Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Texto liberado parcialmente pelo autor. Conteúdo restrito: Materiais e métodos, Resultados e Discussão e Conclusão. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-12-19T14:08:42Z No. of bitstreams: 1 2016_IveloneMariadeCarvalhoBarros_Parcial.pdf: 953689 bytes, checksum: f204c06d417a89fd6d9e8a53859ca3ce (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-26T19:19:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_IveloneMariadeCarvalhoBarros_Parcial.pdf: 953689 bytes, checksum: f204c06d417a89fd6d9e8a53859ca3ce (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-26T19:19:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_IveloneMariadeCarvalhoBarros_Parcial.pdf: 953689 bytes, checksum: f204c06d417a89fd6d9e8a53859ca3ce (MD5) / O Cerrado se constitui em importante centro de biodiversidade abrigando espécies úteis para a medicina popular., entre elas o Erythroxylum suberosum, arbusto da família Erythroxylacea amplamente distribuído no território nacional. Seus frutos servem de alimento para aves, seu tronco é suberoso, sua madeira é utilizada na carpintaria e suas cascas são utilizadas no curtimento de couro. É conhecido como fruta-de-pomba-do-campo, mercureiro, sombra de touro e cabelo de nego, utilizado na medicina popular contra má digestão, reumatismo e inflamação. O presente estudo teve como objetivo realizar estudo químico, de espécie do gênero Erythroxylum, biomonitorado por inibição da hialuronidase. No ensaio de inibição enzimática foi utilizado método turbidimétrico, com adaptações. Os compostos foram isolados por CC de Sílica gel ou Sephadex e identificados por CCD, CLAE-DAD, e RMN de 1H e 13C. O extrato etanólico de E. suberosum apresentou forte potencial de inibição com IC50 = 0,045 mg/mL, significantemente menor que o controle Cromoglicato dissódico (IC50 = 4,8 mg/mL). Do extrato etanólico foram identificados rutina, quercetina e derivados, catequina, epicatequina e derivados do ácido clorogênico e isolada mistura de hiperosídeo e isoquercitrina. Do extrato aquoso foi identificada mistura de frutose e trealose, catequina e epicatequina e isolada rutina. Do extrato hexânicos foram isolados ésteres alifáticos de cadeia longa. A atividade dos extratos e frações frente à enzima foi justificada, em parte, pela presença da quercetina (IC50 = 0,36 mg/mL). A atividade antioxidante observada para os extratos aquoso, etanólico e frações foi relacionada à composição micromolecular dos mesmos. Os extratos brutos de E. suberosum não foram citotóxicos frente às larvas de A. salina com DL50 > 1mg/mL. Esses resultados revelam o potencial de E. suberosum no elenco de espécies brasileiras farmacologicamente úteis. A descoberta de novos inibidores da hialuronidase representam um avanço na terapêutica já que o complexo hialuronano-hialuronidase está envolvido em vários processos fisiopatológicos. Esse foi o primeiro relato, pelo que se sabe, de inibição da hialuronidase pelos extratos e flavonoides isolados das folhas de E. suberosum. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cerrado consists in an important center of biodiversity hosting species uesful for folk medicine, among which is Erythroxylum suberosum, a bush from Erythroxylacea family, widely spread thoughout national territory. Its fruits serve as food to birds, its trunk is suberous, its wood is used in carpentry, and its barks are used in leather tanning. It is well known as fruta-de-pomba-do-campo, mercureiro, sombra de touro and cabelo de nego, used in folk medicine against indigestion, rheumatism and inflammation. The current study aimed to carry out chemical study of species of Erythroxulum genus bioguided by inhibition of hyaluronidase enzyme. In the enzyme inhibition assay was used turbidimetric method, with adaptations. The compounds were isolated by Sílica gel or Sephadex® CC and identified by TLC, HPLCDAD and NMR of 1H and 13C.The ethanolic extract of E. suberosum presented high potential for inhibition with IC50 = 0,045 mg/mL, significantly less than the dissodium cromoglycate control (IC50 = 4,8 mg/mL). Were identified rutin, quercetina and derivates, catechin, epicathechin and derivates of chlorogenic acid and isolated mixture of hyperoside and isoquercitrina from the ethanolic extract. From aqueous extract Rutin was isolated and a mixture of fructose and trehalose sugars, catechin and epicatechin was identified. Of the hexane extract were isolated aliphatic esters of long chain. The activity of the extracts and fractions front of the enzyme hyaluronidase was justified, in part, due to the presence of quercetina (IC50 = 0,36 mg/mL). The antioxidante activity observed for the aqueous and ethanolic extracts and fractions was associated to chemical composition of the same. The crude extracts from the E. suberosum were not citotoxic to brin shrimp (A. salina) with DL50 > 1mg/mL. These results show the potential of E. suberosum in the listo f pharmacologically useful brazilian species. The Discovery of new hyaluronidase inhibitors represent na advance in the Therapeutic due to the hyaluronan-hyaluronidasse complex is involved in seveeral pathophysiological processes. This was the first report, by what is know, inhibition of hyaluronidase enzyme by extracts and flavonoids isolated from the leaves of E. suberosum.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-01-27T14:18:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Michelle Nauara Gomes do Nascimento - 2014.pdf: 1938197 bytes, checksum: a67bc5040425a846cdd4a7a73cefa5cd (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-01-28T12:06:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Michelle Nauara Gomes do Nascimento - 2014.pdf: 1938197 bytes, checksum: a67bc5040425a846cdd4a7a73cefa5cd (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-28T12:06:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Michelle Nauara Gomes do Nascimento - 2014.pdf: 1938197 bytes, checksum: a67bc5040425a846cdd4a7a73cefa5cd (MD5) Previous issue date: 2014-07-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This work describes the chemical study of E. suberosum, aiming to elucidate structures of secondary metabolites in the leaves, stem and roots. Cathepsins assays were used to evaluate in vitro activity of extracts, fractions and isolated compounds, using fluorogenic substrate ZFR-MCA. These enzymes, also known as lysossomal cysteine peptidases are involved in many physiological processes, and are associated with many pathological conditions. Cathepsins K, L and V are involved in the development of diseases such as osteoporosis, skin cancer and atherosclerosis, respectively. Based on pathological processes in which cathepsins are involved, the search for specific inhibitors can be a new approach for the treatment these diseases. The study of ethanolic extract from leaves led to the identification of four flavonoids belonging to the flavonol class: quercetin and its derivatives 3-O-monoglycosides hyperin and isoquercitrin, and 3-O-diglycosides, ombuin-3-rutinoside, all previously reported for this species. The mixture of flavanols, catechin and epicatechin were isolated from ethanolic extract from roots, besides the fatty ester of sitosterol. The mixture of steroids campesterol, stigmasterol and β-sitosterol were identified from the stem extract. This study also suggests the presence of tropane alkaloids, tropacocaine and nortropacocaine, in the ethanolic extract from leaves of E. suberosum, reported for the first time in this species. In the evaluation for cathepsins K, L and V, the extracts (concentration of 50 mg/mL), showed significant inhibition of all enzymes with percentage inhibition values above 60%. The fractions showed significant activity against cathepsin V and L when evaluated at concentrations of 5 and 50 mg/mL. The quercetin flavonol showed IC50 value of 2.2 ± 0.2 μM against cathepsin V and low affinity for cathepsins K and L (100 μM). This is an important result since literature reports for flavonoids as inhibitors of cathepsin V are quite limited. / O presente trabalho descreve o estudo químico de E. suberosum, no intuito de elucidar estruturas de metabólitos secundários presentes nas folhas, caule e raiz, além de avaliar, por meio de teste in vitro, a atividade dos extratos, frações e, quando possível das substâncias isoladas, em busca de inibidores de catepsinas utilizando como ferramenta o substrato fluorogênico ZFR-MCA. Estas enzimas, também conhecidas como cisteíno peptidases lisossomais, estão envolvidas em diversos processos fisiológicos, além de estarem associadas a muitas condições patológicas, estando as catepsinas K, L e V, envolvidas no desenvolvimento de doenças como osteoporose, câncer de pele e aterosclerose, respectivamente. Baseado nos processos patológicos em que estas catepsinas estão envolvidas, a busca de inibidores específicos pode ser uma nova abordagem para o tratamento destas doenças. O estudo do extrato etanólico das folhas levou a identificação de quatro flavonoides pertencentes à classe dos flavonois, sendo estes a quercetina e seus derivados 3-Omonoglicosídeos hiperina e isoquercitrina e 3-O-diglicosídeo, ombuina-3- rutinosídeo, todos já relatados para esta espécie. Do extrato etanólico da raiz, foi isolada a mistura dos flavanois catequina e epicatequina, além do éster graxo do β-sitosterol. No caule foram identificados a mistura dos esteroides campesterol, estigmasterol e β-sitosterol. Este estudo também sugere a presença dos alcaloides tropanos, tropacocaína e nortropacocaína no extrato etanólico das folhas, sendo estes relatados pela primeira vez na espécie. Nos ensaios frente às catepsinas K, L e V, todos os extratos apresentaram inibição superior a 60% quando avaliados na concentração de 50 μg/mL. Já as frações oriundas da partição líquido-líquido, apresentaram inibição mais expressiva frente às catepsinas V e L, quando avaliadas nas concentrações de 5 e 50 μg/mL. O flavonol quercetina apresentou um valor de IC50 de 2,2 ± 0,2 μM para a catepsina V e baixa afinidade para as catepsinas K e L quando avaliado na concentração de 100 μM. Este é um resultado importante, uma vez que os relatos na literatura para flavonoides como inibidores de catepsinas são bastante restritos.

Submitted by Nivaldo Melo (nivaldo.melo@ufvjm.edu.br) on 2015-11-30T16:16:22Z No. of bitstreams: 2 fernanda_fatima_souza_oliveira.pdf: 23893831 bytes, checksum: 83241a9677985b444fbd581bcc90b706 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-12-03T15:55:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 fernanda_fatima_souza_oliveira.pdf: 23893831 bytes, checksum: 83241a9677985b444fbd581bcc90b706 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-03T15:55:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 fernanda_fatima_souza_oliveira.pdf: 23893831 bytes, checksum: 83241a9677985b444fbd581bcc90b706 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2014 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (Capes) / No s?culo XIX o Brasil foi visitado por naturalistas europeus, atra?dos pelas riquezas naturais do pa?s. O franc?s Saint-Hilaire, em sua obra Plantas Usuais dos Brasileiros descreveu plantas que eram usadas pelos habitantes da regi?o norte/nordeste de Minas Gerais. Dentre estas, encontra-se a Erythroxylum suberosum A. St.-Hil. (Erythroxylaceae), conhecida popularmente como ?galinha-choca? e ?merc?rio do campo?, abundante nas proximidades da cidade de Diamantina (MG). Os objetivos do presente trabalho foram o resgate de informa??es sobre as esp?cies bot?nicas descritas por Saint-Hilaire no norte/nordeste de Minas Gerais, no s?culo XIX, inclu?das em sua obra Plantas usuais dos brasileiros e a realiza??o de estudo fitoqu?mico e determina??o da atividade antioxidante de extratos das folhas de E. suberosum. Foram realizadas pesquisas em herb?rios virtuais para detec??o de coletas, nos s?culos XIX, XX e XXI, de quinze esp?cies descritas por Saint-Hilaire no norte/nordeste de Minas Gerais, em sua obra. Estas informa??es foram usadas no direcionamento de coletas destas esp?cies na regi?o de Diamantina e na verifica??o da ocorr?ncia atual de tais plantas. Algumas esp?cies s?o encontradas, ainda na atualidade, nos locais citados pelo naturalista ou em localidades muito pr?ximas: quatro, das quinze esp?cies