Orientador: Wilma De Grava Kempinas / Banca: Patricia Aline Bôer / Banca: Débora Cristina Damasceno / Resumo: O desenvolvimento é um processo complexo que envolve muitos eventos críticos e, para a maioria dos mamíferos, se completa até anos após o nascimento. Assim, os hábitos alimentares maternos durante os períodos da gestação e lactação são de suma importância para o desenvolvimento inicial da prole. Muitos trabalhos já relataram que a restrição proteica durante a gestação resulta em efeitos sobre o sistema cardiovascular e aumenta a propensão para o desenvolvimento de doenças como hipertensão, diabetes e obesidade no período pósnatal. Efeitos sobre a função reprodutiva também foram constatados, porém poucos trabalhos avaliaram os efeitos em diferentes períodos do desenvolvimento inicial. O presente estudo teve por objetivo investigar a repercussão da restrição proteica materna em diferentes intervalos da prenhez ou na lactação, sobre o desempenho gestacional das matrizes e aspectos reprodutivos da progênie. Para tanto, foram utilizadas ratas adultas da linhagem Wistar prenhes, subdivididas em seis grupos: 1) Controle (n=13), 2) Gestação, restrito durante toda a prenhez, do dia gestacional 0 (DG0) ao DG21 (n=12), 3) Pré-implantação, restrito no período pré-implantação, do DG0 ao DG5 (n=12), 4) Embrionário, restrito no período embrionário, do DG6 ao DG15 (n=12), 5) Fetal, restrito no período fetal, do DG16 ao DG21 (n=13) e 6) Lactação, restrito durante toda a lactação, do dia pós-natal 1 (DPN1) ao DPN21 (n=7). As matrizes dos grupos controle e restritos foram alimentadas com ração normoproteica (proteína 17%) e hipoproteica (proteína 6%), respectivamente, de acordo com o delineamento experimental. Parte das matrizes foi morta ao final da prenhez (DG20), para avaliação do desempenho gestacional. As demais foram preservadas para permitir o nascimento dos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Development is a complex process that involves many critical events and, for most mammals, is completed until years after birth. Thus, maternal dietary habits during pregnancy and lactation are very important to the offspring early development. Many studies have reported that protein restriction during pregnancy results in effects on cardiovascular system and increases the probability of developing diseases such as hypertension, diabetes and obesity in the postnatal period. Effects on reproductive function were also observed, however, few studies have evaluated the effects in different periods of early development. This study aimed to investigate the impact of maternal protein restriction in different intervals of pregnancy or during lactation on the gestational performance of pregnant rats and on some reproductive aspects of progeny. To this end, pregnant Wistar rats were randomly assigned into six groups: 1) Control (n=13), 2) Gestation, restricted during all pregnancy, from gestational day 0 (GD0) to GD21 (n=12), 3) Pre-implantation, restricted in the pre-implantation period, from GD0 to GD5 (n=12), 4) Embryonic, restricted in the embryonic period, from GD6 to GD15 (n=12), 5) Fetal, restricted in the fetal period, from GD16 to GD21 (n=13) and 6) Lactation, restricted during all the lactation, from postnatal day 1 (PND1) to PND21 (n=7). Dams of control and restricted groups were fed standard (protein 17%) and low protein (6%) chow, respectively, according to experimental design. Part of the mothers was killed at the end of gestation (GD20) for evaluation of the gestational performance. The others were preserved to allow pups birth and investigation of the following aspects: onset of puberty, reproductive... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-22Bitstream added on 2014-06-13T19:08:42Z : No. of bitstreams: 1 gaspar_alc_me_botib.pdf: 720777 bytes, checksum: 5a83e08a32f54a6149ffe1204f35480f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O desenvolvimento é um processo complexo que envolve muitos eventos críticos e, para a maioria dos mamíferos, se completa até anos após o nascimento. Assim, os hábitos alimentares maternos durante os períodos da gestação e lactação são de suma importância para o desenvolvimento inicial da prole. Muitos trabalhos já relataram que a restrição proteica durante a gestação resulta em efeitos sobre o sistema cardiovascular e aumenta a propensão para o desenvolvimento de doenças como hipertensão, diabetes e obesidade no período pósnatal. Efeitos sobre a função reprodutiva também foram constatados, porém poucos trabalhos avaliaram os efeitos em diferentes períodos do desenvolvimento inicial. O presente estudo teve por objetivo investigar a repercussão da restrição proteica materna em diferentes intervalos da prenhez ou na lactação, sobre o desempenho gestacional das matrizes e aspectos reprodutivos da progênie. Para tanto, foram utilizadas ratas adultas da linhagem Wistar prenhes, subdivididas em seis grupos: 1) Controle (n=13), 2) Gestação, restrito durante toda a prenhez, do dia gestacional 0 (DG0) ao DG21 (n=12), 3) Pré-implantação, restrito no período pré-implantação, do DG0 ao DG5 (n=12), 4) Embrionário, restrito no período embrionário, do DG6 ao DG15 (n=12), 5) Fetal, restrito no período fetal, do DG16 ao DG21 (n=13) e 6) Lactação, restrito durante toda a lactação, do dia pós-natal 1 (DPN1) ao DPN21 (n=7). As matrizes dos grupos controle e restritos foram alimentadas com ração normoproteica (proteína 17%) e hipoproteica (proteína 6%), respectivamente, de acordo com o delineamento experimental. Parte das matrizes foi morta ao final da prenhez (DG20), para avaliação do desempenho gestacional. As demais foram preservadas para permitir o nascimento dos... / Development is a complex process that involves many critical events and, for most mammals, is completed until years after birth. Thus, maternal dietary habits during pregnancy and lactation are very important to the offspring early development. Many studies have reported that protein restriction during pregnancy results in effects on cardiovascular system and increases the probability of developing diseases such as hypertension, diabetes and obesity in the postnatal period. Effects on reproductive function were also observed, however, few studies have evaluated the effects in different periods of early development. This study aimed to investigate the impact of maternal protein restriction in different intervals of pregnancy or during lactation on the gestational performance of pregnant rats and on some reproductive aspects of progeny. To this end, pregnant Wistar rats were randomly assigned into six groups: 1) Control (n=13), 2) Gestation, restricted during all pregnancy, from gestational day 0 (GD0) to GD21 (n=12), 3) Pre-implantation, restricted in the pre-implantation period, from GD0 to GD5 (n=12), 4) Embryonic, restricted in the embryonic period, from GD6 to GD15 (n=12), 5) Fetal, restricted in the fetal period, from GD16 to GD21 (n=13) and 6) Lactation, restricted during all the lactation, from postnatal day 1 (PND1) to PND21 (n=7). Dams of control and restricted groups were fed standard (protein 17%) and low protein (6%) chow, respectively, according to experimental design. Part of the mothers was killed at the end of gestation (GD20) for evaluation of the gestational performance. The others were preserved to allow pups birth and investigation of the following aspects: onset of puberty, reproductive... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Fernanda C. Landim Alvarenga / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Mayra Elena Ortiz D'Avila Assumpção / Resumo: O objetivo deste estudo foi aprimorar os protocolos de produção in vitro de embriões e de ativação partenogenética visando o isolamento e o cultivo de células tronco embrionárias felinas. Os CCOs-I foram obtidos a partir de ovários de gatas adultas e maturados in vitro. No experimento I, os CCOS foram fecundados e os embriões cultivados nos meios SOFaa e FOC. Foram comparadas as taxas de clivagem e a produção de blastocistos. A análise estatística foi realizada por meio da análise de variância e a viabilidade embrionária foi avaliada por sondas fluorescentes (Hoechst e iodeto de propídio). Não houve diferenças significativas entre os meios de cultivo, os quais apresentaram taxas de clivagem de 50,5±9,47 e 63,75±5,9 (P>0,05) e de produção de blastocistos em relação ao total de oócitos fecundados de 18±5,07 e 33,2±3,71 (P>0,05) para FOC e SOF respectivamente. No experimento II, os CCOs maturos foram submetidos a três diferentes protocolos de ativação partenogenética: 1-ionomicina associada ao cicloheximide; 2-ionomicina associada ao roscovitine e 3-ionomicina associada ao estrôncio, os quais foram comparados entre si e ao controle quanto às taxas de ativação, clivagem e desenvolvimento embrionário, sendo cultivados em SOFaa por 72 horas após a ativação. Para tais avaliações, oócitos e embriões foram corados com Hoechst 33342 e examinados em microscópio invertido. Como análise estatística foi utilizado o teste qui-quadrado. Não houve diferença significativa entre os tratamentos quanto à taxa de oócitos ativados (69,9%, 76,6% e 64,6%, para tratamento 1, 2 e 3 respectivamente) (P>0,05) nem quanto às taxas de clivagem (46,6%, 46,73% e 32,32%, para tratamento 1, 2 e 3 respectivamente) (P>0,05), mas sim entre estes e o controle (36% e 12%, respectivamente, para taxa de oócitos ativados e taxas de clivagem) (P<0,05). Quanto ao desenvolvimento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to improve the existent protocols for in vitro embryos production and parthenogenetic activation in cats, aiming the isolation and culture of feline embryonic stem cells. COCs-I were collected from adult queens's ovaries and matured in vitro. In the experiment I, COCs were fertilized and embryos cultured in two culture media, SOFaa and FOC. In both media the cleavage rate and blastocysts production were compared. Fluorescents probes (Hoechst and propidium iodide) were utilized to estimate embryo viability. The statistical analysis was realized through the ANOVA. No statistical difference was observed between culture media. The cleavage rates considering the total number of fertilized oocytes were 50.5±9.47 and 63.75±5.9 (P>0.05) for FOC and SOF medium respectively. Similarly, the blastocysts production rates were 18±5.07 and 33.2±3.71 (P>0.05) for FOC and SOF, respectively. In experiment II matured COCs were submitted to three parthenogenetic activation protocols: 1- ionomycin associated to cycloheximide; 2 - ionomycin associated to roscovitine; 3 - ionomycin associated to strontium. The treatments were compared among themselves and among them and the control concerning chromatin decondensation, cleavage and embryo development rates. The parthenogenetic embryos were then cultured in SOFaa during 72 hours. To estimate chromatin status and number of nuclei, oocytes and embryos were stained with Hoechst 33342 and examined under an inverted fluorescent microscope. As statistical analyses chi-square test was utilized. No statistical difference was observed among treatments concerning activated oocytes rates (69.9%, 76.6% e 64.6%, respectively, for treatment 1, 2 and 3) (P>0.05) neither cleavage rates (46.6%, 46.73% e 32.32%, respectively, for treatment 1, treatment 1, 2, 3) (P>0.05). However, statistical difference was observed among treatments and... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-03Bitstream added on 2014-06-13T20:16:19Z : No. of bitstreams: 1 rascado_ts_me_botfmvz.pdf: 550386 bytes, checksum: 2b1967d2846b363e04547e6d5a1ff2fb (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi aprimorar os protocolos de produção in vitro de embriões e de ativação partenogenética visando o isolamento e o cultivo de células tronco embrionárias felinas. Os CCOs-I foram obtidos a partir de ovários de gatas adultas e maturados in vitro. No experimento I, os CCOS foram fecundados e os embriões cultivados nos meios SOFaa e FOC. Foram comparadas as taxas de clivagem e a produção de blastocistos. A análise estatística foi realizada por meio da análise de variância e a viabilidade embrionária foi avaliada por sondas fluorescentes (Hoechst e iodeto de propídio). Não houve diferenças significativas entre os meios de cultivo, os quais apresentaram taxas de clivagem de 50,5±9,47 e 63,75±5,9 (P>0,05) e de produção de blastocistos em relação ao total de oócitos fecundados de 18±5,07 e 33,2±3,71 (P>0,05) para FOC e SOF respectivamente. No experimento II, os CCOs maturos foram submetidos a três diferentes protocolos de ativação partenogenética: 1-ionomicina associada ao cicloheximide; 2-ionomicina associada ao roscovitine e 3-ionomicina associada ao estrôncio, os quais foram comparados entre si e ao controle quanto às taxas de ativação, clivagem e desenvolvimento embrionário, sendo cultivados em SOFaa por 72 horas após a ativação. Para tais avaliações, oócitos e embriões foram corados com Hoechst 33342 e examinados em microscópio invertido. Como análise estatística foi utilizado o teste qui-quadrado. Não houve diferença significativa entre os tratamentos quanto à taxa de oócitos ativados (69,9%, 76,6% e 64,6%, para tratamento 1, 2 e 3 respectivamente) (P>0,05) nem quanto às taxas de clivagem (46,6%, 46,73% e 32,32%, para tratamento 1, 2 e 3 respectivamente) (P>0,05), mas sim entre estes e o controle (36% e 12%, respectivamente, para taxa de oócitos ativados e taxas de clivagem) (P<0,05). Quanto ao desenvolvimento... / The objective of this study was to improve the existent protocols for in vitro embryos production and parthenogenetic activation in cats, aiming the isolation and culture of feline embryonic stem cells. COCs-I were collected from adult queens´s ovaries and matured in vitro. In the experiment I, COCs were fertilized and embryos cultured in two culture media, SOFaa and FOC. In both media the cleavage rate and blastocysts production were compared. Fluorescents probes (Hoechst and propidium iodide) were utilized to estimate embryo viability. The statistical analysis was realized through the ANOVA. No statistical difference was observed between culture media. The cleavage rates considering the total number of fertilized oocytes were 50.5±9.47 and 63.75±5.9 (P>0.05) for FOC and SOF medium respectively. Similarly, the blastocysts production rates were 18±5.07 and 33.2±3.71 (P>0.05) for FOC and SOF, respectively. In experiment II matured COCs were submitted to three parthenogenetic activation protocols: 1- ionomycin associated to cycloheximide; 2 – ionomycin associated to roscovitine; 3 – ionomycin associated to strontium. The treatments were compared among themselves and among them and the control concerning chromatin decondensation, cleavage and embryo development rates. The parthenogenetic embryos were then cultured in SOFaa during 72 hours. To estimate chromatin status and number of nuclei, oocytes and embryos were stained with Hoechst 33342 and examined under an inverted fluorescent microscope. As statistical analyses chi-square test was utilized. No statistical difference was observed among treatments concerning activated oocytes rates (69.9%, 76.6% e 64.6%, respectively, for treatment 1, 2 and 3) (P>0.05) neither cleavage rates (46.6%, 46.73% e 32.32%, respectively, for treatment 1, treatment 1, 2, 3) (P>0.05). However, statistical difference was observed among treatments and... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29Bitstream added on 2014-06-13T19:32:29Z : No. of bitstreams: 1 simoes_ral_me_botib.pdf: 373207 bytes, checksum: 81fc46acebb89383a1fee98db6390faf (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se com o presente trabalho verificar a relação entre diâmetro folicular, taxa de ovulação e a expressão gênica das isoformas do receptor de LH em vacas da raça Nelore. O experimento 1 foi realizado para verificar a dose mínima de LH capaz de induzir ovulação em folículos com diâmetro entre 10 e 11 mm. Vacas Nelore (n=20) foram submetidas à sincronização da ovulação e o crescimento folicular passou a ser acompanhado diariamente por ultrassonografia (US). Quando os folículos atingiram diâmetro entre 10 e 11 mm, os animais foram divididos em quatro grupos para receber diferentes doses de LH (Lutropin-V®, Bioniche, Ontario, Canada; IM): 1,56; 3,12; 6,25 e 12,5 mg. Os dados foram analisados pelo Teste Exato de Fisher (PROC FREQ, do SAS). As taxas de ovulação foram 0 (0/5), 80 (4/5), 80 (4/5) e 80% (4/5), respectivamente, ocorrendo diferença significativa entre o grupo 1,56 mg e os demais (p<0,02). No experimento 2, foram utilizados 6,25 mg de LH para induzir ovulação em vacas Nelore (n=53) submetidas a sincronização da ovulação e divididas em cinco grupos de acordo com o diâmetro folicular (mm) no momento da administração de LH: Grupo 1 (7,0 a 7,5); Grupo 2 (7,6 a 8,0); Grupo 3 (8,1 a 8,5); Grupo 4 (8,6 a 9,0) e Grupo 5 (9,1 a 10,0). Os resultados foram analisados por Regressão Logística (PROC GENMOD, do SAS). As taxas de ovulação foram 0 (0/11), 20 (2/10), 36 (4/11), 36 (4/11) e 90% (9/10), respectivamente. Houve diferença significativa entre G5 e os demais grupos (p<0,01). Ao associar G1+G2 (7,0 a 8,0 mm), G3+G4 (8,1 a 9,0 mm) e G5 (9,1 a 10,0 mm) as taxas de ovulação foram 9 (2/21), 36 (8/22) e 90% (9/10), respectivamente. Houve diferença significativa entre G1+G2 vs G5 (p<0,01), G3+G4 vs G5 (p<0,02) e G1+G2 vs G3+G4 (p<0,03). Após a administração de LH, o diâmetro do menor folículo capaz de ovular foi 7,65 mm. No experimento... / The aim of the present experiment was to verify the relationship between follicular diameter, ovulation rate and gene expression of LH receptor isoforms, in Nellore cows. Experiment 1 was performed to determine the lowest LH dose necessary to induce ovulation in follicles with 10 to 11 mm in diameter. Nellore cows (n=20) had their ovulation induced by hormonal treatment, and afterwards follicular growth was daily observed by ultrasonography (US). When the follicles reached 10 to 11 mm diameter, the cows were randomly allocated in four groups and treated with different doses of LH (Lutropin-V®, Bioniche, Ontario, Canada): Groups 1.56; 3.12; 6.25 and 12.5 mg. The data were analyzed by Fisher’s Exact Test (PROC FREQ, SAS). The ovulation rates were 0 (0/5), 80 (4/5), 80 (4/5) e 80% (4/5), respectively, and it was lower in group 1.56 when compared to the others (P<0.02). In experiment 2, the 6.25 mg LH dose was chosen to induce ovulation in Nellore cows (n=53), submitted to the same hormonal treatment used in experiment 1, and randomly allocated in five groups according to follicular diameter (mm) at the time of LH administration: Group 1 (7.0-7.5); Group 2 (7.6-8.0); Group 3 (8.1-8.5); Group 4 (8.6-9.0) and Group 5 (9.1-10.0). The results were analyzed by Logistic Regression (PROC GENMOD, SAS). The ovulation rates were 0 (0/11), 20 (2/10), 36 (4/11), 36 (4/11) and 90% (9/10), respectively, for G1, G2, G3, G4 and G5. There was significant difference between G5 and the others groups (P<0.01). When data from two groups (except Group 5) were combined G1+G2 (7.0-8.0 mm), G3+G4 (8.1-9.0 mm) and G5 (9.1-10.0) ovulation rates were, respectively, 9 (2/21), 36 (8/22) e 90% (9/10). There were significant differences when comparing G1+G2 v. G5 (P<0.01), G3+G4 v. G5 (P<0.02) and G1+G2 v. G3+G4 (P<0.03). After LH application, the smallest follicle that ovulated had a diameter of 7.65 mm. In ... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Ciro Moraes Barros / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: Marcelo Fábio Gouveia Nogueira / Resumo: Objetivou-se com o presente trabalho verificar a relação entre diâmetro folicular, taxa de ovulação e a expressão gênica das isoformas do receptor de LH em vacas da raça Nelore. O experimento 1 foi realizado para verificar a dose mínima de LH capaz de induzir ovulação em folículos com diâmetro entre 10 e 11 mm. Vacas Nelore (n=20) foram submetidas à sincronização da ovulação e o crescimento folicular passou a ser acompanhado diariamente por ultrassonografia (US). Quando os folículos atingiram diâmetro entre 10 e 11 mm, os animais foram divididos em quatro grupos para receber diferentes doses de LH (Lutropin-V®, Bioniche, Ontario, Canada; IM): 1,56; 3,12; 6,25 e 12,5 mg. Os dados foram analisados pelo Teste Exato de Fisher (PROC FREQ, do SAS). As taxas de ovulação foram 0 (0/5), 80 (4/5), 80 (4/5) e 80% (4/5), respectivamente, ocorrendo diferença significativa entre o grupo 1,56 mg e os demais (p<0,02). No experimento 2, foram utilizados 6,25 mg de LH para induzir ovulação em vacas Nelore (n=53) submetidas a sincronização da ovulação e divididas em cinco grupos de acordo com o diâmetro folicular (mm) no momento da administração de LH: Grupo 1 (7,0 a 7,5); Grupo 2 (7,6 a 8,0); Grupo 3 (8,1 a 8,5); Grupo 4 (8,6 a 9,0) e Grupo 5 (9,1 a 10,0). Os resultados foram analisados por Regressão Logística (PROC GENMOD, do SAS). As taxas de ovulação foram 0 (0/11), 20 (2/10), 36 (4/11), 36 (4/11) e 90% (9/10), respectivamente. Houve diferença significativa entre G5 e os demais grupos (p<0,01). Ao associar G1+G2 (7,0 a 8,0 mm), G3+G4 (8,1 a 9,0 mm) e G5 (9,1 a 10,0 mm) as taxas de ovulação foram 9 (2/21), 36 (8/22) e 90% (9/10), respectivamente. Houve diferença significativa entre G1+G2 vs G5 (p<0,01), G3+G4 vs G5 (p<0,02) e G1+G2 vs G3+G4 (p<0,03). Após a administração de LH, o diâmetro do menor folículo capaz de ovular foi 7,65 mm. No experimento ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present experiment was to verify the relationship between follicular diameter, ovulation rate and gene expression of LH receptor isoforms, in Nellore cows. Experiment 1 was performed to determine the lowest LH dose necessary to induce ovulation in follicles with 10 to 11 mm in diameter. Nellore cows (n=20) had their ovulation induced by hormonal treatment, and afterwards follicular growth was daily observed by ultrasonography (US). When the follicles reached 10 to 11 mm diameter, the cows were randomly allocated in four groups and treated with different doses of LH (Lutropin-V®, Bioniche, Ontario, Canada): Groups 1.56; 3.12; 6.25 and 12.5 mg. The data were analyzed by Fisher's Exact Test (PROC FREQ, SAS). The ovulation rates were 0 (0/5), 80 (4/5), 80 (4/5) e 80% (4/5), respectively, and it was lower in group 1.56 when compared to the others (P<0.02). In experiment 2, the 6.25 mg LH dose was chosen to induce ovulation in Nellore cows (n=53), submitted to the same hormonal treatment used in experiment 1, and randomly allocated in five groups according to follicular diameter (mm) at the time of LH administration: Group 1 (7.0-7.5); Group 2 (7.6-8.0); Group 3 (8.1-8.5); Group 4 (8.6-9.0) and Group 5 (9.1-10.0). The results were analyzed by Logistic Regression (PROC GENMOD, SAS). The ovulation rates were 0 (0/11), 20 (2/10), 36 (4/11), 36 (4/11) and 90% (9/10), respectively, for G1, G2, G3, G4 and G5. There was significant difference between G5 and the others groups (P<0.01). When data from two groups (except Group 5) were combined G1+G2 (7.0-8.0 mm), G3+G4 (8.1-9.0 mm) and G5 (9.1-10.0) ovulation rates were, respectively, 9 (2/21), 36 (8/22) e 90% (9/10). There were significant differences when comparing G1+G2 v. G5 (P<0.01), G3+G4 v. G5 (P<0.02) and G1+G2 v. G3+G4 (P<0.03). After LH application, the smallest follicle that ovulated had a diameter of 7.65 mm. In ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre