Resumo: A tuberculose representa hoje um dos principais problemas de saúde pública mundial. É estimado que cerca de cem milhões de pessoas sejam infectadas anualmente. Para este grande número de casos, dois fatores têm contribuído significativamente, a resistência da Mycobacterium tuberculosis aos antibióticos existentes e o aumento de casos de co-infecção com HIV. Por isso, é importante o desenvolvimento de novas drogas contra o seu agente causador. Há duas abordagens principais para o desenvolvimento de drogas. Primeiramente pode-se identificar e inibir proteínas que estejam presentes em uma determinada classe de microorganismos, mas não sejam conservadas em humanos, levando a antibióticos de largo espectro, ou ainda pode-se identificar e inibir proteínas de um determinado microorganismo, levando a drogas específicas. Exemplos da primeira abordagem são as enzimas da via do ácido chiquímico e suas ramificações, como a via de síntese de triptofano. A via do ácido chiquímico é responsável pela biossíntese de corismato, que é o precursor comum utilizado na geração de vários compostos aromáticos importantes para sobrevivência da bactéria, entre eles os aminoácidos e co-enzimas; e exemplos da segunda abordagem são enzimas relacionadas com a síntese de ácidos micólicos, que são importantes constituintes da parede celular de micobactérias. O objetivo do presente trabalho foi realizar estudos estruturais de quatro proteínas que são alvos em potencial para o desenvolvimento de drogas contra tuberculose, sendo elas: a Chiquimato quinase e Corisamto sintase, ambas da via do ácido chiquímico; Triptofano sintase, última enzima da via de síntese de triptofano; e a enzima dependente de NADH enoil ACP redutase (InhA), relacionada com a síntese de ácidos micólicos...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Tuberculosis represents today a large problem of world public health. It is estimated that approximately a hundred million people are infected annually. For this large number of cases, two factors have contributed significantly, the resistance of Mycobacterium tuberculosis to existent antibiotics and the increase of the cases of the co-infection with HIV. Therefore, the development of new drugs against its etiologic agent is important. There are two main approaches for the development of drugs. Firstly, proteins of a determined class of microorganism, that are not present in humans, can be identified and inhibited leading to large-spectra antibiotics; or it can identify and inhibit proteins of a determined organism leading to specific drugs. Examples of the first approach are enzymes of the shikimate pathway and its branches, such as the tryptophan synthesis pathway. The shikimate pathway is responsible for biosynthesis of chorismate, it is a common precursor utilized in the production of various important aromatic compounds used in the survival of the bacteria, such as amino acids and coenzymes; an example of the second approach are enzymes related to the synthesis of mycolic acids, they are important constituents of the cellular wall of mycobacteria. The objective of the present work was to perform structural studies of four enzymes that are potential targets to the development of drugs against tuberculosis, such as: shikimate kinase and chorismate synthase, both of the shikimate pathway; tryptophan synthase, last enzyme of the trytophan pathway; and the dependent of NADH enzyme enoyl ACP reductase (InhA) related to the synthesis of mycolic acids. Here, the shikimate kinase structures from M. tuberculosis in complex with ADP and magnesium ion, in the absence of shikimate and the shikimate kinase in complex with ADP and shikimate, in the absence of the magnesium ion, are presented...(Complete abstract click eletronic access below) / Orientador: João Ruggiero Neto / Coorientador: Walter Filgueira de Azevedo Júnior / Banca: Beatriz Gomez Guimarães / Banca: João Alexandre Ribeiro Gonçalves Barbosa / Banca: Maria Celia Bertolini / Banca: Valmir Fadel / Doutor

