Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-11-23T14:01:46Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1007715 bytes, checksum: 19678c503faf871dc1f3df4abd1f2801 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-23T14:01:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1007715 bytes, checksum: 19678c503faf871dc1f3df4abd1f2801 (MD5) Previous issue date: 2018-07-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O gênero Renealmia pertence à família Zingiberaceae e abrange um conjunto de espécies dadas como raras e ameaçadas de extinção. A espécie Renealmia pycnostachys é representada apenas pelo espécime tipo coletado no Sudeste de Minas Gerais e é utilizada na cultura popular como afrodisíaco. Baseado nessas informações, tivemos como objetivo avaliar o efeito do extrato hidroalcoólico da folha de Renealmia pycnostachys sobre as porções gametogênica e androgênica testicular, nos corpos cavernosos do pênis e nos níveis de testosterona sérica. Camundongos Swiss adultos (n=28) foram divididos em 4 grupos: Controle (água) e 3 grupos recebendo doses diárias do extrato da folha (100, 200 e 400 mg/Kg) por 42 dias. Observamos que o extrato não alterou os parâmetros biométricos, corporal e testicular, percentual e volume dos componentes tubulares e índices tubulossomático e epiteliossomático. Nos grupos tratados com o extrato da folha tivemos aumentos do diâmetro tubular, altura do epitélio seminífero, diâmetro de lume, área de túbulo, epitélio e lume e redução no comprimento de túbulo seminífero total. Verificamos aumento no número corrigido de células de Sertoli por grama de testículo, enquanto que a capacidade suporte diminuiu levando a uma redução na produção espermática diária por testículo e por grama de testículo. Somente a histopatologia leve do túbulo seminífero foi observado. Verificamos no intertúbulo aumento no percentual do citoplasma de Leydig e de células de Leydig, além de redução no percentual de tecido conjuntivo. Houve aumento de gotículas de lipídeos no citoplasma das células de Leydig. Observamos o aumento da testosterona sérica, óxido nítrico peniano e corpos cavernosos no pênis. Podemos comprovar que a folha de Renealmia pycnostachys apresenta efeito afrodisíaco sem causar danos à microestrutura testicular ou desequilíbrio redox. / The Renealmia genus belongs to the Zingiberaceae family and covers a number of rare and endangered species. The species Renealmia pycnostachys is represented only by the type of collective specimen in the Southeast of Minas Gerais and is used in the popular culture as an aphrodisiac. Based on these informations, we aimed to evaluate the effect of hydroalcoholic extract of the leaf of Renealmia pycnostachys on the gametogenic and androgenic portions of the testicular, cavernous bodies of the penis and serum testosterone levels. Adult Swiss mice (n = 28) were divided into 4 groups: control (water) and three daily higher doses of leaf extract (100, 200 and 400 mg / kg) for 42 days. We observed that the extract did not alter the biometric parameters, body and testicular, percentage and volume of tubular components and tubulesomatic and epitheliosomatic indexes. The groups treated with the leaf extract had increases in the tubular diameter, height of the seminiferous epithelium, lumen diameter, tubule area, epithelium and lume and reduction in the length of the total seminiferous tubule. We found an increase in the corrected number of Sertoli cells per gram of testis, while the support capacity decreased, leading to a reduction in daily sperm production per testis and gram of testis. Only the mild histopathology of the seminiferous tubule was observed. We verified in the intertubule an increase in the percentage of the Leydig cytoplasm and Leydig cells, in addition to a reduction in the percentage of connective tissue. There was an increase in lipid droplets in the Leydig cell cytoplasm. We observed increased serum testosterone, penile nitric oxide, and cavernous bodies in the penis. We can verify that the leaf of Renealmia pycnostachys presents aphrodisiac effect without causing damage to the testicular microstructure or redox imbalance.

Está bem estabelecido na literatura que o NHE3 é ativado, no intestino, pelo transporte de glicose mediado pelo SGLT1, e que esta ativação não dependente do metabolismo da glicose. Acredita-se que a co-ativação do NHE3 e do SGLT1 ocorra para maximizar a reabsorção de nutrientes no período pós-prandial. Porém, ainda não foi determinado se a captação de glicose através dos SGLTs é capaz de regular a atividade do NHE3 no túbulo proximal renal. Levando-se em conta que este segmento renal também expressa o SGLT2 e que os rins e intestinos apresentam significativas diferenças na disponibilidade de glicose ao longo do dia, o objetivo do presente trabalho foi o de determinar o efeito da glicose e da atividade dos SGLTs renais sobre a atividade do NHE3. Experimentos de microperfusão estacionária demonstraram que a perfusão luminal de glicose 5mM estimula o NHE3 via o metabolismo glicolítico. A perfusão de concentrações suprafisiológicas de glicose inibe o NHE3 por promover aumento de volume celular. A inibição farmacológica dos SGLTs, utilizando-se o inibidor inespecífico Florizina, ocasionou acentuada inibição do NHE3, mesmo na ausência de glicose. Além disso, experimentos de imunofluorescência determinaram que o NHE3 é co-expresso com o SGLT2, mas não com o SGLT1. Conclusão: os resultados deste trabalho demonstram que a glicose apresenta um efeito bimodal sobre o NHE3: em concentrações fisiológicas este açúcar estimula o NHE3, enquanto que em concentrações suprafisiológicas a glicose inibe o trocador. Além disso, a inibição farmacológica do transporte de glicose ocasiona acentuada inibição do NHE3 demonstrando que estes transportadores interagem funcionalmente no túbulo proximal. / It is well established that SGLT1-mediated glucose uptake leads to NHE3 activation in the intestine. This co-activation is thought to be important for postprandial nutrient uptake. However, it remains to be determined whether SGLT-mediated glucose uptake is capable of regulating NHE3-mediated NaHCO3 reabsorption in the renal proximal tubule. Considering that this nephron segment also expresses another SGLT isoform, SGLT2, and that the kidneys and intestine show significant variations in daily glucose availability, the goal of the present work was to determine the effect of SGLT-mediated glucose uptake on NHE3 activity in the renal proximal tubule. Stationary in vivo microperfusion experiments demonstrated that luminal perfusion with 5 mM glucose stimulates NHE3-mediated bicarbonate reabsorption. This stimulatory effect was mediated by glycolytic metabolism but not through ATP production. Conversely, luminal perfusion with 40 mM glucose inhibited NHE3 due to cell swelling. Interestingly, the pharmacological inhibition of SGLT activity by phlorizin produced a marked inhibition of NHE3, even in the absence of glucose. Furthermore, immunofluorescence experiments showed that NHE3 co-localizes with SGLT2, but not with SGLT1, in the rat renal proximal tubule. Collectively, the findings of this work demonstrate that glucose exerts a bimodal effect on NHE3. The physiological metabolism of glucose stimulates NHE3 transport activity, whereas supraphysiological glucose concentrations inhibit this exchanger. Additionally, phlorizin-sensitive SGLT transporters and NHE3 interact functionally in the proximal tubule.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a remoção da smear layer e a penetração intratubular do cimento obturador AH Plus utilizando diferentes protocolos de irrigação. Após aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa da Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto - FORP/USP, noventa incisivos centrais superiores foram selecionados e fornecidos pelo banco de dentes da mesma instituição. Estes foram radiografados no sentido mésio - distal e vestíbulo - lingual para comprovar a presença de canais únicos, sem curvaturas abruptas, reabsorções ou tratamentos endodônticos prévios. Após a remoção da porção coronal para a obtenção de raízes com comprimentos padronizados de 15 milímetros, os diâmetros anatômicos foram determinados e as instrumentações realizadas por meio da técnica coroa ápice estabelecendo os diâmetros cirúrgicos utilizando 3 instrumentos acima dos anatômicos. Durante este processo, os espécimes foram divididos em seis grupos de acordo com os protocolos de irrigação: Grupo 1 (controle - n. 15) - 2,5ml de água destilada a cada troca de instrumentos e 2,5ml de água destilada por 3 minutos ao final da instrumentação; Grupo 2 (n. 15) - 2,5ml de hipoclorito de sódio a 2,5% a cada troca de instrumentos e 2,5ml de hipoclorito de sódio a 2,5% por 3 minutos ao final da instrumentação; Grupo 3 (n. 15) - 2,5ml de hipoclorito de sódio a 2,5% a cada troca de instrumentos e 2,5ml de EDTA a 17% por 3 minutos ao final da instrumentação; Grupo 4 (n. 15) - 2,5ml de hipoclorito de sódio a 2,5% e 2,5ml de EDTA a 17% a cada troca de instrumentos + 2,5ml de EDTA a 17% por 3 minutos ao final da instrumentação; Grupo 5 (n. 15) - 2,5ml de hipoclorito de sódio a 2,5% a cada troca de instrumentos e 2,5ml de ácido cítrico a 10% por 3 minutos ao final da instrumentação; Grupo 6 (n. 15) - 2,5ml de hipoclorito de sódio a 2,5% e 2,5ml de ácido cítrico a 10% a cada troca de instrumentos + 2,5ml de ácido cítrico a 10% por 3 minutos ao final da instrumentação. Após esta fase, cinco espécimes de cada grupo foram clivados no sentido mésio - distal para avaliação da remoção da smear layer em microscopia eletrônica de varredura por meio da análise de 3 imagens de cada terço em aumentos de 300, 1000 e 2000 vezes. Esta variável foi determinada por um score qualitativo estabelecido pelo consenso de 3 avaliadores calibrados. Os demais espécimes foram obturados pela técnica de condensação lateral com cones principais correspondentes ao último instrumento associados ao cimento AH Plus corado com Rodamina B, cones acessórios B8 e mantidos em ambiente com 100% de umidade por 7 dias. Em seguida, os espécimes foram seccionados transversalmente para obtenção de slices de aproximadamente 2mm de espessura em cada terço (cervical, médio e apical) e as faces cervicais submetidas a um tratamento metalográfico para análise da penetração intratubular do cimento obturador em microscopia confocal a laser. Os melhores índices de remoção de smear layer e as maiores porcentagens de penetração intratubular do cimento foram obtidos pelos grupos onde as soluções quelantes foram utilizadas (G3, G4, G5 e G6) com diferenças estatisticamente significantes (p<0,05) em relação aos grupos onde utilizou - se somente a água destilada (G1) e o hipoclorito de sódio a 2,5% (G2) durante o processo de instrumentação. Não foram observadas vantagens em relação ao uso associado do EDTA a 17% e do ácido cítrico a 10% ao hipoclorito de sódio pela ausência de diferenças estatísticas significantes entre os grupos 3 e 4 e 5 e 6, respectivamente. / The aim of this study was to evaluate the smear layer removal and tubular dentine sealer penetration of AH Plus after different irrigation protocols. After approval of the study by the Ethics Committee of the Ribeirão Preto Dental School - FORP/USP, ninety maxillary central incisors were selected and supplied by the tooth bank of the same institution. The teeth were radiographed in the mesiodistal and buccolingual directions to verify the presence of single canals, without abrupt curvatures, resorption or previous endodontic treatment. The coronal portion was removed and roots lengths were standardized at 15 mm. The anatomic diameters were then determined and instrumentations were carried out by the crown-down technique, using 3 higher-diameter instruments to establish the surgical diameters. During this process, the specimens were divided into six groups, according to the following irrigation protocols: Group 1 (control - n. 15) - 2.5ml of distilled water at each change of instruments + 2.5ml of distilled water for 3 minutes at the end of the instrumentation; Group 2 (n. 15) - 2.5ml of 2.5% sodium hypochlorite at each change of instruments + 2.5 ml of 2.5% sodium hypochlorite for 3 minutes at the end of the instrumentation; Group 3 (n. 15) - 2.5ml of 2.5% sodium hypochlorite at each change of instruments + 2.5ml of 17% EDTA for 3 minutes at the end of the instrumentation; Group 4 (n. 15) - 2.5ml of 2.5% sodium hypochlorite and 2.5ml of 17% EDTA at each change of instruments + 2.5ml of 17% EDTA for 3 minutes at the end of the instrumentation; Group 5 (n. 15) - 2.5ml of 2.5% sodium hypochlorite at each change of instruments + 2.5ml of 10% citric acid for 3 minutes at the end of the instrumentation; Group 6 (n. 15) - 2.5ml of 2.5% sodium hypochlorite and 2.5 ml of 10% citric acid at each change of instruments + 2.5 ml of 10% citric acid for 3 minutes at the end of the instrumentation. Following this phase, five specimens from each group were cleaved in the mesiodistal direction to evaluate the smear layer removal by scanning electron microscopy. Evaluation was performed by analyzing 3 images of each third at 300, 1000 and 2000X. This variable was determined by a