<p align="justify">Dans les pays en voie de développement et plus particulièrement en Afrique, la médecine traditionnelle est parfois la seule source de soins abordable et accessible,surtout pour les patients les plus pauvres.</p> <p align="justify">Le présent travail a été réalisé dans le but de rechercher les preuves scientifiques de l’activité anthelminthique des extraits d’amandes de Balanites aegyptiaca utilisés en médecine traditionnelle africaine et d’évaluer une activité potentiellement anti-tumorale du ou des principe(s) actif(s) responsable(s) de l’activité anthelminthique.</p> <p align="justify">Pour caractériser l’activité nématocide des extraits des amandes de Balanites aegyptiaca,nous avons tout d’abord mis au point un test d’évaluation de l’activité toxique en tenant compte des limitations des tests existants. La validation pharmacologique (mesurant la sélectivité, la linéarité, l’exactitude et la précision) a consisté en la détermination de l’activité nématocide d’anthelminthiques couramment utilisés. Pour la caractérisation de l’activité nématocide des amandes de Balanites aegyptiaca, puis le fractionnement, l’isolement et la purification de(s) agent(s) nématocide(s) nous avons adopté la stratégie du fractionnement bio-guidé. Les résultats obtenus montrent que le produit isolé (déterminé comme étant la balanitine-7 ou Bal-7) induit une activité toxique plus élevée sur les vers adultes que sur les stades larvaires.</p> <p align="justify">Bal-7 s’est avéré moins toxique que le levamisole, le mébendazole et le thiabendazole, mais plus toxique que le pyrantel, le niclosamide et la pipérazine. La présente étude a donc permis de montrer que les amandes de Balanites aegyptiaca, utilisée en médecine traditionnelle au Burkina Faso, pourraient être efficaces dans le traitement des parasitoses intestinales.</p> <p align="justify">Certains anthelminthiques comme les benzimidazoles, du fait de leur activité d’inhibition de la polymérisation des tubulines, présentent une activité anti-tumorale. Aussi, faisant suite à la mise en évidence de l’activité nématocide de Bal-7 nous avons entrepris de caractériser l’activité anti-tumorale de balanitines. La méthode d’extraction que nous avons utilisé pour évaluer l’effet anti-tumoral de la Bal-7 est distincte de celle que nous avions utilisée pour évaluer l’effet anthelminthique de cette balanitine. Ainsi, alors que la méthode d’extraction que nous avons utilisée pour obtenir de la Bal-7 pour nos tests liés à l’activité anthelminthique semble avoir conduit à l’isolement de la balanitine-7 pure, la méthode d’extraction que nous avons utilisée pour observer les effets anti-tumoraux potentiels de cette balanitine-7 nous ont conduit à isoler un mélange de balanitine-6 et de balanitine-7 dans des proportions de 28/72%. Nous avons dénommé ce mélange Bal-6/7. L’activité anti-tumorale a été évaluée sur deux lignées cancéreuses humaines (A549, cancer du poumon non-à-petites cellules et U373, glioblastome). Dans ce travail, nous avons montré que Bal-6/7 induit la mort des cellules tumorales par une déplétion marquée de l’[ATP]i et une désorganisation majeure du cytosquelette d’actine. In vivo, Bal-6/7 a montré une activité anti-tumorale modeste, mais néanmoins statistiquement significative. A ce jour, il n’existe pas sur le marché, d’anti-cancéreux dirigé contre les filaments d’actine. Etant donné le rôle de ces filaments d’actine dans la prolifération et la migration des cellules tumorales, le développement de médicaments ayant cette protéine pour cible constituerait une avancée majeure dans la recherche de nouvelles thérapies anti-tumorales. Le mélange Bal-6/7, isolé pour la caractérisation de l’activité anti-tumorale des balanitines, du fait de son potentiel anti-tumoral, présente donc un intérêt certain en thérapeutique anti-cancéreuse. Il serait donc envisageable de développer par synthèse ou hémisynthèse des dérivés de balanitines présentant un meilleur index thérapeutique que le mélange Bal-6/7.</p>

Les glycosaminoglycanes (GAGs) sont des polysaccharides sulfatés qui participent à de nombreux processus physiologiques, via leurs interactions avec un large panel de médiateurs extracellulaires. Parmi ces facteurs, l’interleukine-4 (IL-4) joue un rôle central dans la polarisation M2 des macrophages. Bien que cette cytokine soit un ligand des GAGs, peu d’études ont été réalisées sur le rôle de ces interactions. Dans ce contexte, la première partie de ma thèse a porté sur le rôle des GAGs dans la polarisation M2 des macrophages. Nous avons montré que les activités de l’IL-4 sont dépendantes de sa fixation sur des GAGs 6-O-sulfatés. La sulfatation des GAGs est finement régulée par plusieurs familles d’enzymes, dont l’expression varie en fonction du type cellulaire et de l’environnement. Nous avons alors analysé les variations d’expression de ces enzymes de sulfatation au cours de la polarisation des macrophages. Nos résultats montrent qu’en fonction de leur phénotype, les macrophages expriment des GAGs différents, ce qui peut leur conférer des fonctions spécifiques. En effet, contrairement aux M1 pro-inflammatoires, les M2 sécrètent des facteurs de remodelage tissulaire et de tolérance immunitaire, ce qui peut favoriser la progression des tumeurs. Nous avons vérifié que les GAGs des M2 présentent le FGF-2 aux cellules cancéreuses, suggérant leur participation dans les mécanismes pro-tumoraux. Finalement, le dernier volet de ma thèse a porté sur le rôle des GAGs dans le cancer du sein. Nous avons confirmé que les GAGs sont de bons ligands pour les sélectines et qu’ils pourraient favoriser la promotion des métastases distantes. / Glycosaminoglycans (GAGs) are sulfated polysaccharides involved in many physiological processes, through their interactions with a wide range of extracellular mediators. Among these factors, interleukin-4 (IL-4) has a central role in the M2 polarization of macrophages. Although this cytokine is a ligand of GAGs, only a few studies have been performed on the physiological role of these interactions. In this context, the first part of my thesis focused on the role of GAGs in M2 macrophage polarization. We showed that the responses induced by IL-4 are dependent on the binding to 6-O-sulfated GAGs. The reactions of GAG sulfation are tightly regulated by several families of enzymes, for which the expression is dependent on cell type and environment. Then we analyzed changes in the expression of these sulfating enzymes during macrophage polarization. Our results showed that macrophages produced different GAGs based on their phenotype, which may give them specific functions. In contrast to pro-inflammatory M1 cells, M2 macrophages release factors involved in tissue remodeling and immune tolerance, which may enhance tumor progression. We verified that GAGs are capable of presenting FGF-2 to cancer cells, thus suggesting their involvement in pro-tumoral mechanisms. Finally, the role of GAGs in breast cancer was investigated in the last part of my thesis. Our results confirmed that GAGs are good ligands for selectins, so that they could promote distant metastasis.

Malgré les progrès considérables qui ont été réalisés depuis une trentaine d'années, le cancer demeure un ennemi redoutable. Néanmoins, de nombreuses études épidémiologiques ont montré qu'une alimentation riche en fruits et légumes réduit les risques de développer le cancer. Nous savons également que l'angiogenèse, ou la formation de nouveaux vaisseaux à partir de capillaires préexistants, joue un rôle crucial dans la croissance des tumeurs et dans leur dissémination sous forme de métastases. En conséquence, l'objectif de ce projet est de caractériser les effets antiangiogéniques d'une famille de composés omniprésents dans notre alimentation, les flavonoides, en particulier, les flavonols, kaempférol et myricétine, et les flavones, lutéoline et apigénine. Pour y parvenir, nous avons d'abord procédé à des tests de migration cellulaire et d'invasion de Matrigel™ en chambre de Boyden à l'aide de cellules musculaires lisses d'artère pulmonaire (PASMCs). Les données obtenues montrent qu'apigénine, lutéoline el myricétine inhibent grandement la migration et l'invasion cellulaire, et que les niveaux d'inhibition sont comparables à ceux observés avec des médicaments synthétiques. Ensuite, nous avons réalisé des études de marqueurs moléculaires tels que la phosphorylation du récepteur du facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGFR-β), de la protéine kinase régulatrice des signaux extracellulaires (ERK) et de la protéine Akt, el ce, toujours avec des PASMCs. L'inhibition de la phosphorylation du récepteur PDGFR-β, de la protéine ERK et Akt par I'apigénine et la lutéoline a également été observée. Nous nous sommes également assurés que les effets observés n'étaient pas dus à la toxicité des molécules étudiées en effectuant des tests de viabilité cellulaire au bleu de trypan. Nous avons poursuivi en analysant la sécrétion de la proMMP-2 et du VEGF par les PASMCs lorsqu'elles sont stimulées au PDGF-BB. Les résultats obtenus montrent que la sécrétion de VEGF est inhibée par les flavones alors que seule la lutéoline affecte la sécrétion de la proMMP-2. Finalement, nous avons réalisé des études in vivo sur un modèle animal de souris immunosupprimées, soit des souris CrI:CDl® Foxnlnu. Ce modèle a permis de mettre en lumière le potentiel antiangiogénique in vivo des flavones. En somme, tous les résultats obtenus in vivo et in vitro indiquent que les flavones, lutéoline et apigénine. ont un fort potentiel antiangiogénigue. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Cancer, Angiogenèse, Flavonoïdes, Cellules musculaires lisses, PDGFR.

Depuis les observations du Professeur Trousseau en 1865, le lien entre la progression tumorale et les désordres thrombotiques a été établi. Les patients atteints de cancer sont plus à risque de développer des coagulopathies dues au caractère pro-coagulant des cellules tumorales. Celles-ci induisent une hypercoagulation afin de synthétiser une matrice de fibrine qui servira de support pour la croissance tumorale. Suite à sa stabilisation matricielle, la tumeur sécrète plusieurs agents angiogéniques afin d'induire sa propre vascularisation. La suractivation du système de coagulation contribue alors à la croissance et à l'angiogenèse tumorale et le maillon commun semble être le facteur tissulaire. Cette glycoprotéine transmembranaire est exprimée de manière ubiquitaire dans les tissus subendothéliaux. Son rôle est d'initier la coagulation extrinsèque; lorsque l'intégrité vasculaire est atteinte, le facteur tissulaire est exposé au flux sanguin qui contient son ligand naturel, le facteur VIl. Ces derniers s'associent et le complexe pro-coagulant formé active la thrombine qui convertit le fibrinogène soluble en caillot de fibrine insoluble qui se loge au niveau de la blessure afin de rétablir l'hémostase. Le facteur tissulaire est également impliqué dans la vascularisation embryonnaire car selon certaines études, une délétion totale du gène entraîne une mort in utéro de l'embryon directement causé par un déficit de vascularisation. À l'inverse, sa surexpression entraîne un phénotype pathogénique tel qu'observé chez plusieurs lignées tumorales. Les objectifs de cette étude ont été d'évaluer l'effet de la surexpression du facteur tissulaire sur les propriétés angiogéniques des cellules endothéliales de l'aorte bovine ainsi que de caractériser la capacité du complexe pro-coagulant à induire la migration des cellules épithéliales issues de carcinome rénal humain. Les résultats indiquent que la surexpression endothéliale du facteur tissulaire induit la migration et la formation de structures de type capillaire de manière dépendante et indépendante des mécanismes de l'hémostase. De plus, le complexe pro-coagulant induit la migration des cellules épithéliales métastatiques de carcinome rénal mais non de leur contrepartie non-métastasique qui est caractérisée par une plus haute expression du facteur tissulaire. Finalement, les cellules épithéliales métastatiques et non-métastatiques induisent des différents profils d'activation de la protéine extracellular signal regulated kinase qui régule plusieurs processus cellulaires dont la migration. Ces résultats indiquent alors que le facteur tissulaire est impliqué dans l'angiogenèse et dans la progression tumorale selon des mécanismes qui impliquent ou non l'activité du complexe pro-coagulant. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Facteur tissulaire, Complexe pro-coagulant, Angiogenèse, Cellules endothéliales tumorales, Coagulopathies et cellules épithéliales de carcinome rénal.

La mélanotransferrine (MTf) a tout d'abord été identifiée comme étant un antigène majeur des mélanomes. Son expression a par la suite été rapportée dans plusieurs cellules néoplasiques et quelques tissus sains. Bien que la majorité de la MTf soit associée à la membrane plasmique, une faible portion est sécrétèe dans le milieu extracellulaire sous forme soluble. Notre équipe a récemment démontré que la MTf régulait l'activation du plasminogène et la motilité cellulaire in vitro. Les activateurs du plasminogène sécrétés par les cellules cancéreuses catalysent la conversion du plasminogène en protéase active. La plasmine joue un rôle central dans la progression tumorale en dégradant les protéines de la membrane basale et de la matrice extracellulaire (MEC). Ce remodelage tissulaire facilite grandement l'angiogenèse et l'invasion des cellules cancéreuses vers les tissus adjacents. Le premier objectif de cette thèse fut de démontrer que la MTf favorise l'activation du plasminogène par son activateur de type tissulaire (tPA). À cet effet, une forme recombinante tronquée de la MTf (sMTf) a été utilisée. En présence de plasminogène et de tPA, la sMTf stimule la formation de plasmine dans le milieu extracellulaire de cellules endothéliales (CE) et accroît la dégradation de la fibronectine, une des composantes de la MEC. La dégradation de la MEC conduit au détachement des CE et à leur mort par anoïkis. Ces données suggèrent que la sMTf possède des propriétés anti-angiogéniques en induisant l'anoïkis des CE. Nous avons ensuite évalué ses effets sur le développement angiogénique et sur la croissance tumorale in vivo. Les résultats montrent que la sMTf inhibe significativement la croissance de tumeurs sous-cutanées dérivées de glioblastome et de carcinome pulmonaire humains chez la souris immunosupprimée. Nous démontrons également que le traitement à la sMTf entraîne une réduction de l'expression du marqueur vasculaire d'endogline, de même qu'une diminution de la quantité d'hémoglobine au sein des tumeurs sous-cutanées de glioblastomes. L'ensemble de ces résultats démontre clairement que la sMTf réduit l'angiogenèse et la croissance tumorale in vivo. Tout comme la forme recombinante tronquée, la MTf membranaire (mMTf) interagit avec le système d'activation du plasminogène. La formation de plasmine à proximité de la membrane plasmique favorise l'invasion des cellules tumorales et le développement métastatique. La participation de la mMTf dans la formation de métastases cérébrales a donc été évaluée pour une lignée cellulaire de mélanome humain. Les résultats indiquent la présence de cellules exprimant la MTf humaine dans les cerveaux de souris ayant reçu une injection intraveineuse de cellules de mélanome humain. De même, l'administration d'un anticorps monoclonal dirigé contre la MTf humaine (L235) a réduit de moitié le développement de métastases cérébrales de mélanomes chez la souris. Ces résultats démontrent que l'implication de la mMTf dans l'activation du plasminogène faciliterait la migration des cellules cancéreuses à travers la barière hémato-encéphalique (BHE) et l'invasion du système nerveux central. Les principales contributions de ce travail sont d'avoir démontré d'une part que la sMTf induit le détachement des cellules endothéliales par stimulation de la cascade d'activation du plasminogène. D'autre part, la sMTf entraîne l'inhibition du développement angiogénique et de la croissance tumorale chez la souris. Puis, l'expression de la MTf à la surface des cellules cancéreuses facilite leur migration à travers la BHE dans le but de produire des métastases cérébrales. Cette étude identifie la MTf clairement comme une cible intéressante dans la progression tumorale, tout en suggérant des outils thérapeutiques comme la sMTf recombinante ou une forme humanisée du L235. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Croissance tumorale, Angiogenèse, Métastases cérébrales, Barrière hémato-encéphalique, Mélanotransferrine, Mélanome, Plasminogène.

Dissertation--Leiden--Universiteit, 2003. / Résumé en néerlandais. Notes bibliogr.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine : Nancy 1 : 2004. / Titre provenant de l'écran-titre.

Thèse d'exercice : Médecine. Pneumologie : Nantes : 2007. / Bibliogr.

Thèse de doctorat : Biologie Cellulaire et Nutrition : Nancy 1 : 2008. / Titre provenant de l'écran-titre.

Thèse d'exercice : Pharmacie : Université de Nantes : 2005. / Bibliogr. f. 98-102 [72 réf.].