A placenta de lhama tem sido descrita como epitélio-corial, mas os estudos existentes não aprofundam nos aspectos microscópicos. Para detalhar as características microestruturais foram feitas observações ao microscópio de luz, eletrônico de varredura e de transmissão. Foram coletados 09 úteros grávidos em associação com as membranas fetais, entre 28 a 36 semanas de gestação. Parte do material foi fixado com solução de paraformaldeído 4% e emblocado em paraplast e historesina. Seções de 5µm foram submetidas a colorações de hematoxilina-eosina, Tricrômico de Masson, reações histoquímicas de PAS, Perl?s e fosfatase ácida, e imunohistoquímica para a detecção de uteroferrina. Fragmentos foram fixados com glutaraldeído 2,5%, para microscopia eletrônica de varredura e transmissão. Os resultados observados permitem classificar a placenta da lhama como corioalantóidea, difusa, pregueada, epitéliocorial e o feto esta recoberto pela membrana epidermal. O trofoblasto apresentou células de morfologia variada, desde cúbicas, arredondas até triangulares, com citoplasma contendo grânulos PAS+. Células binucleadas com citoplasma aumentado e núcleos arredondados, bem como células trofoblásticas gigantes com múltiplos núcleos, também foram observadas. As aréolas estavam preenchidas de material PAS positivo Observaram-se grande quantidade de vasos sangüíneos na interface materno-fetal, entre as células do epitélio uterino e ao arredor das projeções coriônicas, as quais eram ramificadas. O mesênquima com fibras colágenas em grande quantidade auxiliam no suporte das projeções coriônicas. Observou-se positividade as reações histoquímicas de PAS, Perl?s e fosfatase ácida, e imunohistoquímica de uteroferrina na interface materno fetal, mas com maior notoriedade no epitélio e lume das glândulas uterinas. Células trofoblásticas gigantes com 4 ou mais núcleos estavam nas projeções coriônicas, mostrando escassa ou nula reatividade histoquímica ao PAS, indicando funcionalidades diferentes das células trofoblásticas mono ou binucleadas. O alantóide estava conformado por uma camada única de células de diferentes alturas, sendo que na superfície destas observaram-se estruturas circulares e poliédricas. A membrana epidermal possui um epitélio estratificado plano de até sete camadas de células mono, bi ou trinucleadas. A alta vascularização das faces materna e fetal, a qual indica uma ótima troca de sustâncias entre ambas faces, e a alta atividade metabólica demonstrada nas glândulas uterinas revelam uma adaptação da gestação desta espécie habitante das altas altitudes da serra do Peru. / The placenta of the llama has been described like epitheliochorial, but existent researches don\'t study in depth microscopic aspects. In order to detail their ultrastructurals characteristics observations were made by light microscopy and scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (TEM). Samples of nine uteruses between 28 to 36 weeks of pregnancy were collected in association with fetal membranes. A part was fixed with of 4% paraformaldehyde solution and embedded either in paraffin or in glycol methacrylate resin. Sections of 5µm in thickness were stained with haematoxylin and eosin, Masson\'s trichrome staining and PAS (Perl`s and acid fosfatase, and inmunohistochemestry for uteroferrina detection. Another part was fixed with 2,5 % glutaraldehyde and post-fixed in 1% osmium tetroxide and processed for SEM. The trophoblast presented cells of morphology varied, since cubical, rounds off until triangular, with cytoplasm with granules PAS+. Binucleates cells with increased cytoplasm and spherical nucleus, as well as giant trophoblastics cells with multiple nucleus, had been also observed. Aréolas was filled of positive material PAS. Great amount of blood vessels are in the maternofetal interface, between the cells of uterine epithelium and around of the chorionic projections. Collagen fibers are observed in the mesenchymae and inside the chorionic projections. PAS positive reaction was observed in the materno-fetal interface, mane manifest in epithelium and lumen of uterine glands. Giant size trofoblastic cels of 4-7 or more nucleus were found in chorionich proyections, showing scarse or nule histochemistry reactivity, indicating different functionalities of different kind of mono or bi nucleated cells. The allantois is structured by an unique layer of different sizes cells, in their surface are circular and polyhedral structures, representing a morphological consideration from this type of function allantois cells. The epidermal membrane is formed by 7 or more layers of cells with one, two or three nucleus. The superficial layer present more smooth cells. The high vascularization of the maternal and fetal faces indicates an optimal interchange of substances between both. The collagen inside the chorionics projections serves as a support skeleton), and the high metabolic demonstrate activity in uterine glands, develope a pregnacy adaptation of these specie who lives in highs of Perú.

Neste estudo caracterizamos a expressão de Mif nas células trofoblásticas (CT), placentárias e decidua (D) na gestação em camundongos.A imunolocalização foi realizada nos dias de gestação(dg) 7,5, 10,5, 13,5 e 17,5.Com cones ectoplacentários e placentas fetais (PL) realizou-se ensaios de Western blotting e qRT-PCR nos mesmos dg.D foram submetidas a qPCR.Aos 7,5 dg as CT gigantes e D apresentaram imunomarcação.Dos 10,5 ao 17,5 dg o Mif concentrou-se nas CTG e no espongiotrofoblasto.Na D, a imunomarcação foi menor que aos 7,5 dg.A expressão protéica na PL aumentou do 7,5 dg para o 10,5 dg (p=0,005) e para o 13,5 dg (p=0.03).A maior expressão gênica foi em 10,5 dg e diferente em 13,5 dg (p=0,048) e 17,5 dg (p=0,009).Na D, a maior expressão gênica foi em 7,5 dg e diferente dos 10,5 (0,012) e 13,5 (0,032) dg.O aumento da expressão de Mif na PL coincide com a organização em quatro camadas e com o início da circulação fetal.Esta distribuição temporal e tecido-específica sugere o MIF como modulador no início da placentação ou na sua adaptação ao ambiente uterino / The goal of this study was to characterize Mif expression by trophoblast (TC),fetal placenta (FP) and decidua (D) during mouse pregnancy.Mif was immunolocalized at TC and D on gestation days (gd) 7.5, 10.5, 13.5 and 17.5.Ectoplacental cones (EC) and FP were used for Western blotting and qPCR.D were also used for qRT-PCR.On gd 7.5,DC and TC giant (TGC) showed strong reactivity.On gds 10.517.5,were concentrated in TGC and spongiotrophoblast cells. D reactivity was weaker than 7.5 gd.Protein expression at FP increased from gd 7.5 to 10.5 (p=0.005) and to 13.5 (p=0.03).Higher mRNA expression was found on gd 10.5 and was different from gds 13.5 (p=0.048) and 17.5 (p=0.009).At D on gd 7.5 was greater than those on gds 10.5 (0,012) and 13.5 (0,032).The up-regulation of Mif coincides with the stage that placenta assumes its four-layered organization and the fetal blood circulation begins,This temporal tissue-specific distribution and expression data suggests that Mif may play a modulator role in the onset of placentation or in it adaptation to the uterine environment

NKG2D (Natural Killer Group 2, type D) es un receptor de activación de las células Natural Killer de sangre periférica (NK), uterinas (uNK) y TCD8+ humanos. Son ligandos de NKG2D (NKG2DL), las proteínas relacionadas con la cadena alfa del complejo principal de histocompatibilidad de clase I A y B (MICA y MICB) y las proteínas de unión a UL16 (ULBPs). Se han descrito variados mecanismos relacionados con la evasión tumoral y con la tolerancia fetal que involucran el control de la síntesis de los NKG2DL, los cuales se expresan principalmente en la superficie de células diana en situaciones de estrés, infección intracelular o transformación maligna. Hay antecedentes que indican que la sobreexpresión de moléculas chaperonas puede alterar el nivel de expresión en la superficie celular de proteínas de membrana, como también algunas citoquinas pueden reducir la expresión de los NKG2DL. Se postula que Calreticulina (CRT) se asocia con las moléculas MICA en células de trofoblasto y en melanoma maligno y que la expresión de los ligandos MICA está influenciada por la Interleuquina 10 (IL-10) en melanoma maligno. Mediante análisis histológicos y microscopía confocal se determinó la superposición de MICA y MICB con calreticulina, calnexina y Erp57. Además, se detectó co-inmunoprecipitación de CRT y MICA. Ambos estudios realizados en cultivos celulares de trofoblasto humano de primer trimestre y en líneas de melanoma maligno humano. Sin embargo no se detectó interacción directa entre CRT-MICA recombinantes mediante análisis de afinidad por BIAcore. Se analizó la expresión de NKG2DL y la relevancia funcional en líneas celulares humanas de melanoma en respuesta al estímulo con Interleuquina 10. Se utilizaron líneas de células malignas del melanoma tratadas con IL-10 para analizar MICA/B mediante qRT-PCR y citometría de flujo. Se demostró que IL-10 disminuye la expresión en la superficie de células de melanoma de MICA, pero no MICB. También se indicó que la regulación de MICA se produce a nivel de mRNA, de forma dosis dependiente tanto de citoquina humana recombinante como de la variante viral de la IL-10. Este estudio reveló además que la disminución la MICA por IL-10 conduce a la reducción de la lisis mediada por células citotóxicas in vitro. Esta tesis contribuye al conocimiento de las moléculas responsables del plegamiento y retención intracelular de los NKG2DL, así como al papel de la IL-10 en la expresión de NKG2DL, ambos mecanismos propios de la evasión inmune tumoral y de la tolerancia fetal.

Orientador : Aureo Tatsumi Yamada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T21:08:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Roman_SilvaneSouza_M.pdf: 7734833 bytes, checksum: 8cc79cbd14542714863a4b95b7e4fdf5 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: As células Natural Killer participam da resposta imune inata por meio da sua ação citolítica sobre células alvos que expressam antígenos de superfície não reconhecidos como próprios ou anormais. A capacidade citolítica é atribuída à liberação do seu conteúdo granular, que contém, além de perforina, granzimas e outras enzimas hidrolíticas. Durante a gestação são encontradas elevadas incidências de células NK no útero (NKu), que apresentam comportamento peculiar e distinto das células NK do sangue circulante (NKc). Se por um lado tem sido comprovado que, a célula NK atua na manutenção da homeostasia e equilíbrio do ambiente uterino durante a gestação, por outro lado, não há dados que demonstrem a atividade citolítica ou citotóxica das NKu na gestação normal, ou, se esta pode ocorrer em situação de anormalidade. O presente trabalho teve o intuito de estabelecer um modelo experimental que induz uma anormalidade na gestação para avaliar o comportamento das células NKu nestas condições. Para tanto foram realizadas lesões dos sítios de desenvolvimento embrionário ou fetal por meio de perfuração dos sítios com agulha hipodérmica em animais nos 6°, 8°, 10°, 12°, 15° e 17° dias de gestação. Amostras de sítios lesados e não lesados foram coletadas nos intervalos de 6 e 24 horas pós-lesão para análises macroscópicas e microscópicas. Nas análises microscópicas, os materiais foram processados pelas técnicas histológicas rotineiras de parafina e submetidos às reações histoquímicas de PAS e lectina DSA (Dolichos bifloros), assim como pelo TUNEL. Pelas análises macroscópicas, foram verificadas ocorrências de hemorragias de diferentes intensidades classificadas como sendo de tipos: lateral (H L), mesometrial (HM), generalizada (HG) e atrófica (HA), de incidências tanto nos sítios submetidos à lesão primária quanto nos adjacentes não manipulados. Nas análises microscópicas dos cortes submetidos às reações histoquímicas, foram encontradas células NKu com alterações morfológicas nos sítios com HM, HG e HA, porém, não naqueles encontrados nos sítios HL e normais. As alterações das NKu foram classificadas em categorias de I a VI, baseando-se no padrão de reatividade pela lectina DSA encontrada na superfície celular e/ou no conteúdo granular. Dentre as alterações das NKu, chamou maior atenção aquela com ausência de marcação no conteúdo granular. As incidências de células NKu com estas alterações variaram tanto ao longo da gestação, quanto nas áreas em que se encontravam nos sítios hemorrágicos. Ressalta-se a coincidência dos períodos em que foram encontradas maiores incidências de hemorragias nas regiões (HM, HG e HA), com os períodos de maior incidência de células NKu apresentando alterações. Não foi encontrado aumento significativo na incidência de células