueleto cis-decahidroquinolínico trisustituido con un grupo metilo en C-2, un grupo hidroxilo libre o esterificado en C-3 y una cadena lateral en C-5.En la presente Tesis Doctoral se han estudiado tres estrategias sintéticas diferentes para la síntesis de cis-decahidroquinolinas enantiopuras, que pudiesen ser utilizadas como intermedios avanzados en la síntesis de lepadinas:- Aminociclaciones de 3-aminociclohexenonas- Reacciones de expansión de ciclo en octahidroindoles - Aminociclaciones de 4-(3-aminoalquil)dihidroanisoles Con estas metodologías se han aislado y caracterizado dieciocho nuevas cis-decahidroquinolinas, algunas de ellas plausibles intermedios para el acceso a las lepadinas. En la primera aproximación se han obtenido decahidroquinolinas 2-metil, 3-hidroxi, 5-butil trisustituidas enantiopuras a partir de 2-(3-aminoalquil)ciclohexenonas, a través de un proceso one-pot de reducción del doble enlace de la enona, doble desbenzilación de la función amina terciaria y aminociclación reductiva intramolecular. Si bien la estereoquímica obtenida no es la adecuada para la síntesis de lepadinas la metodología desarrollada puede ser aplicable a la síntesis de otros alcaloides tales como trans-195A o 5-epi-trans-243A y alcaloides relacionados aislados de la piel de anfibios. Para la obtención de las ciclohexenonas precursoras de la aminociclación se llevó a cabo la adición del derivado lítico del acetal de la 2-bromociclohexenona sobre los epóxidos (1S) y (1R)-[1'(S)-(Dibenzilamino)etil]oxirano en presencia de trifluoruro de boro eterado, obteniendo los productos deseados con buenos rendimientos. No se hallaba descrito en la literatura el ataque de derivados líticos sobre este tipo de epóxidos, de manera que estos resultados constituyen un nuevo procedimiento de obtención de alfa-alquil, beta-aminoalcoholes.En la segunda aproximación se han obtenido decahidroquinolinas 3-hidroxisustituidas por expansión de ciclo de octahidroindoles 2-hidroximetilsustituidos en condiciones termodinamicas, y decahidroquinolinas 2-metil,3-hidroxidisustituidas por expansión de ciclo de octahidroindoles 2-(1-hidroxietil)sustituidos en condiciones cinéticas. La reacción de expansión de ciclo sobre octahidroindoles no se hallaba descrita previamente en la literatura. Asimismo, se ha llevado a cabo un estudio de la mayor estabilidad de los octahidroindoles explorados en este trabajo frente a las correspondientes decahidroquinolinas. Algunos de los productos obtenidos pueden aplicarse a la síntesis de las lepadinas F y G y del alcaloide pandolina.En la tercera aproximación se han obtenido decahidroquinolinas 2-metil,3-hidroxidisustituidas enantiopuras por aminociclación de 4-(3-aminoalquil)dihidroanisoles provenientes de la reducción de Birch de homotiraminas. Este tipo de reacciones solo se hallaba descrita para la obtención de decahidroquinolonas no sustituidas en su versión racémica. Para la preparación de los aminoalcoholes de partida se han llevado a cabo tres metodologías sintéticas diferentes.Los productos de ciclación obtenidos mediante esta aproximación contienen la estereoquímica y funcionalización adecuadas para ser utilizados como intermedios avanzados en las síntesis de las lepadinas A, B, C, F y G, siendos estas dos últimas las de mayor interés al ser las únicas de su família que no han sido todavía sintetizadas. / "Stereoselective synthesis of cis-decahydroquinolines. Advanced intermediates for the access to lepadin alkaloids"cis-Decahydroquinolines constitute the azabicyclic skeleton of natural products such as lepadins and several amphibian alkaloids, as well as some pharmacologically interesting synthetic compounds. Moreover, this heterocyclic motif occurs as a subunit of other azapolycyclic compounds (gephyrotoxins, cylindricines, and pseudoaspidopermidine and pandoline alkaloids). The extensive occurrence of this azabicyclic ring has stimulated the implementation of new procedures to gain acces to functionalized enantiopure cis-decahydroquinolines that can be used as advanced intermediates in the synthesis of compounds embodying this skeleton type.The development of novel procedures to gain acces to functionalized enantiopure cis-decahydroquinolines was studied in this work, with the ultimate aim of using these compounds as intermediates in the synthesis of natural products embodying this structural motif.Three general methods were explored: Route 1) Aminocyclization of 2-(3-aminoalkyl)cyclohexenones.Route 2) Ring expansion of functionalized octahydroindolesRoute 3) Birch reduction followed by aminocyclization of homotyramines.In the first study we obtained decahydroquinolines by aminocyclization of cyclohexenones, via a one-pot reduction of the double bond, double debenzylation and intramolecular reductive amination process. The required starting cyclohexenones were obtained by the coupling reaction between aryllithium derivatives and -aminoalkylepoxides in the presence of boron trifluoride etherate, constituting a new synthetic procedure to achieve enantiopure syn and anti -aminoalcohols. The developed methodology is directly applicable to the synthesis of some alkaloids such as trans-195A and 5-epi-trans-243A.In the second study we investigated the ring expansion rearrangement of octahydroindoles, a type of reaction which was unprecedented. The obtained products could be used as advanced intermediates in the synthesis of the alkaloid pandoline.Finally, in the third study we obtained stereoselectively cis-decahydroquinolines from Birch reduction of homotyramineswith a syn--aminoalcohol unit followed by acid treatment of formed dihydroanisol derivatives. The stereoselectively of the process was determined by the functionality present on the oxigenated side chain. The major product contains four stereogenic centers with the same relative configuration as that of lepadins F and G, so it can be considered as advanced intermediate for the synthesis of this natural products.