encontradas por Saint-Hilaire, foram coletadas e georreferenciadas nas proximidades de Diamantina. Para realiza??o de estudo fitoqu?mico e determina??o de atividade antioxidante, as folhas de E. suberosum foram coletas em Diamantina-MG. O material, seco e pulverizado, foi usado para macera??o com os solventes hexano, acetato de etila e etanol e extra??o pelo M?todo Stas-Otto, para pesquisa de alcaloides. A triagem fitoqu?mica dos extratos sugeriu a presen?a de alcal?ides, cumarinas, flavonoides (incluindo antocianidinas), taninos condensados e triterpenos/esteroides e an?lises por CLAE/DAD sugeriram a presen?a de compostos fen?licos nas amostras. Os extratos preparados pelo M?todo Stas-Otto foram analisados por CG/EM, sendo sugerida a presen?a de 23 subst?ncias, dentre as quais encontrase o alcaloide trop?nico tropacoca?na. Quanto ? atividade antioxidante os extratos de E. suberosum, quando comparados ao padr?o (?cido g?lico), n?o apresentaram pronunciada atividade de retirada de radical DPPH; no entanto, o extrato etan?lico apresentou uma maior quantidade de fen?licos totais, maior poder de redu??o do ?on met?lico Fe3+ e maior capacidade antioxidante pela an?lise por voltametria c?clica. Assim este trabalho contribuiu para a recupera??o e disponibiliza??o de informa??es sobre plantas ?teis coletadas por naturalistas europeus no norte/nordeste de Minas Gerais e para o conhecimento sobre a composi??o qu?mica e atividade antioxidante da esp?cie E. suberosum. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2014. / ABSTRACT In 19th century the Brazil was visited by European naturalists, attracted by the country's natural resources. The French Saint-Hilaire, in his book Useful Brazilian plants described plants that were used by the residents of the north /northeast region of Minas Gerais. Among these is Erythroxylum suberosum A. St.-Hil. (Erythroxylaceae), popularly known as "galinha choca" and "merc?rio do campo" abundant near the city of Diamantina ( MG ). The objectives of this study were the rescue of the information about botanical species described by Saint- Hilaire in the north/northeast of Minas Gerais, in the 19th century, included in his Useful Brazilian plants and realization of phytochemical study and determination of the activity antioxidant of the extracts of the leaves of E. suberosum. Researches were conducted in virtual herbarium for detection of collections in 19th, 20th and 21th centuries of fifteen species described by Saint-Hilaire in the north/northeast of Minas Gerais, in his book. This information was used in targeting these species collected in the region of Diamantina and verify the actual occurrence of this plants. Some species are found, even today, in the places cited by the naturalist or very nearby localities. Four species found near Diamantina were collected and georeferenced. To perform phytochemical study and determination of antioxidant activity, the leaves of E. suberosum were collected in Diamantina-MG. The material, dried and pulverized, was used for maceration with the solvents hexane, ethyl acetate and ethanol and extraction by Stas-Otto method, for the detection of alkaloids. The phytochemical screening of the extracts suggested the presence of alkaloids, coumarins, flavonoids (including anthocyanins), condensed tannins and triterpenes/steroids. The extracts prepared by Stas-Otto method were analyzed by GC/MS, being suggested the presence of 23 substances, among which is the tropane alkaloid tropacocaine. As for antioxidant activity the extracts of E. suberosum, when compared to standard (galic acid), showed no pronounced activity withdrawing DPPH radical; however, the ethanolic extract showed a higher content of phenolic compounds and greater power reduction of Fe3+ metal ion and greater antioxidant potential in assay performed by cyclic voltammetry. Thus this work contributed to the recovery and availability of information on useful plants collected by European naturalists in the north /northeast of Minas Gerais and the knowledge of the chemical composition and antioxidant activity of the species E. suberosum.