Orientador: Alexandrina Sartori / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: Virmondes Rodrigues / Resumo: A necessidade de uma vacina mais segura e eficaz para a profilaxia da tuberculose (TB) e consenso na comunidade cientifica. A vacina genica contendo o gene da proteina de choque termico de 65 KDa (hsp65) do Mycobacterium leprae, e denominada pVAXhsp65, vem sendo investigada no Brasil. Esta vacina induz imunidade protetora contra a TB experimental em camundongos e cobaias. Como o gene desta vacina codifica uma proteina altamente conservada, existe a preocupacao de que a mesma induza autoimunidade. O objetivo deste trabalho foi, portanto, investigar se esta vacina modula o desenvolvimento da encefalite autoimune experimental (EAE), que e um modelo para estudo de Esclerose Multipla. Esta investigacao foi feita em tres etapas: padronizacao da EAE em ratos Lewis, caracterizacao da resposta imune induzida pela vacina pVAXhsp65 nestes animais e, finalmente, avaliacao do efeito desta vacina nas caracteristicas clinicas e imunologicas da EAE induzida nestes animais. Ratos Lewis femeas imunizados no coxim plantar com 50 Êg de mielina, associada ao Adjuvante Completo de Freund, desenvolveram doenca tipica, caracterizada por perda acentuada de peso, escore clinico elevado e alta producao de IFN-Á e TNF-¿. A imunizacao dos animais com 3 doses de pVAXhsp65 por via intramuscular nao desencadeou resposta imune humoral, entretanto, induziu resposta imune celular, caracterizada pela producao de IFN-Á por celulas esplenicas. Animais previamente vacinados desenvolveram EAE com caracteristicas clinicas e imunologicas similares as observadas em animais nao vacinados. Portanto, este trabalho permitiu padronizar de forma satisfatoria a EAE em ratos Lewis o que permitira a utilizacao deste modelo em futuras investigacoes. Alem disso, constatamos que a imunizacao destes animais com DNAhsp65 nao alterou o desenvolvimento tipico da EAE, ou seja, esta doenca nao se manifestou de forma mais grave ou branda. / Abstract: The development of an effective tuberculosis (TB) vaccine is an urgent priority. A genetic vaccine containing the heat shock protein (hsp65) gene from Mycobacterium leprae (pVAXhsp65) showed prophylactic and therapeutic activity in experimental TB. As anti-hsp65 immune response is present in both, multiple sclerosis and experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), it is important to evaluate if pVAXhsp65 immunization affects EAE development. To test this possibility we first optimized EAE development in female Lewis rats. The best procedure included immunization in the footpad with 50 ìg of myelin associated with Complete Freund Adjuvant. This triggered a typical disease, characterized by significant weight loss, high clinical scores and elevated IFN-ã and TNF-á production. Immunization with pVAXhsp65 induced immune response characterized by absence of anti-hsp65 antibodies but significant IFN-ã production by splenic cells stimulated with recombinant rhsp65. Animals previously immunized with pVAXhsp65 developed an EAE with weight loss, clinical score and immune response very similar to non-immunized rats. This investigation allowed the optimization of a very promising model of multiple sclerosis that will benefit other research projects in our laboratory. In addition, these results showed that immunization of Lewis rats with pVAXhsp65 did not exacerbate or delay EAE development. / Mestre

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Mariella Vieira Pereira Leão / Banca: Elizabete Brasil dos Santos / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Cristiane Yumi Koga-Ito / Resumo: Superinfecção resulta no desenvolvimento de patógenos residentes prejudiciais ou oportunistas em conseqüência de alteração da microbiota benéfica e pode representar uma complicação na terapia antimicrobiana. O presente estudo avaliou a presença de leveduras, estafilococos, enterobactérias e Pseudomonas na cavidade bucal e sulco gengival de indivíduos submetidos à terapia antibiótica para tratamento de tuberculose pulmonar e indivíduos controle. Foram incluídos cinqüenta indivíduos diagnosticados com tuberculose pulmonar e que estivessem sob antibioticoterapia por um período mínimo de 45 dias e máximo de seis meses. Para controle foram incluídos indivíduos sistemicamente