La present Tesi doctoral s'emmarca dins d'un projecte de síntesi de productes naturals azapolicíclics.En el decurs de la mateixa, s'han desenvolupat diverses metodologies per tal d'assolir la síntesi d'1-azaspiro[4.5]dec-6-en-8-ones polifuncionalitzades de forma racèmica i enantiopura. Aquests sistemes espirànics s'han sintetitzat per reacció aldòlica d'un producte provinent del trencament oxidatiu d'un 1-azaspiro[4.4]noné enantiomèricament pur o d'un producte provinent de l'alquilació d'una prolina modificada. Alternativament també s'han assolit aquests sistemes per deshidrogenació de les corresponents cetones.La reacció més destacable en la ruta que ens ha conduit a la síntesi enantioselectiva de les d'1-azaspiro[4.5]dec-6-en-8-ones, és la reacció d'inserció d'un carbè alquilidènic a un enllaç C-H en posició 5. L'excés enantiomèric es pugué determinar per HPLC quiral. A partir d'aquestst sistemes d'1-azaspiro[4.5]decà amb els dos metilens veïns al carbonil diferenciats per la presència d'un doble enllaç, s'ha estudiat la seva utilitat sintètica en la preparació dels sistemes azatricíclics de l'FR901483 de manera enantio i regioselectiva. Tots els intents per a assolir el tancament de l'anell piperidínic de l'FR901483 utilitzant substrats aminats resultaren infructuosos llevat del que implica l'acoblament d'halurs de vinil sobre enolats de cetona catalitzada per pal·ladi malgrat aquesta no fou quimioselectiva ni conseqüentment regioselectiva. La raó de la dificultat en aquest procés probablement resideix en la dificultat de generar espècies electrofíliques en la posició  d'amines, per la seva inestabilitat a causa de la participació del nitrogen en processos col·laterals ja sigui de desalquilació, formació d'aziridines, descarbonilacions, etc. A les reaccions que impliquen l'ús d'una amida encara que aquestes no presenten el problema d'inestabilitat, apareix el problema dels possibles rotàmers que junt amb la conformació inicial que potser no adequada per experimentar un procés de ciclació malbarata els intents d'accés al sistema azatricíclic de l'FR901483. Solament la ciclació radicalària de tricloroacetamides com a proradicals utilitzant sililenolèters com a acceptors radicalaris permeté l'aïllament de compostos amb el nucli azatricíclic de l'FR901483, encara que el seu baix rendiment inhabilità el seu ús en el procés de síntesi total.Per altra banda, ens hem plantejat l'accés al nucli azatricíclic de les cilindricines que també contenen el sistema d'1-azaspiro[4.5]decà de referència sintetitzant en primera instància el sistema de decahidroquinolina fusionada en cis i posteriorment el sistema espirànic comentat.En aquest sentit, s'ha implantat una nova metodologia sintètica succinta i versàtil per a la preparació de decahidroquinolines i octahidroindoles funcionalitzats basada en la iodoaminociclació de bishomoal·lilamines. La reacción de 2-al·lil-N-benzilciclohexilamines amb NIS permet l'accés a 3-iododecahidroquinolines que per tractament amb alúmina condueixen a 3-hidroxidecahidroquinolines i/o 2-hidroximetiloctahidroindoles amb retenció de la configuració. S'observà que les 3-iododecahidroquinolines, obtingudes per iodoaminociclació de 2-al.lil-N-benzilciclohexilamines tenen una reactivitat diferent segons presenten una fusió cis o trans. Així, els derivats cis endo al tractar-los amb Al2O3 formen fàcilment sals d'aziridini que en un procés de control cinètic proporcionen octahidroindoles en un procés de contracció anular. Els derivats trans també formen sals d'aziridini, però en aquestes estructures el bescanvi del iode per hidroxil transcorre mantenint-se l'estructura de decahidroquinolina i la conseqüent retenció de la configuració relativa. En condicions de control termodinàmic, l'obertura de les sals d'aziridini provenint de cis-decahidroquinolines canvia de regioselectivitat i dóna lloc a cis-decahidroquinolines amb bescanvi funcional.Aquesta estratègia desenvolupada a l'última part de la tesi, obre una nova ruta sintètica per accedir als sistemes tricíclics de les ciclindricines i la fasicularina a través de les decahidroquinolines corresponents. / The present thesis was realized as a part of a framework directed to the synthesis of azapolicyclic natural products, namely the immunosupressant FR901483 and the marine alkaloids cylindricines.During its development, we succesfully studied several methodologies to achieve the syntheses of polifunctionalized racemic and enantiopure 