NKu com núcleo apoptótico, porém as células trofoblásticas mostraram marcações positivas em maior proporção no período de 24 horas pós-lesão. Os resultados obtidos, demonstram que a lesão embrionária ou fetal provoca desequilíbrio acentuado no ambiente uterino, acarretando em hemorragias de diferentes intensidades, onde foram encontradas células NKu de morfologias alteradas. As alterações encontradas nas células NKu sugerem a ocorrência da liberação do seu conteúdo lítico. O fenômeno da degranulação ocorre em células NKu diferenciadas sem acarretar na auto-degeneração, podendo o seu conteúdo granular ser restaurado. O provável efeito da liberação do conteúdo lítico pelas células NKu pode estar relacionado com o aumento de células trofoblásticas com núcleo apoptótico no período de 24 horas pós-lesão, conforme determinado pelo teste de TUNEL. O fato de terem sido encontradas as mesmas alterações também nos sítios não submetidos à lesão, faz pressupor um efeito sistêmico decorrente da lesão. Além disso, a coincidência do período em que se verificam as hemorragias mais acentuadas nos sítios de maior incidência das NKu com alterações, configura uma relação direta entre os dois fenômenos decorrente da gestação anômala / Abstract: The Natural Killer cell shares in the innate immunity by targeting its cytolytic activity against cells expressing non-self or abnormal MHC class I antigens. The cytolytic capability is related to perforin, granzymes and hydrolytic enzymes contents of the granules that once released induces apoptosis of target cells. However, the NK cell found in the pregnant uterus (uNK) shows peculiar and distinct behavior if compared with those collected from circulating blood (NKc). One of intriguing question in the immunology of reproduction is the presence of such a killer cell which does not trigger the Iytic activity neither in vitro nor in the pregnant uterus. The present work aimed to establish an experimental model of abnormal pregnancy in the mouse to evaluate the uNK cell behavior. In order to, it was performed mechanical lesion of embryo or fetus from 6° to 17° days of pregnancy (dp). Samples of damaged and undamaged uterine sites were collected at 6 and 24h after and evaluated by naked eye. The desired uterine samples were processed for conventional paraffin embedding, sectioning and staining with PAS or D8A (Dolichos biflorus) lectin cytochemistry, as so as, for TUNEL method. 80th damaged and undamaged uterine sites showed hemorrhages that were classified as lateral (LH), mesometrial (MH), general (GH) and atrophic (AH) according to intensity and localization. The uNK cells found in uterine sites with the MH, GH and AH showed changes of morphology and D8A lectin reaction pattems which were classified in the range from I to VI. Among the changes, those uNK showing lost of D8A reactivity in the granules contents (class I) attract special attention. The distribution of such an altered uNK cells varied both along the gestation period and localization in the uterine sites with hemorrhage. The higher incidence of uNK presenting alterations coincides with those periods of higher incidences of hemorrhages in the mesometrial region. No significant increase of apoptotic uNK amount was detected in the damaged samples but the increased amount of trophoblast cells with labeled nuclei with TUNEL method was seen 24hs after lesion. Therefore, the embryo or fetus lesion induces the environment unbalance of respective and adjoining uterine sites eliciting the hemorrhage of different intensities, where were found morphologically abnormal uNK cells. The morphological changes found in the uNK cells suggest the occurrence of granules contents releasing by fully differentiated cells without self-degeneration and the granules contents being probably restored in. The increasing of trophoblast apoptosis found at 24h after lesion could be the effect of cytolytic activity of uNK cell. Since the same profiles of alterations were found in the undamaged uterine sites, the effect of lesion seems to affect systemically the uterus. Furthermore, the coincidences between the periods of higher hemorrhage and higher incidences of mature uNK cell, suggest a direct relation between them in the abnormal pregnancy / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular

A placenta de lhama tem sido descrita como epitélio-corial, mas os estudos existentes não aprofundam nos aspectos microscópicos. Para detalhar as características microestruturais foram feitas observações ao microscópio de luz, eletrônico de varredura e de transmissão. Foram coletados 09 úteros grávidos em associação com as membranas fetais, entre 28 a 36 semanas de gestação. Parte do material foi fixado com solução de paraformaldeído 4% e emblocado em paraplast e historesina. Seções de 5µm foram submetidas a colorações de hematoxilina-eosina, Tricrômico de Masson, reações histoquímicas de PAS, Perl?s e fosfatase ácida, e imunohistoquímica para a detecção de uteroferrina. Fragmentos foram fixados com glutaraldeído 2,5%, para microscopia eletrônica de varredura e transmissão. Os resultados observados permitem classificar a placenta da lhama como corioalantóidea, difusa, pregueada, epitéliocorial e o feto esta recoberto pela membrana epidermal. O trofoblasto apresentou células de morfologia variada, desde cúbicas, arredondas até triangulares, com citoplasma contendo grânulos PAS+. Células binucleadas com citoplasma aumentado e núcleos arredondados, bem como células trofoblásticas gigantes com múltiplos núcleos, também foram observadas. As aréolas estavam preenchidas de material PAS positivo Observaram-se grande quantidade de vasos sangüíneos na interface materno-fetal, entre as células do epitélio uterino e ao arredor das projeções coriônicas, as quais eram ramificadas. O mesênquima com fibras colágenas em grande quantidade auxiliam no suporte das projeções coriônicas. Observou-se positividade as reações histoquímicas de PAS, Perl?s e fosfatase ácida, e imunohistoquímica de uteroferrina na interface materno fetal, mas com maior notoriedade no epitélio e lume das glândulas uterinas. Células trofoblásticas gigantes com 4 ou mais núcleos estavam nas projeções coriônicas, mostrando escassa ou nula reatividade histoquímica ao PAS, indicando funcionalidades diferentes das células trofoblásticas mono ou binucleadas. O alantóide estava conformado por uma camada única de células de diferentes alturas, sendo que na superfície destas observaram-se estruturas circulares e poliédricas. A membrana epidermal possui um epitélio estratificado plano de até sete camadas de células mono, bi ou trinucleadas. A alta vascularização das faces materna e fetal, a qual indica uma ótima troca de sustâncias entre ambas faces, e a alta atividade metabólica demonstrada nas glândulas uterinas revelam uma adaptação da gestação desta espécie habitante das altas altitudes da serra do Peru. / The placenta of the llama has been described like epitheliochorial, but existent researches don\'t study in depth microscopic aspects. In order to detail their ultrastructurals characteristics observations were made by light microscopy and scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (TEM). Samples of nine uteruses between 28 to 36 weeks of pregnancy were collected in association with fetal membranes. A part was fixed with of 4% paraformaldehyde solution and embedded either in paraffin or in glycol methacrylate resin. Sections of 5µm in thickness were stained with haematoxylin and eosin, Masson\'s trichrome staining and PAS (Perl`s and acid fosfatase, and inmunohistochemestry for uteroferrina detection. Another part was fixed with 2,5 % glutaraldehyde and post-fixed in 1% osmium tetroxide and