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Trypanosoma rangeliKoerich, Leonardo Barbosa January 2004 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T12:39:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O Trypanosoma rangeli é um parasita hemoflagelado que infecta uma grande variedade de espécies de mamíferos, incluindo o homem, nas Américas Central e do Sul. Devido a possibilidade da ocorrência de reações sorológicas cruzada com o T. cruzi, diversos estudos tem se voltado para a obtenção de formas tripomastigotas de T. rangeli. Recentemente nosso grupo padronizou a diferenciação do T. rangeli in vitro incubando parasitas em meio DMEM obtendo-se cerca de 80% de formas tripomastigotas. Testando individualmente cada um dos aminoácidos presentes no meio DMEM, parasitas incubados em L-glutamina apresentaram taxas de diferenciação superiores a 80%, enquanto que a incubação com outros aminoácidos induziram baixas diferenciações e/ou altas mortalidades. A adição de DFMO, um inibidor específico e irreversível da ornitina descarboxilase (ODC), reduziu drasticamente as taxas de diferenciação, que foram recuperadas apenas após a adição de putrescina, sugerindo que a ODC é uma enzima chave na regulação da diferenciação do T. rangeli in vitro. Porém, a incubação de parasitas com as poliaminas putrescina, espermidina e espermina, sem L-glutamina, ocasionou altas mortalidades, sugerindo a importancia da L-glutamina para a manutenção do T. rangeli. Também padronizamos duas metodologias distintas para produção e purificação de tripomastigotas de cultura e sangüíneos pelas metodologias de cromatografia de troca iônica, utilizando CM-celulose, e centrifugação diferencial de gradiente, utilizando Histopaque - 1077® respectivamente. A recuperação de tripomastigotas de cultura ficou em torno de 20% e dos tripomastigotas sangüíneos ficou em torno de 40%. Nossos resultados abrem novas perpectivas para estudos da biologia deste parasita, principalmente em relação a regulação gênica e expressão de proteínas de interesse para o diagnóstico diferencial entre T. rangeli e T. cruzi.
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Geração e análise de etiquetas de seqüências transcritas - ESTs - de Trypanosoma rangeliSnoeijer, Cristiane Quimelli January 2004 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2012-10-22T05:27:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1
200174.pdf: 780725 bytes, checksum: 5105c9e6dff3c5b93f852902d1aee0fc (MD5) / O Trypanosoma rangeli, bem como o T. cruzi, são protozoários parasitas da Ordem Kinetoplastida sendo amplamente distribuídos nas Américas Central e do Sul, onde compartilham reservatórios, vetores em regiões geográficas distintas. Infecções produzidas pelo T. cruzi resultam na doença popularmente conhecida como mal de Chagas enquanto que as infecções causadas pelo T. rangeli parecem não ser patogênicas para seres humanos. Apesar disso, cerca de 60% da constituição antigênica solúvel destes parasitas é compartilhada o que pode determinar reações sorológicas cruzadas, dificultando o diagnóstico específico e mascarando a epidemiologia da doença de Chagas humana. As metodologias rotineiramente utilizadas no diagnóstico da doença de Chagas não são capazes de distinguir entre as duas espécies fazendo-se necessária a abertura de novas estratégias que nos permitam distinguí-las de maneira fácil, rápida e economicamente viável. No presente trabalho apresentamos os resultados obtidos à partir da construção e seqüenciamento de três bibliotecas de cDNA de formas epimastigotas da cepa Choachi de T. rangeli que resultaram na obtenção de 656 ESTs, dentre as quais apenas 20 ESTs foram homólogas à seqüências de T. rangeli e 245 não apresentaram homologia com seqüências dos bancos de dados pesquisados. Estes resultados demonstram a importância do uso deste tipo de estratégia para obtenção de novas informações à respeito do T. rangeli, servindo como base para a identificação de alvos diagnósticos ou para estudos da e suas interações com seus hospedeiros.
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Interação Trypanosoma cruzi e hospedeiro : influência do parasita na expressão da subunidade β1i do imunoproteassomaName, Juliana Vieira Ferreira 20 February 2017 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2017. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-05-11T17:55:25Z
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2017_JulianaVieiraFerreiraName.pdf: 1833058 bytes, checksum: b4c218ac98286257ce515f3efda357b8 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline (jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2017-05-17T12:34:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2017_JulianaVieiraFerreiraName.pdf: 1833058 bytes, checksum: b4c218ac98286257ce515f3efda357b8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-17T12:34:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2017_JulianaVieiraFerreiraName.pdf: 1833058 bytes, checksum: b4c218ac98286257ce515f3efda357b8 (MD5) / A Doença de Chagas ou tripanossomíase americana é uma doença causada pelo parasita protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi) e é considerada endêmica em 21 países da América Latina. Estudos mostraram que a infecção por T. cruzi interfere na expressão em nível pós-transcricional de proteínas da via de apresentação MHC classe I, especificamente as subunidades induzíveis do imunoproteassoma (β1i, β2i e β5i), a subunidade PA28α, a proteína TAP e o MHC I. O presente estudo teve como objetivo avaliar se as regiões 5’ e 3’ UTR dos mRNAs dessas proteínas estão envolvidas na inibição da expressão no nível traducional pelo parasita, utilizando como modelo a subunidade β1i do imunoproteassoma. Para isso, essas duas regiões foram amplificadas e clonadas flanqueando o gene repórter EGFP em um vetor de expressão para células eucarióticas. Células transfectadas foram infectadas com T. cruzi e após quatro dias foram realizadas citometria de fluxo e microscopia de fluorescência para analisar a expressão da EGFP. Foi possível observar que as células HeLa transfectadas com a montagem do gene EGFP contendo as regiões 5’UTR e 3’UTR da subunidade B1i e infectadas com o parasita apresentaram queda na expressão da EGFP em sua população. Em uma visão mais individualizada por microscopia foi observado que células que apresentavam uma parasitemia elevada não emitiam fluorescência, ou apresentavam menor intensidade que as células na mesma população não infectadas. Nas células transfectadas com o gene EGFP sem as regiões UTRs observamos que a presença dos parasitas no interior das células não interferiu na expressão da EGFP. Esses resultados indicam que há uma interferência na expressão da subunidade β1i do imunoproteassoma durante a infecção por T. cruzi e que as regiões UTR são alvos nesse processo de inibição pós-transcricional. / Chagas disease or American trypanosomiasis is a disease caused by the protozoan parasite Trypanosoma cruzi (T. cruzi) and is considered endemic in 21 countries in Latin America. Studies have shown that T. cruzi infection interferes in post-transcriptional level expression of MHC class I pathway proteins, specifically the inducible subunits of the immunoproteasome (β1i, β2i and β5i), the PA28α subunit, the TAP protein and the MHC I. The present study aimed to evaluate whether the 5 'and 3' UTR regions of the mRNAs of these proteins are involved in the inhibition of expression at the translational level by the parasite, using as template the β1i subunit of the immunoproteasome. To that end, these two regions were amplified and cloned flanking the EGFP reporter gene into an expression vector for eukaryotic cells. Transfected cells were infected with T. cruzi and after four days flow cytometry and fluorescence microscopy were performed to analyze EGFP expression. It was possible to observe that HeLa cells transfected with EGFP gene assembly containing the 5'UTR and 3'UTR regions of the β1i subunit and infected with the parasite showed a decrease in EGFP expression in their population. In a more individualized view by microscopy it was observed that cells that had a high parasitemia did not emit fluorescence or were emitted much less intensely than cells in the same uninfected population. In cells transfected with the EGFP gene without the UTRs regions we observed that the presence of the parasites inside the cells did not interfere in the EGFP expression. These results indicate that there is interference in the expression of the β1i subunit of the immunoproteasome during T. cruzi infection and that the UTR regions are targets in this post-transcriptional inhibition process.
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Análise proteômica da fração nuclear de formas epimastigotas de Trypanosoma cruziSantos Junior, Agenor de Castro Moreira 27 February 2014 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina,
Programa de Pós-graduação em Patologia Molecular, 2014. / Submitted by Ruthléa Nascimento (ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2014-05-20T12:37:28Z
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2014_AgenordeCastroMoreiradosSantosJunior.pdf: 2582950 bytes, checksum: b1ada59cf3e421cbc9fe13c04ade54a9 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-21T11:48:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2014_AgenordeCastroMoreiradosSantosJunior.pdf: 2582950 bytes, checksum: b1ada59cf3e421cbc9fe13c04ade54a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-21T11:48:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2014_AgenordeCastroMoreiradosSantosJunior.pdf: 2582950 bytes, checksum: b1ada59cf3e421cbc9fe13c04ade54a9 (MD5) / O Trypanosoma cruzi é o protozoário causador da doença de Chagas, uma parasitose de grande relevância na América Latina. A divisão celular do T. cruzi possui características incomuns à maioria dos eucariotos, dado que durante o processo não ocorre o desaparecimento da membrana nuclear e condensação de seus cromossomos. O objetivo deste trabalho foi o estudo do conjunto de proteínas (proteoma) presentes no núcleo da forma epimastigota do T. cruzi. Para tanto, lisados celulares do parasito foram submetidos a um fracionamento celular por ultracentrifugação em gradiente de sacarose. O enriquecimento nuclear foi validado por microscopia de fluorescência com marcação para DNA e as imagens comparadas com a microscopia de campo claro, mostrando que a fração nuclear foi obtida com alto grau de pureza. A análise por SDS-PAGE mostrou diferenças evidentes de perfil proteico entre o extrato nuclear e extratos das demais frações obtidas durante o fracionamento. As proteínas do subproteoma nuclear foram posteriormente analisadas por eletroforese bidimensional (2-DE) e por digestão tríptica seguida de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS/MS). Usando esta última abordagem foi identificadas mais de 800 proteínas sendo quase 30% hipotéticas. Dentre os principais processos biológicos encontrados para as proteínas identificadas estão processos catabólicos, biossintéticos, geração de metabólitos e energia, processo metabólicos nucleares e tradução. As proteínas encontradas poderão ser alvos de futuros estudos para a elucidação de processos como divisão celular, transcrição gênica e formação de cromossomos, que hoje ainda não são bem elucidados. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Trypanosoma cruzi is a protozoan that causes Chagas´ disease, a disease of great relevance in Latin America. The replication process of the T. cruzi possesses unusual features, when compared to other eukaryotes; given that during this process, the nuclear membrane does not disappear and there is not
chromosome condensation. The goal of this project was to study the set of proteins (proteome) that are present in the nucleus of the T. cruzi epimastigote life form. To this end, the parasite cell lysates were subjected to cell fractionation by sucrose gradient ultracentrifugation. As a way to validate these purity of the isolated cell fractions, we used optical microscopy methods including bright field analysis and fluorescence microscopy after DNA labeling. The images
demonstrated that the nuclear fractions were obtained with high purity. Furthermore, SDS-PAGE analysis showed differences in protein profiles between the nuclear extracts and extracts of other fractions obtained during the fractionation. The proteins of the nuclear subproteome were subsequently
analyzed by two-dimensional electrophoresis (2-DE) and liquid chromatography
coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Using the latter approach, we
identified more than 800 proteins with almost 30 % being hypothetical. Among these proteins many are involved in important biological processes such as catabolic and biosynthetic pathway, metabolites and energy generation, nuclear metabolites and translation. Hence, the proteins describe in this work may be use
in future studies to elucidate processes such as cell division, transcription and
chromosomes packaging, which are not fully well understood.