1-azaspiro[4.5]dec-6-en-8-ones. Afterwards, we studied the utility of these advanced intermediates in the synthesis of the azatricyclic system present in the immunosupressant FR901483 or in the one embodying cylindricines' skeleton. The most considerable results were obtained with the palladium catalized reaction of vinyl halides over ketone enolate. Also, radical reaction of trichloroacetamides as proradicals on sylylenolethers as radical acceptors was significant.In the last part, a new versatile and brief methodology on the iodoaminocyclation of bishomolylamines for the preparation of decahydroquinolines and octahydroindoles was achieved. The reaction of 2-allyl-N-benzylcyclohexilamines with NIS makes possible an entry to 3-iododecahydroquinolines which on treatment with alumina lead to 3-hydroxydecahydroquinolines and/or 2-hydroxymethyloctahydroindoles with retention of the configuration.This strategy opens a new synthetic route to the tricyclic system of fasicularin and cylindricines via the corresponding decahydroquinolines.

DE LA TESIS:La investigación fitoquímica presenta un interés indiscutible, tanto por su aplicación al establecimiento de relaciones quimiotaxonómicas en el reino vegetal, como por conducir al descubrimiento de nuevas substancias de posible utilidad. Es con este doble criterio que se ha emprendido el presente trabajo sobre el género "Salvia" L.Éste reúne dos características que han suscitado nuestro interés: Por una parte, es un grupo biológico complejo, en el cual, un mayor conocimiento de los caracteres químicos puede ser de gran utilidad para la delimitación de su estructura sistemática. Por otra parte, muchas de las especies que lo componen presentan interés medicinal reconocido desde la antigüedad, a lo que debe su nombre.Se ha tenido en cuenta, también, que las plantas de este género han sido ampliamente estudiadas en lo que se refiere a la composición de sus esencias. No así en lo que respecta a sus componentes polifenólicos y, particularmente, flavónicos, que constituyen uno de los principales caracteres de aplicación quimiotaxonómica, como se ha puesto de manifiesto en diversos trabajos sobre los géneros Thymus L. [MARTÍNEZ-VERGÉS, 1980] y Euphorbia L. [CAMARASA, 1981], realizados en nuestro Laboratorio.No hemos pretendido obtener grandes conclusiones quimiotaxonómicas, sino aportar una serie de resultados fitoquímicos. Los acompañamos de los comentarios que éstos nos sugieren a nivel quimiotaxonómico para que el botánico, con una visión más global de los caracteres a considerar en la sistematización del género, pueda utilizarlos con esta finalidad.Como en casi todo trabajo experimental, los resultados obtenidos dan respuesta a una serie de cuestiones; pero se abren otros interrogantes que posibilitan nuevas vías de investigación, convirtiéndolo más en una plataforma de partida que en un punto final.Al plantearnos un estudio cromatográfico comparativo, el primer problema a resolver fue la obtención de las substancias a utilizar como patrón. Para ello, se creyó conveniente aislarlas a partir de tres especies: dos de ellas taxonómicamente relacionadas y una tercera alejada de las primeras. En este sentido, las especies elegidas fueron "Salvia lavandulifolia" Vahl y "Salvia candelabrum" Boiss., pertenecientes a la sección "Eusphace" Bentham, y "Salvia verbenaza" L., incluida en la sección "Plethiosphace" Bentham, cuyos aglicones flavónicos fueron ya objeto de investigación en nuestra Tesina de Licenciatura [CAÑIGUERAL, 1982; CAMARASA et al., 1982].En la presente memoria se expone, después de unas breves consideraciones botánicas sobre los táxones estudiados (capítulo II), el proceso de obtención y tratamiento de las muestras de dichos táxones (capítulo III). Seguidamente (capítulo IV), se describen la metodología experimental e instrumental utilizados en el análisis, aislamiento e identificación de sus polifenoles.Los tres capítulos siguientes constituyen la parte experimental, donde se han investigado con más profundidad "S. lavandulifolia" Vahl subsp. "lavandulifolia" (capítulo V) y "S. candelabrum" Boiss. (capítulo VI). En el capítulo VII se describe el análisis comparativo de los polifenoles de diversos táxones de Salvia L.Los resultados se discuten en el capítulo VIII, donde, atendiendo además a los aportados por otros autores, se efectúan una serie de consideraciones acerca de las características flavónicas del género.Las conclusiones y bibliografía ocupan, respectivamente, los capítulos IX y X.