processed for SEM. The trophoblast presented cells of morphology varied, since cubical, rounds off until triangular, with cytoplasm with granules PAS+. Binucleates cells with increased cytoplasm and spherical nucleus, as well as giant trophoblastics cells with multiple nucleus, had been also observed. Aréolas was filled of positive material PAS. Great amount of blood vessels are in the maternofetal interface, between the cells of uterine epithelium and around of the chorionic projections. Collagen fibers are observed in the mesenchymae and inside the chorionic projections. PAS positive reaction was observed in the materno-fetal interface, mane manifest in epithelium and lumen of uterine glands. Giant size trofoblastic cels of 4-7 or more nucleus were found in chorionich proyections, showing scarse or nule histochemistry reactivity, indicating different functionalities of different kind of mono or bi nucleated cells. The allantois is structured by an unique layer of different sizes cells, in their surface are circular and polyhedral structures, representing a morphological consideration from this type of function allantois cells. The epidermal membrane is formed by 7 or more layers of cells with one, two or three nucleus. The superficial layer present more smooth cells. The high vascularization of the maternal and fetal faces indicates an optimal interchange of substances between both. The collagen inside the chorionics projections serves as a support skeleton), and the high metabolic demonstrate activity in uterine glands, develope a pregnacy adaptation of these specie who lives in highs of Perú.

Neste estudo caracterizamos a expressão de Mif nas células trofoblásticas (CT), placentárias e decidua (D) na gestação em camundongos.A imunolocalização foi realizada nos dias de gestação(dg) 7,5, 10,5, 13,5 e 17,5.Com cones ectoplacentários e placentas fetais (PL) realizou-se ensaios de Western blotting e qRT-PCR nos mesmos dg.D foram submetidas a qPCR.Aos 7,5 dg as CT gigantes e D apresentaram imunomarcação.Dos 10,5 ao 17,5 dg o Mif concentrou-se nas CTG e no espongiotrofoblasto.Na D, a imunomarcação foi menor que aos 7,5 dg.A expressão protéica na PL aumentou do 7,5 dg para o 10,5 dg (p=0,005) e para o 13,5 dg (p=0.03).A maior expressão gênica foi em 10,5 dg e diferente em 13,5 dg (p=0,048) e 17,5 dg (p=0,009).Na D, a maior expressão gênica foi em 7,5 dg e diferente dos 10,5 (0,012) e 13,5 (0,032) dg.O aumento da expressão de Mif na PL coincide com a organização em quatro camadas e com o início da circulação fetal.Esta distribuição temporal e tecido-específica sugere o MIF como modulador no início da placentação ou na sua adaptação ao ambiente uterino / The goal of this study was to characterize Mif expression by trophoblast (TC),fetal placenta (FP) and decidua (D) during mouse pregnancy.Mif was immunolocalized at TC and D on gestation days (gd) 7.5, 10.5, 13.5 and 17.5.Ectoplacental cones (EC) and FP were used for Western blotting and qPCR.D were also used for qRT-PCR.On gd 7.5,DC and TC giant (TGC) showed strong reactivity.On gds 10.517.5,were concentrated in TGC and spongiotrophoblast cells. D reactivity was weaker than 7.5 gd.Protein expression at FP increased from gd 7.5 to 10.5 (p=0.005) and to 13.5 (p=0.03).Higher mRNA expression was found on gd 10.5 and was different from gds 13.5 (p=0.048) and 17.5 (p=0.009).At D on gd 7.5 was greater than those on gds 10.5 (0,012) and 13.5 (0,032).The up-regulation of Mif coincides with the stage that placenta assumes its four-layered organization and the fetal blood circulation begins,This temporal tissue-specific distribution and expression data suggests that Mif may play a modulator role in the onset of placentation or in it adaptation to the uterine environment

