Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2007. / Submitted by Luis Felipe Souza (luis_felas@globo.com) on 2008-11-20T17:08:04Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_2007_BrunoArrivabeneCordeiro.pdf: 3457427 bytes, checksum: d1f3ce112f52ac941c0578ad24456bda (MD5) / Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2009-02-04T16:13:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_2007_BrunoArrivabeneCordeiro.pdf: 3457427 bytes, checksum: d1f3ce112f52ac941c0578ad24456bda (MD5) / Made available in DSpace on 2009-02-04T16:13:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_2007_BrunoArrivabeneCordeiro.pdf: 3457427 bytes, checksum: d1f3ce112f52ac941c0578ad24456bda (MD5) / Os túbulos de Malpighi constituem o principal órgão excretor de insetos. Suas funções vão além da excreção, podendo participar da desintoxicação e resposta imune do inseto. A infecção por baculovírus com deleção em seu gene egt em larvas de lepidópteros promove uma degeneração precoce dos túbulos, com conseqüente melhor atividade do baculovírus, resultando em uma redução no tempo de morte das larvas. Porém, não são observados indícios de infecção nas células dos túbulos. O gene ecdysteroid udp-glucosyltransferase (egt) codifica a enzima EGT que é responsável pela transferência de unidades de UDP-galactose ou UDP-glicose para a ecdisona, inativando-a. Utilizando baculovírus AgMNPV recombinantes contendo genes marcadores egfp ou lacZ, analisou-se as alterações causadas nos túbulos de Malpighi de A. gemmatalis, utilizando microscopia de luz e eletrônicas de transmissão (MET) e varredura (MEV). Verificou-se a relação destas alterações com a ausência do gene egt e/ou presença de um gene marcador. Realizou-se um bioensaio para comparar a atividade dos baculovírus entre si. As infecções pelos baculovírus causaram alterações visíveis a partir de 24 horas pós-infecção em microscopia de luz, sendo possível observar as proteínas marcadoras presentes em células traqueolares e em regiões dos túbulos associadas às mesmas. Com o avanço da infecção, as proteínas marcadoras apresentaram-se em maiores proporções e a degeneração dos túbulos aumentou. Em MET, observou-se um aumento progressivo da desorganização das microvilosidades, alterações nos espaços citoplasmáticos, nas invaginações basais e mitocôndrias, deformações da lâmina basal, secreções apócrinas e morte celular, conforme o progresso da infecção. Por sua vez, em MEV, observou-se mudanças na superfície, a qual apresentou aspecto flácido e ressecado, reentrâncias, protuberâncias, poros e cristais conforme a progressão da infecção. No entanto, em nenhuma das análises por microscopia, observou-se indícios de infecção nas células dos túbulos de Malpighi. Os resultados mostraram uma melhor atividade dos baculovírus contendo lacZ em relação aos que contém egfp, sendo que a ausência de egt implicou em maior intensidade e velocidade das alterações. O tempo médio de morte (LT50) calculado a partir do bioensaio para os diferentes vírus revelou melhor atividade dos recombinantes contendo lacZ, sendo que o recombinante contendo egt se mostrou mais eficaz. Devido à ausência de indícios de infecção nas células dos túbulos, acredita-se que a degeneração dos mesmos é provocada indiretamente pela infecção. A morte das células dos túbulos pode estar relacionada à oncose, que pode ser provocada pela depleção das reservas energéticas, e também à apoptose, que pode ser ativada pelo acúmulo das proteínas marcadoras EGFP e LacZ. A ausência do gene egt pode estar resultando em um maior gasto energético pelo hospedeiro, agravando o processo de morte celular que está ocorrendo nos túbulos de Malpighi, resultando em redução no tempo de morte do hospedeiro. ___________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Malpighian tubules constitute the main excretion organ of insects. Its functions go beyond excretion and may play a role in detoxification and immune defense of the insect. The infection by baculoviruses with their egt gene deleted in lepidopteron larvae promotes an early degeneration of the tubules with consequent better baculovirus activity resulting in reduction of the larvae time of death. However, there was no trace of infection in the tubules cells. The ecdysteroid udp-glucosyltransferase (egt) gene encodes the EGT enzyme, which is responsible for the transfer of UDP-galactose or UDP-glucose units to the ecdisone, inactivating it. Using AgMNPV recombinant baculoviruses containing egfp or lacZ, the alterations caused in the Malpighian tubules of A. gemmatalis were analyzed by light microscopy and transmission (TEM) and scanning (SEM) electronic microscopies. The relationship of the alterations observed with the absence of the egt gene and/or presence of a marker gene was verified. A bioassay was made to compare the baculoviruses activities among them. The infections by the baculoviruses caused visible alterations from 24 hours post-infection by light microscopy, being possible to observe the marker proteins in the tracheolar cells and regions of the tubules associated with them. As the infection advanced, the marker proteins appeared in higher proportions and the degeneration of the tubules increased. In TEM, a progressive increase was observed in the disorganization of the microvilli, alterations in cytoplasmic spaces, basal infolds and mitochondria, deformations in the basal lamina, apocrine secretions and cell death, accordingly to the progress of the infection. Meanwhile, in SEM, changes in the surface as a loose and parched aspect, reentrances, protuberances, pores and crystals, were observed according to the progression of infection. However, there was no trace of infection in the cells of the Malpighian tubules by the microscopic analyses. The results showed best activity for the baculoviruses containing lacZ compared to the ones containing egfp and the absence of egt implied in higher intensity and speed of the alterations. The mean time to death (LT50) calculated for the different baculoviruses revealed best activity of the recombinants containing lacZ but the recombinants containing egt were more pathogenic. Due to the absence of vestiges of infection in the tubules cells, it is believed that the degeneration of the tubules is provoked by infection indirectly. The cell death in the tubules might be related to oncosis, which may be activated by depletion of energy reserves and also related to apoptosis, which may be activated by accumulation of EGFP and LacZ. The absence of egt gene might be resulting in a higher energetic expense by the host, aggravating the cell death process that is taking place in the Malpighian tubules, resulting in reduction of host time of death.

O rim é tanto um órgão-alvo como a principal fonte de produção de ET-1, peptídio que regula a excreção de Na+ e água por este órgão que expressa os seus respectivos receptores, ETA e ETB, além dos trocadores NHE1 e NHE3 que são essenciais para o equilíbrio ácido base e hidroeletrolítico das células. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar, em células IRPTC, o papel de ET-1 na atividade dos trocadores NHE1 e NHE3. Nossos resultados indicam que o tratamento agudo com ET-1 (10-9 M) aumenta a velocidade de recuperação do pHi (dpHi/dt) nos dois primeiros minutos após o pulso ácido, sugerindo aumento na atividade dos trocadores NHE1 e NHE3, que ocorre via ativação dos receptores ETA e ETB e parece ser secundária à atividade da p90RSk e p38MAPK. O tratamento crônico com ET-1 (10-9 M) reduz a dpHi/dt nos dois primeiros minutos após o pulso ácido, o que sugere redução na atividade dos trocadores NHE1 e NHE3, que pode ser secundária à inibição da Na+, K+-ATPase por ET-1. / The kidney is both a target organ and the main source of ET-1 production, a peptide that regulates the excretion of Na+ and water by this organ that expresses its respective receptors, ETA and ETB, in addition to the NHE1 and NHE3 exchanger which are Essential for the basic acid and electrolyte balance of cells. Thus, the objective of this study was to investigate, in IRPTC cells, the role of ET-1 in the activity of the NHE1 and NHE3 exchanger. Our results indicate that the acute treatment with ET-1 (10-9 M) increases the rate of recovery of pHi (dpHi/dt) in the first two minutes after the acid pulse, suggesting an increase in the activity of the NHE1 and NHE3 exchanger, which occurs via activation Of ETA and ETB receptors and appears to be secondary to the activity of p90RSk and p38MAPK. Chronic treatment with ET-1 (10-9 M) reduces dpHi/dt in the first two minutes after the acid pulse, suggesting a reduction in NHE1 and NHE3 exchanger activity, which may be secondary to inhibition of Na+, K+- ATPase by ET-1.