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Expressão, purificação,caracterização e modelagem molecular da enzima phosphoglucose isomerase de Trypanosoma Brucei / Expression, purification characterization and molecular modelling of the phosphoglucose isomerase enzyme from Trypanosoma BruceiLuiz Marcelo Eugenio 12 June 2001 (has links)
A tripanossomose africana, ou doença do sono, como é popularmente conhecida, atingiu 25 mil pessoas só em 1995. Estima-se que a doença seja responsável pela morte de 10.000 pessoas a cada ano, segundo os dados da Organização Mundial da Saúde. Sua distribuição é exclusivamente africana, devido ao fato de sua transmissão depender da Tsé-Tsé, mosca do gênero Glossina que encontra lá condições favoráveis para sua proliferação. Atualmente os medicamentos existentes não são eficientes e devem ser ministrados em doses altas, provocando graves efeitos colaterais. O parasita Tripanosoma brucei, na forma encontrada no sangue dos mamíferos (tripomastigota), é o responsável pela doença e, assim como toda a família Trypanosomatidea, é altamente dependente de glicose. Esses parasitas consomem a quantidade de glicose equivalente à sua massa em aproximadamente sete horas. A via glicolítica torna-se, portanto, chave para o desenvolvimento de inibidores que possam ser utilizados no combate a estes parasitas. Nesse sentido, temos realizado estudos com a enzima glicose-6-fosfato isomerase (glucose-6-fosfato isomerase; Phosphoglucose Isomerase PGI; EC 5.3.1.9), responsável pela isomerização reversível da D-glicose-6-fosfato e D-frutose-6-fosfato e participa na glicólise como a segunda enzima da via. Os trabalhos realizados até aqui culminaram na sua expressão em forma recombinante, purificação através de coluna de afinidade, e caracterizações enzimáticas. Sua atividade específica foi determinada através de métodos já estabelecidos encontrados na literatura. O IC50 da enzima frente a quatro inibidores da reação foi determinado. O trabalho finaliza com a construção de um modelo estrutural da enzima determinado através de métodos de modelagem molecular por homologia. / The African trypanosomiasis, or sleeping sickness as is popularly known, affected 25 thousand people only in 1995. It is estimated that the disease is responsible for 10 thousand deaths per year, according to data provided from the World Health Organization (WHO). The distribution of the disease is exclusively African due to the transmission being dependent on the tsé-tsé vector. A fly, belonging to the Glossinia genus, finds in the African continent favorable conditions for its proliferation. Presently the existing drugs are not efficient and have to be applied in high dosage, resulting in severe side effects. The bloodstream form (tripomastigote) of the parasite Trypanosoma brucei is responsible for the disease and such as the whole Trypanosomatidae family is dependent on glucose. Those parasites consume a quantity of glucose equivalent to its mass in approximately seven hours. This characteristic results in the glycolitic pathway been a key target for drug development against those parasites. In this direction we are developing research with the enzyme glucose-6-phosphate isomerase (Phosphoglucose lsomerase PGI; EC 5.3.1.9) responsible for the reversible isomnerisation of D-glucose6-phosphate and D-fuctcose-6-phosphate. PGI participates as the second enzyme in the glycolytic pathway. The work developed so far resulted in the expression of the recombinant form of the parasite PGI, its affinity purification and enzimatic characterization. The specific activity was determined with established methods. The IC50 of four inhibitors was determined and a structural model of T brucei PGI was built by molecular modeling techniques.
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Síntese, comprovação estrutural e avaliação da atividade anti-T cruzi de derivados imidazacrídinicos e imidazolidínicosFrança Luis, Aracelly 31 January 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A doença de Chagas é uma infecção causada pelo Trypanosoma cruzi, o qual é
transmitido ao homem através da picada de insetos pertencentes à espécie Triatoma
infestans. Em sua fase aguda, a doença provoca febre e miocardite. No entanto,
alguns pacientes podem desenvolver a forma crônica, quando então surgem as
principais conseqüências cardíacas e gastrointestinais. Muitos estudos foram feitos
na busca de novos fármacos e alguns deles descrevem o potencial efeito anti-T.
cruzi de derivados imidazolidínicos e acridínicos, ambos conhecidos pelo suas
variadas ações biológicas. Neste trabalho, descreve-se a síntese e características
físico-químicas de novos derivados imidazolidínicos e imidazacridínicos. Todos os
compostos sintetizados tiveram suas estruturas químicas comprovadas por
espectroscopia de Infravermelho (IV), Ressonância Magnética Nuclear de
Hidrogênio (RMN1H), espectrometria de Massas (MS) e cristalografia.
