La cryoconservation du tissu ovarien (CTO) permet aujourd'hui de préserver la fertilité des femmes et jeunes filles devant subir un traitement potentiellement gonadotoxique ou souffrant de pathologie à l'origine d'une insuffisance ovarienne prématurée. En vue d'optimiser les procédures de CTO, l'objectif de notre travail a porté d'une part sur la validation d'un protocole original de congélation lente du tissu ovarien applicable en thérapeutique et d'autre part, sur le développement d'un protocole de vitrification. L'analyse statique du tissu ovarien congelé selon notre protocole de congélation lente montre des résultats similaires en comparaison à ceux obtenus avec le tissu frais en termes de qualité des follicules et de l'endothélium vasculaire ovarien. Néanmoins, le stroma semble plus sensible aux effets délétères de la congélation. L'analyse fonctionnelle montre que le tissu ovarien congelé/décongelé présente une folliculogenèse active après 12 jours de culture in vitro. Les mesures des concentrations en oestradiol dans les milieux de culture et l'étude immunohistochimique du facteur de prolifération PCNA (proliferating cell nuclear antigen) témoignent en effet de l'activité fonctionnelle des follicules décongelés en culture. Dans un second temps, nous avons développé un protocole de vitrification du tissu ovarien. Pour évaluer son efficacité, nous avons réalisé une analyse statique du tissu ovarien vitrifié selon ce protocole versus notre protocole de congélation lente validé. Les résultats obtenus ne montrent aucune différence significative entre les deux méthodes, en termes de préservation de la morphologie et de l'intégrité nucléaire des follicules et du stroma ovarien. En conclusion, notre protocole de congélation lente préserve la qualité des différents compartiments constituant le tissu ovarien et la fonctionnalité de ce tissu. Ces données viennent compléter des travaux préliminaires de l'équipe et permettent de valider ce protocole envisageable maintenant en thérapeutique. La procédure de vitrification développée présente une efficacité similaire à la procédure de congélation lente en termes de préservation de la qualité des follicules et du stroma ovarien. Néanmoins, il serait nécessaire de poursuivre l'étude de l'efficacité de ce protocole par une analyse fonctionnelle. / No abstract available

Lors de l’obésité un état inflammatoire chronique de bas grade se développe dans le tissu adipeux et contribue à son dysfonctionnement participant ainsi au développement de l’insulino-résistance. Cette inflammation est due à une infiltration et une activation de différentes cellules immunitaires dans le tissu adipeux, dont des macrophages. Les acides gras saturés et le LPS participent à l’activation des cellules immunitaires conduisant ainsi à la production de cytokines inflammatoires, tous ces facteurs étant impliqués dans le dysfonctionnement du tissu adipeux et dans l’insulino-résistance. La kinase inflammatoire Tpl2 activée par le LPS et les cytokines, a récemment été identifiée comme une nouvelle kinase dont l’expression est augmentée dans le tissu d’obèses. Son rôle dans l’inflammation de ce tissu et dans la résistance à l’insuline est donc un axe de recherche majeur dans la recherche de nouvelles cibles thérapeutiques pour le traitement de l’obésité et des complications métaboliques qui lui sont associées. Nos résultats impliquent Tpl2 dans les effets délétères des macrophages activés par les acides gras ou le LPS sur la biologie des adipocytes. De même, l’inhibition pharmacologique de Tpl2 ou l’utilisation d’ARN interfèrent altère le potentiel chimiotactique du sécrétome d’adipocytes vis-à-vis des macrophages. Nos résultats indiquent que la kinase Tpl2 est activée par l’hypoxie dans les adipocytes et les macrophages, et que son inhibition entraîne une réduction de l’expression et de la production de facteurs inflammatoires. Ces études permettent de proposer Tpl2 comme cible thérapeutique potentielle dans le traitement de l’obésité et du diabète. / During obesity a chronic low grade inflammation is developed in adipose tissue and contributes to its malfunction and participating in the development of insulin resistance. This inflammation is due to the infiltration and activation of various immune cells in adipose tissue, such as macrophages. Saturated fatty acids and LPS are involved in immune cell activation and leading to the production of inflammatory cytokines, all of which are involved in the malfunction of adipose tissue and insulin resistance. The inflammatory TPL2 kinase activated by LPS and cytokines, has recently been identified as a novel kinase, whose expression is increased in obese tissue. Its role in the inflammation of this tissue and in the insulin resistance is a major area of research in the search for new therapeutic targets for the treatment of obesity and metabolic complications associated. Our results suggested that TPL2 is involved in the deleterious effects of macrophages activated by fatty acids or LPS on the biology of adipocytes. Similarly, the pharmacological inhibition of TPL2 or use of interfering RNA impairs chemotactic potential secretome of adipocytes versus the macrophages. Our results indicate that the TPL2 kinase is activated by hypoxia in adipocytes and macrophages, and its inhibition leads to a reduction of the expression and production of inflammatory factors. These studies suggested thatTPL2 is a potential therapeutic target in the treatment of obesity and diabetes.

Le tissu adipeux, outre son rôle de réserve énergétique, joue un rôle essentiel dans le contrôle de l'homéostasie du métabolisme ainsi que dans la physiopathologie de différentes affections, telles que diabète de type 2, dyslipidémies ou athérosclérose. Ce rôle est en partie assuré par des substances sécrétées par le tissu adipeux dans le plasma et regroupées sous le terme d'adipokines. Il s'agit notamment du tumor necrosis factor (TNF)-α, de la leptine, résistine ou encore de l'adiponectine (ApN). L'ApN se distingue des autres adipokines car, contrairement à l'augmentation des concentrations plasmatiques de leptine, de résistine ou de TNF-α observée dans l'obésité, ses taux sont corrélés de façon négative à l'indice de masse corporelle et de façon positive à la sensibilité à l'insuline. L'ApN joue donc un rôle très important dans la modulation du métabolisme lipidique et glucidique et/ou dans la régulation de l'insulinosensibilité. Afin d'étudier les répercussions in vivo d'une expression précoce et chronique d'ApN spécifiquement dans le tissu adipeux, nous avons créé des souris transgéniques où l'ADNc de l'ApN (forme complète) a été placé sous contrôle d'un promoteur adipocytaire. Selon le nombre de copies du transgène intégré dans le génome, nous obtenons des phénotypes forts différents, voire opposés. Dans notre étude réalisée chez des souris ayant intégré un nombre modeste de copies du transgène (6 copies), nous observons une diminution de l'expression (ARNm) et du contenu protéique en ApN du tissu adipeux. Ce rétrocontrôle négatif de la production d'ApN est associé à un phénotype d'intolérance au glucose et d'insulinorésistance, à une adiposité accrue probablement suite à la faible expression des molécules impliquées dans la dissipation d'énergie et à l'accroissement de la lipogenèse. Nous assistons également à une faible expression d'AdipoR2, l'isoforme du récepteur responsable de l'action de l'ApN sous sa forme complète. A l'inverse, les souris ayant intégré un grand nombre (100) de copies du transgène présentent une augmentation de l'expression et du contenu en ApN dans différents sites du tissu adipeux blanc (le phénomène de rétrocontrôle de l'ApN endogène étant masqué par une surexpression plus prononcée de l'ApN exogène). Cette surexpression d'ApN est associée à une amélioration attendue de l'homéostasie glucidique et du profil lipidique. De plus, ces souris présentent une nette réduction de leur adiposité secondaire à une augmentation de la dépense énergétique et, fait original, à une diminution de la différenciation adipocytaire. Le remaniement du tissu adipeux résulte en de petits adipocytes, caractérisés par une diminution d'expression des enzymes lipogéniques et de marqueurs adipocytaires, ainsi que par une augmentation d'expression de protéines découplantes et d'un marqueur préadipocytaire (Pref-1). Chez ces souris, l'expression d'AdipoR2 est accrue, peut-être suite à une réduction locale de TNFα. / Adipose tissue regulates fuel homeostasis and is implicated in the pathophysiology of several components of the metabolic syndrome, such as diabetes of type 2, dyslipidemia or atherosclerosis. The secretion of regulatory peptides, often referred to as adipocytokines, mediates in part these adipose functions. The best-known adipokines include tumor necrosis factor α (TNFα), leptin, resistin and adiponectin (ApN). Unlike the other adipokines, which are elevated in obesity, plasma ApN levels are negatively correlated to body mass index and positively to insulin sensitivity. Thus, ApN plays a fundamental role in regulating lipid and glucose metabolism, and insulin action. To study in vivo the chronic effects of ApN specifically on adipose tissue, we generated transgenic mouse lines allowing persistent and moderate expression of native full-length ApN targeted to white adipose tissue. We have obtained two different phenotypes according to the number of transgene copies integrated into the genome In our mouse lines with a modest copy number (6), we observed a decrease of expression (ARNm) and protein content of ApN in adipose tissue. This negative feedback on ApN production was associated with a phenotype of the glucose intolerance and insulin resistance, and with an increased adiposity due to low expression of molecules involved in energy expenditure, and to increased lipogenesis. We also observed a weak expression of AdipoR2, the receptor isoform responsible for the action of full-length ApN. On the contrary, mice with a high copy number (100), clearly overexpressed ApN in various sites of white fat (the downregulation of endogenous ApN being masked by the marked overexpression of exogenous ApN). This overexpression of ApN was associated with an expected improvement of glucose homeostasis and lipid profile. Furthermore, these mice showed reduced adiposity, due to increased energy expenditure and decreased adipocyte differentiation. Adipose tissue remodelling resulted in smaller (younger) adipocytes, characterized by a decrease of lipogenic enzymes and of adipocyte markers, as well as by an increased expression of uncoupling proteins and a preadipocyte marker (Pref-1). In this group of mice, the expression of AdipoR2 was enhanced possibly because of a local reduction of TNFα.

Thèse doctorat : Génie Mécanique : Villeurbanne, INSA : 2002. / Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr. p. 298-320.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine : Nancy 1 : 2003. / Titre provenant de l'écran-titre.

Thèse de doctorat : Biomécanique : Paris 12 : 2007. / Titre provenant de l'écran-titre. Pagination : XII-247 p. Bibliogr. : 152 réf.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine : Nancy 1 : 2002. / Thèse : 2002NAN11170. Titre provenant de l'écran-titre.

Thèse de doctorat : Histoire : Tours : 2008. / Titre provenant de l'écran-titre.

Thèse (Ph. D.)--Université Laval, 2007. / Bibliogr.: f. 226-259. Publié aussi en version électronique dans la Collection Mémoires et thèses électroniques.

Thèse (M.Sc.)--Université Laval, 2003. / Bibliogr.: f. 91-105. Publié aussi en version électronique.