Made available in DSpace on 2014-10-09T12:25:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 01248.pdf: 1789417 bytes, checksum: 5a973aecd1016836db674f63b72e6524 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IEA/D / Faculdade de Ciencias Farmaceuticas, Universidade de Sao Paulo - CF/USP

Le tritium est l’isotope radioactif de l’hydrogène. Il est capable d’intégrer la plupart des moléculesbiologiques. Bien que sa radiotoxicité soit faible, les effets du tritium seraient augmentés s’il étaitcapable de se concentrer dans des compartiments critiques du vivant. Afin de mieux comprendre lacirculation du tritium dans l’environnement et mettre en évidence les constantes de transfert entrecompartiments, nous avons étudié la tritiation de différentes matrices agricoles exposéeschroniquement à du tritium. La première étape de notre démarche est la validation des techniquesmises en oeuvre dans la préparation des échantillons. Nous avons démontré la possibilité de stocker deséchantillons environnementaux à Valduc et avons mis en évidence différents biais liés à l’extraction del’eau. Des solutions ont été proposées. Une hypothèse est formulée sur l’origine physique du facteurde séparation isotopique original que nous avons mis en évidence lors de l’extraction de l’eau du lait.Dans l’étude environnementale, les mesures faites sur les végétaux confirment l’importance del’exposition atmosphérique dans la tritiation de la plante. L’absence de différence liée à l’espèce dansla tritiation de la matière sèche a été démontrée. La diversité des résultats obtenus sur la tritiation desdifférentes fractions de matrices végétales encouragent la poursuite de cette voie de recherche. Nousavons comparé la tritiation des principales fractions hydrogénées du lait, d’abord entre elles puis entreéchantillons afin de mettre en évidence les facteurs à l’origine des différences observées. Nous avonsainsi montré la très grande corrélation entre l’eau d’abreuvement et l’eau libre du lait ainsi qu’entre lesactivités tritium de la matière sèche du bol alimentaire et des fractions organiques du lait. Nous avonségalement mis en évidence l’importance des paramètres métaboliques dans l’excrétion du tritium dansle lait. La synthèse de ces résultats montre l’importance des effets de la dilution de l’hydrogène dansles compartiments considérés devant les mécanismes de discrimination isotopique, y compris au seind’une chaîne alimentaire exposée chroniquement dans son ensemble. / Tritium is the radioactive isotope of hydrogen. It can be integrated in most of the biological molecules.Even if its radiotoxicity is weak, effects of tritium could be increased if it can concentrate in somecritical compartments of beings. In order to better understand the tritium circulation in the environment and highlight constants of transfer between compartments, we have studied the tritiationof different agricultural matrices chronically exposed to tritium. The first step of our study is thevalidation of the different techniques used to prepare our sample. We have also demonstrated that itwas possible to store environmental samples in the Valduc centre and have underlined some biasesdue to the extraction of free water. Some ways of improvements are proposed. A hypothesis has alsobeen formulated on the origin of an original isotopic fractionation effect during the extraction of the free water of milk. In the environmental study, the specific activities measured on plants confirm the importance of the atmospheric exposure on their tritiation. No difference in the tritiation has beenmeasured between wheat, barley and colza. Some differences have been measured in the tritiation ofsome organic components of vegetal matrices. These results underline the interest of continuing thiskind of study. We have also compared the tritiation of the main hydrogenated components of milk,first, component to component, then, sample to sample. Some origins of the measured differences havebeen shown. We have demonstrated the correlation between the specific activities of drinking waterand the free water of milk as between the tritiations of dry matter of cattle’s food and of the mainorganic components of milk. Our results show also the importance of the metabolism on thedistribution of tritium in the different compartments. The overall synthesis of our results show the importance of the dilution of hydrogen in the considered environmental compartments, above theisotopic effects, even in a food chain chronically exposed to tritium.

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Cette étude s'inscrit dans le domaine de la surveillance de l'environnement. Elle consiste à optimiser et valider la procédure analytique de détermination du tritium sous forme organique, et à identifier les molécules organiques, porteuses de tritium, responsables de son transfert de l'environnement à l'homme. La démarche s'est organisée en trois temps. Une procédure analytique a d'abord été mise en place pour déterminer, la teneur en hydrogène des échantillons, élément clé, utilisée pour le calcul des activités de tritium organique. L'impact de la séparation des fractions de tritium organique (l'échange labile) sur la détermination de l'activité de la fraction représentative du niveau de tritium environnemental a ensuite été évalué. Pour cela, les quantités d'échantillon solubilisées ont été estimées. Enfin, la spéciation du tritium dans des échantillons environnementaux a été abordée. Pour cela, les familles de molécules, puis les composés organiques solubilisés lors des échanges labiles ont été identifiés. Les résultats montrent que la répartition du tritium dans les organismes dépend à la fois des propriétés de la liaison chimique dans laquelle il est impliqué et des propriétés des molécules organiques le portant. Les composés identifiés appartiennent aux familles de molécules constitutives (glucides, acides aminés) de la matière vivante. Il serait à présent intéressant d'étudier la répartition du tritium au sein d'un échantillon de l'environnement pour cibler les molécules d'intérêt et étudier de manière plus approfondie la distribution du tritium dans l'environnement et son impact, de l'environnement à l'homme.

La détermination de la conformation d’une petite molécule liée à sa cible biologique nous permet de concevoir des drogues de propriété biologique améliorée. Cette détermination peut être difficile dû aux limitations techniques, comme indiqué par le débat sur la conformation de microtubule-lié d’une drogue anticancéreuse – paclitaxel. Les études utilisant la cristallographie des rayons X et la RMN du liquide ne peut pas fournir les informations détaillées sur la conformation espérée. La RMN du solide est un choix raisonnable en mesurant précisément des distances interatomiques de la molécule, et le marquage sélectif au tritium permet de mesurer une distance longue jusqu’à 14,4 Å avec une précision haute grâce au rapport gyromagnetique élevé de ce noyau. Aucune modification structurale n’a été rendue par le marquage au tritium. Ainsi notre sujet ayant pour l’objectif de déterminer la conformation bioactive du paclitaxel comporte la synthèse des 6 isotopomères de paclitaxel ditritiés sur les sites particuliers, suivie par la préparation des complexes de microtubule-paclitaxel marqué. L’analyse de RMN du tritium à l’état solide fournira les distances clés pour la détermination. 2 isotopomères ont été synthétisés par tritier le paclitaxel dibromé et coupler la baccatine tritiée et la chaîne latérale tritiée, respectivement. La stratégie synthétique conçue permet de réaliser la synthèse avec un rendement généralement satisfaisant et une bonne stéréosélectivité. Différentes méthodes de tritiation ont été testées, dont un enrichissement isotopique supérieur à 92% a été obtenu. La synthèse des autres isotopomères ainsi que des complexes de microtubule-paclitaxel est en cours de réaliser dans notre laboratoire. / The determination of the conformation of small molecule bound to its biological target would facilitate people to design improved drugs. This determination can be difficult due to technical limitations, as exemplified by the long standing debate on the microtubule-binding conformation of a natural anticancer drug – paclitaxel. Previous studies using X-ray crystallography and solution-state NMR failed to furnish direct information on the expected conformation. Solid-state NMR may help in this task by providing precise interatomic distances, and the selective labeling on different sites with tritium atoms enables accurate measurement of long-range distances (up to 14.4 Å) owing to the high gyromagnetic ratio of this nucleus, without any structural modification of the molecule. So our project aiming at illustrating the bioactive conformation of paclitaxel consists the syntheses of 6 different paclitaxel isotopomers bearing a pair of tritiums at specified positions, flowing by the preparations of corresponding microtubule-labeled paclitaxel complexes. The solid-state tritium NMR analyses of these complexes would provide key distances for determining the expected conformation. Up to now, 2 paclitaxel isotopomers have been prepared from labelling the dibrominated paclitaxel precursor and from coupling the tritiated taxane rings and the tritiated side chains, respectively. The synthetic strategy allowed us to realize the syntheses in generally high yield and good stereoselectivity. Different tritiation methods have been used, from which an isotopic enrichment of higher than 92% was obtained. The syntheses of other 4 isotopomers, together with the microtubule complexes are currently underway in our lab.

Thesis (M.S.)--University of Michigan, 1965.

Thesis (M.S.)--University of Michigan, 1965.

Thesis (Ph. D.)--University of Wisconsin--Madison, 1962. / Vita. eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references (leaves 60-62).

Thesis [Ph. D.]--Cornell University, January, 2009. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 158-173).

Thesis (Ph. D.)--University of California, San Diego, 1974. / Vita: leaf x. Includes bibliographical references (leaves 127-135).