Adicionalmente, investigou-se a citotoxicidade de todos os compostos utilizando-se
células esplênicas de camundongos. O estudo da atividade anti-parasitária dos
derivados imidazacridínicos e do composto 5-(9H-fluoren-2-il-metileno)-2-(4-nitrobenzilsulfonil)-
3,5-diidro-imidazol-4ona (LPSF/NN-237) foi realizado através da
técnica de ensaio MTT. O cálculo da IC50, para esses mesmos compostos, foi
determinado por meio de uma regressão linear simples utilizando o software Prisma
4 Graphpad. Os resultados demonstraram que o composto 5-(acridin-9-il-metileno)-
3-benzil-4-tioxo-imidazolidin-2-ona (LPSF/AC-128) obteve os melhores resultados de
atoxidade e atividade anti-parasitária para T.cruzi, sendo um potencial candidato a
novos fármacos no combate à doença de Chagas
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Caracterização molecular e ultraestrutural do estresse do retículo endoplasmático de Trypanosoma cruziSANDES, Jana Messias 26 February 2016 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-13T17:36:08Z
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Previous issue date: 2016-02-26 / FACEPE / O retículo endoplasmático (RE) é uma organela vital para as células eucarióticas, envolvido na síntese, modificação e enovelamento de proteínas, homeostase do cálcio e metabolismo de lipídios. Variações no nível de cálcio, inibição da glicosilação, estresse oxidativo, entre outros, podem levar o RE a uma condição de estresse, a qual dispara vias de sinalização específicas incluindo a Unfolded Protein Response (UPR). A UPR promove aumento na expressão de chaperonas, inibe a tradução de novas proteínas e aumenta a degradação de proteínas mal enoveladas. No entanto, quando o estresse é severo ou persistente, a UPR induz mecanismos de morte celular, principalmente por apoptose. Embora o RE possua papel fundamental na sobrevivência das células de mamíferos, estudos sobre a fisiologia desta organela em Trypanosoma cruzi, agente etiológico da Doença de Chagas, ainda são escassos. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi caracterizar molecular e morfologicamente a resposta de formas epimastigotas de T. cruzi ao estresse do RE induzido por ditiotreitol (DTT) ou tunicamicina (TM). As células tratadas com DTT apresentaram inibição do crescimento de maneira dose-dependente, com recuperação do crescimento após a retirada da droga. O tratamento com DTT não alterou os níveis proteicos de BiP (binding protein) mas reduziu significativamente os níveis de RNAm de BiP e calreticulina (CRT), sugerindo que o T. cruzi tenha uma resposta diferente da UPR de eucariotos superiores. O estresse persistente do RE induzido pelo DTT causou drásticas alterações morfológicas e fisiológicas compatíveis com morte celular por apoptose tardia/necrose, como observado pela dupla marcação com anexina-V e iodeto de propídeo, além da redução do tamanho do corpo celular, inchaço e desorganização das cristas mitocondriais, despolarização do potencial de membrana mitocondrial (ψm) e aumento da produção (21 – 94%) de espécies reativas de oxigênio (ROS). No entanto, a presença de perfis do RE envolvendo porções do citoplasma sugere que a autofagia também esteja ocorrendo. Por outro lado, a TM apresentou um forte efeito tripanostático, sem crescimento celular independentemente da dose ou do tempo de incubação, inclusive após a retirada da droga. O tratamento com a TM também não foi capaz de alterar os níveis proteicos de BiP, porém induziu um aumento nos níveis de RNAm de BiP e CRT. A análise por citometria de fluxo demonstrou que o tratamento com TM induziu despolarização do ψm sem um aumento pronunciado na produção de ROS, e apenas cerca de 10% das células tratadas apresentaram fenótipos de apoptose. Alterações ultraestruturais também foram observadas nas células tratadas com TM, como o arredondamento do corpo celular, a presença de inclusões lipídicas e um grande número de perfis de RE ao redor de estruturas citoplasmáticas em processo de degradação. Dessa forma, nossos resultados sugerem que o tratamento com DTT compromete o funcionamento da célula de maneira geral mais do que atua como estressor do RE, devido ao seu forte efeito oxidativo, levando à morte da célula. Já a TM atua mais especificamente sobre o RE, desencadeando um processo de autofagia/RE-fagia na tentativa de reverter o estresse de RE sem induzir morte celular por apoptose. / The endoplasmic reticulum (ER) is a vital organelle to eukaryotic cells, involved in the protein synthesis, folding and modification, calcium homeostasis and lipid metabolism. Changes in calcium levels, glycosylation inhibition, oxidative stress or others, can lead to an ER stress condition, which triggers specific signaling pathways including the Unfolded Protein Response (UPR). The UPR promotes an increase in the chaperone expression, inhibits the translation of new proteins and increases the degradation of unfolded proteins. However, when the stress is severe or persistent, the UPR induces cell death mechanisms, mainly by apoptosis. Although the ER has a pivotal role in the survival of mammalian cell, studies about the physiology of this organelle in Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of Chagas disease, are still scarce. In this regard, the aim of this study was to characterize molecular and morphologically the response of epimastigote forms of T. cruzi to the ER stress induced by dithiothreitol (DTT) or tunicamycin (TM). DTT-treated cells showed a dose-dependent growth inhibition, with growth recovery after drug withdrawal. The DTT treatment did not alter the BiP (binding protein) protein levels but significantly reduced the mRNA levels of BiP and calreticulin (CRT), suggesting that T. cruzi has a different response from higher eukaryotes UPR. Persistent ER stress induced by DTT caused drastic morphological and physiological changes compatible with cell death by late apoptosis/necrosis, as observed by double staining with annexin-V and propidium iodide, reduction of cell body, swelling and disorganization of mitochondrial cristae, mitochondrial membrane potential (ψm) depolarization and increasing of reactive oxygen species (ROS) production (21-94%). However, the presence of ER profiles involving cytoplasmic portions suggests that autophagy may also be occurring. On the other hand, the TM showed strong trypanostatic effect, with no cell growth observed independent of the dose and the time of incubation, even after drug withdrawal. The TM treatment was also unable to change the BiP protein levels, but induced an increase in BiP and CRT mRNA levels. The flow cytometry analysis showed that TM-treatment induced ψm depolarization without a pronounced increase in the ROS production (10 - 15%) and only about 10% of the treated cells exhibited apoptotic phenotypes. Ultrastructural changes were also observed in TM-treated cells, such as rounding of the cell body, the presence of lipid inclusions and a large number of ER profiles surrounding cytoplasmic structures in degradation process. Therefore, our results suggest that the DTT treatment compromises the whole cell function rather than acts as a specific inductor of ER stress, due to its strong oxidative effect, leading to cell death. The TM treatment acts more specifically on the ER, triggering an autophagy/ER-phagy process in an attempt to reverse the ER stress, without inducing cell death by apoptosis.
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Infecção por dois estoques de Trypanosoma cruzi em diferentes linhagens de camundongosNagamatsu, Rosely Yukiko 24 February 1997 (has links)
Orientador: Irineu Jose Barsanti de Camargo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T07:13:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1997 / Resumo: Foram estudadas respostas imunológicas apresentadas por diferentes linhagens de camundongos à infecção por estoques de Tripanosoma cruzi, cepa Y, mantidos em in vitro (TC) ou in vivo (TS). Foi observado que a manutenção do parasita em cultura celular atenua a virulência, refletida em menor mortalidade. As linhagens também apresentaram diferentes graus de resistência. Entretanto a linhagem BALBI/cJ, de mortalidade intermediária à linhagem AI J e C57Bl61 J, apresentou uma cinética parasitêmica maior, e portanto a parasitemia nem sempre correlaciona com a taxa de mortalidade. A imunização com o TC seguido de desafio após 72hs com o TS provocou uma proteção parcial à letalidade desse estoque. Análises imunohistoquímicas na fase precoce da infecção demonstraram uma hipertrofia do linfonodo poplíteo, do baço e das respectivas áreas povoadas por linfócitos, entretanto sem diferença entre localização das células T CD4 e T CD8. A análise percentual mostrou que na fase inicial da infecção existe zuna variação do número de linfócitos T CD4 e T CD8 dependente do estoque utilizado, que pode refletir a proteção induzida por TC / Abstract: Imune responses from differents strains of mice were studied after infection by stocks of Trypanosoma cruzi, Y strain, with in vitro (TC) or in vivo (TS) maintance. It was observed that maintance of parasite in celullar culture reduces virulence, reflected by smaller parasitemia. The strains of mice present differents levels of resistance to mortality. However, the BALBI cJ strain, of intermediated level of mortality between AI J and C57Bl61 J strains, presented greatest parasitemic kinectic, and therefore the parasitemia may not always correlacionate with mortality. The imunization with TC following challenge 72hs after with TS partially protected the lethal action of this stock. Imunohistoquimics analysis of early phase of infection demonstred hypertrophy in spleen, poplite linphonode and respectives limphocyte populated areas, however without difference between T CD4 or T CD8 lymphocyte localization. The percentual analysis showed that exist a variation of T CD4 and T CD8 lymphocyte subpopulations quantity in initial phase of infection depended of stock utilizated, which may reflect the protection induced by TC / Mestrado / Mestre em Imunologia