saudáveis. A coleta de material da cavidade bucal foi realizada pela técnica de enxágüe bucal e do sulco gengival utilizando-se cones de papel absorvente esterilizados. As amostras coletadas foram semeadas em duplicata em placas de Petri contendo ágar Sabouraud dextrose com cloranfenicol, ágar Manitol e ágar MacConkey. As amostras de Candida spp. e de estafilococos coagulase-positivas foram identificadas por provas bioquímicas específicas e as amostras de estafilococos coagulase-negativas, enterobactérias e Pseudomonas foram identificadas utilizando-se o sistema API. Os resultados foram analisados pelo teste estatístico de Mann-Whitney (p<0,05). Candida spp. foram detectadas em número significativamente maior na cavidade bucal de indivíduos com tuberculose pulmonar em relação aos controles, sendo C. albicans mais prevalente em ambos os grupos. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos para Staphylococcus spp., enterocatérias e Pseudomonas. Concluiu-se que os indivíduos sob antibioticoterapia para tratamento de tuberculose pulmonar apresentaram maior prevalência de Candida spp. na cavidade bucal em relação aos controles. / Abstract: Superinfection results an overgrowth of potentially harmful resident or other opportunistic pathogens and can further represent a complication of an antimicrobial therapy that alters a beneficial microbiota. The present study evaluated the presence of yeasts, staphylococci, enteric rods and pseudomonads in the oral cavity and gingival sulcus of individuals with pulmonary tuberculosis undergoing antibiotic treatment and controls individuals. There were included 50 individuals diagnosed with pulmonary tuberculosis that were submitted to antibiotic therapy during a minimal period of 45 days and maximum 6 months. Systemically health individuals were included in the control group. Samples from oral cavity were collected through oral rinses and subgingival samples were taken using sterile paper points. Samples were cultured in duplicate onto Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol, manitol agar and MacConkey agar. The isolates of Candida spp. and coagulase-positive staphylococci were identified by phenothypic characterization and the isolates of coagulase-negative staphylococci, enteric rods and pseudomonads were identified by API system. Data were analyzed statistically by Mann-Whitney test (p<0.05). Candida spp. were detected in the oral cavity of pulmonary tuberculosis individuals in a significant higher number when compared to controls, and C. albicans was the most prevalent specie found in both groups. No significant statistical differences were observed between the groups related to Staphylococcus spp., enteric rods and pseudomonads. It was concluded that individuals with pulmonary tuberculosis showed significant increase in the quantity of Candida spp. concerning controls. / Doutor

Orientador: Georgino Honorato de Oliveira / Banca: Georgino Honorato de Oliveira / Banca: Maria Teresa Pepato / Banca: Clarice Queico Fujimura Leite / Banca: Paulo Rodrigo Stival Bittencourt / Banca: Décio Gomes de Oliveira / Resumo: As plantas medicinais sempre desempenharam papel importante na medicina, e modernamente, ainda são capazes de incrementar o arsenal terapêutico, fornecendo esperança de melhores condições de tratamento para inúmeras doenças. A Tuberculose (TB) é considerada a principal causa de morte em países em desenvolvimento, de grande população e baixo padrão sanitário. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a toxicidade oral aguda e a médio prazo dos extratos vegetais de Syngonhanthus macrolepsis, Turnera ulmifolia e Quassia amara, em ratos. Para avaliação da toxicidade foram utilizados os protocolos 401 e 408 da "Organization for Economic Cooperation and Development" (OECD). Ênfase foi dada as alterações do perfil bioquímico e histopatológico de fígado e rins. Utilizando Kits avaliou-se a atividade da ALT, AST, γ-GT, ALP, além de uréia, creatinina, bilirrubina e tempo de protrombina. Os cortes de fígado e rins foram corados com hematoxilina e eosina e analisados em microscopia óptica. Mesmo quando se administrou 5000mg/kg, apenas alguns animais apresentaram