As substâncias farmacologicamente ativas tem despertado interesse da comunidade científica nos últimos anos. Estas substâncias são usadas em medicina diagnóstica, tratamento e prevenção de doenças. Algumas destas substâncias são excretadas na forma não metabolizada e outras na forma ativa, sendo que muitas delas não são completamente removidas nas estações de tratamento de esgotos. Um desses grupos ativos de substâncias, são os estrogênios esteróides e seus conjugados, os quais tem sido identificados como grandes contribuintes para a desregulação endócrina. O presente trabalho consistiu de desenvolver um método analítico empregando extração em fase sólida (SPE), usando cartuchos Strata-X, e cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas (CG/EM) para a determinação dos hormônios sexuais contidos nas águas subterrâneas da regiâo da cidade universitária de São Paulo, mais especificamente do Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN). Dentre os hormônios conhecidos, foi dado destaque nesse trabalho para os estrogênios naturais estradiol, estrona e progesterona, e os estrogênios sintéticos etinilestradiol e norgestrel. A validação do método foi baseada no documento do INMETRO e da ANVISA. Os índices de recuperações estiveram entre 70-120% para todos os compostos, estando dentro da faixa recomendada pela literatura para matrizes ambientais. Os limites de detecção encontrados variaram de 0,062 a 0,498 μg:L-1, e os limites de quantificação foram de 0,942 a 1,343 μg:L-1. Todos os compostos apresentaram coeficientes de determinação superiores a 0,99. / The pharmacologically active substances has awaked the interest of the scientific community in recent years. These substances are used in diagnosis medicine, treatment and pevention of illness. Some the substances are excreted unmetabolized and others in the active form, many of which are not complety removed in the wastewater treatment plants. One these groups is the steroid estrogens and their conjugates, which has been identified as a major contributors to endocrine-disrupting This work presents the development of an analytical procedure through solid phase extraction (SPE) using Strata-X cartridges and gas chromatography acopled mass spectrometry (GC/MS) for the determination of sexual steroid hormones in groundwater from São Paulo University campus, specifically at Institute of Energy and Nuclear Research (IPEN). Among the known hormones, emphasis was given in this work for the naturals estrogens estradiol, estrone and progesterone, and the synthetics estrogens ethynylestradiol and norgestrel. The validation of the analytical method was based on the document INMETRO and ANVISA. The indices of recovery werw between 70-120q% for all compounds, being within the range recommended in the literature for environmental matrices. The detection limits ranged from 0.062 to 0.498 μg:L-1, and the limits of quantification were 0.942 to 1.343 μg:L-1. All compounds showed coecients of determination greather than 0.99.

A ivermectina é uma lactona macrocíclica usada como agente antiparasitário de amplo espectro de ação contra nematelmintos e artrópodes. É empregada, principalmente, no controle de infecções parasitárias de animais domésticos, e recentemente vem sendo utilizada em seres humanos para o tratamento da oncocercose, escabiose e pediculose. Em mamíferos, diversas evidências indicam que as lactonas macrocíclicas interagem com canais de cloro mediados pelo ácido gama-aminobutírico (GABA). Sabe-se que o sistema GABAérgico está envolvido com a manifestação do comportamento sexual e estudo prévios mostraram que a ivermectina prejudicou o comportamento sexual de ratos machos e fêmeas. Assim, considerando que a ivermectina pode interferir na esfera sexual, este trabalho avaliou os efeitos temporais da exposição à ivermectina (0,2 e 1,0 mg/kg, por via subcutânea) em parâmetros reprodutivos e hormonais de ratos e de coelhos. Em ratos avaliou-se peso relativo dos órgãos de machos e fêmeas, o índice gonadossomático de machos, os achados histopatológicos; o receptor de andrógeno em testículos por imunohistoquímica; concentração sérica de testosterona, FSH e LH; expressão relativa de enzimas da via esteroidogênica por reação em cadeia da polimerase em tempo real (PCR-RT); ciclo estral, desempenho reprodutivo e concentração de estradiol nas fezes de ratas. Em coelhos machos avaliou-se a concentração, a motilidade e a morfologia de espermatozoides; a integridade das membranas plasmáticas, acrossomal e mitocondrial de espermatozoides; o peso relativo dos órgãos e o índice gonadossomático; a concentração sérica testosterona; os achados histopatológicos; e a análise hematológica e bioquímica sérica. Os resultados mostraram que a administração de ivermectina em ratos: não alterou o peso relativo dos testículos, epidídimos, próstata e vesícula seminal; não modificou o índice gonadossomático; promoveu prejuízo nas células germinativas do epitélio seminífero dos testículos, achado sugestivo de prejuízo na espermatogênese e na espermiogênese de machos; não interferiu na expressão de receptor andrógeno dos testículos, bem como a expressão relativa de enzimas da via esteroidogênica; não interferiu na concentração sérica de testosterona e FSH, porém diminuiu a concentração sérica de LH; não interferiu no ciclo estral, no desempenho reprodutivo e na concentração de estradiol nas fezes de ratas. Os resultados de ratos e ratas foram discutidos considerando a interferência da ivermectina na neurotransmissão GABAérgica, bem como na via de produção dos hormônios hipofisários-gonadais. Em coelhos, não foram observadas alterações nos parâmetros da fertilidade de machos, avaliada pela concentração, motilidade e morfologia de espermatozoides, e nem no potencial de fertilização, avaliado pela integridade das membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial dos espermatozoides; não houve interferência nos níveis séricos de testosterona, na bioquímica sérica e em parâmetros do hemograma. Esses resultados em conjunto são indicativos de que a ivermectina causa poucos efeitos prejudiciais em aspectos reprodutivos de ratos e coelhos. / Ivermectin is a macrocyclic lactone used as a broad spectrum antiparasitic agent against nematelmints and arthropods. It is mainly used in the control of parasitic infections of domestic animals, and recently has been used in humans to treat onchocerciasis, scabies and pediculosis. In mammals, various evidences indicate that macrocyclic lactones interact with gamma-aminobutyric acid (GABA)-mediated chloride channels. It is known that the GABAergic system is involved in the manifestation of sexual behavior and previous studies have shown that ivermectin impaired sexual behavior in male and female rats. Thus, considering ivermectin may interfere with the sexual sphere, this study evaluated the temporal effects of exposure to ivermectin (0.2 and 1.0 mg/kg, administered subcutaneously) on reproductive and hormonal parameters of rats and rabbits. In rats it was evaluated organ weights of male and female, the gonadossomatic index of males, histopathological findings; the immunohistochemical of the androgen receptor in the testes; serum LH, FSH and testosterone concentrations; relative expression of steroidogenic pathway enzymes by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR); estrous cycle, reproductive performance and estradiol concentration in the feces of female rats. In male rabbits it was evaluated the spermatozoa concentration, motility and morphology; the integrity of the membranes plasmatic, acrosomal and mitochondrial of the spermatozoa; the organ weights, the gonadosomatic index; serum testosterone concentrations; histopathological findings; and hematological and serum biochemical analysis. The results showed that ivermectin administration in rats: not alter the relative weights of the testes, epididymis, prostate and seminal vesicle; not modified gonadosomatic index; caused damage in the germinal cells of the seminiferous epithelium of the testes, finding suggestive of impairment in spermatogenesis and male spermiogenesis; did not interfere with the androgen receptor expression of the testes, as well as the relative expression of enzymes of the steroidogenic pathway; did not interfere in the serum testosterone and FSH concentrations, but it decreased the serum LH concentration; did not interfere in the estrous cycle, reproductive performance and estradiol concentration in the feces of female rats. The results of male and female rats were discussed considering the interference of ivermectin in GABAergic neurotransmission as well as in the production pathway of pituitary-gonadal hormones. In rabbits, no changes were observed in male fertility parameters evaluated by spermatozoa concentration, motility and morphology, nor the potential for fertilization evaluated by the integrity of the membranes plasmatic, acrosomal and mitochondrial of the spermatozoa; there was no interference in serum testosterone concentration, serum biochemistry and hematological parameters. These results together are indicative that ivermectin causes few adverse effects on reproductive aspects of rats and rabbits.

As substâncias farmacologicamente ativas tem despertado interesse da comunidade científica nos últimos anos. Estas substâncias são usadas em medicina diagnóstica, tratamento e prevenção de doenças. Algumas destas substâncias são excretadas na forma não metabolizada e outras na forma ativa, sendo que muitas delas não são completamente removidas nas estações de tratamento de esgotos. Um desses grupos ativos de substâncias, são os estrogênios esteróides e seus conjugados, os quais tem sido identificados como grandes contribuintes para a desregulação endócrina. O presente trabalho consistiu de desenvolver um método analítico empregando extração em fase sólida (SPE), usando cartuchos Strata-X, e cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas (CG/EM) para a determinação dos hormônios sexuais contidos nas águas subterrâneas da regiâo da cidade universitária de São Paulo, mais especificamente do Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN). Dentre os hormônios conhecidos, foi dado destaque nesse trabalho para os estrogênios naturais estradiol, estrona e progesterona, e os estrogênios sintéticos etinilestradiol e norgestrel. A validação do método foi baseada no documento do INMETRO e da ANVISA. Os índices de recuperações estiveram entre 70-120% para todos os compostos, estando dentro da faixa recomendada pela literatura para matrizes ambientais. Os limites de detecção encontrados variaram de 0,062 a 0,498 μg:L-1, e os limites de quantificação foram de 0,942 a 1,343 μg:L-1. Todos os compostos apresentaram coeficientes de determinação superiores a 0,99. / The pharmacologically active substances has awaked the interest of the scientific community in recent years. These substances are used in diagnosis medicine, treatment and pevention of illness. Some the substances are excreted unmetabolized and others in the active form, many of which are not complety removed in the wastewater treatment plants. One these groups is the steroid estrogens and their conjugates, which has been identified as a major contributors to endocrine-disrupting This work presents the development of an analytical procedure through solid phase extraction (SPE) using Strata-X cartridges and gas chromatography acopled mass spectrometry (GC/MS) for the determination of sexual steroid hormones in groundwater from São Paulo University campus, specifically at Institute of Energy and Nuclear Research (IPEN). Among the known hormones, emphasis was given in this work for the naturals estrogens estradiol, estrone and progesterone, and the synthetics estrogens ethynylestradiol and norgestrel. The validation of the analytical method was based on the document INMETRO and ANVISA. The indices of recovery werw between 70-120q% for all compounds, being within the range recommended in the literature for environmental matrices. The detection limits ranged from 0.062 to 0.498 μg:L-1, and the limits of quantification were 0.942 to 1.343 μg:L-1. All compounds showed coecients of determination greather than 0.99.