1) INTRODUCCIÓNLas benzodiacepinas son unos fármacos ampliamente usados en nuestros días para el tratamiento clínico de síntomas relacionados con la ansiedad, pero estos fármacos producen por otro lados efectos miorrelajantes, anticonvulsivantes e hipnóticos. Las benzodiacepinas median estos efectos a través del receptor benzodiacepínico central el cual está unido a receptor del GABA y del ionóforo del cloro.Aunque estos efectos farmacológicos están mediados a través del receptor benzodiacepínico central (Costa y col, 1979), existe otra clase de lugares de unión a las benzodiacepinas cuyo mecanismo de acción es menos claro. Estos lugares de unión se encuentran localizados tanto a nivel de tejidos periféricos (Baestrup and Squires, 1977) y en el cerebro, concretamente a nivel de la glia (Awad and Gavish, 1987, 1989). A este lugar de unión se le denomina receptor benzodiacepínico periférico, existiendo ligandos específicos para este lugar como son el Ro 5-4864 (que presenta una estructura de tipo benzodiacepínica y se diferencia del diazepam, que presenta una elevada afinidad por el receptor benzodiacepínico central, por la presencia de un cloro en posición 4') y el PK 11195 que presenta una estructura de isoquinoleínico.Los objetivos del presente trabajo han consistido en llevar a cabo un estudio a nivel molecular para la caracterización del receptor benzodiacepínico periférico en tracto genital de rata. Asimismo, se ha realizado un estudio para demostrar una posible interacción entre este receptor con el receptor de la testosterona y con el receptor mitocondrial de las dihidropiridinas de alta capacidad y baja afinidad. También hemos considerado de interés ver el papel que puede desempeñar el ligano endógeno propuesto para este receptor, la protoporfirina IX.Se planteó la necesidad de realizar estudios con tejido humano y más concretamente en próstata humana, debido al posible interés de este receptor como marcador de neoplasias. En el presente trabajo se ha realizado un estudio para demostrar la existencia de un transporte de la adenosina a nivel mitocondrial y el papel que desempeñan las benzodiacepinas a nivel periférico inhibiendo dicho transporte. 2) METODOLOGÍALos tejidos de roedores se han obtenido a partir de ratas Sprage-Dawley macho adultas de 250-275 gramos ce peso (C.E.R.J., Le Genest, Francia). Los animales fueron estabulados en condiciones estándar de temperatura y mantenidos en un ciclo de oscuridad de 12 horas. Los animales se sacrificaron y los tejidos se homogeneizaron con un Polytron. El extracto crudo mitocondrial se obtuvo por doble centrifugación a 3000 rpm durante 10 min a 4ºC. El sobrenadante obtenido en este proceso se centrifugó a 8000 rpm durante 10 min. Para cuantificar el contenido proteico del "pellet" obtenido se utilizó el método de Bradford, que se fundamenta en la utilización de un colorante Coomasie Brillant Blue G-250 que se une a la proteína al cabo de 2 min., formándose un complejo que se lee al espectrofotómetro a 595 nm.Los estudios de Binding se realizaron usando [(3)H]-Ro 5-4864 y [(3)H]-PK 11195. El volumen del ensayo fue de 0.250 ml incluyendo 0.125 de la preparación mitocondrial. Las muestras fueron incubadas entre 0-4ºC durante 60 min. La incubación se terminó por filtración con ayuda del vacío a través de filtros Whatman GF/B que habían sido tratados previamente con polietilenenimna. Los filtros se colocaron son viales de centelleo y se añadió "cockteil" de centelleo, determinándose la radioactividad retenida en los filtros al cabo de 24 horas.Para les estudios de transporte [(3)H] adenosina se utilizó testículo de rata realizándose los estudios a los 5 min.3) RESULTADOSLos estudios realizados en tejido de trata muestran la existencia de un lugar de unión de elevada afinidad tanto para el Ro 5-4864 en vesícula seminal, próstata y conducto deferente como para el PK 11195 en próstata de rata. En tejido de próstata humana se observa una disminución muy patente en la afinidad del Ro 5-4864 mientras que el PK 11195 continua teniendo en humanos una afinidiad dentro de un orden nanomolar. Los estudios cinéticos vienen a confirmar la elevada afinidad del PK 11195. Estos resultados confirman que en la especie humana el receptor benzodiacepínico periférico se aleja de una estructura relacionada con la molécula benzodiacepínica para reconocer de manera selectiva una estructura de tipo isoquinoleínico.Se ha realizado un estudio comparativo entre tejido prostático de rata y humano y dentro del tejido humano se han comparado muestras control con muestras de adenoma de próstata. Se ha comprobado una mayor población de receptores benzodiacepínicos periféricos en tejido humano respecto a roedores y no se encuentran diferencias significativas