<p align="justify">Dans les pays en voie de développement et plus particulièrement en Afrique, la médecine traditionnelle est parfois la seule source de soins abordable et accessible,surtout pour les patients les plus pauvres.</p> <p align="justify">Le présent travail a été réalisé dans le but de rechercher les preuves scientifiques de l’activité anthelminthique des extraits d’amandes de Balanites aegyptiaca utilisés en médecine traditionnelle africaine et d’évaluer une activité potentiellement anti-tumorale du ou des principe(s) actif(s) responsable(s) de l’activité anthelminthique.</p> <p align="justify">Pour caractériser l’activité nématocide des extraits des amandes de Balanites aegyptiaca,nous avons tout d’abord mis au point un test d’évaluation de l’activité toxique en tenant compte des limitations des tests existants. La validation pharmacologique (mesurant la sélectivité, la linéarité, l’exactitude et la précision) a consisté en la détermination de l’activité nématocide d’anthelminthiques couramment utilisés. Pour la caractérisation de l’activité nématocide des amandes de Balanites aegyptiaca, puis le fractionnement, l’isolement et la purification de(s) agent(s) nématocide(s) nous avons adopté la stratégie du fractionnement bio-guidé. Les résultats obtenus montrent que le produit isolé (déterminé comme étant la balanitine-7 ou Bal-7) induit une activité toxique plus élevée sur les vers adultes que sur les stades larvaires.</p> <p align="justify">Bal-7 s’est avéré moins toxique que le levamisole, le mébendazole et le thiabendazole, mais plus toxique que le pyrantel, le niclosamide et la pipérazine. La présente étude a donc permis de montrer que les amandes de Balanites aegyptiaca, utilisée en médecine traditionnelle au Burkina Faso, pourraient être efficaces dans le traitement des parasitoses intestinales.</p> <p align="justify">Certains anthelminthiques comme les benzimidazoles, du fait de leur activité d’inhibition de la polymérisation des tubulines, présentent une activité anti-tumorale. Aussi, faisant suite à la mise en évidence de l’activité nématocide de Bal-7 nous avons entrepris de caractériser l’activité anti-tumorale de balanitines. La méthode d’extraction que nous avons utilisé pour évaluer l’effet anti-tumoral de la Bal-7 est distincte de celle que nous avions utilisée pour évaluer l’effet anthelminthique de cette balanitine. Ainsi, alors que la méthode d’extraction que nous avons utilisée pour obtenir de la Bal-7 pour nos tests liés à l’activité anthelminthique semble avoir conduit à l’isolement de la balanitine-7 pure, la méthode d’extraction que nous avons utilisée pour observer les effets anti-tumoraux potentiels de cette balanitine-7 nous ont conduit à isoler un mélange de balanitine-6 et de balanitine-7 dans des proportions de 28/72%. Nous avons dénommé ce mélange Bal-6/7. L’activité anti-tumorale a été évaluée sur deux lignées cancéreuses humaines (A549, cancer du poumon non-à-petites cellules et U373, glioblastome). Dans ce travail, nous avons montré que Bal-6/7 induit la mort des cellules tumorales par une déplétion marquée de l’[ATP]i et une désorganisation majeure du cytosquelette d’actine. In vivo, Bal-6/7 a montré une activité anti-tumorale modeste, mais néanmoins statistiquement significative. A ce jour, il n’existe pas sur le marché, d’anti-cancéreux dirigé contre les filaments d’actine. Etant donné le rôle de ces filaments d’actine dans la prolifération et la migration des cellules tumorales, le développement de médicaments ayant cette protéine pour cible constituerait une avancée majeure dans la recherche de nouvelles thérapies anti-tumorales. Le mélange Bal-6/7, isolé pour la caractérisation de l’activité anti-tumorale des balanitines, du fait de son potentiel anti-tumoral, présente donc un intérêt certain en thérapeutique anti-cancéreuse. Il serait donc envisageable de développer par synthèse ou hémisynthèse des dérivés de balanitines présentant un meilleur index thérapeutique que le mélange Bal-6/7.</p>

Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal.

Afin d'améliorer l'efficacité des immunothérapies anti-tumorales, il est crucial de mieux comprendre les régulations cellulaires et moléculaires contrôlant l'initiation et le maintien d'une réponse immunitaire adaptative anti-tumorale. Dans ce contexte, l'équipe a identifié l'E3 ubiquitine ligase ASB2a (Ankyrin repeat-containing protein with a SOCS Box 2 alpha) comme un régulateur de la motilité des cellules hématopoïétiques via la polyubiquitination et la dégradation par le protéasome de la Filamine A. Mon projet de thèse visait à étudier si ASB2a joue un rôle dans la mise en place et/ou le maintien de la réponse immunitaire anti-tumorale. L'analyse des données de séquençage d'ARN issues des biopsies d'une cohorte de patients atteints de cancer colorectaux révèle que l'expression d'ASB2 est plus élevée dans les sous-types de mauvais pronostic et est inversement corrélée avec la survie des patients. Dans le but de déterminer s'il existe un lien fonctionnel entre l'expression d'ASB2 et la progression du cancer du côlon, nous avons utilisé un modèle de tumeurs coliques chez des souris invalidées de façon conditionnelle et inductible pour le gène ASB2 dans les cellules hématopoïétiques. Dans un premier temps, nous avons validé la pertinence de ce modèle d'invalidation en montrant qu'ASB2a était responsable des différents niveaux de Filamine A observés entre les différentes populations de cellules dendritiques conventionnelles de la rate. J'ai ensuite démontré que l'invalidation d'ASB2 réduit le développement des tumeurs coliques, résultats en accord avec la pathologie humaine. Ce phénotype est causé par l'activation d'une réponse immunitaire anti-tumorale adaptative de type 1 plus forte chez les souris invalidées pour ASB2. L'ensemble de ces travaux mettent en évidence le potentiel d'ASB2a comme cible thérapeutique innovante dans le traitement du cancer colorectal. / In order to enhance the efficiency of anti-tumor immunotherapies, it is crucial to better understand the cellular and molecular regulations sustaining the initiation and maintenance of an adaptive anti-tumor immune response. In this context, the team identified the E3 ubiquitin ligase ASB2a (Ankyrin repeat-containing protein with a SOCS Box 2 alpha) as a regulator of hematopoietic cell mobility through the polybiquitination and proteasomal degradation of the Filamin A. My thesis project aimed to study if ASB2a plays a role in the establishment and/or maintenance of the anti-tumor immune response. The analysis of RNA sequencing derived from the biopsy of colorectal cancer patients revealed that ASB2a expression is higher in the subtypes associated with poor prognosis and is inversely correlated with patient relapse-free survival. In order to determine whether there is a functional link between ASB2 expression and colon cancer progression, we used a colorectal cancer model applied to ASB2 knockout mice in hematopoietic cells. First, we validate the relevance of this knockout model by showing that ASB2a was responsible for the different levels of Filamin A observed between the different populations of spleen conventional dendritic cells. Then, I have shown that ASB2 invalidation reduces the development of colonic tumors, in accordance with human pathology. This phenotype is due to the activation of a stronger type 1 adaptive anti-tumor immune response in ASB2 knockout mice. This study highlight the potential of ASB2a as an innovative therapeutic target in the treatment of colorectal cancer.

Peu d'antigènes tumoraux présentent à la fois une expression dans un grand nombre de cellules tumorales et exercent un rôle vital pour leur développement. Mon travail de thèse a consisté à étudier les réponses en lymphocytes T dirigées contre deux de ces protéines : la Survivine et la Midkine. Nous avons démontré que ces deux protéines induisent spécifiquement des lymphocytes T CD4+ et CD8+ capables de reconnaître des cellules tumorales. Nous avons également identifié les séquences immunogéniques (épitopes T) dans ces antigènes. Deux épitopes CD4 et CD8 de la Midkine sont localisés dans le peptide signal. Notre étude montre que la Midkine constitue une nouvelle cible pour la vaccination contre de nombreux cancers et propose des séquences peptidiques originales comme candidats vaccins.

En 2002, notre équipe a montré que la stimulation de cellules primaires cortico-surrénaliennes bovines en culture primaire par l'hormone hypophysaire ACTH induisait l'expression du VEGF de manière indépendante de sa transcription. En effet, en réponse à l'ACTH, l'expression du VEGF est régulée au niveau post-transcriptionnel par la stabilisation/déstabilisation de son transcrit via des séquences riches en AU (ARE) situées dans la région 3‘ non traduite (3'UTR) de son ARNm. Le laboratoire a mis en évidence une protéine, TIS11b, exprimée également en réponse à une stimulation des cellules par l'ACTH, mais de manière concomitante avec la phase de déstabilisation de l'ARNm du VEGF. TIS11b appartient à une famille de protéines déstabilisatrices des ARNm via les séquences ARE. L'interaction de TIS11b avec l'ARNm du VEGF a été confirmée par la suite, et le site de liaison de la protéine à l'ARNm a également été identifié.<br /><br />Dans ce contexte, le premier objectif de ma thèse était d'évaluer la possibilité d'utiliser les propriétés déstabilisatrices de TIS11b sur l'ARNm du VEGF pour une thérapie anti-angiogène et anti-tumorale. Pour cela, la protéine a été vectorisée par la fusion de petits peptides ou PTD (protein transduction domain, Tat issu du VIH ou les polyarginines R7 et R9) lui permettant de traverser les membranes et d'atteindre sa cible intracellulaire, l'ARNm du VEGF. Nous avons pu montrer dans cette étude que 100 nM de protéines de fusion Flag-Tat-, Flag-R7- et Flag-R9-TIS11b sont capables d'induire une diminution du taux d'ARNm du VEGF ainsi que de la production de la protéine VEGF, dans des cellules en culture après 24 h d'incubation. De plus, nous avons pu montrer que l'injection de 100 nM de la protéine de fusion Flag-R9-TIS11b dans la glande corticosurrénalienne de souris, induisait une diminution d'environ 50 % de l'expression du VEGF par cette glande et que cette diminution était maintenue à 48 h. Des résultats préliminaires encourageants d'inhibition de croissance tumorale ont été obtenus avec l'injection de cette protéine de fusion dans des tumeurs pré-établies chez la souris nude, et doivent être confirmés.<br /><br />L'ACTH étant une hormone qui active la voie de l'AMPc et de la protéine kinase A (PKA), le deuxième objectif de ma thèse était de caractériser la phosphorylation de TIS11b par la PKA en réponse à une stimulation par l'ACTH et d'étudier les conséquences de cette phosphorylation sur son activité déstabilisatrice des ARNm. Nous avons pu montrer pour la première fois, que la PKA phosphoryle la protéine TIS11b, in vitro, au niveau de la sérine 54. Un deuxième site de phosphorylation en réponse à une stimulation par l'ACTH, via probablement une autre kinase que la PKA, a été mis en évidence au niveau de la sérine 334. Il semblerait que la protéine TIS11b comporte un domaine d'activation et un domaine d'inhibition susceptibles d'être régulés en réponse à une stimulation par l'ACTH. L'attribution de ces domaines aux sérines 54 et 334 nécessite des expériences complémentaires.

Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal

À ce jour, il est connu que le succès des traitements chimiothérapeutiques, outre l’effet cytotoxique direct sur les cellules tumorales, repose sur la contribution du système immunitaire. Nos travaux de recherche montrent que le traitement au cyclophosphamide de souris DBA/2 porteuses du mastocytome P815 induit le rejet de la tumeur, ainsi qu’une protection à long terme, de façon dépendante de la présence des lymphocytes T CD4+ et CD8+. De plus, le rejet du mastocytome P815 corrèle avec une augmentation de l’infiltration au sein de la tumeur de lymphocytes T CD8+ spécifiques d’un antigène muté. Lors de ce travail, nous avons tenté d’identifier les mécanismes moléculaires et cellulaires impliqués dans le rejet du mastocytome P815 induit suite à un traitement au cyclophosphamide. Dans ce but, les lymphocytes T CD8+ spécifiques de l’antigène muté, infiltrant un mastocytome P815 en progression ou en régression (suite à un traitement au cyclophosphamide), ont été analysés afin de mettre en évidence des caractéristiques phénotypiques et/ou fonctionnelles associées à ces populations de cellules T CD8+. Le traitement au cyclophosphamide conduit à l’infiltration de lymphocytes T CD8+ effecteurs en phase terminale de différenciation (KLRG1+ CD27- Eomes+ Perforin+) au sein de la tumeur, alors que les lymphocytes T CD8+ présents dans le microenvironnement tumoral du mastocytome P815 en progression possèdent un phénotype de cellules dysfonctionnelles (PD-1+ LAG-3+ Ki67-). Les IFN-I sont impliqués, au moins partiellement, dans l’acquisition du phénotype effecteur des cellules puisque leur inhibition entraine une augmentation de l’expression du récepteur PD-1.Ces résultats amènent à une meilleure compréhension des mécanismes par lesquels le cyclophosphamide régule l’amplitude et la qualité des réponses immunes spécifiques de la tumeur. Outre un effet quantitatif qui se traduit par l’expansion et l’infiltration dans la tumeur de lymphocytes T CD8+ spécifiques de l’antigène muté, cet agent chimiothérapeutique contribue au rejet du mastocytome P815 en favorisant le développement de lymphocytes T CD8+ effecteurs. La compréhension des effets immunomodulateurs d’un traitement chimiothérapeutique présente un intérêt majeur pour l’amélioration des thérapies en oncologie, tant en ce qui concerne l’immunothérapie que les combinaisons de traitement. / An important question is how chemotherapy may (re-)activate tumor-specific immunity. In this study, we provide a phenotypic, functional and genomic analysis of tumor-specific CD8+ T cells in tumor (P815)-bearing mice, treated or not with cyclophosphamide. Our data show that chemotherapy favors the development of effector-type lymphocytes in tumor bed, characterized by higher KLRG-1 expression, lower PD-1 expression and increased cytotoxicity. This suggests re-engagement of T lymphocytes into the effector program since most T cells are dysfunctional in the tumor microenvironment before cyclophosphamide treatment. IFN-I appears involved in this remodelling. Our findings provide some insight into how cyclophosphamide regulates the amplitude and quality of tumor-specific immune responses. / Doctorat en Sciences / info:eu-repo/semantics/nonPublished

<p align="justify">Dans les pays en voie de développement et plus particulièrement en Afrique, la médecine traditionnelle est parfois la seule source de soins abordable et accessible,surtout pour les patients les plus pauvres.</p><p><p align="justify">Le présent travail a été réalisé dans le but de rechercher les preuves scientifiques de l’activité anthelminthique des extraits d’amandes de Balanites aegyptiaca utilisés en médecine traditionnelle africaine et d’évaluer une activité potentiellement anti-tumorale du ou des principe(s) actif(s) responsable(s) de l’activité anthelminthique.</p><p><p align="justify">Pour caractériser l’activité nématocide des extraits des amandes de Balanites aegyptiaca,nous avons tout d’abord mis au point un test d’évaluation de l’activité toxique en tenant compte des limitations des tests existants. La validation pharmacologique (mesurant la sélectivité, la linéarité, l’exactitude et la précision) a consisté en la détermination de l’activité nématocide d’anthelminthiques couramment utilisés. Pour la caractérisation de l’activité nématocide des amandes de Balanites aegyptiaca, puis le fractionnement, l’isolement et la purification de(s) agent(s) nématocide(s) nous avons adopté la stratégie du fractionnement bio-guidé. Les résultats obtenus montrent que le produit isolé (déterminé comme étant la balanitine-7 ou Bal-7) induit une activité toxique plus élevée sur les vers adultes que sur les stades larvaires.</p><p><p align="justify">Bal-7 s’est avéré moins toxique que le levamisole, le mébendazole et le thiabendazole, mais plus toxique que le pyrantel, le niclosamide et la pipérazine. La présente étude a donc permis de montrer que les amandes de Balanites aegyptiaca, utilisée en médecine traditionnelle au Burkina Faso, pourraient être efficaces dans le traitement des parasitoses intestinales.</p><p><p align="justify">Certains anthelminthiques comme les benzimidazoles, du fait de leur activité d’inhibition de la polymérisation des tubulines, présentent une activité anti-tumorale. Aussi, faisant suite à la mise en évidence de l’activité nématocide de Bal-7 nous avons entrepris de caractériser l’activité anti-tumorale de balanitines. La méthode d’extraction que nous avons utilisé pour évaluer l’effet anti-tumoral de la Bal-7 est distincte de celle que nous avions utilisée pour évaluer l’effet anthelminthique de cette balanitine. Ainsi, alors que la méthode d’extraction que nous avons utilisée pour obtenir de la Bal-7 pour nos tests liés à l’activité anthelminthique semble avoir conduit à l’isolement de la balanitine-7 pure, la méthode d’extraction que nous avons utilisée pour observer les effets anti-tumoraux potentiels de cette balanitine-7 nous ont conduit à isoler un mélange de balanitine-6 et de balanitine-7 dans des proportions de 28/72%. Nous avons dénommé ce mélange Bal-6/7. L’activité anti-tumorale a été évaluée sur deux lignées cancéreuses humaines (A549, cancer du poumon non-à-petites cellules et U373, glioblastome). Dans ce travail, nous avons montré que Bal-6/7 induit la mort des cellules tumorales par une déplétion marquée de l’[ATP]i et une désorganisation majeure du cytosquelette d’actine. In vivo, Bal-6/7 a montré une activité anti-tumorale modeste, mais néanmoins statistiquement significative. A ce jour, il n’existe pas sur le marché, d’anti-cancéreux dirigé contre les filaments d’actine. Etant donné le rôle de ces filaments d’actine dans la prolifération et la migration des cellules tumorales, le développement de médicaments ayant cette protéine pour cible constituerait une avancée majeure dans la recherche de nouvelles thérapies anti-tumorales. Le mélange Bal-6/7, isolé pour la caractérisation de l’activité anti-tumorale des balanitines, du fait de son potentiel anti-tumoral, présente donc un intérêt certain en thérapeutique anti-cancéreuse. Il serait donc envisageable de développer par synthèse ou hémisynthèse des dérivés de balanitines présentant un meilleur index thérapeutique que le mélange Bal-6/7.</p> / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Les cellules microgliales, principales cellules immunocompétentes résidentes du système nerveux central (SNC), d'origine myéloïde, présentent un potentiel intéressant dans la lutte contre le cancer par leur localisation privilégiée dans les tumeurs cérébrales. A la moindre perturbation de leur microenvironnement, elles s'activent graduellement, ré-expriment toutes les molécules nécessaires à la présentation de l'antigène, perdent leurs prolongements cytoplasmiques jusqu'à devenir amiboïdes et sont donc à terme totalement indiscernables des macrophages périphériques. Dans le cadre d'une immunothérapie anti-tumorale, il est important pour mieux comprendre les réponses immunitaires de pouvoir distinguer les divers protagonistes. Au sein des produits d'une banque soustractive microgliale réalisée auparavant au laboratoire, trois ARNm se sont révélés discriminants entre cellules microgliales et macrophages primaires et ce, même en condition pro- ou anti-inflammatoire. Les cellules microgliales peuvent également dans certaines conditions se différencier en cellules type dendritique. Or ces dernières sont très prometteuses en immunothérapie active, notamment par leur capacité à effectuer la présentation croisée. En utilisant la microglie néonatale ou adulte primaire, nous avons mis en évidence que la microglie in vitro et ex vivo était aussi capable de présentation croisée et que celle-ci, bien que de faible intensité, peut être modulée positivement par le GM-CSF et le CpG. Deux modèles de tumeurs intracérébrales plus ou moins immunogènes implantées par stéréotaxie chez la souris ont alors été développés afin d'évaluer des protocoles utilisant ces résultats. Ainsi un traitement combinant déplétion des lymphocytes T régulateurs et injection de CpG permet de guérir la plupart des animaux ayant la tumeur la moins agressive mais ne montre en revanche pas de réel bénéfice pour la tumeur très agressive en intracérébral alors qu'en périphérie les résultats sont systématiquement meilleurs. Enfin, l'immune responsive gene 1, issu de la banque soustractive, a été caractérisé et s'avère être un nouveau marqueur potentiel d'activation des cellules immunitaires innées stimulées par les interférons ou les ligands des récepteurs Toll, aussi bien chez la souris que chez l'homme, et pourrait donc être intéressant pour suivre l'évolution de la réponse du système immunitaire après une thérapie.

L'Aminopeptidase-N (APN ou CD13) [EC.3.4.11.2] est une ectoenzyme homodimérique de nature glycoprotéique appartenant à la famille M1 des zinc-aminopeptidases. Elle est surexprimée à la surface des cellules endothéliales angiogéniques, ainsi que sur un certain nombre de cellules tumorales. Et il existe une corrélation étroite entre l'élévation de l'expression de l'APN, une activité enzymatique accrue et le pouvoir invasif de nombreux types de cellules tumorales. Des inhibiteurs puissants et sélectifs de l'APN, appartenant à la famille des composés de type amino-benzosubérone, ont été synthétisés au laboratoire. Ces composés ont été testés in vitro et in vivo, et il est apparu qu'ils présentaient une affinité variant du nano au picomolaire. En parallèle à ces essais, un nouveau projet a débuté il y a quelques années au laboratoire, visant à déterminer la structure tridimensionnelle de l'APN humaine. La connaissance de cette structure constitue un enjeu majeur car des co-cristallisations avec ces inhibiteurs permettraient de résoudre le mode de liaison de cette nouvelle famille de composés à l'APN. La difficulté de cette étude réside dans le fait que l'APN est une glycoprotéine membranaire particulièrement difficile à purifier à partir de tissus ; de plus, cette protéine étant ancrée dans la membrane de la cellule, sa cristallisation en est d'autant plus complexe. Plusieurs stratégies de clonage et de surexpression de l'APN humaine ont été envisagées, avec pour objectif final, l'obtention d'une protéine cristallisable, glycosylée ou non.