piloereção e irritabilidade que não alcançaram 8 horas, caracterizando assim baixa toxicidade aguda. Para toxicidade a médio prazo as alterações mais significantes em relação aos respectivos controles foram os níveis de creatinina para o extrato de T. ulmifolia. Na avaliação da toxicidade a médio prazo observou-se que o extrato de T.ulmifolia apresentou maior toxicidade em comparação aos respectivos controles. As fêmeas foram mais sensíveis que os machos tanto para as análises de função renal quanto hepática. Em geral as fêmeas apresentaram maior toxicidade que os machos. Assim, considerando as DNEAO ao nível renal e hepático, tendo com "end point" alterações bioquímicas que foram as mais sensíveis, para as fêmeas seria 200Pg/mL e para os machos 400Pg/mL, gerando RfD respectivamente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The medicinal plants had always played important role in the medicine, and modernly, still are capable to develop the therapeutical armory, supplying hope of better conditions of treatment to innumerable illnesses. The Tuberculosis (TB) is considered the main cause of death in underdeveloped countries, great population and low sanitary condition. The objective of the present work was to evaluate the acute oral toxicidade and subchronic oral toxicity of vegetal extracts of Syngonhanthus macrolepsis, Turnera ulmifolia and Quassia amara in rats. For evaluation of the toxicity protocols 401 and 408 of the "Organization and Development will be Economic Cooperation" (OECD) had been used. Emphasis was given to the changes in the biochemist and histopathologic profile of liver and kidneys. Using Kits it was evaluated activity of the ALT, AST, γ-GT, ALP beyond urea, creatinina, bilirubin and prothrombin time. The cuts of liver and kidneys had been dyed with hematoxylin and eosin and analyzed in light microscopy. Even though when 5000mg/kg bw was given, only some animals had presented heir stand and irritability that had not later than 5h, having thus characterized low acute toxicity. For subchronic toxicity, the most significant changes in relation to the respective controls had been the levels of creatinina for the extract of T. ulmifolia. In the evaluation of the subchronic toxicity it was observed that the extract of T.ulmifolia presented greater toxicity in comparison to the respective controls. The females had been more sensible than the males as well hepatic as renal function. In general the females had presented greater toxicity that the males. Thus, considering the NOAEL to the renal and hepatic level, having with end point biochemical changes who had been most sensible, for the females would be 200Pg/mL and for the males 400Pg/mL which , generating RfD respectively of 17,5 and 35mg/kg... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Clarice Queico Fujimura Leite / Banca: Paulo Inácio da Costa / Banca: Rosilene Fressatti Cardoso / Banca: Daisy Nakamura Sato / Banca: Eliana Aparecida Varanda / Resumo: O estudo da epidemiologia molecular através de diferentes técnicas vigentes como Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP), Spacer Oligonucleotide Typing (Spoligotyping) e Mycobacterial Interspersed Repetitive Units (MIRU) revolucionou a compreensão da epidemiologia da tuberculose. Foram analisados isolados clínico de pacientes portadores de tuberculose pulmonar no município de Araraquara, entre os anos 2000 e 2006, através de genotipagem por RFLP e Spoligotyping (n=122). A técnica de RFLP permitiu a identificação de um índice de 26,4% de casos de tuberculose proveniente de infecção recente na cidade de Araraquara, no período de 2000 a 2006. Verificou-se relação epidemiológica em cerca de 68% dos casos envolvendo grupos genéticos identificados pelo RFLP. Destaca-se as transmissões intradomiciliares e a moradia em condomínios residenciais do CDHU. A técnica de RFLP permitiu a distinção de dois grandes grupos genéticos, A e B, dentre os isolados de Araraquara. Cerca de 73% dos spoligotipos obtidos foram identificados no Banco Internacional de Spoligotyping SpolDB4, sendo as famílias LAM, T e H as mais predominantes e cerca de 27% dos spoligotipos encontrados apresentaram perfis não descritos no SpolDB4. A associação do RFLP, Spoligotyping e MIRU não foi uma boa ferramenta para a análise genética dos isolados clínicos visando esclarecimentos epidemiológicos. Embora a genotipagem através do RFLP permita uma melhor discriminação entre os isolados bem como uma excelente associação entre amostras relacionadas epidemiologicamente, a técnica de Spoligotyping associada ao MIRU permite uma boa discriminação entre os isolados clínicos, da mesma forma que propicia uma satisfatória correlação entre casos ligados epidemiologicamente / Abstract: Molecular epidemiology study using different current methods such as Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP), Spacer Oligonucleotide Typing (Spoligotyping) and Mycobacterial Interspersed Repetitive Units (MIRU) modified tuberculosis epidemiology comprehension. Clinical isolates from pulmonary tuberculosis patients from Araraquara, between 2000 and 2006, were genotyped through RFLP and Spoligotyping (n=122). RFLP provided the identification of a 26.4% level of tuberculosis cases caused by recent infection in the period. Epidemiologic association were verified in 68% of the cases in clusters identified by RFLP. Intradomiciliary transmissions and living in residential condominiums from CDHU were important factors. RFLP fingerprint provides the distinction of two big genetic groups, A and B, among Araraquara isolates. About 73% of spoligotypes were described in the International Spoligotyping Database SpolDB4 and LAM, T and H families were the most frequent, in the other hand, 27% of spoligotypes had unique profifes not described in SploDB4. RFLP, Spoligotyping and MIRU association was not a good tool to genotype clinical isolates in order to provide epidemiological understandings. Although RFLP fingerprinting allows a better discrimination as well as an excellent association among epidemiological related isolates, Spoligotyping associated with MIRU provides a good discrimination among clinical isolates as well as provides a satisfactory correlation among cases epidemiological connected / Doutor

Orientador: Clarice Queico Fujimura Leite / Banca: Rosilene Fressatti Cardoso / Banca: Henrique Ferreira / Resumo: O estudo da epidemiologia molecular através de diferentes técnicas vigentes revolucionou a compreensão da epidemiologia da tuberculose. A técnica Spoligotyping tem sido extensamente aplicada no estudo da epidemiologia molecular da tuberculose, para abordar estrutura populacional do M. tuberculosis, atentando para identificar principais linhagens e distribuições geográficas. Por outro lado, técnicas moleculares para diferenciar cepas de M. tuberculosis, tais como RFLP e MIRU possibilitam agrupar isolados clínicos de M. tuberculosis provenientes de pacientes que apresentam ligações epidemiológicas, identificando cadeias de transmissão e discriminando os isolados a nível clonal. A presente dissertação objetivou utilizar as técnicas de Spoligotyping e MIRU, para compreender um pouco mais sobre a tuberculose de uma metrópole, avaliando isolados provenientes do Ambulatório do Instituto Clemente Ferreira (referência no tratamento de tuberculose) na cidade de São Paulo. Os isolados clínicos de pacientes atendidos no período de agosto de 2006 a julho de 2008 foram reidentificados pela técnica molecular de PCR, e as cepas identificadas como de M. tuberculosis foram submetidas à genotipagem pelas técnicas de Spoligotyping e MIRU. Foi confirmada a identificação de M. tuberculosis em 93 isolados clínicos pela técnica de PCR-IS6110. No Spoligotyping, do total de 93 isolados, 21 amostras (22,6%) revelaram spoligotipos ainda não descritos na base de dado mundial (SpolDB4, SITVIT e Spotclust) e 51 (54,8%) estavam envolvidos em 12 cluster, 7 diferentes famílias e 36 spoligotipos. A família mais freqüente foi a LAM (26 isolados), seguida de T (24 isolados) e Haarlem (11 isolados), que juntos representaram 65,4% de todos os isolados. Essas 3 famílias representam os genótipos mais freqüentemente encontrados na África, América Central, América do Sul e Europa. Seis SITs... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The molecular epidemiology study using different techniques has improved the epidemiology of tuberculosis understanding. The Spoligotyping technique has been widely applied in the study of molecular epidemiology of tuberculosis, to address population structure of M. tuberculosis, focusing on the identification of the main lines and geographic distributions. Furthermore, molecular techniques used to differentiate strains of M. tuberculosis, such as RFLP and MIRU can be used for clustering clinical isolates of M. tuberculosis from patients with epidemiological links, identifying chains of transmission and discriminating isolates at the clonal level. In this work the techniques of Spoligotyping and MIRU were used to understand a little more about tuberculosis in a metropolis, assessing isolates from the Ambulatory Clemente Ferreira Institute (reference in the treatment of tuberculosis) in São Paulo. Clinical isolates from patients treated between August 2006 and July 2008 were re-identified by the molecular technique of PCR, were strains identified as M. tuberculosis were evaluated through genotyping the use of Spoligotyping and MIRU techniques. By PCR-IS6110 the identification of M. tuberculosis was confirmed in 93 clinical isolates. The total of 93 isolates, 21 samples (22.6%) in Spoligotyping showed spoligotypes have not yet been described in the world's data base (SpolDB4, SITVIT and Spotclust) and 51 (54.8%) were involved in 12 clusters, seven different families and 36 spoligotypes. The most frequent family was the LAM (26 isolates), followed by T (25 isolates) and Haarlem (11 isolates), which together accounted 65,4% of all isolates. These three families represent the most frequently genotypes found in Africa, Central America, South America and Europe. Six SITs accommodated 51.4% (37/72) of all isolates identified in SpolDB4 (SIT53, SIT50, SIT42, SIT60, SIT17 and SIT1). By technique... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Walter Filgueira de Azevedo Júnior / Banca: Luis Fernando Delboni / Banca: Fernanda Canduri / Resumo: A Purina Nucleosídeo Fosforilase (PNP) catalisa a fosforólise de nucleosídeos de purina para suas respectivas bases e açucares (ribose ou desoxirribose) 1-fosfato. A PNP desempenha uma função central no metabolismo das purinas, normalmente operando na via de recuperação do DNA das células. Mais ainda, a PNP cliva ligações glicosídicas com inversão da configuração para produzir a-ribose 1-fosfato. Acredita-se que no organismo do Mycobacterium tuberculosis a PNP desempenha tarefas similares, o que levanta o interesse em desenvolver ciência que dê suporte para o desenvolvimento de drogas baseadas na estrutura desta proteína. A proteína é um homotrímero simétrico com um arranjo triangular das subunidades, similar às PNPs triméricas de mamíferos. Cada monômero consiste de um enovelamento a/ß formado por onze fitas ß circundadas por oito hélices a. O estudo desta PNP visa proporcionar comparações com outras estruturas, na intenção de identificar as bases estruturais de possíveis diferenças ou similaridades funcionais entre esta e outras PNPs, num esforço para desenvolver pesquisa que dê suporte para o desenho de novas drogas mais seletivas e poderosas contra a tuberculose. / Abstract: The Purine nucleoside phosphorylase (PNP) catalyses the phosphorolysis of purine nucleosides to corresponding bases and ribose 1-phosphate. PNP plays a central role in purine metabolism, normally operating in the purine salvage pathway of cells. Moreover, PNP cleaves glycosidic bond with inversion of configuration to produce á-ribose 1-phosphate. It is believed that in the MtPNP is responsible for the same labor in the Mycobacterium tuberculosis organism, which arouses the interest in developing science for giving support to the development of structure based drugs. The protein is a symmetrical homotrimer with triangular arrangement of the subunits, similar to the trimeric mammalian PNPs. Each monomer consist of a á/â folding formed by eleven â sheet surrounded by eight á helices. The study of this PNP aims the possibility of caring out comparisons with other structures, in order to identify the structural basis of possible differences or functional similarities between this and other PNPs, in an effort to develop research which gives support to the design of more selective and powerful new drugs against tuberculosis. / Mestre

Orientador: Alexandrina Sartori / Banca: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Virmondes Rodrigues Júnior / Resumo: A única vacina disponível contra a tuberculose (TB) é o bacilo de Calmette- Guérin (BCG), que é constituída por uma cepa de Mycobacterium bovis vivo atenuado, mas que possui variabilidade de proteção de 0 a 80%. Portanto é necessário o desenvolvimento de novas vacinas para o controle dessa infecção. Dentre as novas formulações profiláticas em teste para TB destacam-se as vacinas gênicas, sendo a DNAhsp65 a vacina investigada por nosso grupo. A DNAhsp65 é uma construção que contém o gene que codifica a proteína de choque térmico de 65KDa do M. leprae. Em virtude da elevada homologia entre a hsp65 micobacteriana e a hsp60 dos mamíferos, pode ocorrer mimetismo antigênico, ou seja, reatividade cruzada entre anticorpos e células T específicas para hsp65 micobacteriana e hsp60 humana. Nesse contexto, nosso grupo tem estudado o possível efeito colateral da DNAhsp65 no desenvolvimento de doenças autoimunes. Neste projeto foi investigado o efeito (proteção, exacerbação ou inocuidade) de diferentes formulações vacinais para TB na encefalite autoimune experimental (EAE). Os objetivos foram caracterizar a resposta imune específica induzida pela DNAhsp65 em ratos Lewis e avaliar o efeito imunomodulador tanto da estratégia clássica de imunização (3 doses de DNAhsp65 por via im) quanto da estratégia prime-boost BCG / DNAhsp65, nas características clínicas, imunológicas e histológicas da EAE. Quanto à imunogenicidade da DNAhsp65, foram testadas duas doses da vacina administradas via intramuscular (100 e 300 μg), sendo que somente a maior dose induziu IgG2b específica para hsp65 e produção de IFN- em cultura de células esplênicas estimuladas in vitro com rhsp65. Para avaliar o efeito da imunização com DNAhsp65 ou do prime-boost BCG /DNAhsp65 no desenvolvimento da EAE, os animais foram previamente imunizados com 3 doses de 300 μg de DNAhsp65 ou... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: BCG is the only accepted vaccine against tuberculosis (TB) but its protective ability is very limited. Many new vaccines are therefore being evaluated. Our group has been working with DNAhsp65 that is a genetic construction containing the gene of hsp65 from Mycobacterium leprae. In previous experimental work we demonstrated that both, DNAhsp65 alone or associated with BCG, in a prime-boost regimen, were effective to control TB. A possible deleterious effect related to autoimmunity needed to be tested because hsp65 is highly homologous to the correspondent mammalian protein. In this investigation we tested the effect of a previous immunization with DNAhsp65 alone or associated with BCG in a rat model of multiple sclerosis. Female Lewis rats were immunized with 3 doses of DNAhsp65 or primed with BCG followed by 2 DNAhsp65 boosters. The animals were then immunized with myelin associated with Complete Freund Adjuvant to develop experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). The following parameters were evaluated: weight loss, clinical score, inflammation at the central nervous system (CNS) and immune response against myelin. No deleterious effect was associated with these immunizations schedules. Immunized animals equally lost weight, the clinical scores were similar and inflammation at the CNS did not increase. Interestingly, both procedures determined decreased inflammation in the brain and lumbar spinal cord. This was concurrent with a modulatory effect over cytokine production by peripheral lymphoid organs. Cell cultures from spleen and lymph nodes in vitro stimulated with myelin produced less IFN- and IL-10, respectively. This phenomenon was more clear in rats immunized with the genetic vaccine alone than with the prime-boost strategy. Together the results suggest that these strategies for TB prophylaxis would not accelerate or aggravate MS, being therefore... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre