A implantação embrionária e a placentação em cobaios são caracterizadas pela presença trofoblastos que se destacam da placenta principal, semelhantes ao trofoblasto extra-viloso de humanos. Nestes animais ultrapassam os limites, e podem ser encontrados infiltrados no profundamente no endométrio e no em ambiente externo ultrapassando aos limites da parede uterina. A cobaia desenvolve uma importante estrutura fisiológica de troca materno-embrionária, denominada de placenta vitelina invertida, definidas como membrana fetal destituída parcial ou totalmente do revestimento trofoblástico que permite a exposição do endoderma extra-embrionário em contato direto com o tecido materno. Tais características denotam um mecanismo de controle da resposta imune materna distinta dos paradigmas estabelecidos na reprodução humana e de roedores, assim como ratos e camundongos. Sendo a mais intrigante, a destituição do trofoblasto como célula da interface-materno-fetal que controla a tolerância imune-materna.No presente trabalho, procurou-se estabelecer a organização da placenta vitelina de cobaios a partir da identificação das células que compõe esta membrana extra-embrionária e identificar em que momento ocorre à remoção das células trofoblásticas, e a subseqüente forma de interação das células da placenta vitelina na interface com o tecido materno. Para tanto foram utilizados cobaias fêmeas com idade gestacional conhecida, sacrificadas para coleta de segmentos uterinos nos períodos iniciais da gestação e destinados ao processamento histotógico de embebição em parafina. Na ausência de marcadores celulares específicos conhecidos para cobaios, foram realizados testes prospectivos com reações: citoquímicas de PAS e azul de toluidina (AT; um painel de lectinas biotinadas com afinidade específica para diferentes açúcares; e imunocitoquímica para citoqueratina. As reações realizadas com PAS e AT não identificaram populações celulares com marcação seletiva. Contudo dentre as lectinas tetadas, a Erytrina cristagali lectin (ECL) apresentou reação altamente seletiva para a população de trofoblasto mural (TM) que se origina do trofectoderma, mantendo esta reatividade ao longo da gestação. Esta marcação permitiu avaliar temporal e espacialmente o destino destas células que ao longo da gestação eram mantidas como monocamada de TM revestindo externamente a placenta vitelina e, portanto, não expondo as células do endoderma parietal ou visceral ao ecido materno. Pelo acompanhamento do desenvolvimento embrionário nos cortes seriados, foi constatada no interior do blastocisto a organização de duas massas celulares internas em pólos opostos desde a fase de pré-eclosão. Uma das massas celulares constituída de embrioblastos que dará origem aos os folhetos embrionários nas fases subseqüentes, enquanto a outra formada as células tronco trofoblásticas precursora do cone ectoplacentário (CE). A cavidade da blastocele que separa estas duas massas celulares tem a sua parede revestida pelo endoderma parietal em fase tardia, após a formação da cavidade amniótica. Estes achados demonstram a pecularidade da embriogênese no cobaio, diferente daquelas descritas para humanos e outros roedores, não permitem analogias diretas, o que pode ter contribuído para o equívoco na descrição clássica da organização e constituição da placenta vitelina invertida de constituição córion-amniótica. Isto é, o trofoblasto participa da organização da placenta vitelina inicial e permanece na membrana âmnion-córion-vitelina perfazendo todo o limite do embrião ao longo da gestação. Portanto a hipótese da placenta vitelina parcial ou totalmente invertida baseada na descrição clássica em cobaios é decorrente da interpretação equivocada da embriogênese destes animais. / The guinea pig embryo implantation and placentation is characterized by trophoblast cells detaching from the main placenta in a similar way of human extra-villous trophobasts that deeply intrude inside the endometrium and sometimes also found outside the uterine wall. Furthermore, this animal also develops inverted yolk sac placenta defined as fetal membrane partially or fully devoided of trophoblast sheet that allows extra-embryonic endoderma direct exposition to the maternal environment. These characteristics denote a distinct control mechanism of maternal immune response from the established paradigm for human and rodents (rat and mouse) reproduction, being most intriguing the depriving of trophoblast as cells of maternal-fetal interface regulating the maternal immune tolerance. The present work aimed to establish the organization of guinea pig yolk sac based on identification of cell populations composing this membrane and identification if, or, when the trophoblast cells are removed from and subsequent interaction way of yolk sac cell in interface with maternal tissue. It was used pregnant guinea pig sacrificed on established gestational day to collect uterine fragments on early pregnancy stage and processed by conventional paraffin embedding. Due to absence of known specific cell markers for guinea pig, was performed the prospective evaluation using PAS and toluidine blue (TB) cytochemistry and a screening using a panel of biotinylated lectin specific for different sugars and, anti-cytokeratin. The PAS and TB staining did not identify any specific cell population, however, among the lectins used, Erytrina cristagali lectin (ECL) showed high selective labeling to the trophoblast cells originated from the trophectoderm that was kept through the gestational period. This reaction pattern was useful to evaluate chronologically and topologically the fate of this cell and confirmed the constancy of these cells layering the yolk sac placenta in contact with maternal tissue and therefore, endodermal cells were not exposed to maternal environment. Evaluation of embryo development step by step in the serial sections showed the presence of two inner cell mass in opposite sites inside the pre-hatched blastocyst. One of this, was formed with embryoblast that latter will originate the embryonic sheets and the other formed with trophoblast stem cells (ST) will originate the ectoplacental-cone. The wall of blastocele cavity separate these two inner cell mass was initially covered by a single ECL positive mural trophoblast and only later after the amniotic cavity is formed the extraembyonic endodermal cells migrate from the embryonic sheets to cover internally the blastocele cavity to organize the yolk sac placenta. These findings show the peculiarity of guinea pig embryogenesis, quite different from those described for human and rodents and therefore, does not allow direct analogy and seems to contribute in the misunderstanding of classic description of inverted yolk sac placenta and its cellular organization. It means, the trophoblast cell participates in the early organization of yolk sac placenta and remains in chorioamniotic yolk sac fetal membrane constantly limiting the embryo surface in contact with maternal environment. Therefore, the hypothesis of complete or partially inverted yolk sac placenta seems to be a miss understanding of guinea pig embryogenesis.

O saco vitelino é o único anexo embrionário presente em todas as espécies dos embriões vertebrados, répteis, aves e mamíferos. Em mamíferos domésticos o saco vitelino é inicialmente grande, pois nestas espécies ele é transitório. Após a implantação, surge no mesênquima lateral à notocorda agrupamentos de células, denominados ilhotas sanguíneas, que representam os progenitores dos sistemas vascular e hematopoético: os hemangioblastos. Os hemangioblastos centrais das ilhas sanguíneas formam as primeiras células-tronco hematopoéticas, enquanto os hemangioblastos periféricos se diferenciam em angioblastos, os precursores dos vasos sanguíneos. O desenvolvimento inicial da atividade hematopoética no saco vitelino conduz a hipótese de que esse tecido é o local primário de desenvolvimento hematopoético e que as células-tronco derivadas dele semeiam os outros sítios intraembriônicos. Foi possível observar nas análises microscópicas que realmente existe uma relação entre ambas linhagens. Nas análises de expressão gênica, alguns genes expressos pelo hemangioblasto apresentaram alta expressão nas análises D+0 e outros genes também específicos do hemangioblasto, porém em estágios secundários de diferenciação como os encontrados na região aórtica, a nível de endotélio hemogênico apresentaram altos níveis de expressão após 3 dias em cultivo. Concluímos portanto, que o saco vitelino por ser o local primário de formação das células sanguíneas e endoteliais nos estágios iniciais da embriogênese, por serem primitivas e, portanto não expressarem marcadores de células maduras na sua superfície, tornam estas células uma importante fonte de células-tronco relevante para a Terapia Celular para hemofilia e muitas outras doenças humanas. / The yolk sac is the single attachment embryo present in all species of vertebrate embryos, reptiles, birds and mammals. In domestic mammals the yolk sac is initially large, since these species it is transient. After implantation, appears in the lateral mesenchyme to the notochord cell clusters, called \"blood islands\" that represent the progenitors of vascular and hematopoietic systems: the hemangioblasts. The central islands hemangioblasts form the first blood hematopoietic stem cells, while peripheral hemangioblasts, the angioblastic differentiate into the precursors of blood vessels. The initial development of the yolk sac hematopoietic activity leads to the hypothesis that this tissue is the primary site of development and that hematopoietic stem cells derived from them sow other intraembryos sites. It was observed in the microscopic analysis that there is indeed a relationship between the two lineages. In the analysis of gene expression, some genes expressed by hemangioblasts showed high expression in D+0 and other specific genes also hemangioblasts, but in secondary stages of differentiation as found in the aortic region, the level of hemogenic endothelium showed high levels of expression after 3 days in culture. We therefore conclude that the yolk sac to be the primary site of formation of blood and endothelial cells in the early stages of embryogenesis, for its cells be primitive and therefore do not express markers of mature cells on the surface, these cells become an important source of cells relevant to stem cell therapy for hemophilia and many other human diseases.

Foram conduzidos dois experimentos com um total de 416 poedeiras Hisex White, com os objetivos de avaliar os efeitos de diferentes níveis dietários de proteína bruta (PB) e de lisina (LIS) sobre as características de desempenho, qualidade interna dos ovos e determinar o balanço e o coeficiente de metabolizabilidade aparente do nitrogênio (Experimento 1) e avaliar os efeitos de diferentes níveis dietários de LIS e metionina (MET) sobre o desempenho, qualidade interna dos ovos e propriedades funcionais dos componentes dos ovos (Experimento 2). No Experimento 1, foram utilizadas 160 poedeiras alojadas individualmente e submetidas ao delineamento inteiramente casualizado (DIC) em esquema fatorial 4 x 2, com os fatores: níveis de PB (12%, 14%, 16% e 18%) e de LIS (0,85% e 1,00%), totalizando oito tratamentos com cinco repetições de quatro aves cada. No Experimento 2, foram utilizadas 256 poedeiras alojadas individualmente e submetidas ao DIC em arranjo fatorial 4x4, com os fatores: níveis de LIS (0,482%, 0,682%, 0,882% e 1,082%) e de MET (0,225%, 0,318%, 0,411% e 0,505%), totalizando 16 tratamentos com quatro repetições de quatro aves cada. O desempenho foi avaliado por meio das características consumos de ração (CR), lisina (CLIS), metionina (CMET), proteína bruta (CPB) e de energia (CE), peso (PO), produção (PROD) e massa de ovos (MO), e conversão alimentar (CA). As características CPB, PO e MO tiveram respostas linear crescente. A qualidade interna dos ovos foi avaliada por meio das características peso e porcentagens de albúmen (ALB%) e gema (GEM%), e unidade Haugh (UH). A ALB% apresentou diferença significativa com resposta linear crescente. Em ambos experimentos, a qualidade dos ovos armazenados foi mensurada pelas características UH, PO e altura de albúmen, as quais apresentaram melhores resultados quando os ovos foram conservados em ambiente refrigerado. No entanto, independente do ambiente, a qualidade dos ovos piorou com o aumento do tempo de armazenamento. Respostas máximas das análises de proteína, sólidos totais, viscosidade e pH dos componentes albúmen e gema, foram obtidas quando as aves foram alimentadas com a concentração média de 15,33% de PB na dieta. No Experimento 1, após o término do período experimental foram realizadas coletas das excretas por um período de três dias para cálculo do balanço de nitrogênio, sendo observado aumento significativo da ingestão e excreção de nitrogênio conforme o incremento de PB na dieta. No experimento 2, as características CR, CMET, CE, PROD, PO e MO apresentaram resposta máxima quando as aves foram alimentadas com as concentrações dietárias médias de 0,870% de LIS e de 0,450% de MET. A classificação dos ovos por tipo e as características de qualidade interna e externa dos ovos não sofreram influência dos diferentes níveis dietários de MET e LIS. As propriedades funcionais dos componentes albúmen e gema foram avaliadas por meio da qualidade do cozimento com a confecção de bolos tipos Angel e Sponge cakes, a qual não foi influenciada pelos tratamentos. Conclui-se que níveis médios de 15,33% de PB, 0,450% de MET e 0,870% de LIS satisfazem as exigências das poedeiras para as características avaliadas. / Four hundred sixteen Hisex White hens were used to evaluate the effects of different dietary levels of crude protein (CP) and lysine (LYS) on performance, internal egg quality and to determine the nitrogen balance and its apparent metabolizability coefficient (Experiment 1), and to evaluate the effects of different dietary levels of LYS and methionine (MET) on performance, internal egg quality and functional properties of egg components (Experiment 2). One hundred sixty hens were randomly distributed in a 4 x 2 factorial scheme: CP levels (12%, 14%, 16% and 18%) and LYS levels (0,85% and 1,00%) totalizing eight treatments with five replicates of four birds each (Experiment 1). Two hundred fifty six hens were randomly distributed in a 4 x 4 factorial scheme: LYS levels (0,482%, 0,682%, 0,882% and 1,082%) and MET levels (0,225%, 0,318%, 0,411% and 0,505%) totalizing sixteen treatments with four replicates of four birds each (Experiment 2). Several characteristics were evaluated such as performance: intakes of feed, LYS, MET, CP and energy, egg production, egg weight, egg mass, and feed conversion; internal egg quality: weight and percentages of egg albumen and egg yolk, Haugh unit; quality of storaged eggs: Haugh unit, egg weight and albumen height; analyses of concentrations of protein, total solids, viscosity and pH of the egg components. The characteristics intake of CP, egg weight, egg mass, and albumen percent showed positive and linear response. In both experiments, the quality of storaged eggs was better when eggs were storaged in refrigerated environment than natural environment. However, irrespective of the environment, the internal egg quality was impaired as the time of storage was increased. Maximum responses for analyses of protein, total solids, viscosity, and pH of albumen and yolk were obtained when hens were fed diets containing 15,33% of CP. In the Experiment 1, after the experimental period, another assay was carried out to determine the nitrogen balance by using total excreta procedure during a three-day period. It was observed increase of intake and excretion of nitrogen as the content of CP in the diet was increased. In the Experiment 2, feed intake, MET intake, energy intake, egg production, egg weight, and egg mass showed maximum responses when hens were fed diets containing 0,870% of LYS and 0,450% of MET. Egg grading, internal and external egg quality characteristics were not influenced by the different dietary levels of MET and LYS. The functional properties of egg components (cooking quality by making Angel and Sponge cakes) were not affected by the treatments. It was concluded that hens fed diets containing 15,33% of CP, 0,450% of MET, and 0,870% of LYS show optimum performance, internal and external egg quality.

O saco vitelino desempenha um importante papel no desenvolvimento embrionário de todos os mamíferos. Sua função está sendo estudada, demonstrando ser um dos lugares iniciais da hematopoiese. No período em que a placenta verdadeira ainda não esta formada, durante o desenvolvimento embrionário, o saco vitelino é a principal fonte de nutrição do embrião, constituindo um sitio de transferência e síntese de proteínas. As proteínas são moléculas que governam praticamente todas as funções celulares e são do ponto de vista químico as moléculas biológicas estruturalmente mais complexas. A proteômica é o estudo em grande escala de proteínas de uma amostra biológica complexa. O objetivo deste trabalho foi realizar a analise estrutural e bioquímica inicial das proteínas presentes no saco vitelino de embriões bovinos por eletroforese bidimensional 2D-PAGE. A partir dos géis obtidos em 2D-PAGE as amostras de proteínas contidas no saco vitelino de 37 dias de gestação apresentaram cerca de 1230 proteínas, e os géis das amostras de 23 dias de gestação apresentaram cerca de 970 proteínas. O saco vitelino de 23 dias apresentou proteínas essenciais diferencialmente expressas nos estágios de desenvolvimento, como Hemogen, proteína expressa neste estagio, responsável pelo controle da proliferação e diferenciação de células hematopoiéticas; a proteína Glicoproteína-N-acetilgalactosamina 3-beta-galactosiltransferase-1, envolvida nos processos de angiogênese, trombopoiese e no desenvolvimento da homeostase nos rins; a proteína fator de transcrição Corion-especifico (GCMa) fator de transcrição necessário para o desenvolvimento da placenta. Enqueanto que o saco vitelino de 37 dias apresentou proteinas essenciais deste estágio como a apolipoproteína E (APOE) que medeia à ligação, inter-sinalização e catabolismo das partículas de lipoproteína, podendo servir como uma ligação para o receptor de LDL (apo B/E) e para receptores específicos de apo-E dos tecidos hepáticos durante a embriogênese. Estas proteinas serão de vital importância para o desenvolvimento do embrião até a formação da placenta. / The yolk sac plays an important role in embryonic development of all mammals. Its function is being studied, proving to be one of the initials of haematopoiesis. In the period when the placenta is not real yet formed during embryonic development, the yolk sac is the main source of nutrition of the embryo, providing a place for the transfer and synthesis of proteins. Proteins are molecules that govern all cellular functions and are from a chemical structurally the most complex biological molecules. The proteomics is the large-scale study of proteins in a complex biological sample. The aim of this work was make the analisys of present proteins in the yolk sac of bovine embryos by 2D-PAGE two-dimensional electrophoresis. The gels obtained from 2D-PAGE of protein samples contained in the yolk sac of 37 days of pregnancy had about 1230 proteins, and gels of samples from 23 days of pregnancy had about 970 proteins. The yolk sac of 23 days showed essential proteins differentially expressed in stages of development, as Hemogen, protein expressed in stage, responsible for controlling the proliferation and differentiation of hematopoietic cells, the protein acetylgalactosamine glycoprotein-N-3-beta-galactosyltransferase-1, involved in the process of angiogenesis, trombopoiese homeostasis and development of the kidney, the protein factor chorion-specific transcription (GCMa) transcription factor necessary for the development of the placenta. The yolk sac of 37 days showed essential proteins differentially expressed in stages of development , as apolipoprotein E (APOE), which mediates the binding, intersignaling and catabolism of lipoprotein particles, and can serve as a link to the receptor to LDL (apo B/E) and specific receptors for apo E in the liver tissue embryogenesisThese proteins are of vital importance to the development of the embryo until the formation of the placenta.

Entre as biotécnicas da reprodução, a inseminação artificial (IA) é a que proporciona maior amplitude de resultados nos programas de melhoramento genético animal. A adequada seleção dos atributos produtivos e reprodutivos de fêmeas e principalmente dos machos é a base essencial para a maximização do potencial dessa técnica. O sêmen para IA pode ser fresco, fresco diluído, refrigerado e congelado. Os diluidores têm papel fundamental na expansão do volume seminal, permitindo seu fracionamento na preservação do sêmen no processo de refrigeração, eles devem ser atóxicos, ter pH e pressão osmótica compatíveis com a sobrevivência espermática, de baixo custo e fácil preparo. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a conservação de sêmen ovino resfriado com diluente de Kenney (K) ou diluente de Kenney mais gema de ovo (KG) por até 48 horas. Foram utilizados quatro carneiros, sendo feitas 40 colheitas. Logo após o sêmen era dividido em duas alíquotas uma com o diluente de K e outra alíquota com diluente de KG. As amostras foram resfriadas à 10ºC. As análises subjetivas usuais foram feitas nos tempos 0, 24 e 48 horas. Estas análises incluíram turbilhonamento, motilidade e vigor. Foram feitas também análises de testes funcionais como a avaliação da integridade das membranas plasmática e acrossomal através das colorações de eosina-nigrosina e técnica da coloração Fast Green / Rosa Bengala (POPE, 1991) respectivamente, avaliação da atividade citoquímica mitocondrial através da coloração de diaminobenzidina (DAB) e avaliação da susceptibilidade do espermatozóide ao estresse oxidativo através da avaliação dos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico após a incubação com sistema gerador constituído de sulfato de ferro e ascorbato. Neste trabalho o tempo afetou significativamente a motilidade e o vigor espermático, caindo de 79,16±1,41 para 40,25±2,55 após 48hs e de 3,92±0,06, para 2,57±0,10 após 48hs respectivamente. O tempo influenciou também a integridade das membranas plasmática e acrossomal, fazendo com que houvesse uma queda gradativa nas integridades (0hs=95,75±0,36, 24hs=90,69±0,99, 48hs=86,11±1,45) e (0hs=90,34±0,80, 24hs=84,33±1,30, 48hs=76.67±1,69) respectivamente. Foi possível observar também que ao longo do tempo houve uma diminuição da atividade mitocondrial e um aumento nas espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), que diferiu do tempo 0hs para o tempo 48hs (807,42±39.22 e 937,76 ± 41,87). Verificou-se ainda que o meio K apresentou maiores valores de vigor do que o meio KG (p=0,0144), e que o meio K foi capaz de preservar melhor a atividade mitocondrial P=0,0005. A concentração de TBARS no diluente K correlacionou-se negativamente com as variáveis motilidade, vigor, integridade de membrana plasmática e acrossomal. No diluente KG as correlações do TBARS e DAB III foram positiva (r=0,35), demonstrando que quanto maior a quantidade de células com baixa atividade mitocondrial, maior a concentração de TBARS. Foi também encontrada uma correlação negativa entre a variável integridade de acrossomo (ACRO) e TBARS (r=-0,40; P=0,0001), mostrando que quanto menor a porcentagem de células com acrossomo integro, maior a concentração de substancias reativas ao acido tiobarbitúrico. Concluindo que o diluente K foi eficaz em preservar as características seminais de ovino por até 48 horas e que a adição da gema de ovo ao diluente de Kenney não foi capaz de melhorar estas características. / Among the reproductive biotechniques routinely used in animal production, the artificial insemination (AI) is known to provide a greater gain in genetic improvement programs. The adequate selection of female and especially male productive and reproductive traits is the keystone to maximize the potential of this technique. Semen used for AI can be used fresh diluted or not, chilled and frozen. An essential role is played by semen extenders on volume expansion, allowing not only the fractioning in multiple insemination doses, but also the maintenance of sperm fertilizing potential. Therefore, for semen fractioning, chilling or cryopreservation, extenders are required to be atoxic, must maintain pH and osmolarity compatible to the sperm survival, and should be preferably inexpensive and easy to prepare. Therefore, the objective of the present study was to evaluate chilled ram semen using the Kenney extender (K) of the Kenney extender with egg yolk (KG) for 48 h. Forty ejaculates of four rams were (n=40) were used. Samples were equally divided into two aliquots and extended in K extender and KG extender. Samples were chilled at 10ºC and evaluated immediately after chilling (0h), 24 and 48 h later. These analyses included gross motility (swirl pattern), individual motility and vigor. Functional test analyses such as evaluation of plasma membrane integrity using the eosin-nigrosin staining technique, acrosome integrity using the fast green / bengal rose staining method (POPE, 1991), mitochondrial cytochemical activity evaluation utilizing diaminobenzidine (DAB) staining and assessment of sperm susceptibility to the oxidative stress based the levels of thiobarbituric acid reactive substances after the incubation with ferrous sulphate and ascorbate (TBARS) were performed. In this study, a significant influence of chilling period was found for spermatic motility and vigor dropping from 79.16±1.41 to 40.25±2.55 after 48 hours and from 3.92±0.06 to 2.57±0.10 after 48 hours, respectively. Time also negatively influenced the integrity of plasma and acrosomal membrane (0hr=95.75±0.36, 24hrs=90.69±0.99, 48hrs=86.11±1.45; and 0hr=90.34±0.80, 24hrs=84.33±1.30, 48hrs=76.67±1.69, respectively). Also, during the course of time there was a decrease in mitochondrial activity and an increase in TBARS, with an increase from moment 0 to 48 hrs (807.42 ± 39.22 and 937.76 ± 41.87). It was also found that the medium K had greater values of vigor than the medium KG (p=0.0144), and that the medium K was capable of better preserve mitochondrial activity (P=0.0005). A negative correlation was found between the TBARS concentration with motility and vigor and plasma and acrosomal membrane integrity when samples were stored with the extender K. In the KG extender, the TBARS and DAB III correlations were positive (r=0, 35) indicating that showing that the greater the number of cells with low mitochondrial activity, the higher the TBARS concentration. Also, a negative correlation between the acrosomal integrity variable (ACRO) and TBARS (r=-0, 40; P=0,0001) was found, which demonstrates that the lower the percentage of cells with intact acrosomal, the higher the susceptibility to the oxidative stress. Therefore, results indicated that the K extender was effective in preserve the seminal characteristics of ovine for 48 hours and the addition of egg yolk to kenney extender was not capable of improving such characteristics.

A grande demanda por proteína animal e a importância que a criação bovina exerce sobre a economia nacional, vêm exigindo eficientes sistemas de produção. A preservação e disseminação da genética do rebanho bovino dependem de biotecnologias como a criopreservação espermática, inseminação artificial e fertilização in vitro. No entanto, atualmente muito tem sido discutido sobre o uso da gema de ovo nos diluidores seminais. Pois apresentam variabilidade em sua composição e risco de contaminação microbiológica. Em contrapartida, apesar dos diluidores sintetizados com lecitina de soja não fornecerem esses riscos, seus resultados não são muito satisfatórios na criopreservação espermática bovina. Com base na hipótese de que a suplementação do diluidor seminal à base de lecitina de soja com antioxidantes, preserve as características das células espermáticas de maneira tão eficiente quanto à gema de ovo, o objetivo do presente experimento foi comparar o efeito do diluidor à base de gema de ovo com o diluidor à base de lecitina de soja (com e sem antioxidantes), sobre a manutenção da funcionalidade e fertilidade de amostras espermáticas bovinas criopreservadas. Para tal, foram utilizadas amostras seminais de 20 touros Brangus, cujas colheitas foram realizadas pelo método de eletroejaculação e as amostras foram diluídas em 4 grupos de diluidores: LElecitina de soja (sem a adição de antioxidantes); LAlecitina de soja suplementada com ácido ascórbico (AA, 4,5mM); LS lecitina de soja suplementada com superóxido dismutase (SOD, 60UI/mL) e GOgema de ovo (sem adição de antioxidantes). O sêmen foi então, criopreservado de maneira automatizada. As amostras foram descongeladas e analisadas quanto aos testes laboratoriais de motilidade computadorizada do espermatozóide (CASA); integridade de membrana plasmática (eosina/nigrosina); integridade de membrana acrossomal (fast Green/ rosa bengala); atividade citoquímica mitocondrial (DAB); susceptibilidade do DNA à desnaturação (SCSA); índice de estresse oxidativo induzido (TBARS). Além disso, foram realizados testes para verificar o potencial de fertilidade das amostras espermáticas criopreservadas. A fertilidade in vivo foi realizada pela técnica de inseminação artificial em tempo fixo (IATF), utilizando 450 fêmeas bovinas, seguido de exame ultrassonográfico para avaliação de prenhez. Teste de fertilidade in vitro, foi realizado pela técnica de produção in vitro de embriões (PIV) com o uso de ovários de frigoríficos, a classificação do desenvolvimento embrionário e a avaliação da motilidade espermática foram promovidas no decorrer do processo. Os resultados demonstraram que o diluidor LE apresentou efeito na proteção espermática de maneira semelhante ao diluidor GO. No entanto a suplementação desse primeiro com antioxidantes é uma alternativa para melhorar ainda mais esse processo, já que a taxa de prenhez obtida nos grupos LA e LS é satisfatória em um programa de IATF. Ainda o grupo LS foi o que apresentou melhores resultados no processo de PIV. Concluindo que o diluidor à base de lecitina de soja suplementado com o antioxidante superóxido dismutase seria uma opção para a substituição definitiva dos diluidores sintetizados com gema de ovo. / Due to the great demand for animal protein and the importance that bovine breeding exert on national economy, efficient production systems have been required. Cattle genetics preservation and dissemination depend on reproductive biotechnologies such as sperm cryopreservation, artificial insemination and in vitro fertilization. However, the use of egg yolk-based extender is under discussion nowadays, once there is great variability in its composition and risks of bacteriological contamination. On the other hand, despite soybean lecithin-based extenders do not present these risks, satisfactory results, after bovine sperm cryopreservation, have not been reached yet. Based on the hypothesis that soybean lecithinbased extender supplemented with antioxidants, preserve the sperm cell characteristics so efficient as egg yolk does, the aim of the present experiment was to compare the effects of egg yolk-based extender and soybean lecithin-based extender (with and without antioxidants), on functionality and fertility maintenance of bovine cryopreserved sperm samples. For this, seminal samples from 20 Brangus bulls were used, collects were realized by eletroejaculation method and samples were diluted in 4 extenders group: LE-soybean lecithin-based extender (without antioxidant supplementation); LA- soybean lecithin supplemented with ascorbic acid (AA, 4,5mM); LS- soybean lecithin supplemented with superoxide dismutase (SOD, 60UI/mL) and GO-egg yolk-based extender (without antioxidant supplementation). Then, semen was cryopreserved by automatic method. Samples were thawed and analyzed by laboratorial tests such as computer assisted semen analysis (CASA); plasma membrane integrity (eosin/nigrosin); acrosome membrane integrity (fast green/ rose bengal); mitochondrial cytochemical activity (DAB); susceptibility of chromatin denaturation (SCSA); induced oxidative stress index (TBARS). Furthermore, tests for fertility potential of cryopreserved semen samples were performed. In vivo fertility was accessed by timed artificial insemination (TAI), 450 bovine females were inseminated, and ultrasonographical exam was realized for pregnancy detection. In vitro fertility test was accessed by embryo in vitro production (IVP), ovaries from slaughterhouses were used, embryo development classification and sperm motility were promoted during the process. Results indicate that sperm protection is similar between LE and GO extenders. However the antioxidant supplementation of soybean lecithin-based extender is a great alternative to improve the process of sperm protection, since pregnancy rate of LA and LS groups was satisfactory for a TAI program. Besides, LS group presented the best results on IVP process. In conclusion, soybean lecithin-based extender supplemented with superoxide dismutase would be a better option for a definite replacement of egg yolk-based extender for sperm bovine cryopreservation.

Made available in DSpace on 2016-04-28T14:59:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008 - Thaiz Marinho Magalhaes Cedro.pdf: 1901514 bytes, checksum: e3897dc76edd8a3714a6678cf8139f8f (MD5) Previous issue date: 2008-08-29 / 1160 eggs were utilized in four experiments were conducted in Eggs Analyses Laboratory of the Institute of Animal Science of the Rural Federal University of Rio de Janeiro (UFRRJ) using commercial eggs produced by two groups of laying hens line Isa Brown with 33 weekold. In group 1, the birds were fed throughout their productive life with a basic diet of corn and soybean meal, while in group 2, since 22? weeks-old of the hens, was added to the basic diet 1.5% of marine algae substrate and 1.8% fish oil (production of enriched ω-3 eggs). In experiment 1, whose aim was to evaluate the internal and external quality of conventional and enriched ω-3 eggs stored at different temperatures, it was found that both types of eggs studied had similar characteristics of internal and external quality. Eggs stored for 21 days at 25?C had lower averages for Haugh unit and yolk index and higher averages of albumen pH and yolk pH when compared to other treatments related to temperature and period of storage. There were no significant differences in egg shell thickness, shell weight and shell percentage between the two types of eggs stored for 21 days, regardless of the temperature of storage. In experiment 2 was assessed the influence of the season on the quality of enriched ω-3 eggs stored in refrigerated environment. In this second issue was verify that the eggs collected in the summer showed eggs weight and internal and external quality aspects lower than those collected in winter. In this second issue was verify that the eggs collected in the summer showed eggs weight and internal and external quality aspects lower than those collected in winter. In this second issue was verify that the eggs collected in the summer showed eggs weight and internal and external quality aspects lower than those collected in winter. The storage affected negatively the eggs weight, Haugh unit and yolk index, but there was no effect on the shell thickness. In experiment 3 was compared the fatty acids levels and relationships in conventional and enriched ω-3 eggs. The enriched ω-3 eggs showed total levels of ω-3 polyunsaturated (1839 mg/100g of yolk) and monounsaturated fatty acids (10,744 mg/100g of yolk) higher than those of conventional eggs (927 and 7997 mg/100g of yolk, respectively). Relations between polyunsaturated/saturated fatty acids (P/S) and between ω-6/ω-3 of enriched eggs were close to the ideal estimated for human consumption (1.10 and 3.00, respectively). The conventional eggs had total levels of saturated (8740 mg/100g of yolk) and ω-6 polyunsaturated fatty acids (9600 mg/100g of yolk) significantly higher than the enriched ω-3 eggs (6640 and 5510 mg/100g of yolk, respectively). In Experiment 4, three people individually assessed the intensity of yolk pigmentation with a color range. It was found that conventional eggs had the yolk less pigmented enriched ω-3 ones. The storage at different temperatures caused the appearance of dark spots in the egg yolks enriched. Based on the results obtained in experimental conditions used it was found that enriched ω-3 eggs showed high levels of ω-3 polyunsaturated fatty acids, appropriate balance of the relations between P/S and between ω-6/ω-3 and good characteristics of internal and external quality, thus those eggs can be considered an excellent alternative food for those consumers concerned about eating healthy diets. / Foram utilizados 1160 ovos comerciais em quatro experimentos realizados no Laborat?rio de An?lises de Ovos do Instituto de Zootecnia da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ) produzidos por dois grupos de poedeiras da linhagem Isa Brown com 33 semanas de idade. No grupo 1, as aves foram alimentadas durante toda vida produtiva com ra??o a base de milho e farelo de soja (produ??o de ovos convencionais), enquanto que no grupo 2, ? partir da 22? semana de idade das aves, foi acrescentado a ra??o b?sica 1,5% de substrato de algas marinhas e 1,8% de ?leo de peixe (produ??o de ovos enriquecidos com ω-3). No experimento 1, cujo objetivo foi avaliar a qualidade interna e externa de ovos comerciais convencionais e enriquecidos com ω-3 armazenados em diferentes temperaturas, foi verificado que os dois tipos de ovos estudados apresentaram caracter?sticas de qualidade interna e externa semelhantes. Os ovos armazenados por vinte e um dias a 25?C apresentaram menores m?dias para unidade Haugh e ?ndice de gema e maiores para pH do alb?men e da gema quando comparado aos demais tratamentos relacionados a temperatura e per?odo de armazenamento. N?o foram observadas diferen?as significativas para espessura, percentual e peso da casca entre os dois tipos de ovos estocados por vinte e um dias, independentemente da temperatura de armazenamento. No experimento 2 foi avaliada a influ?ncia da esta??o do ano sobre a qualidade de ovos enriquecidos com ω-3 armazenados em ambiente refrigerado. Neste segundo ensaio foi observado que os ovos coletados no ver?o apresentaram peso, qualidade interna e externa inferior ao daqueles coletados no inverno. Com rela??o ao armazenamento, foi verificado efeito negativo sobre o peso, unidade Haugh e ?ndice de gema, mas n?o houve efeito sobre a espessura da casca destes ovos. No experimento 3, comparou-se os n?veis de ?cidos graxos e suas rela??es em ovos comerciais convencionais e enriquecidos com ω-3 e foi verificado que os ovos enriquecidos com ω-3 apresentaram teores totais de ?cidos graxos (AG) poliinsaturados da s?rie ω-3 (1839 mg/100g de gema) e de AG monoinsaturados (10744 mg/100g de gema) significativamente superiores aos dos ovos convencionais (927 e 7997 mg/100g de gema, respectivamente). As rela??es entre os ?cidos graxos poliinsaturados/saturados (P/S) e entre ω-6/ω-3 dos ovos enriquecidos foram pr?ximas ao ideal estimado para o consumo humano (1,10 e 3,00; respectivamente). Os ovos convencionais apresentaram teores totais de AG saturados (8740 mg/100g de gema) e de AG poliinsaturados da s?rie ω-6 (9600 mg/100g de gema) significativamente superiores aos dos ovos enriquecidos ω-3 (6640 e 5510 mg/100g de gema, respectivamente). No experimento 4, tr?s pessoas individualmente avaliaram a intensidade de pigmenta??o da gema com o aux?lio de um leque colorim?trico. Foi verificado que os ovos convencionais apresentaram gema menos pigmentada que os ovos enriquecidos com ω-3. O armazenamento em diferentes temperaturas provocou o aparecimento de manchas escuras nas gemas dos ovos enriquecidos. Com base nos resultados obtidos nas condi??es experimentais utilizadas concluiu-se que os ovos enriquecidos com ω-3 apresentaram elevados n?veis de AG poliinsaturados da s?rie ω-3, balan?o adequado das rela??es entre ω-6/ω-3 e P/S e boas caracter?sticas de qualidade interna e externa, sendo desta forma, considerados uma excelente alternativa de alimento para aqueles consumidores preocupados em ingerir dietas mais saud?veis.

Foram conduzidos dois experimentos com um total de 416 poedeiras Hisex White, com os objetivos de avaliar os efeitos de diferentes níveis dietários de proteína bruta (PB) e de lisina (LIS) sobre as características de desempenho, qualidade interna dos ovos e determinar o balanço e o coeficiente de metabolizabilidade aparente do nitrogênio (Experimento 1) e avaliar os efeitos de diferentes níveis dietários de LIS e metionina (MET) sobre o desempenho, qualidade interna dos ovos e propriedades funcionais dos componentes dos ovos (Experimento 2). No Experimento 1, foram utilizadas 160 poedeiras alojadas individualmente e submetidas ao delineamento inteiramente casualizado (DIC) em esquema fatorial 4 x 2, com os fatores: níveis de PB (12%, 14%, 16% e 18%) e de LIS (0,85% e 1,00%), totalizando oito tratamentos com cinco repetições de quatro aves cada. No Experimento 2, foram utilizadas 256 poedeiras alojadas individualmente e submetidas ao DIC em arranjo fatorial 4x4, com os fatores: níveis de LIS (0,482%, 0,682%, 0,882% e 1,082%) e de MET (0,225%, 0,318%, 0,411% e 0,505%), totalizando 16 tratamentos com quatro repetições de quatro aves cada. O desempenho foi avaliado por meio das características consumos de ração (CR), lisina (CLIS), metionina (CMET), proteína bruta (CPB) e de energia (CE), peso (PO), produção (PROD) e massa de ovos (MO), e conversão alimentar (CA). As características CPB, PO e MO tiveram respostas linear crescente. A qualidade interna dos ovos foi avaliada por meio das características peso e porcentagens de albúmen (ALB%) e gema (GEM%), e unidade Haugh (UH). A ALB% apresentou diferença significativa com resposta linear crescente. Em ambos experimentos, a qualidade dos ovos armazenados foi mensurada pelas características UH, PO e altura de albúmen, as quais apresentaram melhores resultados quando os ovos foram conservados em ambiente refrigerado. No entanto, independente do ambiente, a qualidade dos ovos piorou com o aumento do tempo de armazenamento. Respostas máximas das análises de proteína, sólidos totais, viscosidade e pH dos componentes albúmen e gema, foram obtidas quando as aves foram alimentadas com a concentração média de 15,33% de PB na dieta. No Experimento 1, após o término do período experimental foram realizadas coletas das excretas por um período de três dias para cálculo do balanço de nitrogênio, sendo observado aumento significativo da ingestão e excreção de nitrogênio conforme o incremento de PB na dieta. No experimento 2, as características CR, CMET, CE, PROD, PO e MO apresentaram resposta máxima quando as aves foram alimentadas com as concentrações dietárias médias de 0,870% de LIS e de 0,450% de MET. A classificação dos ovos por tipo e as características de qualidade interna e externa dos ovos não sofreram influência dos diferentes níveis dietários de MET e LIS. As propriedades funcionais dos componentes albúmen e gema foram avaliadas por meio da qualidade do cozimento com a confecção de bolos tipos Angel e Sponge cakes, a qual não foi influenciada pelos tratamentos. Conclui-se que níveis médios de 15,33% de PB, 0,450% de MET e 0,870% de LIS satisfazem as exigências das poedeiras para as características avaliadas. / Four hundred sixteen Hisex White hens were used to evaluate the effects of different dietary levels of crude protein (CP) and lysine (LYS) on performance, internal egg quality and to determine the nitrogen balance and its apparent metabolizability coefficient (Experiment 1), and to evaluate the effects of different dietary levels of LYS and methionine (MET) on performance, internal egg quality and functional properties of egg components (Experiment 2). One hundred sixty hens were randomly distributed in a 4 x 2 factorial scheme: CP levels (12%, 14%, 16% and 18%) and LYS levels (0,85% and 1,00%) totalizing eight treatments with five replicates of four birds each (Experiment 1). Two hundred fifty six hens were randomly distributed in a 4 x 4 factorial scheme: LYS levels (0,482%, 0,682%, 0,882% and 1,082%) and MET levels (0,225%, 0,318%, 0,411% and 0,505%) totalizing sixteen treatments with four replicates of four birds each (Experiment 2). Several characteristics were evaluated such as performance: intakes of feed, LYS, MET, CP and energy, egg production, egg weight, egg mass, and feed conversion; internal egg quality: weight and percentages of egg albumen and egg yolk, Haugh unit; quality of storaged eggs: Haugh unit, egg weight and albumen height; analyses of concentrations of protein, total solids, viscosity and pH of the egg components. The characteristics intake of CP, egg weight, egg mass, and albumen percent showed positive and linear response. In both experiments, the quality of storaged eggs was better when eggs were storaged in refrigerated environment than natural environment. However, irrespective of the environment, the internal egg quality was impaired as the time of storage was increased. Maximum responses for analyses of protein, total solids, viscosity, and pH of albumen and yolk were obtained when hens were fed diets containing 15,33% of CP. In the Experiment 1, after the experimental period, another assay was carried out to determine the nitrogen balance by using total excreta procedure during a three-day period. It was observed increase of intake and excretion of nitrogen as the content of CP in the diet was increased. In the Experiment 2, feed intake, MET intake, energy intake, egg production, egg weight, and egg mass showed maximum responses when hens were fed diets containing 0,870% of LYS and 0,450% of MET. Egg grading, internal and external egg quality characteristics were not influenced by the different dietary levels of MET and LYS. The functional properties of egg components (cooking quality by making Angel and Sponge cakes) were not affected by the treatments. It was concluded that hens fed diets containing 15,33% of CP, 0,450% of MET, and 0,870% of LYS show optimum performance, internal and external egg quality.

<p>Immunoglobulin Y (IgY) is the major antibody found in eggs from chicken (Gallus domesticus). IgY can be used as an alternative to mammalian antibodies normally used in research, and its use in immunotherapy has recently been proposed. Compared to mammalian antibodies, IgY possesses several biochemical advantages and its simple purification from egg yolk prevents a stressful moment in animal handling, as no bleeding is necessary. </p><p>Small amount of antigen (1 mg) can be used to elicit an immune response in chickens and there are low intra-individual differences regarding antibody concentration found in yolk. By studying two chicken breeds and their cross, a genetic correlation was shown regarding the IgY concentration, which implies a possibility by breeding to increase IgY concentrations. By using IgY instead of goat antibody as capture antibody in ELISA, it is possible reduce interferences by complement activation. After oral administration of IgY to healthy volunteers, IgY activity was present in saliva 8 hours later, indicating a protective effect. This effect has been studied in an open clinical trial with cystic fibrosis patients. Specific IgY against Pseudomonas aeruginosa given orally prolongs the time of intermittent colonization by six months, decrease the number of positive colonizations and might be a useful complement to antibiotic treatment. Immunoglobulin therapy may diminish the development of antibiotic resistant microorganisms. The use of immunoglobulin therapy broadens the arsenal available to combat pathogens in medicine and IgY is a promising candidate, both as an alternative to antibiotics and as a useful tool in research and diagnostics.</p>

Immunoglobulin Y (IgY) is the major antibody found in eggs from chicken (Gallus domesticus). IgY can be used as an alternative to mammalian antibodies normally used in research, and its use in immunotherapy has recently been proposed. Compared to mammalian antibodies, IgY possesses several biochemical advantages and its simple purification from egg yolk prevents a stressful moment in animal handling, as no bleeding is necessary. Small amount of antigen (1 mg) can be used to elicit an immune response in chickens and there are low intra-individual differences regarding antibody concentration found in yolk. By studying two chicken breeds and their cross, a genetic correlation was shown regarding the IgY concentration, which implies a possibility by breeding to increase IgY concentrations. By using IgY instead of goat antibody as capture antibody in ELISA, it is possible reduce interferences by complement activation. After oral administration of IgY to healthy volunteers, IgY activity was present in saliva 8 hours later, indicating a protective effect. This effect has been studied in an open clinical trial with cystic fibrosis patients. Specific IgY against Pseudomonas aeruginosa given orally prolongs the time of intermittent colonization by six months, decrease the number of positive colonizations and might be a useful complement to antibiotic treatment. Immunoglobulin therapy may diminish the development of antibiotic resistant microorganisms. The use of immunoglobulin therapy broadens the arsenal available to combat pathogens in medicine and IgY is a promising candidate, both as an alternative to antibiotics and as a useful tool in research and diagnostics.