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-05-24T13:16:05Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1295210 bytes, checksum: 4ce6920b272a35167656916056179c03 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-24T13:16:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1295210 bytes, checksum: 4ce6920b272a35167656916056179c03 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Plantas medicinais dominam a farmacologia por proverem várias fontes de remédios e assim, a mesma espécie de planta pode ter compostos que melhoram e compostos que prejudicam a espermatogênese. Dianthus caryophyllus apresenta ação antibiótica, antifúngica, antiviral, antioxidativa, sedativa e tranquilizante. Teve ação no controle da pressão arterial em ratos e possível efeito antiurolítico, porém nenhum estudo foi feito para avaliar seus efeitos na reprodução. Assim, esse estudo visou avaliar o efeito do extrato aquoso da flor de Dianthus caryophyllus (EADC) nos testículos de camundongos Balb/c, além da resposta de enzimas antioxidante à planta. Quarenta e oito animais foram distribuídos aleatoriamente em seis grupos experimentais (n=8): G1 (Controle), G2 (Viagra), G3, G4, G5 receberam diariamente 10, 20, 40 mg/kg de EADC, respectivamente, e o G6 recebeu EADC 40mg/kg em dias alternados. Foram realizadas análises morfométricas e estereológicas do parênquima testicular, avaliação de alterações estruturais do tecido, atividade das enzimas catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa S-transferase (GST), além da concentração de malondialdeido (MDA) e de óxido nítrico (ON) nos testículos. Houve redução do diâmetro, proporção, volume e área do lúmem tubular, aumento da proporção e área de epitélio seminífero em todos os grupos tratados com a planta, sendo que o diâmetro tubular reduziu apenas em G5. Houve redução da proporção de túbulos seminíferos normais e aumento de vacúolos em todos os grupos. No intertúbulo houve aumento de tecido conjuntivo em G5. A proporção de células de Leydig aumentou apenas em G6, assim como o volume das células de Leydig por grama de testículo no mesmo grupo. O número de células de Leydig por testículo aumentou apenas em G6, enquanto por grama de testículo houve aumento em G5 e G6. Quanto à volumetria dos componentes, houve aumento do volume de tecido conjuntivo em G4, G5 e G6. Houve aumento de CAT em G5 e G6 e de MDA em todos os grupos tratados. Pode-se inferir que houve aumento da produção espermática em todos os grupos, no intertúbulo nota-se mais efeitos em Leydig e tecido conjuntivo principalmente nos grupos G5 e G6 e que a planta gera estresse oxidativo. / Medicinal plants dominate pharmacology by providing various sources of medicines and thus, the same plant species may have components that improve and impair spermatogenesis. Dianthus caryophyllus has antibiotic, antifungal, antiviral, antioxidative, sedative and tranquilizing actions. It had action in controlling blood pressure in rats and possible antiurolithic effects, but no study was done to evaluate its effects on reproduction. The aim of this study was evaluate the effect of the aqueous extract of the Dianthus caryophyllus flowers (AEDC) on the testis of Balb/c mice and the antioxidant enzyme response to the plant. 48 animals were randomly distributed in six experimental groups (n = 8): G1 (Control), G2 (Viagra), G3, G4, G5 received daily 10, 20, 40 mg / kg AEDC respectively and G6 40 G / AEDC 40mg / kg every other day. Morphometric and stereological analyzes of the testicular parenchyma, evaluation of tissue structural alterations, activity of catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione S-transferase (GST), and malondialdehyde (MDA) and oxide nitric oxide (ON) in the testicles. There was a reduction in the diameter, proportion, volume and area of the tubular lumen, increase in the proportion and area of seminiferous epithelium in all groups treated with the plant, and reduction of tubular diameter only in G5. There was a reduction in the proportion of normal seminiferous tubules and increase of vacuoles in all groups. In the intertubular compartment there was reduction in the proportion of lymphatic space as well as increase of connective tissue in all the treated groups. The proportion of Leydig cells increased only in G6, as did the volume of Leydig cells per gram of testis in the same group. The number of Leydig cells per testis increased only in G5, while per gram of testis there was increase in G5 and G6. In the volumetry of the components, there was an increase of only connective tissue in G4, G5 and G6. There was an increase in CAT in G5 and G6 and in MDA in all treated groups. It can be concluded that there was an increase in sperm production in all groups, in the intertubular compartment there were more effects in Leydig and connective tissue, especially in the G5 and G6 groups, and that the plant generates oxidative stress.

A patogenia da hiponatremia decorrente do uso da Fluoxetina em pacientes idosos não está bem definida. Este achado tem sido atribuído a uma secreção inapropriada do Hormônio Antidiurétido (HAD), embora ainda não tenha sido evidenciado um aumento dos níveis plasmático deste hormônio nestes pacientes. Desta forma, este trabalho visa investigar o efeito da Fluoxetina sobre o rim e mais especificamente se ela teria um efeito direto sobre o Ducto Coletor Medular Interno (DCMI) de ratos normais: 1) Estudos in vivo- 10 ratos foram suplementados com aplicações intraperitoniais diárias de 10mg/kg de Fluoxetina. Após 10 dias os animais foram sacrificados e o sangue e os rins foram coletados para posterior análise. 2) Estudos in vitro- a) estudos com a técnica de Imunoblotting para avaliar a expressão da proteína da Aquaporina 2 (AQP2) em ratos suplementados e em suspensão de túbulos de DCMI de 10 ratos normais incubados com 10-7M de Fluoxetina por 30 min. b) estudos com microperfusão de segmentos isolados do nefron- a permeabilidade osmótica à água (Pf, mm./sec) foi determinada em DCMI perfundidos de ratos normais(n=6) com a técnica standart, na presença de10-7M de Fluoxetina. Resultados: 1) Os estudos in vivo mostraram que o peso caiu de 179±1,28g para 158±1,15g (p<0,0001), o Na plasmático caiu de 139,3±0,78mEq/l para 134,9±0,5mEq/l (p<0,0001) e não houve alterações do K e do HAD plasmáticos. 2) Os estudos in vitro-a) a análise densitométrica dos ensaios com imunoblotting mostraram um aumento da expressão da proteína da AQP2 de 40%, ambos, em ratos suplementados (cont-99,6± 5,2 vs Fx 145,6±16,9, p< 0,05) e em frações de membrana da suspensão de túbulos incubados com Fluoxetina (cont-100,0±3,5.vs 143,0±2,0, p<0,01). b) A Fluoxetina aumentou a Pf nos DCMI, na ausência de HAD de 7,24±2,07 para Fx- 15,77±3,25 (p<0,01). Em resumo, nossos dados revelaram que a Fluoxetina determinou uma diminuição do peso corporal e do nível plasmático de Na sem alterar os níveis plasmáticos de K e HAD e ocasionou um aumento da expressão da proteína da AQP2 e um aumento da permeabilidade à água nos DCMI, levando-nos à conclusão de que o efeito direto da Fluoxetina no DCMI, aumentando a reabsorção de água, pode ser responsável pela hiponatremia encontrada nos pacientes idosos com depressão que fazem uso desta droga. / The pathogenesis of the hyponatremia after Fluoxetine(Fx) supply in elderly is not well understood. This event has been attributed to an inappropriate antidiuretic hormone secretion although the vasopressin enhanced plasma level has not been demonstrated yet in these pacients. Thus, this experiment was designed to investigate the effect of Fx on the kidney and more specifically if it would have a direct effect in the inner medullary collecting duct (IMCD) from normal rats: 1) in vivo study- 10 rats were supplied daily with i.p. injections of Fx 10 mg/kg. After five days, the rats were sacrificed and blood and kidneys were collected. 2) in vitro studya) Immunobloting studies for AQP2 protein expression, in IMCD from supplied rats and in IMCD tubules suspension from 10 normal rats incubated with mm./sec) Fx. by 30 min. b) Microperfusion studies- the osmotic water permeability (Pf, mm./sec) was determined in normal rats IMCD(n=6) isolated and perfused by the standart methods.Fx (10-7M) was added to the bath fluid. Results: In vivo study showed that the weight decreased from 179±1.28g to 158±1.5g(p<0.0001); the Na+ plasma level decreased from 139.3±0.78mEq/l to 134.9±0.5mEq/l(p<0.0001), the K+ and the ADH plasma level remained unchanged. In vitro study- a) the densitometric analysis of the immunobloting essays showed an increase in AQP2 protein abundance of about about 40%, both, in supplied rats (cont-99.6± 5.2 vs Fx 145.6±16.9, p< 0.05), and in membrane fraction extracted from IMCD tubule suspension incubated with Fx ( cont-100.0±3.5.vs 143.0±2.0,p<0.01). b) Fx increased the Pf in IMCD in absence of vasopressin from the control period- 7.24±2.07 to Fx- 15.77±3.25 (p<0.01). In summary, our data revealed that, after Fx, weight, and plasma Na+ level decreased, the plasma K+ and ADH levels remained unchanged, whereas the AQP2 protein abundance and the water absorption in IMCD increased, leading us to conclude that the direct effect of Fx in the IMCD, could account for the hyponatremia produced by this drug in depressed elderly.

O parálogo 3 do trocador Na+/H+ (NHE3) é essencial para a reabsorção de HCO3- nos túbulos proximais renais e sua expressão e função adaptam-se às diferentes condições ácido-base do organismo. O objetivo desta tese foi avaliar quais as diferenças entre os efeitos da acidose metabólica (AM) e respiratória (AR) sobre a regulação do NHE3 e identificar variáveis responsáveis pelas respostas adaptativas observadas. Em células OKP, a AM foi simulada diminuindo a [HCO3-] do meio de cultura e a AR aumentando a pCO2 ambiente por 24 h. Foram observados os efeitos das acidoses sobre o RNAm-Nhe3, a presença da proteína-NHE3 na membrana celular e a atividade promotora do gene do Nhe3. Concluiu-se que o pH extracelular não é a variável físico-química responsável por estimular a expressão do NHE3, contudo é um importante candidato à variável responsável por regular o tráfego da proteína para a membrana. Além disso, a região de -471 a -153 pb em relação ao sítio de início de transcrição do promotor do gene do Nhe3 contém prováveis reguladores positivos que atuam em resposta à AM. / The Na+/H+ exchanger 3 (NHE3) is essential for HCO3- reabsorption in renal proximal tubules and its expression and function must adapt to acid-base conditions. The goal of the presente study was to evaluate whether there are differences between metabolic (MA) and respiratory acidosis (RA) with regard to NHE3 modulation and to identify variables that may trigger these distinct adaptive responses. In OKP cells, MA was achieved by lowering [HCO3-] in the cell culture medium and RA by increasing pCO2 in the incubator chamber for 24 h. The effects of both acidosis on Nhe3 mRNA levels, cell-surface NHE3 expression and promoter activity were evaluated. In summary, it was concluded that low extracellular pH is not the physical-chemical variable that up-regulates NHE3 expression, however, extracellular pH is a candidate for the variable related to the NHE3 displacement to the apical membrane. Moreover, the Nhe3 gene promoter region spanning from -471 to -153 base pairs upstream from the transcriptional start site contains putative enhancers regulated in response to MA.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 256877 bytes, checksum: d548a53fcd07f9ed376af138ca9245bb (MD5) Previous issue date: 2007-07-31 / The crab-eating fox (Cerdocyon thous), known as graxaim, lobinho, etc. belongs to the order Carnivora and family Canidae, being found at the most part of Brazil. This animal does not figure in the list of IBAMA s (Brazilian Institute of Environment and Renewable Natural Resources, 2007) threatened animals of extinguishing and even relatively abundant, little is known about its social, morphological and physiological biology, in special those related with the basic fundamentals of its reproductive physiology. The study of basic aspects of reproduction, in special the spermatogenic process, is relevant to provide informations for the development of technologies in attended reproduction. The quantitative analysis of spermatogenesis can be used to establish kinetic patterns of division and renewal of spermatogonias. It allows estimate the efficiency of the spermatogenic process, the quantification of germ cells population and its relationship with the Sertoli cells population, in some stages of the spermatogenic process development. The present work defines some testicular volumetric parameters and correlates the morphometry of testis and seminiferous tubule data with corporal weight. It also characterizes and classifies the intertubular space of crab-eating fox. In this way, it had been used six adults crab-eating fox, from the Wild Animals Selection Center (CETAS-UFV). To collect samples was chosen the testis biopsy, which is an appropriate methodology for sample collection for the study of the physiologic and reproductive pathologies in domestic and wild animals, as it provides sufficient material for histological analysis, not presenting any alteration in long term spermatogenic process. In this work, the average body weight of the crab-eating fox was 6.53 kg, of which 0.068% are allocated in testicular mass and 0.042% specifically in seminiferous tubules, which represented 87.5% of testicular parenchyma. The testicular albuginea represented 12.5% of testicular mass. The average diameter of seminiferous tubules was 236 &#956;m, the average epithelium thickness was 629 &#956;m, with 18 meters of seminiferous tubule per gram of testis. In relation to the testicular parenchyma, 3.88% is occupied by Leydig cells, 7.95% by conjunctive tissue, 0.12% by lymphatic vessels and 0.72% by blood vessels. The average volume of Leydig cell was 1149 &#956;m3 and the average nuclear diameter was 8.01 &#956;m. In crab-eating fox the Leydig cells are on average 0.0022% of body weight and its average number per gram of testis (31 million) is within the expected for mammalians, between 20 and 40 million. / O cachorro-do-mato (Cerdocyon thous), conhecido como graxaim, raposacaranguejeira, lobinho, lobete e graxaim-do-mato, pertence à ordem Carnivora e família Canidae, sendo encontrado na maior parte do território brasileiro. Este animal não figura na lista de animais ameaçados de extinção do IBAMA (Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis, 2007) e embora relativamente abundante, pouco é conhecido sobre sua biologia social e morfofisiológica, em especial quanto aos fundamentos básicos da sua fisiologia reprodutiva. O estudo de aspectos básicos da reprodução, em especial o processo espermatogênico, torna-se relevante para fornecer informações para o desenvolvimento de tecnologias de reprodução assistida. A análise quantitativa da espermatogênese pode ser utilizada no estabelecimento de padrões cinéticos, como a divisão e renovação de espermatogônias. Permite ainda estimar o coeficiente de eficiência do processo espermatogênico e quantificar a população das células germinativas e suas relações com a população das células de Sertoli em várias etapas do desenvolvimento ao longo do processo espermatogênico. O presente trabalho se propôs a definir alguns parâmetros volumétricos testiculares e correlacionar os dados de morfometria testicular e do túbulo seminífero à massa corporal, além de caracterizar e classificar o espaço intertubular do cachorro-domato. Foram utilizados seis cachorros-do-mato adultos, provenientes do Centro de Triagem de Animais Silvestres CETAS-UFV. Para a coleta das amostras foi realizada a biópsia testicular, que é uma metodologia eletiva para a coleta de material para o estudo da fisiologia e patologias reprodutivas em animais domésticos e selvagens, uma vez que fornece material suficiente para análise histológica, não apresentando quaisquer alterações sobre o processo espermatogênico em longo prazo. No presente trabalho, o peso corporal médio dos cachorros-do-mato foi de 6,53 Kg, dos quais cerca de 0,068% estão alocados em massa testicular e 0,042% especificamente em túbulos seminíferos, que representaram cerca de 87,5% do parênquima testicular .A albugínea testicular representou cerca de 12,5% da massa testicular. O diâmetro médio dos túbulos seminíferos foi de 236 &#956;m, e a espessura média do epitélio seminífero foi de aproximadamente 62,9 &#956;m, apresentando 18 metros de túbulo seminífero por grama de testículo. Com relação ao parênquima testicular, 3,88% é ocupado por células de Leydig, 7,95% por tecido conjuntivo, 0,12% por vasos linfáticos e 0,72% por vasos sangüíneos. O volume médio da célula de Leydig foi de 1149 &#956;m3 e o seu diâmetro nuclear médio foi de 8,01 &#956;m. Em cachorros-do-mato, as células de Leydig ocupam em média 0,0022% do peso corporal, com o número médio dessas células de 31 milhões por grama de testículo, que está dentro da amplitude descrita para a maioria dos mamíferos, entre 20 e 40 milhões.

O parálogo 3 do trocador Na+/H+ (NHE3) é essencial para a reabsorção de HCO3- nos túbulos proximais renais e sua expressão e função adaptam-se às diferentes condições ácido-base do organismo. O objetivo desta tese foi avaliar quais as diferenças entre os efeitos da acidose metabólica (AM) e respiratória (AR) sobre a regulação do NHE3 e identificar variáveis responsáveis pelas respostas adaptativas observadas. Em células OKP, a AM foi simulada diminuindo a [HCO3-] do meio de cultura e a AR aumentando a pCO2 ambiente por 24 h. Foram observados os efeitos das acidoses sobre o RNAm-Nhe3, a presença da proteína-NHE3 na membrana celular e a atividade promotora do gene do Nhe3. Concluiu-se que o pH extracelular não é a variável físico-química responsável por estimular a expressão do NHE3, contudo é um importante candidato à variável responsável por regular o tráfego da proteína para a membrana. Além disso, a região de -471 a -153 pb em relação ao sítio de início de transcrição do promotor do gene do Nhe3 contém prováveis reguladores positivos que atuam em resposta à AM. / The Na+/H+ exchanger 3 (NHE3) is essential for HCO3- reabsorption in renal proximal tubules and its expression and function must adapt to acid-base conditions. The goal of the presente study was to evaluate whether there are differences between metabolic (MA) and respiratory acidosis (RA) with regard to NHE3 modulation and to identify variables that may trigger these distinct adaptive responses. In OKP cells, MA was achieved by lowering [HCO3-] in the cell culture medium and RA by increasing pCO2 in the incubator chamber for 24 h. The effects of both acidosis on Nhe3 mRNA levels, cell-surface NHE3 expression and promoter activity were evaluated. In summary, it was concluded that low extracellular pH is not the physical-chemical variable that up-regulates NHE3 expression, however, extracellular pH is a candidate for the variable related to the NHE3 displacement to the apical membrane. Moreover, the Nhe3 gene promoter region spanning from -471 to -153 base pairs upstream from the transcriptional start site contains putative enhancers regulated in response to MA.

A patogenia da hiponatremia decorrente do uso da Fluoxetina em pacientes idosos não está bem definida. Este achado tem sido atribuído a uma secreção inapropriada do Hormônio Antidiurétido (HAD), embora ainda não tenha sido evidenciado um aumento dos níveis plasmático deste hormônio nestes pacientes. Desta forma, este trabalho visa investigar o efeito da Fluoxetina sobre o rim e mais especificamente se ela teria um efeito direto sobre o Ducto Coletor Medular Interno (DCMI) de ratos normais: 1) Estudos in vivo- 10 ratos foram suplementados com aplicações intraperitoniais diárias de 10mg/kg de Fluoxetina. Após 10 dias os animais foram sacrificados e o sangue e os rins foram coletados para posterior análise. 2) Estudos in vitro- a) estudos com a técnica de Imunoblotting para avaliar a expressão da proteína da Aquaporina 2 (AQP2) em ratos suplementados e em suspensão de túbulos de DCMI de 10 ratos normais incubados com 10-7M de Fluoxetina por 30 min. b) estudos com microperfusão de segmentos isolados do nefron- a permeabilidade osmótica à água (Pf, mm./sec) foi determinada em DCMI perfundidos de ratos normais(n=6) com a técnica standart, na presença de10-7M de Fluoxetina. Resultados: 1) Os estudos in vivo mostraram que o peso caiu de 179±1,28g para 158±1,15g (p<0,0001), o Na plasmático caiu de 139,3±0,78mEq/l para 134,9±0,5mEq/l (p<0,0001) e não houve alterações do K e do HAD plasmáticos. 2) Os estudos in vitro-a) a análise densitométrica dos ensaios com imunoblotting mostraram um aumento da expressão da proteína da AQP2 de 40%, ambos, em ratos suplementados (cont-99,6± 5,2 vs Fx 145,6±16,9, p< 0,05) e em frações de membrana da suspensão de túbulos incubados com Fluoxetina (cont-100,0±3,5.vs 143,0±2,0, p<0,01). b) A Fluoxetina aumentou a Pf nos DCMI, na ausência de HAD de 7,24±2,07 para Fx- 15,77±3,25 (p<0,01). Em resumo, nossos dados revelaram que a Fluoxetina determinou uma diminuição do peso corporal e do nível plasmático de Na sem alterar os níveis plasmáticos de K e HAD e ocasionou um aumento da expressão da proteína da AQP2 e um aumento da permeabilidade à água nos DCMI, levando-nos à conclusão de que o efeito direto da Fluoxetina no DCMI, aumentando a reabsorção de água, pode ser responsável pela hiponatremia encontrada nos pacientes idosos com depressão que fazem uso desta droga. / The pathogenesis of the hyponatremia after Fluoxetine(Fx) supply in elderly is not well understood. This event has been attributed to an inappropriate antidiuretic hormone secretion although the vasopressin enhanced plasma level has not been demonstrated yet in these pacients. Thus, this experiment was designed to investigate the effect of Fx on the kidney and more specifically if it would have a direct effect in the inner medullary collecting duct (IMCD) from normal rats: 1) in vivo study- 10 rats were supplied daily with i.p. injections of Fx 10 mg/kg. After five days, the rats were sacrificed and blood and kidneys were collected. 2) in vitro studya) Immunobloting studies for AQP2 protein expression, in IMCD from supplied rats and in IMCD tubules suspension from 10 normal rats incubated with mm./sec) Fx. by 30 min. b) Microperfusion studies- the osmotic water permeability (Pf, mm./sec) was determined in normal rats IMCD(n=6) isolated and perfused by the standart methods.Fx (10-7M) was added to the bath fluid. Results: In vivo study showed that the weight decreased from 179±1.28g to 158±1.5g(p<0.0001); the Na+ plasma level decreased from 139.3±0.78mEq/l to 134.9±0.5mEq/l(p<0.0001), the K+ and the ADH plasma level remained unchanged. In vitro study- a) the densitometric analysis of the immunobloting essays showed an increase in AQP2 protein abundance of about about 40%, both, in supplied rats (cont-99.6± 5.2 vs Fx 145.6±16.9, p< 0.05), and in membrane fraction extracted from IMCD tubule suspension incubated with Fx ( cont-100.0±3.5.vs 143.0±2.0,p<0.01). b) Fx increased the Pf in IMCD in absence of vasopressin from the control period- 7.24±2.07 to Fx- 15.77±3.25 (p<0.01). In summary, our data revealed that, after Fx, weight, and plasma Na+ level decreased, the plasma K+ and ADH levels remained unchanged, whereas the AQP2 protein abundance and the water absorption in IMCD increased, leading us to conclude that the direct effect of Fx in the IMCD, could account for the hyponatremia produced by this drug in depressed elderly.

Os experimentos indicam, como já demonstrado em estudos prévios do laboratório, que angiotensina II (Ang II) apresenta efeito estimulatório sobre a cinética de recuperação de pHi em células OKP. Tal estímulo não é acentuado pela super-expressão de AT1aR recombinante, ao contrário do que imaginávamos inicialmente. Acreditamos que, por conta da capacidade de amplificação de sinal característica dos receptores acoplados a proteína G, um aumento de expressão do receptor AT1aR em relação ao nível endógeno seja redundante para o fenômeno biológico estudado. Por outro lado, os resultados para o grupo com super-expressão de ATRAP corroboram nossa hipótese inicial, ao indicar uma atenuação do efeito de Ang II sobre a recuperação de pHi, em comparação aos demais grupos experimentais tratados com Ang II. Considerando que a recuperação de pHi em células OKP reflete essencialmente a atividade de troca Na+/H+ mediada pelo contra-transportador NHE3, podemos concluir que a regulação positiva de NHE3 via AT1aR/AngII é prejudicada pelo aumento de expressão da proteína ATRAP. / The experimental data suggests that, as shown in previous works from our laboratory, angiotensin II (Ang II) raises the pHi recovery rate in OKP cells. This upregulation is not enhanced by recombinant AT1aR overexpression, contrary to our initial hypothesis. We believe that, due to signal amplification mediated by G-protein coupled receptors, any increase in AT1aR would be redundant considering the biological phenomenon of interest. On the other hand, results from the ATRAP overexpression group supports our initial hypothesis, pointing an attenuated effect of Ang II over pHi recovery in relation to the remaining groups treated with Ang II. Considering that pHi recovery in OKP cells primarily reflects the Na+/H+ exchange activity mediated by NHE3 antiporter, we can conclude that NHE3 upregulation mediated by AT1aR/AngII is impaired by an increase in ATRAP protein expression.

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