entre tejido de adenoma de próstata y control, con lo cual el papel del receptor benzodiacepínico periférico como marcador de neoplasias queda en entredicho. Los estudios de competición demuestran que el PK 11195 presenta una afinidad de orden nanomolar en tejido de rata y humano, mientras que el Ro 5-4864 presenta una elevada afinidad en roedores. Se demuestra una interacción de tipo no competitivo entre los inhibidores del "carrier" ADP/ATP y el receptor benzodiacepínico periférico. Los compuestos que actúan inhibiendo el transporte de la adenosina desplazan con una afinidad dentro del orden micromolar la unión del Ro 5-4864 y del PK 11195. La protoporfirina IX presenta una afinidad dentro del orden micromolar para el receptor benzodiacepínico periférico en roedores. Se demuestra que este efecto no se realiza a través del receptor benzodiacepínico periférico. / The clinical use of benzodiazepines is due to their specific binding to the central benzodiazepine receptor, which is linked to the GABA receptor and ion chloride channel. At present there are no clinical applications based on the interaction of drugs peripheral benzodiazepine receptor. The aim of the present study is to investigate and characterize [(3)H]-Ro 5-4864 and [(3)H]-PK 11195 binding sites in rat and humans. PK 11195 had higher affinity by the peripheral type benzodiazepine receptor than Ro 5-4854 in human prostate. In rat the affinity was in nanomolar range for this receptor. The Ro 5-4864 binding in rat was inhibited no competivively by atractyloside and alpha, beta-methylene ATP, suggesting a modulation by the ADP/ATP mitochondrial carrier. We postulate that [(3)H]-Ro 5-4864 binding sites are regulated by purine nucleotides in a allosteric fashion, a result suggesting the involvement of these binding sites in mitochondrial metabolism, which could explain why both Ro 5-4864 and PK 11195 decrease respiratory control in isolated rat kidney mitochondria. Protoporphyrin IX the most potent endogenous ligand inhibitor of [(3)H]-PK 11195 binding (Verma and Snyder, 1989) was also able to displace [(3)H]-Ro 5-4864 binding but only a micromolar concentration range. Clonazepam, a characteristic central benzodiazepine ligand, did not displace [(3)H]-binding site. Flutamide is able to displace Ro 5-4864 and PK 11195 only a micromolar concentrations. However, the slopes of competition curves not differ from unity, we have characterized an adenosine carrier in rat mitochondria. Peripheral benzodiazepines inhibited the adenosine transporter in the micromolar range.

El objetivo principal de esta tesis es estudiar la circulación del LCR y la patología relacionada con la misma mediante una técnica de neuroimagen no invasiva.La Resonancia Magnética inicialmente permitía realizar estudios estructurales cerebrales de alta resolución, pero no estudios funcionales o dinámicos. En la actualidad se han desarrollado nuevas secuencias de RM, por ejemplo la secuencia en contraste de fase, que anulan el tejido estático a la vez que realzan las estructuras en movimiento como son la sangre y el LCR.La secuencia de RM en contraste de fase aporta dos herramientas muy útiles para el estudio del LCR: el estudio cualitativo y el estudio cuantitativo.El estudio cualitativo permite evaluar el movimiento del LCR mediante técnica de Cine RM. La secuencia en contraste de fase adquiere varias imágenes del LCR durante el ciclo cardiaco. Si estas imágenes se visualizan secuencialmente, permitirán observar el paso del LCR a través de los distintos estrechos y agujeros de los ventrículos y en el espacio subaracnoideo.Por su parte, el estudio cuantitativo permite estudiar diferentes parámetros del movimiento del LCR en un lugar determinado. Así se puede calcular la velocidad, el flujo y el volumen de líquido que circula, por ejemplo, en el acueducto.En esta tesis se han desarrollado tres líneas de estudio. El objetivo del primer protocolo de estudio es conocer el comportamiento del LCR en personas sanas a fin de poder comprender mejor la patología que se deriva. Para ello se ha estudiado un grupo de sujetos sanos de distintas edades, lo que a su vez permite conocer si se producen cambios con la edad. El movimiento del LCR relacionado con el ciclo cardiaco vira de dirección al cambiar de sístole a diástole, siempre empezando a nivel acueductal y finalizando a nivel de las cisternas basales. Las velocidades del flujo varían intersujeto mientras que el volumen de flujo es un valor más reproducible. Estas particularidades del flujo del LCR se muestran alteradas en los pacientes con estenosis de acueducto, con malformación de Arnold Chiari tipo I y con HCA.De los resultados obtenidos del primer protocolo se deduce que el estudio cualitativo del LCR es básico para realizar el diagnóstico y establecer el tratamiento en pacientes con estenosis de acueducto y en casos de malformación de Arnold Chiari tipo I, mientras que el estudio cuantitativo es importante para el diagnóstico de los pacientes con HCA. El objetivo principal del segundo protocolo de estudio es determinar la efectividad de la cuantificación del volumen de flujo en el acueducto para el diagnóstico de HCA. Cuando el volumen de flujo diastólico es superior 91 mm3 la sensibilidad y la especificidad de este test es de 82,4% y 77,8 %. Así pues se propone realizar un estudio por Resonancia Magnética en contraste de fase en todos los pacientes con sospecha de HCA y test diagnósticos más invasivos únicamente en los casos en que exista una disociación clínica radiológica.El tercer protocolo de estudio de esta tesis tiene por objetivo evaluar la utilidad de la secuencia de Resonancia Magnética en contraste de fase en el seguimiento de pacientes intervenidos de ventriculostomía premamilar endoscópica por presentar hidrocefalia. Esta técnica permite evaluar la permeabilidad de la ventriculostomía utilizando la secuencia cualitativa, pero además, mediante la cuantificación del volumen de flujo, se puede predecir el funcionamiento de la ventriculostomía premamilar. En este estudio se demuestra que cuando el volumen de flujo absoluto (volumen de flujo sistólico y diastólico) obtenido en el primer estudio posquirúrgico es superior a 75mm3, la sensibilidad del test para determinar qué enfermos mejorarán tras el tratamiento es de 76,5 %y la especificidad es del 100%.Así pues, los resultados obtenidos en esta tesis permiten demostrar que el estudio de Resonancia Magnética en contraste de fase es una herramienta no sólo útil sino también imprescindible en el estudio de pacientes con patología de circulación del LCR. / UTILITY OF MAGNETIC RESONANCE USING PHASE CONTRAST IN THE DIAGNOSIS OF CSF CIRCULATION DISORDERS.TEXT: The aim of this thesis is to know the utility of Magnetic Resonance (MR) using Phase Contrast sequences in the diagnosis of CSF circulation disorders. The CSF has a major movement from ventricular cavities and subarachnoid space to venous sinus induced by a pressure gradient between subarachnoid spaces and venous spaces. There is another type of CSF movement related to cardiac cycle. It is an in and fro type of motion. During cardiac systole the CSF have a craniocaudal movement and during cardiac diastole the direction of CSF is inverted. MR using a specific sequence denominated phase contrast allows detecting movements of fluids like CSF or blood. If the acquisition is performed triggered with cardiac movement, we can obtain a sequence of images detecting the circulation of CSF during the cardiac cycle. These images can be evaluated using cine allowing a qualitative study and also let to obtain quantifications of velocity and flow volumeTo evaluate the utility of this technique in the CSF disorders we realize tree different studies. The first study compares the flow pattern in the ventricular and subarachnoid space and the quantification of velocity and flow volume between a control group, a group with aqueductal stenosis, a group with Arnold Chiari malformation and Normal Pressure hydrocephalus (NPH) group. The results obtained demonstrated that the flow volume in the aqueduct in healthy subjects is between 20 to 80 mm3 showing an increment with age. Otherwise in patients with aqueductal stenosis and Chiari malformation, the qualitative study was very helpful in demonstrating the absence of flow in the aqueduct in the first group and the difficulty of CSF circulation in foramen magnum in the Chiari malformation. An interesting result was that in patients with NPH, the flow volume was significantly higher that the healthy subjects.The second study compare the flow volume in patients with NPH with the infusion test the Katzman used as a diagnostic tool of this syndrome. The results obtained demonstrate that the diastolic flow volume can be used as a diagnostic tool with a sensibility of 82,4% and specificity of 77,8%, using a diastolic flow volume of 91 mm3 as a threshold.The last study evaluated the MR using phase contrast in the postsurgery evaluation of patients who has undergone a premamilar endoscópica ventriculostomy (PEV). The results demonstrate that flow volume recorded in the ventriculostomy hole is an indicator of functionality of the PEV. When this value is high in the initial postsurgery exam the PEV will be open with a sensibility of 76,5 % and specificity of 100%.In conclusion: with all the results obtained in this project we conclude that MR using Phase Contrast is a essential tool to evaluate patients who suffer of CSF circulation disorders.

La hipertensión pulmonar (HP) se define por la presencia de una presión arterial pulmonar media (PAPm) mayor de 25 mmHg en reposo o de más de 30 mmHg durante el ejercicio. El pronóstico de la HP está relacionado con varios factores hemodinámicos, entre los cuales está la PAPm y la función ventricular derecha. Estas mediciones se cuantifican a través del estudio hemodinámico pulmonar que se realiza mediante cateterismo cardíaco derecho (CCD), que es la prueba de referencia pero tiene los inconvenientes de ser una técnica invasiva y no exenta de complicaciones.La evaluación precisa del ventrículo derecho (VD) en la hipertensión pulmonar es clínicamente importante y en la práctica asistencial la valoración funcional con técnicas no invasivas como la ecocardiografía o ventriculografía isotópica presenta limitaciones debido a la morfología y disposición anatómica del VD. Esto induce al estudio y desarrollo de otros métodos no invasivos para la valoración de los cambios hemodinámicos asociados a la hipertensión pulmonar.El presente estudio pretende un mayor conocimiento del comportamiento del ventrículo derecho y de las arterias pulmonares en la hipertensión pulmonar, utilizando la resonancia magnética como técnica de imagen reciente y en plena expansión en el campo de la patología cardiovascular.El presente trabajo ha valorado el comportamiento del corazón derecho en una serie de 60 sujetos. 18 pacientes con HP arterial, 17 pacientes con HP asociada a cardiopatía, 15 pacientes sin HP y 10 sujetos sanos, a través de una técnica de imagen no invasiva como la resonancia magnética y sin la necesidad de utilizar medios de contraste. Se han correlacionado los parámetros obtenidos por resonancia magnética con los resultados hemodinámicos obtenidos con la prueba de referencia que es el cateterismo cardíaco derecho y además se han evaluado los resultados en los distintos grupos del estudio.Las conclusiones son:La resonancia magnética tiene aplicabilidad clínica en la evaluación de los pacientes con hipertensión pulmonar, porque ofrece una excelente visualización del ventrículo derecho y de la arteria pulmonar que permite obtener unos parámetros - RM anatómicos y funcionales que reflejan el estado hemodinámico del ventrículo derecho.Se ha demostrado la correcta precisión de la técnica de cuantificaicón de flujo - RM mediante el diseño de un modelo experimental.La RM cuantifica el gasto cardíaco con una precisión similar al CCD mediante la técnica de flujo - RM.Los parámetros - RM del VD y de la AP se correlacionan con las mediciones hemodinámicas de PAPm y RVP. El grosor de la pared libre del VD es el parámetro que muestra una mejor correlación hemodinámica.Todos los parámetros - RM muestran diferencias significativas entre los grupos. El grupo con HPA es el que presenta las alteraciones más acusadas, lo que indicaría enfermedad más severa que condiciona un remodelamiento del VD más importante que en el grupo de HP asociada a cardiopatía.El grupo de HP asociada a cardiopatía presenta unas alteraciones más leves de los parámetros - RM y podría ser un indicador de HP en una fase pasiva o reversible, importante para el pronóstico del transplante cardíaco.

La complicació vascular més greu després del trasplantament hepàtic és la trombosi de l'artèria hepàtica. Quan aquesta complicació se sospita clínicament es realitza una ecografia Doppler amb la finalitat d'establir el diagnòstic. Tanmateix, donats els resultats de la present tesi, és possible, mitjançant l'ecografia Doppler, establir el diagnòstic de trombosi de l'artèria hepàtica abans que apareixi la sospita clínica. Aquest fet augmenta les probabilitats de revascularitzar amb èxit l'artèria hepàtica i millora significativament el pronòstic dels pacients tractats, reduint la morbimortalitat i la taxa de retrasplantaments. Per poder realitzar el diagnòstic en fases pre-clíniques és necessari establir un protocol que inclogui la pràctica d'ecografies Doppler de rutina, almenys durant les primeres 72 hores posteriors al trasplantament. Tanmateix, la interpretació del registre Doppler arterial en aquest periode és complexa ja que amb freqüència existeix una elevació transitòria de les resistències hepàtiques que contribueixen a alterar l'ona Doppler. Segons els resultats obtinguts en el present treball d'investigació, aquesta elevació de les resistències post-trasplantament estan en relació amb l'edat avançada del donant i amb l'antecedent d'un temps d'isquèmia prolongat; sense que això tingui valor pronòstic, ja que no implica repercussió clínica precoç ni tampoc a llarg plaç.Per altra banda, ha quedat demostrat que el contrast ecogràfic d'última generació (SonoVue®) és de gran utilitat en l'estudi de permeabilitat de l'artèria hepàtica en el periode immediat posterior al trasplantament, ja que augmenta la sensibilitat de l'ecografia Doppler, escurça la duració de l'exploració ecogràfica i disminueix el nombre d'arteriografies diagnòstiques necessàries. A més, permet establir el diagnòstic de sospita de la síndrome de robatori de l'artèria esplènica mitjançant ecografia ja que permet constatar els criteris angiogràfics descrits pel diagnòstic d'aquesta complicació. Les troballes ecogràfiques que permetrien sospitar una síndrome de robatori serien la presència d'una artèria hepàtica permeable amb fluxe molt escàs constituït per petits pics sistòlics (de vegades indetectable a l'estudi Doppler sense contrast), ompliment simultani de l'artèria hepàtica i la vena porta a l'estudi contrastat i disminució mantinguda de la perfusió de les branques distals de l'artèria hepàtica. / "DOPPLER SONOGRAPHY OF THE HEPATIC ARTERY IN THE IMMEDIATE POST-TRASPLANT PERIOD"TEXT:Hepatic artery thrombosis is one of the most important and devastating complications following orthotopic liver transplantation. Doppler ultrasonography is the initial imaging test in patients in whom hepatic artery thrombosis is suspected. However, according to the results of this doctoral thesis, Doppler ultrasound may allow a presymptomatic detection of early hepatic artery thrombosis. This fact permits an early repermeabilization of the hepatic artery before liver damage, reducing the morbidity and the necessity of retransplantation, improving the prognosis of these patients. In order to allow a prompt diagnosis of this complication in presymptomatic stage it is necessary to establish a surveillance Doppler program which includes at least a routine Doppler sonography in the first 72-hours after liver transplantation. However, the interpretation of the Doppler arterial waveform in this early period is difficult, because of the frequent high resistance flow which contributes to alter the Doppler waveform. The results obtained in the present investigation work show that the increase of the arterial resistances immediately after liver transplantation are in relation with the old-age liver donor and a long ischemic time. However, this is a finding without clinical repercussion at early and long-term follow-up.Contrast-enhanced ultrasound using a second generation contrast agent (SonoVue®) is very useful in the study of the hepatic artery permeability in the immediate post-operative period because it improves significantly the flow visualization in hepatic artery, decreases scanning time and reduces the frequency of arteriographics studies. Moreover, microbubble ultrasound contrast helps to establish the diagnosis of the splenic arterial steal syndrome. The sonographic findings that point to the diagnosis of this syndrome are the presence of a patent hepatic artery with slowly flow constituted by low velocity systolic peaks (sometimes only detectable after contrast injection), simultaneous filling contrast of the hepatic artery and the portal vein and diminished perfusion of the distal hepatic arteries.

Centella asiatica es una planta medicinal usada fundamentalmente para el tratamiento de afecciones de la piel como la cicatrización de heridas, tratamiento de la dermatitis o celulitis, etc. Problemas de índole geopolíticos y alteraciones en su hábitat han provocado un desabastecimiento del mercado de esta planta. Por todo ello, es necesario el desarrollo de procesos alternativos como los sistemas biotecnológicos, para conseguir la producción in vitro de centellósidos. En esta tesis se ha desarrollado inicialmente un sistema de micropropagación vegetal de C. asiatica mediante semillas artificiales, para lograr una fuente de material vegetal in vitro para la obtención de callo y posteriormente de suspensiones celulares. Los resultados han demostrado que no se requiere el desarrollo de estructuras organizadas de los cultivos de C. asiatica, para lograr la síntesis de centellósidos, sus principales compuestos bioactivos. También se ha progresado en el estudio de la biosíntesis de los centellósidos y de los fitoesteroles, ya que ambos tipos de compuestos presentan una parte de la ruta biosintética común. Los resultados obtenidos han permitido demostrar, la acción específica del elicitor jasmonato de metilo en la regulación de ambas vías metabólicas, demostrando que existe una relación dosis-dependiente entre la concentración del elicitor y la producción de centellósidos. Todo ello, puede contribuir a un mejor conocimiento de la biosíntesis de triterpenoides en plantas y del papel regulador de los elicitores. Finalmente, y puesto que los cultivos celulares de C. asiatica obtenidos, mantienen operativos los sistemas enzimáticos que catalizan los últimos pasos en la formación de centellósidos, se desarrolló un sistema de biotransformación de los cultivos celulares para bioconvertir el sustrato de alfa-amirina en centellósidos, abriendo una nueva vía para la utilización comercial de este sistema biotecnológico. / Centella asiatica is a herbaceous plant with great medicinal value, which has been used in traditional medicine as an antipyretic, diuretic and in the treatment of skin diseases. However, there is currently a shortage of "C. asiatica" in the international market, due to geopolitical problems and changes in the environment. An alternative source of centellosides, such as an in vitro biotechnology system, is therefore necessary. This thesis reports the development of a micropropagation system of "C. asiatica" using artificial seeds to obtain in vitro calli and subsequently cell suspensions. The results demonstrate that the organized structures of "C. asiatica" are not necessary for the synthesis of centellosides, its main active compounds. Moreover, the elicitation studies showed that exogenously applied methyl jasmonate induced the biosynthesis of saponins, while the free sterol content decreased notably, thus establishing a dose-dependent relationship between elicitor concentration and centelloside content. Since the obtained cell suspension cultures of "C. asiatica" maintain active enzymatic systems, this has permitted the biotransformation of alpha-amyrin to centellosides. This process can become a alternative biotechnological system to produce saponins.