qualitative score established by the consensus of 3 calibrated examiners. The remaining specimens were filled using lateral condensation with AH Plus sealer labeled with Rhodamine B and kept in an environment with 100% humidity for 7 days. Then, the specimens were sectioned to obtain approximately 2 mm thick slices of each third (cervical, middle and apical). The cervical surfaces were subjected to metallographic treatment for analysis of the tubular dentine sealer penetration by confocal laser microscopy. The highest smear layer removal rates and tubular dentine sealer penetration percentages were obtained by the groups that used chelating solutions (G3, G4, G5 and G6). These showed statistically significant differences (p<0.05) compared with the groups that used just distilled water (G1) and 2.5% sodium hypochlorite (G2) during instrumentation. No benefits were observed for the combined use of 17% EDTA or 10% citric acid with 2.5% sodium hypochlorite, considering that there were no statistically significant differences between groups 3 and 4, and between 5 and 6, respectively.

Os radiofármacos são preparações farmacêuticas com finalidade diagnóstica ou terapêutica que, quando prontas para o uso, contêm um ou mais radionuclídeos. São utilizados em Medicina Nuclear para diagnóstico e terapia de várias doenças. O tecnécio-99m-mercaptoacetiltriglicina (MAG3-99mTc) foi primeiramente preparado em 1986 na Universidade de Utah pelo Dr. Alan R. Fritzberg e tem sido utilizado para avaliação da filtração glomerular e dos túbulos renais. O objetivo deste trabalho foi definir as condições de preparação de uma formulação para obtenção de MAG3 na forma de um reagente liofilizado comercial, para ser marcado com 99mTc. Inicialmente foram preparados lotes teste baseados nas formulações europeia e americana, com pH final 6 e os resultados foram insatisfatórios. A mudança de pH para 12 resultou em aumento na pureza radioquímica, porém sem estabilidade de marcação com 99mTc em até 4 horas. O teste com a formulação cubana em pH 9,5 resultou em pureza radioquímica (% PRq) maior que 90% até 4 horas de marcação. O limite especificado para % PRq é de 90%. Com base nos resultados anteriores, foram definidos os componentes da formulação IPEN e três lotes do produto liofilizado com 100 frascos cada, foram avaliados quanto à estabilidade radioquímica e biológica até cerca de 9 meses. Quatro lotes piloto produzidos com 230 frascos liofilizados cada, estão em estudo de estabilidade até o presente momento. As atividades de marcação com 99mTc foram 0,74 - 3700 MBq (5 - 100 mCi), em 3 mL de NaCl 0,9%. A % PRq foi determinada em até 240 minutos de marcação utilizando cromatografia em camada delgada, com 2 sistemas diferentes: Metiletilcetona:acetato de etila 60:40 (v/v) em fita de iTLC-SG para determinação de 99mTcO4- em Rf = 1 e Acetonitrila:água 50:50 (v/v) em fita Whatman 3MM para determinação de 99mTcO2 em Rf = 0. Os resultados foram expressos como média % PRq &plusmn; desvio padrão considerando-se análises em duplicata de dois frascos para cada um dos tempos de marcação. 0,74 MBq (200 &mu;Ci) de atividade mínima ou 129,5 MBq (3500 &mu;Ci) de atividade máxima de marcação em 0,1 mL NaCl 0.9% foram administrados em camundongos Swiss e a radioatividade nos rins, fígado e vesícula, estômago, intestino e carcaça foi medida após 45 minutos. Os valores foram expressos como média % DI (Dose Injetada) &plusmn; DP. O estudo de toxicidade aguda foi realizado em um grupo de 10 camundongos machos da linhagem Balb/c, pesando entre 20-30 g, com cerca de dois meses de vida, por um período de 14 dias. Todos os resultados de controle de qualidade atenderam aos critérios especificados. Observou-se que o preparo e a adição dos reagentes, a quantidade de cloreto estanoso e o valor de pH nas etapas intermediárias foram fatores importantes na obtenção de um radiofármaco para marcação com 99mTc, como no caso do MAG3. / Radiopharmaceuticals are pharmaceutical preparations for diagnostic or therapeutic purposes that, when ready for use, contain one or more radionuclides. They are used in Nuclear Medicine for diagnosis and therapy of various diseases. Technetium-99m-mercaptoacetyltriglycine (99mTc-MAG3) was first prepared in 1986 at the University of Utah by Dr. Alan R. Fritzberg and has been used to assess glomerular filtration and renal tubules. The objective of this work was to define the preparation conditions of the formulation to obtain MAG3 in the form of a commercial lyophilized reagent to be labeled with 99mTc. Test lots were initially prepared based on the European and American formulations with final pH 6 and the results were unsatisfactory. The change in pH to 12 resulted in an increased radiochemical purity, however without 99mTc labeling stability in up to 4 hours. Testing with the Cuban formulation at pH 9.5 resulted in radiochemical purity (% PRq) greater than 90% up to 4 hours of labeling. The limit specified for % PRq is 90%. Based on the above results, the components of the IPEN formulation were defined and three batches of the lyophilized product with 100 vials each were evaluated for radiochemical and biological stability up to about 9 months. Four pilot batches produced with 230 freeze-dried vials each are currently in stability studies. The 99mTc labeling activities were 0.74 3,700 MBq (5 - 100 mCi) in 3 mL 0.9% NaCl. The % PRq was determined in up to 240 minutes of labeling using thin layer chromatography with 2 different systems: methyl ethyl ketone:ethyl acetate 60:40 (v/v) on iTLC-SG strip for determination of 99mTcO4- in Rf = 1 and acetonitrile:water 50:50 (v/v) on Whatman 3MM strip for determination of 99mTcO2 in Rf = 0. The results were expressed as mean % PRq &plusmn; Standard Deviation (SD) considering duplicate analyzes of two vials for each of the labeling times. 0.74 MBq (200 &mu;Ci) of minimal labeling activity or 129.5 MBq (3,500 &mu;Ci) of maximum labeling activity in 0.1 mL 0.9% NaCl were administered in Swiss mice and radioactivity in the kidneys, liver and gallbladder, stomach, intestine and carcass was measured after 45 minutes. Values were expressed as mean % ID (Injected Dose) &plusmn; SD. The acute toxicity study was performed on a group of 10 male Balb/c mice, weighing between 20-30 g with about two month old, for a period of 14 days. All quality control results met the specified criteria. It was found that the preparation and addition of the reactants, the amount of stannous chloride and the pH value in the intermediate steps were important factors in obtaining a radiopharmaceutical for labeling with 99mTc as in the case of MAG3.

Submitted by Suzana Dias (suzana.dias@famerp.br) on 2018-11-09T18:53:26Z No. of bitstreams: 1 RenatoFerneda_dissert.pdf: 585980 bytes, checksum: 7c6b97dc0f3805fe789d0fdbee741928 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-09T18:53:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RenatoFerneda_dissert.pdf: 585980 bytes, checksum: 7c6b97dc0f3805fe789d0fdbee741928 (MD5) Previous issue date: 2018-04-27 / Although the antirretroviral therapy, in spite of having reduced the mortality for AIDS and increased the lifespan of the HIV bearers, it can contribute to the arrise of adverse long time effects, besides renal ones. The tenofovir (TDF), a first line antirretroviral (ARV) for treatment, has low general toxicity. TDF can take to moderate reduction in glomerular filtration rate (GFR) and a larger prevalence of renal tubular dysfunction (RTD) when compared to those patients who are not on therapy of this medication. The decline of the renal function found in the patients can vary from mild to chronic injuries or a simple reduction in GFR. The mechanism of RTD is not completely understood, and it has been attributed to the mitocondrial lesion in the proximal tubule cells caused by the increasing of the intracelular TDF concentration. Aditionaly, host´s genetic polymorphisms have been considered one of the TDF concentration increasing causes. RTD can be characterized concisely by the deficiency in the solutes reabsorption as bicarbonate, uric acid, phosphate, glucose and low weight molecular proteins. Objectives: verify the prevalence of RTD in the HIV bearers on TDF treatment, identify the risk factors associated and compare the 24-hours urine methods with the serum creatinine and its clearance for the RTD identification. Methods: longitudinal prospective study, performed in the Complexo de Doenças Transmissíveis em São José do Rio Preto/SP, between january 2011 to december 2015. Results: 163 patients were included in the study, in which 106 (68,4%) didn't use TDF and 57 (31,6%) used TDF. RTD occured in 8 patients that used TDF, a prevalence of 14%. The patients age was identified as significant risk factor for the development of RTD. The proteinuria (average 109,2mg/24h) and the phosphaturia (average 791,9mg/24h) were significant for the diagnosis of RTD. Conclusions: the prevalence of RTD was 14%. The age was determined as risk factor for RTD, mainly in patients over 60 years-old. Phosphaturia and the proteinuria showed the greatest diagnosis sensibility for RTD, respectively. The serum creatinine and phosphorus concentration, the creatinine clearance and the stand alone hyperproteinuria should not be used as diagnosis predictors for RTD. / A TARV, apesar de ter reduzido a mortalidade por AIDS e aumentado a expectativa de vida dos portadores de HIV, pode contribuir para o aparecimento de efeitos adversos de longo prazo, inclusive renal. O tenofovir (TDF), antirretroviral (ARV) de primeira linha para o tratamento, tem baixo perfil geral de toxicidade. No entanto, pode levar a uma moderada redução na taxa de filtração glomerular (TFG) e uma maior prevalência de disfunção tubular renal (DTR) quando comparado àqueles pacientes que não o utilizam. O declínio da função renal encontrado nos pacientes podem ser injúrias agudas, crônicas ou uma simples redução na TFG. O mecanismo da DTR não é totalmente conhecido; atribui-se à lesão mitocondrial nas células dos túbulos proximais pelo aumento da concentração do TDF intracelular, além da suspeita da influência de polimorfismos genéticos dos hospedeiros. Pode ser resumidamente caracterizada pela deficiência na reabsorção de solutos como bicarbonato, ácido úrico, fosfato, glicose e proteínas de baixo peso molecular. Objetivos: Verificar a prevalência da DTR nos portadores de HIV em uso de TDF; identificar os fatores de risco associados e comparar os métodos de Urina de 24 horas com a creatinina sérica e o clearance para a sua identificação. Casuística e método: estudo longitudinal prospectivo, com 163 pacientes, realizado no Complexo de Doenças Transmissíveis em São José do Rio Preto/SP, no período de janeiro de 2011 a dezembro de 2015. Resultados: Foram incluídos 163 pacientes no estudo, dos quais 106 (68,4%) não utilizaram TDF e 57 (31,6%) utilizaram TDF. A DTR ocorreu em 8 pacientes que utilizaram TDF; uma prevalência de 14%. A idade dos pacientes (média de 43,9 anos) foi identificada como fator de risco significante para o desenvolvimento da DTR. A proteinúria (média 109,2mg/24h) e a fosfatúria (média 791,9mg/24h) foram significantes para o diagnóstico da DTR. Conclusões: A prevalência da DTR foi de 14%. A idade foi determinada como fator de risco para a DTR, principalmente, na faixa acima dos 60 anos. Os exames laboratoriais que mostraram a maior sensibilidade diagnóstica para a DTR foram a fosfatúria e a proteinúria, respectivamente. A creatinina sérica, o fósforo sérico, o clearance de creatinina e a hiperproteinúria isolada não mostraram sensibilidade como preditores diagnósticos para a DTR.

The present research had the objective to analyze qualitatively though histobacteriology, the remaining dentine of upper human premolars after removal of clinically decayed tissue, according to presence, location and distribution of microorganisms in dental tubules in different degrees of depth of carious lesion. It was selected representative histological blades of histological cut in series, obtained during the research of Biffi et al (1982), extracted from patients of both genera and age from 20 to 40 years old. The teeth should present proximal caries and/ or occlusal caries and the removal of decayed tissue would be done in vitro. The three faces (dental, mesial and occusal) were clinically classified according to the depth of the caries in degrees 0, 1, 2, 3, 4 or 5 and microscopically assessed. The blades were tinged using the technique of Hematoxylin and Eosine, Trichrome of Masson and histobacteriological of Gram, modified by Brown and Brenn. The interpretation of histological cuts was realized with the use of a trinocular and photomicroscope. In the descriptive analysis it was possible to check the bacterial penetration in a superficial way and/ or in a deep way in the dentinal tubules both in the pulpal floor or in the amelodentinal junction, as well as the presence of bacterial niches in the cavity preparation. The contaminated tubules showed morphologically inaltered, and in pulp exposure during the removal of deep caries it was verified the introduction of a contaminated dentinal fragment in the pulp tissue. In order to have a statistical analysis of the number of microorganisms, it was applied the Pearson s correlation coefficient, respectively among the different degrees of caries and localization in the amelodentinal junction and pulp floor. It was brought to a conclusion that, in 56,7% of the decayed faces the microorganisms were placed in dentine considered clinically healthy, in which they lodged in dentinal tubules morphologically inaltered; the localization and the distribution of microorganisms in the tubules were variable and independent of the depth of the caries. / A presente pesquisa teve como objetivo realizar analise histobacteriológica da dentina remanescente de pré-molares humanos após a remoção do tecido cariado, quanto à presença, localização e distribuição dos microrganismos nos túbulos dentinários em diferentes graus de profundidade da lesão cariosa. Foram selecionadas lâminas histológicas representativas de cortes histológicos seriados de 20 dentes, obtidos durante a pesquisa de Biffi et al. (1982), extraídos de pacientes de ambos os gêneros e faixa etária entre 20 a 40 anos. Estes dentes apresentaram cárie proximal e/ou oclusal e a remoção do tecido cariado foi realizada in vitro. As três faces do dente (mesial, distal e oclusal) foram clinicamente classificadas quanto à profundidade de cárie em graus 0, 1, 2, 3, 4 ou 5 e microscopicamente avaliadas. As lâminas foram coradas pela técnica Hematoxilina e Eosina, Tricrômico de Masson e histobacteriológico de Gram, modificado por Brown e Brenn. A analise dos cortes histológicos foi realizada utilizando o microscópio de luz. Na análise histológica foi observada a presença bacteriana superficial e/ou profunda nos túbulos dentinários tanto no assoalho pulpar quanto na junção amelo-dentinária, bem como a presença de nichos bacterianos no preparo cavitário. Os túbulos contaminados apresentavam-se morfologicamente inalterados e na exposição pulpar, durante a remoção profunda da cárie, constatou-se a introdução de fragmento dentinário contaminado no tecido pulpar. Para análise estatística do número de microrganismos, foi aplicado o coeficiente de correlação de Pearson, respectivamente entre os diferentes graus de cárie e localização na junção amelo-dentinária e assoalho pulpar. Conclui-se que, em 56,7% das faces cariadas os microrganismos encontravam-se situados na dentina considerada clinicamente como sadia, os quais alojavam-se em túbulos dentinários morfologicamente inalterados; a localização e a distribuição dos microrganismos nos túbulos foi variável e independente da profundidade da cárie. / Mestre em Odontologia

O objetivo do presente estudo foi avaliar a remoção da smear layer e a penetração intratubular do cimento obturador AH Plus utilizando diferentes protocolos de irrigação. Após aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa da Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto - FORP/USP, noventa incisivos centrais superiores foram selecionados e fornecidos pelo banco de dentes da mesma instituição. Estes foram radiografados no sentido mésio - distal e vestíbulo - lingual para comprovar a presença de canais únicos, sem curvaturas abruptas, reabsorções ou tratamentos endodônticos prévios. Após a remoção da porção coronal para a obtenção de raízes com comprimentos padronizados de 15 milímetros, os diâmetros anatômicos foram determinados e as instrumentações realizadas por meio da técnica coroa ápice estabelecendo os diâmetros cirúrgicos utilizando 3 instrumentos acima dos anatômicos. Durante este processo, os espécimes foram divididos em seis grupos de acordo com os protocolos de irrigação: Grupo 1 (controle - n. 15) - 2,5ml de água destilada a cada troca de instrumentos e 2,5ml de água destilada por 3 minutos ao final da instrumentação; Grupo 2 (n. 15) - 2,5ml de hipoclorito de sódio a 2,5% a cada troca de instrumentos e 2,5ml de hipoclorito de sódio a 2,5% por 3 minutos ao final da instrumentação; Grupo 3 (n. 15) - 2,5ml de hipoclorito de sódio a 2,5% a cada troca de instrumentos e 2,5ml de EDTA a 17% por 3 minutos ao final da instrumentação; Grupo 4 (n. 15) - 2,5ml de hipoclorito de sódio a 2,5% e 2,5ml de EDTA a 17% a cada troca de instrumentos + 2,5ml de EDTA a 17% por 3 minutos ao final da instrumentação; Grupo 5 (n. 15) - 2,5ml de hipoclorito de sódio a 2,5% a cada troca de instrumentos e 2,5ml de ácido cítrico a 10% por 3 minutos ao final da instrumentação; Grupo 6 (n. 15) - 2,5ml de hipoclorito de sódio a 2,5% e 2,5ml de ácido cítrico a 10% a cada troca de instrumentos + 2,5ml de ácido cítrico a 10% por 3 minutos ao final da instrumentação. Após esta fase, cinco espécimes de cada grupo foram clivados no sentido mésio - distal para avaliação da remoção da smear layer em microscopia eletrônica de varredura por meio da análise de 3 imagens de cada terço em aumentos de 300, 1000 e 2000 vezes. Esta variável foi determinada por um score qualitativo estabelecido pelo consenso de 3 avaliadores calibrados. Os demais espécimes foram obturados pela técnica de condensação lateral com cones principais correspondentes ao último instrumento associados ao cimento AH Plus corado com Rodamina B, cones acessórios B8 e mantidos em ambiente com 100% de umidade por 7 dias. Em seguida, os espécimes foram seccionados transversalmente para obtenção de slices de aproximadamente 2mm de espessura em cada terço (cervical, médio e apical) e as faces cervicais submetidas a um tratamento metalográfico para análise da penetração intratubular do cimento obturador em microscopia confocal a laser. Os melhores índices de remoção de smear layer e as maiores porcentagens de penetração intratubular do cimento foram obtidos pelos grupos onde as soluções quelantes foram utilizadas (G3, G4, G5 e G6) com diferenças estatisticamente significantes (p<0,05) em relação aos grupos onde utilizou - se somente a água destilada (G1) e o hipoclorito de sódio a 2,5% (G2) durante o processo de instrumentação. Não foram observadas vantagens em relação ao uso associado do EDTA a 17% e do ácido cítrico a 10% ao hipoclorito de sódio pela ausência de diferenças estatísticas significantes entre os grupos 3 e 4 e 5 e 6, respectivamente. / The aim of this study was to evaluate the smear layer removal and tubular dentine sealer penetration of AH Plus after different irrigation protocols. After approval of the study by the Ethics Committee of the Ribeirão Preto Dental School - FORP/USP, ninety maxillary central incisors were selected and supplied by the tooth bank of the same institution. The teeth were radiographed in the mesiodistal and buccolingual directions to verify the presence of single canals, without abrupt curvatures, resorption or previous endodontic treatment. The coronal portion was removed and roots lengths were standardized at 15 mm. The anatomic diameters were then determined and instrumentations were carried out by the crown-down technique, using 3 higher-diameter instruments to establish the surgical diameters. During this process, the specimens were divided into six groups, according to the following irrigation protocols: Group 1 (control - n. 15) - 2.5ml of distilled water at each change of instruments + 2.5ml of distilled water for 3 minutes at the end of the instrumentation; Group 2 (n. 15) - 2.5ml of 2.5% sodium hypochlorite at each change of instruments + 2.5 ml of 2.5% sodium hypochlorite for 3 minutes at the end of the instrumentation; Group 3 (n. 15) - 2.5ml of 2.5% sodium hypochlorite at each change of instruments + 2.5ml of 17% EDTA for 3 minutes at the end of the instrumentation; Group 4 (n. 15) - 2.5ml of 2.5% sodium hypochlorite and 2.5ml of 17% EDTA at each change of instruments + 2.5ml of 17% EDTA for 3 minutes at the end of the instrumentation; Group 5 (n. 15) - 2.5ml of 2.5% sodium hypochlorite at each change of instruments + 2.5ml of 10% citric acid for 3 minutes at the end of the instrumentation; Group 6 (n. 15) - 2.5ml of 2.5% sodium hypochlorite and 2.5 ml of 10% citric acid at each change of instruments + 2.5 ml of 10% citric acid for 3 minutes at the end of the instrumentation. Following this phase, five specimens from each group were cleaved in the mesiodistal direction to evaluate the smear layer removal by scanning electron microscopy. Evaluation was performed by analyzing 3 images of each third at 300, 1000 and 2000X. This variable was determined by a qualitative score established by the consensus of 3 calibrated examiners. The remaining specimens were filled using lateral condensation with AH Plus sealer labeled with Rhodamine B and kept in an environment with 100% humidity for 7 days. Then, the specimens were sectioned to obtain approximately 2 mm thick slices of each third (cervical, middle and apical). The cervical surfaces were subjected to metallographic treatment for analysis of the tubular dentine sealer penetration by confocal laser microscopy. The highest smear layer removal rates and tubular dentine sealer penetration percentages were obtained by the groups that used chelating solutions (G3, G4, G5 and G6). These showed statistically significant differences (p<0.05) compared with the groups that used just distilled water (G1) and 2.5% sodium hypochlorite (G2) during instrumentation. No benefits were observed for the combined use of 17% EDTA or 10% citric acid with 2.5% sodium hypochlorite, considering that there were no statistically significant differences between groups 3 and 4, and between 5 and 6, respectively.

Está bem estabelecido na literatura que o NHE3 é ativado, no intestino, pelo transporte de glicose mediado pelo SGLT1, e que esta ativação não dependente do metabolismo da glicose. Acredita-se que a co-ativação do NHE3 e do SGLT1 ocorra para maximizar a reabsorção de nutrientes no período pós-prandial. Porém, ainda não foi determinado se a captação de glicose através dos SGLTs é capaz de regular a atividade do NHE3 no túbulo proximal renal. Levando-se em conta que este segmento renal também expressa o SGLT2 e que os rins e intestinos apresentam significativas diferenças na disponibilidade de glicose ao longo do dia, o objetivo do presente trabalho foi o de determinar o efeito da glicose e da atividade dos SGLTs renais sobre a atividade do NHE3. Experimentos de microperfusão estacionária demonstraram que a perfusão luminal de glicose 5mM estimula o NHE3 via o metabolismo glicolítico. A perfusão de concentrações suprafisiológicas de glicose inibe o NHE3 por promover aumento de volume celular. A inibição farmacológica dos SGLTs, utilizando-se o inibidor inespecífico Florizina, ocasionou acentuada inibição do NHE3, mesmo na ausência de glicose. Além disso, experimentos de imunofluorescência determinaram que o NHE3 é co-expresso com o SGLT2, mas não com o SGLT1. Conclusão: os resultados deste trabalho demonstram que a glicose apresenta um efeito bimodal sobre o NHE3: em concentrações fisiológicas este açúcar estimula o NHE3, enquanto que em concentrações suprafisiológicas a glicose inibe o trocador. Além disso, a inibição farmacológica do transporte de glicose ocasiona acentuada inibição do NHE3 demonstrando que estes transportadores interagem funcionalmente no túbulo proximal. / It is well established that SGLT1-mediated glucose uptake leads to NHE3 activation in the intestine. This co-activation is thought to be important for postprandial nutrient uptake. However, it remains to be determined whether SGLT-mediated glucose uptake is capable of regulating NHE3-mediated NaHCO3 reabsorption in the renal proximal tubule. Considering that this nephron segment also expresses another SGLT isoform, SGLT2, and that the kidneys and intestine show significant variations in daily glucose availability, the goal of the present work was to determine the effect of SGLT-mediated glucose uptake on NHE3 activity in the renal proximal tubule. Stationary in vivo microperfusion experiments demonstrated that luminal perfusion with 5 mM glucose stimulates NHE3-mediated bicarbonate reabsorption. This stimulatory effect was mediated by glycolytic metabolism but not through ATP production. Conversely, luminal perfusion with 40 mM glucose inhibited NHE3 due to cell swelling. Interestingly, the pharmacological inhibition of SGLT activity by phlorizin produced a marked inhibition of NHE3, even in the absence of glucose. Furthermore, immunofluorescence experiments showed that NHE3 co-localizes with SGLT2, but not with SGLT1, in the rat renal proximal tubule. Collectively, the findings of this work demonstrate that glucose exerts a bimodal effect on NHE3. The physiological metabolism of glucose stimulates NHE3 transport activity, whereas supraphysiological glucose concentrations inhibit this exchanger. Additionally, phlorizin-sensitive SGLT transporters and NHE3 interact functionally in the proximal tubule.

RESUMO Desinfecção da dentina radicular pela irradiação dos lasers de ND:YAG, HO:YAG e ER:YAG: um modelo in vitro A provável causa do insucesso da terapia endodôntica é a persistência de microrganismos colonizando os túbulos dentinários. Para reduzir o risco de insucesso e, se possível, o tempo despendido no tratamento endodôntico, novos equipamentos e materiais são constantemente desenvolvidos. O objetivo desta investigação foi estudar o efeito da irradiação laser intracanal na desinfecção dos túbulos dentinários de dentes bovinos recém-extraídos, utilizando-se um modelo in vitro. Os grupos irradiados pelos vários lasers foram comparados ao tratamento com hidróxido de cálcio, freqüentemente utilizado como medicação intracanal. O cemento radicular foi removido, o canal preparado e os dentes, cortados, resultando em 180 corpos de prova padronizados. Para promover a colonização bacteriana, os corpos de prova foram incubados, a 37 o C, em frascos contendo caldo de tripticase de soja e Enterococcus faecalis, o qual continha um plasmídeo que permitiu o seu crescimento em um meio seletivo com cloranfenicol. Os corpos de prova foram divididos em cinco grupos experimentais e três grupos-controle. Para irradiação foram utilizados os lasers pulsados de: Ho:YAG a 2,1 µm; Nd:YAG (1,06 µm); e Er:YAG (2,94 µm) com e sem refrigeração ar/água. Os grupos tratados receberam três parâmetros diferentes de irradiação com cada tipo de laser: energia abaixo do limiar de modificação física (physical modification threshold - ½ do PMT) por 60s; no limiar (PMT) por 60s; e, acima do limiar (120s). O Grupo 5 recebeu sete dias de tratamento com hidróxido de cálcio. Como controles, três espécimes para cada grupo receberam água estéril (controle negativo), três receberam KI3, após exposição à bactéria (controle negativo) e três não receberam tratamento após exposição à bactéria (controle positivo). A quantidade de bactérias foi estimada mediante a contagem de unidades formadoras de colônias (u.f.c.). De modo a avaliar, paralelamente, se os comprimentos de onda laser utilizados no experimento poderiam ser absorvidos pelo E. faecalis, foram obtidos espectros de absorção no UV, VIS e IR, por meio de espectroscopia. A análise estatística mostrou uma redução bacteriana como segue: Ho:YAG > hidróxido de cálcio > Nd:YAG > Er:YAG com refrigeração ar/água > Er:YAG sem refrigeração ar/água. Houve uma significativa redução bacteriana no grupo irradiado pelo Ho:YAG no limiar de modificação – PMT (50 mJ, 10 Hz, 66 J/cm 2 , por 120s), seguida pelo Ho:YAG a 50 mJ, 10 Hz, 33J/cm 2 , por 60s e pelo grupo que recebeu hidróxido de cálcio. Os dois últimos grupos não apresentaram diferenças estatísticas significativas. O espectro de absorção pelas bactérias (E. faecalis) nas faixas dos comprimentos de onda do UV e VIS apresentou picos de absorção em 361 nm e em 377 nm (UV). Já o infravermelho próximo revelou uma baixa absorção pelo microrganismo testado. / SUMMARY Disinfection of intracanal dentin by Nd:YAG, Ho:YAG and Er:YAG laser irradiation: an in vitro model A possible cause for root canal failure is the persistence of bacteria that have colonized dentinal tubules. To reduce this risk and, if possible, to also shorten the time-consuming endodontic therapy, new equipment and materials are constantly being introduced. The aim of the present investigation was to study the effect of disinfection of dentinal tubules by intracanal laser irradiation using an in vitro model. The groups irradiated by various lasers were compared with calcium hydroxide, a material frequently used as intracanal medication between appointments. Freshly extracted, intact bovine incisors were used. The root cementum was removed and the teeth cut to produce 180 standardized specimens. For bacterial colonization, specimens were incubated at 37 o C in test tubes with Tryptic Soy Broth and Enterococcus faecalis, which carried a plasmid that allowed the growth in a selective medium containing chloramphenicol. The specimens were divided in five treatment groups and three control groups. For irradiation, pulsed delivered Ho:YAG laser at 2.1 µm, Nd:YAG laser (1.06 µm), and Er:YAG and Er:YAG laser (2.94µm) with and without air/water coolant, were used. Lasers groups received three different laser settings for treatment: output energy below the physical modification threshold (½ of PMT) for 60 sec, at the PMT for 60 sec and above the PMT (120 sec). Group 5 received a seven-day treatment with calcium hydroxide. As controls, three specimens for each treatment group received sterile water instead of bacteria (negative control), three received iodine potassium-iodide after bacterial exposure (negative control), and three did not receive treatment after bacterial exposure (positive control). The number of bacteria was estimated by counting CFU. In order to evaluate whether the lasers used in the experiment could be absorbed by the bacteria E. faecalis, an UV, VIS and NIR spectra were obtained using a spectrophotometer. Statistical analysis showed the bacterial reduction as follow: Ho:YAG laser > hidróxido de cálcio> Nd:YAG laser > Er:YAG laser with air/water coolant > Er:YAG laser without air/water coolant. There was a significantly higher bacterial reduction in the group irradiated by the Ho:YAG at the PMT (50mJ, 10 Hz, 66 J/cm 2 for 120 sec), followed by Ho:YAG irradiated at 50mJ, 10 Hz, 33 J/cm 2 for 60 sec, and the group that received calcium hydroxide. The latter two groups were not significantly different. The UV and VIS absorbance spectrum presented two absorbance peaks at 361nm and 337nm (UV). The NIR spectrum revealed a very low absorbance by the E. faecalis.

O estudo avaliou os efeitos agudos da Ang-(1-7) na reabsorção de bicarbonato (JHCO3-) no túbulo proximal cortical de rato, in vivo, medindo o pH intratubular pelo microeletródio sensível a H+. O JHCO3- controle é 2,84 ± 0,08 nmol. cm-2. s-1 (49), a Ang-(1-7; 10-12 ou 10-9 M) o reduz (35 ou 61 %) e a Ang-(1-7; 10-6 M) o eleva (56 %). A inibição do receptor Mas (por A779) eleva o JHCO3- (30 %), abole o efeito inibidor da Ang-(1-7), mas não afeta seu efeito estimulador. A inibição do NHE3 (por S3226) diminui o JHCO3- (45 %), não altera o efeito inibidor da Ang-(1-7), mas transforma seu efeito estimulador em inibidor. A concentração de cálcio citosólico ([Ca2+]i), medida pelo FURA-2-AM, controle é 100 ± 2,47 nM (35) e a Ang-(1-7; 10-12, 10-9 ou 10-6 M) a aumenta (152, 103 ou 53 %) transientemente (3 min). A inibição do receptor Mas aumenta a [Ca2+]i (26 %), mais inibe o efeito estimulador de todas as doses de Ang-(1-7). Os resultados indicam que o efeito bifásico dose-dependente da Ang-(1-7) sobre o JHCO3- no túbulo proximal é via receptor Mas e isoforma NHE3 e sugerem estimulação desse trocador por moderado aumento da [Ca2+]i na presença de Ang-(1-7; 10-6 M) e sua inibição por pronunciado aumento da [Ca2+]i na vigência de Ang-(1-7; 10-12 ou 10-9 M). / The action of Ang-(1-7) on bicarbonate reabsorption (JHCO3-) was evaluated in vivo middle proximal tubule of rat kidney, using H ion-sensitive microelectrodes. The control JHCO3- is 2,84 ± 0.08 nmol. cm-2. s-1 (49), Ang-(1-7; 10-12 or 10-9 M) decreases it (35 and 61 %) but Ang-(1-7; 10-6 M) increased it (56 %). A779 (an Ang-(1-7) receptor Mas antagonist) increases the JHCO3- (30 %), prevents the inhibitory effect of Ang-(1-7) and does not affect the stimulatory effect of Ang-(1-7). S3226 (10-6 M; an inhibitor of NHE3) decreases the JHCO3- (45 %), does not affect the inhibitory effect of Ang-(1-7) and changes its stimulatory effect on an inhibitory effect. The control cytosolic free calcium ([Ca2+]i), monitored by FURA-2-AM, is 100 ± 2,47 nM (35) and Ang-(1-7; 10-12, 10-9 or 10-6 M) causes a transient (3 min) increase of it (152, 103 or 53 %). A779 increases the [Ca2+]i (26 %) but impaired the stimulatory effect of Ang-(1-7). Our results indicate the biphasic dose-dependent effect of Ang-(1-7) on JHCO3- in proximal tubule is mediated via Mas receptor and NHE3 and are compatible with stimulation of this exchanger by a moderate increase in [Ca2+]i in the presence of Ang-(1-7, 10-6 M), and its inhibition by large increase in [Ca2+]i with Ang-(1-7, 10-12 or 10-9 M).