PROPÓSITO: Determinar y comparar la concentración de somatostatina (SST) intravítrea en pacientes con edema macular diabético (EMD), retinopatía diabética proliferativa (RDP), enfermedad oclusiva venosa retiniana (OVR) y pacientes controles. Determinar y comparar la concentración de eritropoyetina (EPO) intravítrea en pacientes con EMD, RDP, OVR y pacientes controles.MATERIAL Y MÉTODOS: Se obtuvieron muestras vítreas, séricas y plasmáticas de pacientes con edema macular secundario a OVR, EMD, RDP, membrana epiretiniana, agujero macular y desprendimiento regmatógeno retiniana (controles). La EPO y la SST se midieron por radioinmnoensayo. RESULTADOS: No se encontraron diferencias entre los grupos en la concentración de EPO sérica (Concentración sérica: OVR: 8.9 mU/mL [7-20.8]; EMD: 12.4 mU/mL[7.8-46.7]; RDP: 9,33 mU/mL [3-16]; controls: 8.6 mU/mL [4.1-19], P=ns). No se encontraron diferencias en la concentración de EPO intravítrea ajustada entre pacientes con OVR y controles (OVR: 69 mU/mL [27-800] vs. controles: 50 mU/mL [13-107], P=0,095). No se hallaron diferencias entre la concentración intravítrea de EPO entre los pacientes con RDP y EMD (RDP: 528,74 mU/mL [156-1859] vs. EMD: 578,63 mU/mL [41-2780], P=0,833). La concentración intravítrea de EPO ajustada fue superior en los pacientes con EMD y RDP que en los pacientes con OVR y controles y las diferencias fueron estadisticamente significativas (P<0,05). No se encontraron diferencias en la concentración de SST intravítrea ajustada entre pacientes con OVR y controles (OVR: 715,8 pg/mL [49-1367] vs. controles: 735,26 pg/mL [102-2024] P=0,973). No se encontraron diferencias en la concentración intravítrea de SST ajustada entre pacientes con RDP y EMD ( RDP: 119,59 pg/mL [14-377] vs. EMD: 88,97 pg/mL [21-232]P=0,601). La concentración intravítrea de SST fue significativamente superior en los pacientes con OVR y controles con respecto a los pacientes con EMD y RDP (p<0,05).CONCLUSIONES: En los pacientes con EMD y RDP encontramos una disminución en la concentración de SST intravítrea que no encontramos en los pacientes con OVR. La EPO intravítrea se encontró aumentada en los pacientes con EMD y RDP pero no en los pacientes con OVR. La SST y la EPO demostraron tener una implicación patogénica en el EMD y en la RDP cosa que no ocurrió en el EM secundario a OVR. / PURPOSE: To determine the levels of somatostatin (SST) and Erythropoietin (EPO) in the vitreous fluid of patients with diabetic macular edema (DME), proliferative diabetic retinopathy (PDR), macular edema secondary to retinal vein occlusion (RVO) and controls subjects.METHODS: Vitreous, serum and plasma samples were obtained from patients with macular edema secondary to RVO, DME, PDR, idiopathic epiretinal membrane, macular hole and rhegmatogenous retinal detachment (controls). EPO and SST were measured by radioimmunoassay (RIA).RESULTS: No differences were found between the groups in serum EPO levels. (Serum concentrations: RVO: 8.9 mU/mL [7-20.8]; DME: 12.4 mU/mL[7.8-46.7]; PDR: 9,33 mU/mL [3-16]; controls: 8.6 mU/mL [4.1-19], P=ns). No differences were found in intravitreal EPO levels between patients with RVO and controls. (Intravitreal concentrations: RVO: 69 mU/mL [27-800] vs. controls: 50 mU/mL [13-107], P=0,095). No differences were found in intravitreal EPO levels between patients with RDP and DME (Intravitreal concentrations: DPR: 528,74 mU/mL [156-1859] vs. DME: 578,63 mU/mL [41-2780], P=0,833). Intravitreal EPO concentration was significantly higher in patients with DME and RDP than in patients with RVO or controls (P<0,05). No differences were found in intravitreal SST levels between patients with RVO and controls (Intravitreal concentrations: RVO: 715,8 pg/mL [49-1367] vs. controls: 735,26 pg/mL [102-2024] P=0,973). No differences were found in intravitreal SST levels between patients with PDR and DME (Intravitreal concentrations: PDR: 119,59 pg/mL [14-377] vs. EMD: 88,97 pg/mL [21-232]P=0,601).Intravitreal SST concentration was significantly higher in patients with RVO and controls than in patients with DME and PDR (p<0,05).CONCLUSIONS: Intravitreal SST levels are elevated in patients with macular edema secondary to RVO and control subjects compared to patients with DME and PDR. Intravitreal EPO levels are not elevated in patients with macular edema secondary to RVO compared to control subjects whereas patients with DME and PDR have high levels of this factor in the vitreous. These results suggest that EPO and SST could be involved in the pathogenesis of diabetic retinopathy but not in macular edema secondary to RVO.