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Sintese, caracterização e avaliação de atividade biologica da mistura isomerica de 3-(4'-bromo-[1,1'-bifenil-4-il)-3(4-bromo-fenil)N, N-dimetil-2-propeno-1-amina e de seus isomeros geometricosFernandes, Anna Maria Alves de Piloto 22 July 2018 (has links)
Orientador: Nelson Eduardo Duran Caballero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-22T19:17:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1997 / Mestrado
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Caracterização da atividade enzimatica da triparedoxina peroxidase em Trypanosoma cruziRodrigues, Renata Vilela 01 December 2001 (has links)
Orientadores: Fernanda Ramos Gadelha, Luis Eduardo Soares Netto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T10:57:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2001 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi caracterizar e comparar a atividade enzimática da triparedoxina peroxidase (TXNp) em duas cepas de T. cruzi que apresentam diferentes resistências ao estresse oxidativo. A identificação da TXNp foi feita em extratos celulares totais da forma epimastigota de T. cruzi das cepas Y e Tulahuen 2. De um modo geral, a cepa Tulahuen 2 tem uma concentração maior desta enzÍma do que a Y. Variações na concentração da TXNp dentro de uma mesma cepa com origens geográficas diferentes também foi observada. A TXNp obtida em extratos celulares totais de T. cruzi epimastigotas possui função antioxidante, protegendo a glutamina sintetase (GS) contra as espécies reativas de oxigênio (EROs) produzidas pelo sistema oxidante DTT/Fe3+/02. Parece não estar envolvida com a proliferação celular, uma vez que uma correlação não pôde ser estabelecida através da análise por Western blotting entre os diferentes dias de crescimento e a quantidade desta proteína. A triparedoxina (TXN) também foi encontrada nos mesmos extratos e variações em sua concentração foram observadas quando as cepas e seus diferentes dias de crescimento foram comparados. Neste caso também as células Tulahuen 2 apresentaram uma maior concentração da TXN. Uma maior resistência às EROs geradas pelo sistema DTT/Fe3+/02 pode ser explicada pela maior concentração de TXN e TXNp encontradas. Isto levaria a um metabolismo de hidroperóxidos mais efetivo, quando comparado à cepay. Os "sheddings" de T. cruzi de ambas as formas (epimastigota e tripomastigota) mostraram a liberação de TXNp para o meio extracelular / Abstract: The objective of this work was to charactetize and compare the tryparedoxin peroxidase (TXNp) enzymatic activity in two strains of T. cruzi that have different resistances to oxidative stress. TXNp identification was made in total ceIlular extracts ITom epimastigote of Y and Tulahuen 2 strain. In a broad sense, Tulauen 2 strain has a higher concentration of this enzyme when compared to the Y strain. Differences in TXNp concentration into a same strain with different geographic origins were also observed.
TXNp present in total ceIlular extracts ITom T. cruzi epimastigote has an antioxidant function, protecting glutamine synthetase (GS) against reactive oxygen species (ROS) produced by the DTTlFe3+/02 oxidant system. lt appears not to be involved with cellular proliferation, since a correlation could not be stablished using Westem Blot analysis, between the different growth days and the amount of this protein.
Tryparedoxin (TXN) was also found in the same extracts and variation in its concentration were observed when strains and different growth days were compared. Also in this case, Tulahuen 2 ceIls had a higher concentration of TXN. The higher resistance observed in the Tulahuen 2 strain against ROS generated by DTTlFe3+/02 system can be explained by the higher concentration of TXN and TXNp found. This would led to a hydroperoxide metabolism system more effective, when compared to the Y strain. T. cruzi sheddings of both forms (epimastigote and trypomastigote) showed liberation ofTXNp to the extraceIlular environrnent / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular
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