Los objetivos de la presente tesis son los siguientes:- Determinar la sensibilidad en la detección del ARNm de la tirosinasa mediante la reacción en cadena de la polimerasa con transcripción reversa (RT-PCR) como marcador de células metastásicas de melanoma de úvea, en sangre periférica a partir de diluciones de varias líneas celulares de dicha tumoración. - Valorar la proporción de pacientes diagnosticados de melanoma de úvea, en los que mediante la misma técnica se detectan micrometástasis en sangre periférica.- Validar la RT-PCR para el rastreo metastásico en los pacientes afectos de melanoma de úvea respecto de los métodos estándar. (Radiografía de tórax, enzimas hepáticos y ecografía hepática).- Relacionar los factores clínicos y anatomo-patológicos pronósticos conocidos en el melanoma de úvea, con el resultado de la RT-PCR.

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Se ha desarrollado un nuevo método de inmovilización de tirosinasa de champiñón, basado en la adsorción de esta enzima a un éster cinámico de un carbohidrato fotoentrecruzado, con muy buenos resultados. Se han obtenido inmovilizados de tirosinasa directamente a partir de extractos de champiñón. Se han estudiado los parámetros que afectan a la inmovilización (pH, tiempo y concentración de enzima), las características de tirosinasa inmovilizada (cantidad de enzima inmovilizada, actividad enzimática, pH y temperatura óptimos de reacción, estabilidad térmica, operacional y al almacenado), las propiedades cinéticas (constante de Michaelis, velocidad máxima y constante catalítica) de tirosinasa inmovilizada sobre distintos soportes al actuar sobre diversos sustratos y la estereoespecificidad de tirosinasa inmovilizada sobre un soporte quiral y otro no quiral respecto a los isómeros L y D y racémicos. Los conocimientos adquiridos se han aplicado con éxito a la producción de diversos o-difenoles como L-dopa, a partir de sus correspondientes monofenoles. / A new mushroom tyrosinase immobilization method consisting of tyrosinase adsorption on a photocrosslinked cinnamic carbohydrate ester has been developed with very good results. Immobilized tyrosinase was obtained directly from a mushroom extract. We studied the parameters affecting the immobilization process (pH, time and enzyme concentration), the properties of immobilized tyrosinase (quantity of immobilized enzyme, enzymatic activity, optimum pH and reaction temperature; thermal, operational and storage stability), kinetic properties (Michaelis constant, maximum steady-state rate and catalytic constant) of tyrosinase immobilized on several supports and acting over several substrates, and tyrosinase stereospecificity immobilized on a chiral and a nonchiral support acting on L and D isomers and racemics. The knowledge acquired was used to successfully produce several o-diphenols, such as L-dopa, from the corresponding monophenols.