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A neuroproteção é um dos tópicos mais relevantes aplicados à neurociência. As junções comunicantes (JC), formadas pelas conexinas (Cx) estão envolvidas na neurodegeneração após lesão. Estudos com animais KO apresentam resultados contraditórios sobre papel das JCs. O objetivo deste trabalho foi analisar o papel das Cxs a partir do trauma mecânico na retina, modelo que permite a visualização do foco, penumbra, e áreas adjacentes à lesão. Observamos regulação distinta das Cx36 e Cx43 durante a neurodegeneração. A Cx36 não se alterou e a Cx43 apresentou desorganização e aumento da imunorreatividade após 7 dias, concomitantemente com GFAP. Células amácrinas apoptóticas encontram-se acopladas a células vizinhas por Cx36. O papel funcional das JCs foi avaliado, utilizando bloqueadores, para verificar a viabilidade/morte de células. Carbenoxolone (CBX), reduziu o espalhamento da apoptose, após 4h, enquanto a quinina, teve o mesmo efeito após 1h. A distribuição de núcleos apoptóticos confirmou que a utilização de bloqueadores de JCs reduz a propagação da apoptose. A quinina, mas não o CBX, diminuiu a expressão de caspases iniciais e efetoras. O controle da permeabilidade de canais de JCs pode participar de estratégias de neuroproteção. / The neuroprotection stands out as one of the most pursued hot topics in applied neurosciences. The gap junctions (GJ), formed by connexin (Cx) are involved in neurodegeneration injury. Studies using KO animal models endowed apparently contradictory results in relation to the role of coupling in neuroprotection. The aim of this study was to analyze the role of Cx-mediated communication in focal lesion induced by mechanical trauma in the retina, a model that alow the visualization of the focus, penumbra and adjacent areas. We observed distinct regulation of Cx36 and Cx43 during neurodegeneration. The Cx36 did not change during the lesion progression and Cx43 showed disorganized pattern and upregulated after 7 days, the same as GFAP. Apoptotic amacrine cells are coupled with health neighborhood cells by Cx36. The functional role of GJ was evaluated using blockers to verify the viability/cell death. Carbenoxolone (CBX) reduced the spread of apoptosis after 4h while quinine had the same effect after 1h. The distribution of apoptotic nuclei confirmed that the use of GJ blockers reduced the propagation of apoptosis. Quinine, but not CBX, decreases initial and effector caspases expression. The control of GJ channels permeability can participate in neuroprotection strategies.

Retinose Pigmentar (RP) é uma doença hereditária que conduz progressivamente à cegueira. Mais de 150 mutações da rodopsina associadas à RP foram descritas, e causam a alteração da sua conformação. Esta tese testou a hipótese de que pequenas moléculas auxiliam na formação da rodopsina e/ou reduzem a morte dos fotorreceptores. As mutações da RP, N15S e P23H, revelaram diferenças quanto às características e gravidade devido à má-formação das proteínas mutantes. Ligação de pequenas moléculas (retinóides, íons metálicos, clorofilas e antocianinas) à rodopsina foi demonstrada in vitro. O derivado da clorofila, Ce6, mostrou-se mais efetivo, conferindo maior estabilidade e foi então testado em ratos submetidos à degeneração por luz ou em modelos de RP (P23H e S334ter). Observou-se uma proteção contra a degeneração por luz e uma significante diminuição da degeneração no P23H. Em contraste, Ce6 causou um aumento na degeneração dos fotorreceptores do S334ter. Finalmente, resultados clínicos, bioquímicos e in vivo foram comparados e mostraram estar altamente relacionados. / Retinitis Pigmentosa (RP) is an inherited disease that progressively leads to blindness. More than 150 mutations associated with RP are known in rhodopsin, causing its misfolding. This thesis tested the hypothesis that small molecules can rescue folded rhodopsin and/or reduce photoreceptor cell death. RP mutations, N15S and P23H, revealed differences in characteristics and severity of misfolding of the mutant proteins. Binding of small molecule classes (retinals, metal ions, chlorophylls and anthocyanins) to rhodopsin was demonstrated in vitro. The chlorophyll derivative, Ce6, was most effective in conferring stability and therefore tested in rats subjected to light-damage and RP rat models, P23H and S334ter. Protection against the light-induced retinal degeneration and more importantly a significant slowing of the photoreceptor degeneration rate in the P23H rat were observed. In contrast, Ce6 increased photoreceptor degeneration in the S334ter rat. Finally, clinical, biochemical and in vivo rat data were compared and it was found to be highly correlated.

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Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-02-22T22:44:29Z No. of bitstreams: 1 FelipePortoFiuza_DISSERT.pdf: 2760660 bytes, checksum: a2d147e9d0481d5a91cfe15442490d40 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-02-25T22:05:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 FelipePortoFiuza_DISSERT.pdf: 2760660 bytes, checksum: a2d147e9d0481d5a91cfe15442490d40 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-25T22:05:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FelipePortoFiuza_DISSERT.pdf: 2760660 bytes, checksum: a2d147e9d0481d5a91cfe15442490d40 (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / O Sistema de Temporiza??o Circadiana (STC), em roedores, ? composto por estruturas neurais interligadas como o n?cleo supraquiasm?tico (NSQ) do hipot?lamo, o folheto intergeniculado (FIG) do t?lamo, vias sincronizadoras e efetores comportamentais. O NSQ tem sido descrito como o principal marca-passo circadiano em diversas esp?cies de mam?feros enquanto que o FIG parece estar envolvido na integra??o de informa??es f?ticas e n?o-f?ticas retransmitindo-as ao NSQ. O STC, como um todo, permite que o organismo tenha uma organiza??o temporal interna ordenada, o que propicia a execu??o adequada dos mecanismos fisiol?gicos e comportamentais trazendo homeostasia para o organismo. No entanto, essa estabilidade ? alterada com o avan?o da idade ocorrendo desde perda de fun??es fisiol?gicas simples ? diminui??o no desempenho cognitivo. Tendo isso em vista, ? proposto nesse estudo verificar se h? mudan?as neuroqu?micas, citoarquitet?nicas e de afer?ncias retinianas no FIG com o envelhecimento e suas poss?veis implica??es morfofuncionais. Para isso, ratos Wistar foram divididos em 3 grupos: Jovem (3 meses); Meia Idade (13 meses); Idoso (23 meses). Esses animais foram submetidos a perfus?o transcard?aca de paraformalde?do (4%) para fixar seus tecidos. Posteriormente seu enc?falo foi removido e submetido ? microtomia (30 ?m) onde as sec??es foram coletadas em intervalos de 6. Essas sec??es foram processadas por colora??o de Nissl e imunoistoqu?micas para GFAP, GAD, ENK, NPY e CTb a fim de verificar as caracter?sticas do FIG. Observamos uma perda celular em animais de meia-idade e idosos na marca??o de Nissl, NPY e nas proje??es de CTb. Al?m disso, vimos um aumento de GFAP em animais de meia-idade quando comparados a jovens e idosos. N?o houve diferen?as na an?lise dos outros marcadores. Esses achados indicam que essa estrutura perde afer?ncias retinianas e neur?nios, em especial os produtores de NPY, existindo uma prov?vel gliog?nese compensat?ria. Isso aponta para uma correla??o entre os d?ficits de funcionamento do STC e deteriora??o anat?mica de seus componentes com o envelhecimento. / The circadian timing system (CTS), in rodents, consists of interconnected neural structures such as the suprachiasmatic nucleus (SCN) of the hypothalamus, Intergeniculate Leaflet (IGL) of the thalamus, synchronous pathways and behavioral effectors. The SCN has been described as the major circadian pacemaker in several species of mammals, while the IGL appears to be involved in integration of photic and non-photic clues relaying them to SCN. The CTS allows an ordered internal temporal organization to the organism, providing the proper execution of physiological and behavioral mechanisms, which brings homeostasis. However, this stability is disrupted with aging process causing numerous pathological disorders, ranging from simple loss of physiological functions to decreases in cognitive performance. Therefore, is fundamental understanding the effects of senescence in this system. In this context, is proposed in this study to check if there are changes in IGL cytoarchitecture, neurochemical and retinal afferent markers with aging and their possible morpho-functional implications. To achieve this goal wistar rats were divided into 3 groups: young (3 months); Middle Age (13 months); Old (23 months). They were submitted to paraformaldhyde (4%) transcardiac perfusion to tissue fixation. Then, they had their brain removed and sectioned in 30 ?m slices, which every sixth section were collected. This sections were processed by nissl method and immunostaining for GFAP, GAD, ENK, NPY and CTb in order to analyze the IGL features. It was observed a cell loss in middle age and old animals at Nissl, NPY and CTb stains. In addition, it was shown a increase in GFAP in middle aged animals compared to young and old ones. No differences were found in other neurochemichal stains. These data suggests IGL loss retinal afferents and neurons, in special the NPY-IR ones, likely having a compensatory gliogenesis. This supports the correlations between the CTS functional deficits and an anatomical deterioration of its components with the aging process.