Pesquisas têm documentado como é variável a decomposição corporal e o intervalo de tempo verificado entre as diversas fases do processo de decomposição do cadáver e o momento em que se verificou a morte. Fatores ambientais como temperatura, umidade, condições aeróbica e anaeróbica, presença de microrganismos e condições do solo são considerados como fatores que interferem no processo que envolve a preservação ou não do cadáver. As circunstâncias que detêm a putrefação, uma vez iniciada, estão representadas pelos processos naturais conservadores dos cadáveres. A formação da adipocera foi investigada para confirmar a sua relação com o tempo de esqueletização relacionado ao sexo. O trabalho teve os seguintes objetivos: 1) registrar e comparar as variáveis ambientais temperatura, umidade relativa do ar, chuvas e as variáveis corporais peso e teor de gordura dos animais; 2) investigar se o processo de esqueletização sofre interferência hormonal, descrevendo, macroscopicamente, a esqueletização comparando-se os grupos conforme o sexo e a fase hormonal e 3) identificar a composição da massa cadavérica dos restos da decomposição corpórea através do método da cromatografia gasosa. Trata-se de trabalho experimental com ratos Wistar sendo utilizados 30 ratos divididos em três grupos: 10 machos castrados sem reposição de testosterona (MCST), 10 machos castrados com reposição de testosterona (MCCT) e 10 machos controles da testosterona (MCoT). Para a formação do grupo das fêmeas foram utilizadas 60 ratas divididas em seis grupos: 10 fêmeas controles na fase diestro (FCoD), 10 fêmeas controles na fase estro (FCoE), 10 fêmeas controles na fase proestro (FCoP), 10 fêmeas castradas sem reposição de hormônio (FCSH), 10 fêmeas castradas com reposição de estrógeno (FCCE) e 10 fêmeas castradas com reposição de progesterona (FCCP). Estes animais foram cuidados até atingirem o peso entre 350 e 450g, quando foram mortos em câmara de CO2 e depois envolvidos individualmente em gaze e algodão e colocados em urnas de madeira e depois sepultados dentro de uma caixa de cimento enterrada no solo. As análises realizadas para verificar a variação dos fatores ambientais e dos fatores corporais não interferiram no processo de esqueletização. Após as exumações, apenas o grupo MCoT apresentou esqueletização completa com o esqueleto visível livre de quaisquer restos remanescentes. Os grupos MCST e MCCT apresentaram esqueletização mínima com massa cadavérica recobrindo todo o corpo e alguns ainda apresentando órgãos e vísceras conservados. Todos os grupos das fêmeas apresentaram esqueletização parcial. Toda massa cadavérica analisada confirmou ser adipocera. Considerando-se que os dois grupos de animais foram sepultados no mesmo local, sob as mesmas condições ambientais e corporais, simultaneamente durante o mesmo intervalo de tempo, foi possível apontar a variável hormônio como o fator responsável pela diferença observada na decomposição corpórea. / Researches have been documenting as it is variable the corporal decomposition and the interval of time verified between the several phases of the process of decomposition of the corpse and the moment in which the death was verified. Environmental factors as temperature, humidity, aerobic and anaerobic conditions, presence of microorganisms and conditions of the soil are considered as factors that interfere in the process that involves the preservation or not of the corpse. The circumstances that stop the rotting, once initiated, are represented by the natural processes conservative of the corpses. The formation of the adipocere was investigated to confirm its relation to the time of skeletization related to the sex. The research had the following objectives: 1) to register and to compare the environmental temperature variables, relative humidity of the air, rain and the corporal weight variables and rate of fat of the animals; 2) to investigate if the skeletization process suffers hormonal interference, describing, macroscopically, the skeletization being compared to the groups according to the sex and the hormonal phase and 3) to identify the composition of the cadaverous mass of the remains of the corporal decomposition through the method of gas chromatography. It deals with experimental work with 30 Wistar rats divided into three groups: 10 castrated males no testosterone replacement (CMNT), 10 castrated males with testosterone replacement (CMWT) and 10 males control of testosterone (MCoT). For the formation of the group of the females, 60 female rats were used divided into six groups: 10 females control in the phase diestrus (FCoD), 10 females control in the phase estrus (FCoE), 10 females control in the phase proestrus (FCoP), 10 castrated females no hormone replacement (CFNH), 10 castrated females with estrogen replacement (CFWE) and 10 castrated females with progesterone replacement (CFWP). These animals were taken care of until they reached the weight between 350 and 450g, when they were killed in camera of CO2 and later involved individually in gauze and cotton and put in wood urns and later buried in a cement box placed in the soil. The analyses did to verify the variation of the environmental factors and of the corporal factors didn\'t interfere in the skeletization process. After the exhumations, just the group MCoT presented complete skeletization with the visible skeleton free from any remaining remains. The groups CMNT and CMWT presented minimum skeletization with cadaverous mass covering the whole body and some still presenting conserved organs and viscera. All of the groups of females presented partial skeletization. Every analyzed cadaverous mass was confirmed to be adipocere. Considering that the two groups of animals were buried in the same place, under the same environmental and corporal conditions, simultaneously during the same interval of time, it was possible to point out the variable hormone as the responsible factor for the difference observed in the corporal decomposition.