A neuroproteção é um dos tópicos mais relevantes aplicados à neurociência. As junções comunicantes (JC), formadas pelas conexinas (Cx) estão envolvidas na neurodegeneração após lesão. Estudos com animais KO apresentam resultados contraditórios sobre papel das JCs. O objetivo deste trabalho foi analisar o papel das Cxs a partir do trauma mecânico na retina, modelo que permite a visualização do foco, penumbra, e áreas adjacentes à lesão. Observamos regulação distinta das Cx36 e Cx43 durante a neurodegeneração. A Cx36 não se alterou e a Cx43 apresentou desorganização e aumento da imunorreatividade após 7 dias, concomitantemente com GFAP. Células amácrinas apoptóticas encontram-se acopladas a células vizinhas por Cx36. O papel funcional das JCs foi avaliado, utilizando bloqueadores, para verificar a viabilidade/morte de células. Carbenoxolone (CBX), reduziu o espalhamento da apoptose, após 4h, enquanto a quinina, teve o mesmo efeito após 1h. A distribuição de núcleos apoptóticos confirmou que a utilização de bloqueadores de JCs reduz a propagação da apoptose. A quinina, mas não o CBX, diminuiu a expressão de caspases iniciais e efetoras. O controle da permeabilidade de canais de JCs pode participar de estratégias de neuroproteção. / The neuroprotection stands out as one of the most pursued hot topics in applied neurosciences. The gap junctions (GJ), formed by connexin (Cx) are involved in neurodegeneration injury. Studies using KO animal models endowed apparently contradictory results in relation to the role of coupling in neuroprotection. The aim of this study was to analyze the role of Cx-mediated communication in focal lesion induced by mechanical trauma in the retina, a model that alow the visualization of the focus, penumbra and adjacent areas. We observed distinct regulation of Cx36 and Cx43 during neurodegeneration. The Cx36 did not change during the lesion progression and Cx43 showed disorganized pattern and upregulated after 7 days, the same as GFAP. Apoptotic amacrine cells are coupled with health neighborhood cells by Cx36. The functional role of GJ was evaluated using blockers to verify the viability/cell death. Carbenoxolone (CBX) reduced the spread of apoptosis after 4h while quinine had the same effect after 1h. The distribution of apoptotic nuclei confirmed that the use of GJ blockers reduced the propagation of apoptosis. Quinine, but not CBX, decreases initial and effector caspases expression. The control of GJ channels permeability can participate in neuroprotection strategies.

Retinose Pigmentar (RP) é uma doença hereditária que conduz progressivamente à cegueira. Mais de 150 mutações da rodopsina associadas à RP foram descritas, e causam a alteração da sua conformação. Esta tese testou a hipótese de que pequenas moléculas auxiliam na formação da rodopsina e/ou reduzem a morte dos fotorreceptores. As mutações da RP, N15S e P23H, revelaram diferenças quanto às características e gravidade devido à má-formação das proteínas mutantes. Ligação de pequenas moléculas (retinóides, íons metálicos, clorofilas e antocianinas) à rodopsina foi demonstrada in vitro. O derivado da clorofila, Ce6, mostrou-se mais efetivo, conferindo maior estabilidade e foi então testado em ratos submetidos à degeneração por luz ou em modelos de RP (P23H e S334ter). Observou-se uma proteção contra a degeneração por luz e uma significante diminuição da degeneração no P23H. Em contraste, Ce6 causou um aumento na degeneração dos fotorreceptores do S334ter. Finalmente, resultados clínicos, bioquímicos e in vivo foram comparados e mostraram estar altamente relacionados. / Retinitis Pigmentosa (RP) is an inherited disease that progressively leads to blindness. More than 150 mutations associated with RP are known in rhodopsin, causing its misfolding. This thesis tested the hypothesis that small molecules can rescue folded rhodopsin and/or reduce photoreceptor cell death. RP mutations, N15S and P23H, revealed differences in characteristics and severity of misfolding of the mutant proteins. Binding of small molecule classes (retinals, metal ions, chlorophylls and anthocyanins) to rhodopsin was demonstrated in vitro. The chlorophyll derivative, Ce6, was most effective in conferring stability and therefore tested in rats subjected to light-damage and RP rat models, P23H and S334ter. Protection against the light-induced retinal degeneration and more importantly a significant slowing of the photoreceptor degeneration rate in the P23H rat were observed. In contrast, Ce6 increased photoreceptor degeneration in the S334ter rat. Finally, clinical, biochemical and in vivo rat data were compared and it was found to be highly correlated.