O objetivo do presente estudo foi avaliar se as raças de cães popularmente consideradas agressivas apresentam maiores níveis circulantes de testosterona que as raças consideradas dóceis ou afáveis, discutindo os tipos de comportamento agressivo em que a presença de maiores níveis desse andrógeno poderia determinar uma maior predisposição à manifestação da agressividade. Foram utilizados 217 animais adultos, sendo 113 machos e 104 fêmeas, com idade entre um e 10 anos, que foram divididos em dois grupos distintos: grupo agressivo representados por cinco raças que apresentam agressividade alta a muito alta (Rottweiler, Bull Terrier, Pit Bull, Pastor Alemão e Fila Brasileiro) e grupo não agressivo representada por seis raças que apresentam agressividade baixa a moderada (Labrador, Golden Retriever, Beagle, Bulldog Inglês, Poodle e Cocker). Após colheita de sangue e preparo das amostras, as concentrações séricas de testosterona foram determinadas por meio de Radioimunoensaio (RIE), no Laboratório de Dosagens Hormonais (LDH), FMVZ-USP. Os testes estatísticos foram realizados utilizando-se o programa computacional Statististical Analysis System (SAS). Não houve diferença significativa entre as concentrações séricas de testosterona entre cães de um a oito anos de idade, nem entre cães de raças agressivas e não agressivas, porém, ao se comparar as raças individualmente, os cães das raças Rottweilwer e Beagle apresentaram maiores concentrações de testosterona sérica que os cães das demais raças (p<0,05). Concluiu-se que a concentração sérica de testosterona não pode ser utilizada como preditora do comportamento agressivo das raças Rottweiler, Bull Terrier, Pit Bull, Pastor Alemão e Fila Brasileiro. É importante a divulgação e conscientização da população sobre posse responsável. / The aim of the present study was to evaluate if the canine breeds commonly considered aggressive have higher levels of circulating testosterone than the manageable ones, and to discuss about the kinds of aggressive behavior that testosterone could be involved. It was used 217 adult animals (113 males and 104 females), between one and ten years old, that was divided in two groups: the aggressive group, represented by five breeds that are classified as having high and very high aggressive behavior (Rottweiler, Bull Terrier, Pit Bull, Pastor Alemão e Fila Brasileiro) and the non-aggressive group, represented by six breeds that have short to moderate aggressive behavior. After the blood samples be collected and prepared, the serum testosterone was measured by Radioimmunoassay (RIA), at the Laboratorio de Dosagens Hormonais (LDH), FMVZ- USP. The statistical tests were done by the use of the computational program Statistical Analysis System (SAS). There weren`t any significant difference of the seric testosterone concentration neither between one and eight year old males, nor between the aggressive and non-aggressive canine breeds. Comparing the breeds individually, the Rottweiler and the Beagle dogs presented higher testosterone levels than the dogs of other breeds (p<0,05). It could be concluded that the seric testosterone couldn`t be used as a predictor factor to the aggressive behavior of the Rottweiler, Bull Terrier, Pit Bull, Pastor Alemão e Fila Brasileiro dogs. The discussion about the responsibility necessary to have a domestic animal is very important.

O objetivo do presente estudo foi avaliar se as raças de cães popularmente consideradas agressivas apresentam maiores níveis circulantes de testosterona que as raças consideradas dóceis ou afáveis, discutindo os tipos de comportamento agressivo em que a presença de maiores níveis desse andrógeno poderia determinar uma maior predisposição à manifestação da agressividade. Foram utilizados 217 animais adultos, sendo 113 machos e 104 fêmeas, com idade entre um e 10 anos, que foram divididos em dois grupos distintos: grupo agressivo representados por cinco raças que apresentam agressividade alta a muito alta (Rottweiler, Bull Terrier, Pit Bull, Pastor Alemão e Fila Brasileiro) e grupo não agressivo representada por seis raças que apresentam agressividade baixa a moderada (Labrador, Golden Retriever, Beagle, Bulldog Inglês, Poodle e Cocker). Após colheita de sangue e preparo das amostras, as concentrações séricas de testosterona foram determinadas por meio de Radioimunoensaio (RIE), no Laboratório de Dosagens Hormonais (LDH), FMVZ-USP. Os testes estatísticos foram realizados utilizando-se o programa computacional Statististical Analysis System (SAS). Não houve diferença significativa entre as concentrações séricas de testosterona entre cães de um a oito anos de idade, nem entre cães de raças agressivas e não agressivas, porém, ao se comparar as raças individualmente, os cães das raças Rottweilwer e Beagle apresentaram maiores concentrações de testosterona sérica que os cães das demais raças (p<0,05). Concluiu-se que a concentração sérica de testosterona não pode ser utilizada como preditora do comportamento agressivo das raças Rottweiler, Bull Terrier, Pit Bull, Pastor Alemão e Fila Brasileiro. É importante a divulgação e conscientização da população sobre posse responsável. / The aim of the present study was to evaluate if the canine breeds commonly considered aggressive have higher levels of circulating testosterone than the manageable ones, and to discuss about the kinds of aggressive behavior that testosterone could be involved. It was used 217 adult animals (113 males and 104 females), between one and ten years old, that was divided in two groups: the aggressive group, represented by five breeds that are classified as having high and very high aggressive behavior (Rottweiler, Bull Terrier, Pit Bull, Pastor Alemão e Fila Brasileiro) and the non-aggressive group, represented by six breeds that have short to moderate aggressive behavior. After the blood samples be collected and prepared, the serum testosterone was measured by Radioimmunoassay (RIA), at the Laboratorio de Dosagens Hormonais (LDH), FMVZ- USP. The statistical tests were done by the use of the computational program Statistical Analysis System (SAS). There weren`t any significant difference of the seric testosterone concentration neither between one and eight year old males, nor between the aggressive and non-aggressive canine breeds. Comparing the breeds individually, the Rottweiler and the Beagle dogs presented higher testosterone levels than the dogs of other breeds (p<0,05). It could be concluded that the seric testosterone couldn`t be used as a predictor factor to the aggressive behavior of the Rottweiler, Bull Terrier, Pit Bull, Pastor Alemão e Fila Brasileiro dogs. The discussion about the responsibility necessary to have a domestic animal is very important.

A ivermectina é uma lactona macrocíclica usada como agente antiparasitário de amplo espectro de ação contra nematelmintos e artrópodes. É empregada, principalmente, no controle de infecções parasitárias de animais domésticos, e recentemente vem sendo utilizada em seres humanos para o tratamento da oncocercose, escabiose e pediculose. Em mamíferos, diversas evidências indicam que as lactonas macrocíclicas interagem com canais de cloro mediados pelo ácido gama-aminobutírico (GABA). Sabe-se que o sistema GABAérgico está envolvido com a manifestação do comportamento sexual e estudo prévios mostraram que a ivermectina prejudicou o comportamento sexual de ratos machos e fêmeas. Assim, considerando que a ivermectina pode interferir na esfera sexual, este trabalho avaliou os efeitos temporais da exposição à ivermectina (0,2 e 1,0 mg/kg, por via subcutânea) em parâmetros reprodutivos e hormonais de ratos e de coelhos. Em ratos avaliou-se peso relativo dos órgãos de machos e fêmeas, o índice gonadossomático de machos, os achados histopatológicos; o receptor de andrógeno em testículos por imunohistoquímica; concentração sérica de testosterona, FSH e LH; expressão relativa de enzimas da via esteroidogênica por reação em cadeia da polimerase em tempo real (PCR-RT); ciclo estral, desempenho reprodutivo e concentração de estradiol nas fezes de ratas. Em coelhos machos avaliou-se a concentração, a motilidade e a morfologia de espermatozoides; a integridade das membranas plasmáticas, acrossomal e mitocondrial de espermatozoides; o peso relativo dos órgãos e o índice gonadossomático; a concentração sérica testosterona; os achados histopatológicos; e a análise hematológica e bioquímica sérica. Os resultados mostraram que a administração de ivermectina em ratos: não alterou o peso relativo dos testículos, epidídimos, próstata e vesícula seminal; não modificou o índice gonadossomático; promoveu prejuízo nas células germinativas do epitélio seminífero dos testículos, achado sugestivo de prejuízo na espermatogênese e na espermiogênese de machos; não interferiu na expressão de receptor andrógeno dos testículos, bem como a expressão relativa de enzimas da via esteroidogênica; não interferiu na concentração sérica de testosterona e FSH, porém diminuiu a concentração sérica de LH; não interferiu no ciclo estral, no desempenho reprodutivo e na concentração de estradiol nas fezes de ratas. Os resultados de ratos e ratas foram discutidos considerando a interferência da ivermectina na neurotransmissão GABAérgica, bem como na via de produção dos hormônios hipofisários-gonadais. Em coelhos, não foram observadas alterações nos parâmetros da fertilidade de machos, avaliada pela concentração, motilidade e morfologia de espermatozoides, e nem no potencial de fertilização, avaliado pela integridade das membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial dos espermatozoides; não houve interferência nos níveis séricos de testosterona, na bioquímica sérica e em parâmetros do hemograma. Esses resultados em conjunto são indicativos de que a ivermectina causa poucos efeitos prejudiciais em aspectos reprodutivos de ratos e coelhos. / Ivermectin is a macrocyclic lactone used as a broad spectrum antiparasitic agent against nematelmints and arthropods. It is mainly used in the control of parasitic infections of domestic animals, and recently has been used in humans to treat onchocerciasis, scabies and pediculosis. In mammals, various evidences indicate that macrocyclic lactones interact with gamma-aminobutyric acid (GABA)-mediated chloride channels. It is known that the GABAergic system is involved in the manifestation of sexual behavior and previous studies have shown that ivermectin impaired sexual behavior in male and female rats. Thus, considering ivermectin may interfere with the sexual sphere, this study evaluated the temporal effects of exposure to ivermectin (0.2 and 1.0 mg/kg, administered subcutaneously) on reproductive and hormonal parameters of rats and rabbits. In rats it was evaluated organ weights of male and female, the gonadossomatic index of males, histopathological findings; the immunohistochemical of the androgen receptor in the testes; serum LH, FSH and testosterone concentrations; relative expression of steroidogenic pathway enzymes by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR); estrous cycle, reproductive performance and estradiol concentration in the feces of female rats. In male rabbits it was evaluated the spermatozoa concentration, motility and morphology; the integrity of the membranes plasmatic, acrosomal and mitochondrial of the spermatozoa; the organ weights, the gonadosomatic index; serum testosterone concentrations; histopathological findings; and hematological and serum biochemical analysis. The results showed that ivermectin administration in rats: not alter the relative weights of the testes, epididymis, prostate and seminal vesicle; not modified gonadosomatic index; caused damage in the germinal cells of the seminiferous epithelium of the testes, finding suggestive of impairment in spermatogenesis and male spermiogenesis; did not interfere with the androgen receptor expression of the testes, as well as the relative expression of enzymes of the steroidogenic pathway; did not interfere in the serum testosterone and FSH concentrations, but it decreased the serum LH concentration; did not interfere in the estrous cycle, reproductive performance and estradiol concentration in the feces of female rats. The results of male and female rats were discussed considering the interference of ivermectin in GABAergic neurotransmission as well as in the production pathway of pituitary-gonadal hormones. In rabbits, no changes were observed in male fertility parameters evaluated by spermatozoa concentration, motility and morphology, nor the potential for fertilization evaluated by the integrity of the membranes plasmatic, acrosomal and mitochondrial of the spermatozoa; there was no interference in serum testosterone concentration, serum biochemistry and hematological parameters. These results together are indicative that ivermectin causes few adverse effects on reproductive aspects of rats and rabbits.

O entendimento dos mecanismos de ação hormonal envolvidos com o crescimento do pêlo são de grande relevância na área médica e podem representar novas perspectivas no tratamento para distúrbios de crescimento de pêlos. A aromatase, enzima que converte androgênios em estrogênios, é uma das enzimas-chave relacionadas com o metabolismo intra-tecidual de hormônios sexuais. O objetivo desse estudo foi determinar a expressão gênica da enzima aromatase em folículos pilosos do vértice do escalpo de mulheres com ciclos regulares e ovulatórios e em pacientes com PCOS, verificando possíveis associações com variáveis hormonais e metabólicas dessas mulheres. Cinqüenta e quatro mulheres no menacme preencheram os critérios de inclusão (23 com PCOS e 31 com ciclos regulares e ovulatórios) e completaram avaliação antropométrica, hormonal e metabólica. Uma sub-amostra de 16 mulheres (11 com ciclos regulares e ovulatórios e 5 com PCOS) foi selecionada para coleta de folículos pilosos através da técnica do arrancamento. A expressão do gene da aromatase foi avaliada por PCR em tempo real, e os resultados foram normalizados em relação ao gene constitutivo b2-microglobulina. A expressão do gene da aromatase foi observada nos folículos pilosos da região do escalpo de mulheres dos dois grupos em estudo. A expressão deste gene foi de intensidade baixa e variável entre as amostras estudadas e não houve diferença estatisticamente significativa da relação dos genes aromatase/b2-microglobulina entre o grupo de mulheres com ciclos regulares [80 (35,31 – 138,25) e o grupo PCOS [52,11 (5,68 – 84,8), P = 0,157]. A expressão do gene da aromatase em folículos pilosos do escalpo de mulheres correlacionou-se negativamente e com significância estatística com os níveis séricos de LH (P = 0,008, r = -0,653) e esta correlação foi independente de testosterona ou SHBG. Esses resultados demonstram, pela primeira vez, que folículos pilosos da região do vértice do escalpo de mulheres expressam o gene da aromatase. A correlação negativa e independente de LH com a expressão gênica da aromatase pode estar refletindo o microambiente hormonal nos folículos pilosos e, em especial, o conjunto das alterações metabólicas e hormonais característico de pacientes com PCOS. É possível que a expressão gênica dessa enzima seja mais evidente na papila dérmica (porção dos folículos pilosos não analisada nesse estudo) e que a regulação do balanço estrogênico no metabolismo local não seja tão pronunciada na porção epitelial dos folículos pilosos que é obtida pela técnica do arrancamento. A análise da expressão protéica da enzima, a seleção de pacientes hirsutas de outras etiologias e de mulheres portadoras de alopecia, e a coleta de outras regiões pilosas hormônio-dependentes estão entre as perspectivas para a confirmação do padrão de expressão gênica da aromatase nos folículos pilosos. / The knowledge of hormonal mechanisms of action that are involved with hair growth is of great relevance on medical research and could represent new approaches on therapeutics for hair growth disturbs. Aromatase, the enzyme that converts androgens into estrogens, is one of the key enzymes related to sexual hormones metabolism and may act on different target tissues, like the hair follicle. The aim of this study was to determine the aromatase gene expression on hair follicles from the vertex portion of the scalp of women with regular and ovulatory cycles, and patients with PCOS. We were also interested on the possible association among the gene expression and hormonal/metabolic parameters of these women. Fifty-four women at reproductive age were included (23 with PCOS and 31 with regular and ovulatory cycles), and were submitted to anthropometric, hormonal, and metabolic evaluation. A minor group of 16 women (11 with regular and ovulatory cycles and 5 with PCOS) were selected for hair follicle’s molecular analysis, using the plucking technique. Aromatase gene expression was analyzed by using real time PCR, and the results were normalized with the housekeeping gene b2-microglobuline. Aromatase gene expression was observed at the scalp’s hair follicles from the two groups of women. The intensity of the gene expression was low and variable among the samples. There was not a statistically significant difference between the women with regular cycles [80 (35,31 – 138,25) and patients with PCOS [52,11 (5,68 – 84,8), P = 0,157]. Aromatase gene expression in the plucked hairs from the vertex portion of the scalp of women was negatively correlated with circulating LH levels (P = 0,008, r = -0,653), and was also independent of testosterone or SHBG levels. The present results show, for the first time, that plucked hairs from the vertex portion of the scalp of women express the gene of aromatase. The negative and independent correlation between LH and aromatase gene expression may reflect the hormonal microenvironment of the hair follicle, and also the hormonal and metabolic alterations characteristics of women with PCOS. Aromatase gene expression may be more evident at the dermal papilla (not analyzed in this study), and the local metabolism could not be so pronounced on the epithelial portion of hair follicles, when obtained by the plucking method. Aromatase protein expression, plucked hair from other hormone-dependent areas and from women with other clinical conditions like androgenetic alopecia, are some of the perspectives for the confirmation of the pattern of aromatase gene expression on hair follicles.

O entendimento dos mecanismos de ação hormonal envolvidos com o crescimento do pêlo são de grande relevância na área médica e podem representar novas perspectivas no tratamento para distúrbios de crescimento de pêlos. A aromatase, enzima que converte androgênios em estrogênios, é uma das enzimas-chave relacionadas com o metabolismo intra-tecidual de hormônios sexuais. O objetivo desse estudo foi determinar a expressão gênica da enzima aromatase em folículos pilosos do vértice do escalpo de mulheres com ciclos regulares e ovulatórios e em pacientes com PCOS, verificando possíveis associações com variáveis hormonais e metabólicas dessas mulheres. Cinqüenta e quatro mulheres no menacme preencheram os critérios de inclusão (23 com PCOS e 31 com ciclos regulares e ovulatórios) e completaram avaliação antropométrica, hormonal e metabólica. Uma sub-amostra de 16 mulheres (11 com ciclos regulares e ovulatórios e 5 com PCOS) foi selecionada para coleta de folículos pilosos através da técnica do arrancamento. A expressão do gene da aromatase foi avaliada por PCR em tempo real, e os resultados foram normalizados em relação ao gene constitutivo b2-microglobulina. A expressão do gene da aromatase foi observada nos folículos pilosos da região do escalpo de mulheres dos dois grupos em estudo. A expressão deste gene foi de intensidade baixa e variável entre as amostras estudadas e não houve diferença estatisticamente significativa da relação dos genes aromatase/b2-microglobulina entre o grupo de mulheres com ciclos regulares [80 (35,31 – 138,25) e o grupo PCOS [52,11 (5,68 – 84,8), P = 0,157]. A expressão do gene da aromatase em folículos pilosos do escalpo de mulheres correlacionou-se negativamente e com significância estatística com os níveis séricos de LH (P = 0,008, r = -0,653) e esta correlação foi independente de testosterona ou SHBG. Esses resultados demonstram, pela primeira vez, que folículos pilosos da região do vértice do escalpo de mulheres expressam o gene da aromatase. A correlação negativa e independente de LH com a expressão gênica da aromatase pode estar refletindo o microambiente hormonal nos folículos pilosos e, em especial, o conjunto das alterações metabólicas e hormonais característico de pacientes com PCOS. É possível que a expressão gênica dessa enzima seja mais evidente na papila dérmica (porção dos folículos pilosos não analisada nesse estudo) e que a regulação do balanço estrogênico no metabolismo local não seja tão pronunciada na porção epitelial dos folículos pilosos que é obtida pela técnica do arrancamento. A análise da expressão protéica da enzima, a seleção de pacientes hirsutas de outras etiologias e de mulheres portadoras de alopecia, e a coleta de outras regiões pilosas hormônio-dependentes estão entre as perspectivas para a confirmação do padrão de expressão gênica da aromatase nos folículos pilosos. / The knowledge of hormonal mechanisms of action that are involved with hair growth is of great relevance on medical research and could represent new approaches on therapeutics for hair growth disturbs. Aromatase, the enzyme that converts androgens into estrogens, is one of the key enzymes related to sexual hormones metabolism and may act on different target tissues, like the hair follicle. The aim of this study was to determine the aromatase gene expression on hair follicles from the vertex portion of the scalp of women with regular and ovulatory cycles, and patients with PCOS. We were also interested on the possible association among the gene expression and hormonal/metabolic parameters of these women. Fifty-four women at reproductive age were included (23 with PCOS and 31 with regular and ovulatory cycles), and were submitted to anthropometric, hormonal, and metabolic evaluation. A minor group of 16 women (11 with regular and ovulatory cycles and 5 with PCOS) were selected for hair follicle’s molecular analysis, using the plucking technique. Aromatase gene expression was analyzed by using real time PCR, and the results were normalized with the housekeeping gene b2-microglobuline. Aromatase gene expression was observed at the scalp’s hair follicles from the two groups of women. The intensity of the gene expression was low and variable among the samples. There was not a statistically significant difference between the women with regular cycles [80 (35,31 – 138,25) and patients with PCOS [52,11 (5,68 – 84,8), P = 0,157]. Aromatase gene expression in the plucked hairs from the vertex portion of the scalp of women was negatively correlated with circulating LH levels (P = 0,008, r = -0,653), and was also independent of testosterone or SHBG levels. The present results show, for the first time, that plucked hairs from the vertex portion of the scalp of women express the gene of aromatase. The negative and independent correlation between LH and aromatase gene expression may reflect the hormonal microenvironment of the hair follicle, and also the hormonal and metabolic alterations characteristics of women with PCOS. Aromatase gene expression may be more evident at the dermal papilla (not analyzed in this study), and the local metabolism could not be so pronounced on the epithelial portion of hair follicles, when obtained by the plucking method. Aromatase protein expression, plucked hair from other hormone-dependent areas and from women with other clinical conditions like androgenetic alopecia, are some of the perspectives for the confirmation of the pattern of aromatase gene expression on hair follicles.

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Localizado nesse complexo estuarino, está o Porto marítimo mais movimentado da América Latina e um dos mais importantes pólos petroquímicos do país. Nessa região o tratamento de esgoto sanitário é praticamente inexistente (cobrindo aproximadamente 20% de toda população), não havendo estudos sobre a ocorrência ambiental e a dinâmica de estrógenos ou outros alteradores endócrinos no local. Por outro lado, frequentemente os estudos ambientais existentes sobre a ocorrência de contaminantes, negligenciam a confiabilidade analítica. Frente à esse cenário, o presente estudo apresenta a determinação de estrógenos (17α–etinilestradiol (EE2), 17β-estradiol (E2) e estriol (E3)) em água do mar com alta confiabilidade, utilizando método baseado em extração em fase sólida (SPE) e análise por HPLC-FLD, com o uso de ferramentas estatísticas para a modelagem da curva analítica, avaliação do efeito matriz e estudo de conservação dos cartuchos SPE após a eluição da amostra. O processo de validação analítica mostrou valores adequados de recuperação (76-94%, para diferentes concentrações de EE2, E2 e E3), precisão (coeficiente de variação menor que 20%) e seletividade. Os limites de deteção do método para o EE2, E2 e E3 foram respectivamente de 9,7, 2,3 e 4,3 ng L-1. Cinco curvas analíticas para cada composto foram utilizadas para avaliar o efeito matriz, sendo as soluções padrões preparadas em solvente (acetonitrila), água marinha artificial (S=30) e agua marinha, sendo para essas últimas, os padrões adicionados hora antes da extração, hora após a eluição da amostra no cartucho. Para o preparo de cada curva analítica foram utilizados seis concentrações diferentes dos padrões, sendo as curvas analíticas refeitas para cada amostragem realizada. O modelo teve por base a regressão linear, utilizando ajuste por mínimos quadrados, sendo o mesmo avaliado por análise de variância (ANOVA). Os resultados mostraram efeito matriz para todos os analitos. A conservação dos analitos nos cartuchos SPE foram avaliados para 6; 22; 29; 55 e 80 dias, e os resultados evidenciaram que não houve diferença significativa entre eles. Foram realizadas três amostragens no estuário de Santos-São Vicente, em março de 2014 (12 pontos amostrais de superfície), e fevereiro e junho de 2015 (com 15 pontos amostrais de superfície e 6 pontos amostrais de águas de fundo, na baía de Santos). Os valores de concentração para o estriol (mais frequentemente encontrado) variaram entre ND-354 ng L-1, para o 17β-estradiol de nd-18 ng L-1 enquanto o 17α–etinilestradiol não foi quantificado em nenhuma das amostras. Não foram observadas diferenças entre as amostragens nas diferentes estações do ano, sendo as maiores variações de concentrações observadas no âmbito de diferentes comportamentos de maré (sizígia e quadratura). No geral, os valores de concentrações encontrados para o estriol e estradiol podem acarretar riscos aos organismos aquáticos quando os mesmos são expostos à esses alteradores por longos períodos. / Southeast is the Brazilian most populated region. Santos-São Vicente estuary, located there, includes c.a. 1.5 million inhabitants, one of the most important Brazilian petrochemical sites and the bigger harbor from Latin America. In this region, the sewage treatment is almost inexistent (covers c.a. 20% of all population), nevertheless there are not studies about the occurrence and environmental dynamics of estrogens or others endocrine disruptors there. On the other hand, the analytical reliability in environmental studies have been frequently neglected. Thus, this work presents a reliability evaluation for estrogens (EE2, E2 and E3) determination in marine water, using a method based in solid phase extraction (SPE) and HPLC-FLD analysis, statistical tools were used to accomplish the calibration curve, storage time of SPE cartridges after sample elution and matrix effects. The analytical validation process showed adequate selectivity, recovery (76-94%, for different concentrations of EE2, E2 and E3) and precision (RSD below 20%). The method detection limit for EE2, E2 and E3 was 10, 2 and 4 ng L-1, respectively. Five analytical curves for each compound were used to evaluate the matrix effect wherein the standard solutions were prepared in solvent (acetonitrile, or on the SPE extract from artificial seawater (S=30) or in natural seawater). Additionally, for artificial and natural seawater, the standards were spiked to matrix before the SPE. All standard solution contained all the studied estrogens, at the same concentration, for each curve it was used six standards concentrations. Model fitting was done by linear regression models, using ANOVA to evaluate the fittings. The results showed matrix effects for all analytes, thus matrix-matched (natural seawater) analytical curves were used at the following method validation steps. SPE cartridges storage time (after sample loading) was studied for 6, 22, 29, 55 and 80 storage days, data demonstrated no significant differences for these storage times. Three sampling was made at Santos estuary, in march 2014, february 2015 and june 2015, with 15 samples collected each. Estriol (E3) concentrations ranging ND-354 ng L-1, estradiol (E2) ND-18 ng L-1 while 17α–ethynylestradiol (EE2) were not detectable in any samples (below method LOQ). Overall, estriol concentration are above no-observed-effect concentrations from long-term exposition, which can lead to risk for aquatic organisms.