O biglicam é um proteoglicano é altamente expresso em células trofoblásticas de patologias placentárias com invasividade exacerbada. No entanto, as funções do biglicam no trofoblasto ainda não foram elucidadas. Sendo assim, verificamos a expressão e as funções de biglicam e seus receptores Toll-like (TLR)-2 e TLR-4 nas células trofoblásticas durante a gestação. As células do citotrofoblasto extraviloso (CTEV) foram positivas para todas as moléculas, menos para o biglicam em placentas a termo. Adição exógena de biglicam promoveu migração e invasão das células trofoblásticas. O biglicam estimulou a fosforilação de AKT nos sítios Thr308 e Ser473 nas células trofoblásticas. A migração e a invasão biglicam-dependentes e as fosforilações de AKT foram inibidas após a adição de anticorpos bloqueadores anti-TLR-2 e anti-TLR-4. O silenciamento gênico de AKT1 em células SGHPL-5 aboliu os efeitos do biglicam na motilidade. Em conclusão, o biglicam aumenta a motilidade de células trofoblásticas após sinalização por AKT através da ativação de TLR-2 e TLR-4. / Biglycan is a highly expressed proteoglycan in trophoblast cells from invasiveness-changed placental pathologies. However, biglycan functions in the trophoblast were not yet identified. Therefore, it was verified the expression and functions of biglycan and its receptors Toll-like (TLR)-2 and TLR-4 in trophoblast cells throughout pregnancy. The extravillous cytotrophoblast cells (EVT) were positive to all the molecules, although biglycan was negative in term placentas. Exogenous biglycan promoted migration and invasion of trophoblast cells. Biglycan stimulated AKT phosphorilation at Thr308 and Ser473 sites in trophoblast cells. The biglycan-dependent migration, invasion and AKT phosphorilation were inhibited upon addiction of anti-TLR-2 and anti-TLR-4 blocking antibodies. AKT1 genic silencing in SGHPL-5 cells abolished the motility effects. In conclusion, biglycan increases the motility of trophoblast cells after AKT signaliing throughout TLR-2 and TLR-4 activation.

Este estudo determinou a expressão gênica e a localização tecidual de receptores do fator de inibição da migração de macrófagos (MIF) na interface materno-placentária em camundongos aos 7,5, 10,5, 13,5 e 17,5 dias de gestação (ddg). Observou-se expressão gênica dos receptores na decídua durante todo o período estudado. CD74 e CD44 foi imunolocalizado em células deciduais, endoteliais e leucócitos, sugerindo que estas populações são presuntivos alvos do diálogo parácrino trofoblasto-decídua. No compartimento fetal, a expressão de CD74 ocorreu aos 7.5 e 17,5 ddg e de CD44, durante a gestação. RNAm dos receptores, mas não imunolocalização destes foi observada no trofoblasto aos 7,5 ddg, sugerindo mecanismos reguladores pós-transcricionais. Como a sinalização mediada por MIF requer CD74 para ativação de CD44, a baixa expressão de CD74 aos 10,5 e 13,5 ddg sugere sinalização limitada. Os resultados sugerem que a placenta fetal tem populações específicas expressando CD44-CD74 no final da gestação, o que pode ser determinante para a ativação celular mediada pelo MIF. / The study determined the gene expression and tissue localization of the macrophage migration inhibitory factor (MIF) receptors (CD74-CD44) at the maternal placental interface in mice, on gestation days (gd) 7.5, 10.5, 13.5 and 17.5. We observed the gene expression of the receptors to the decidua in all gestation days. CD74-CD44 were immunolocalized in decidual and endothelial cells and, leukocytes, suggesting these cells are presumptive targets for trophoblast-decidual paracrine dialogue. In the fetal compartment, expression of CD74 occurred on gd7.5 and 17.5 and of CD44 during all pregnancy. mRNA for both receptors, but not immunolocalization was detected on the gd7.5-trophoblast, suggesting post-transcriptional regulatory mechanism. As MIF-mediated signaling requires CD74 for activation of CD44, low expression of CD74 on gd10.5 and 13.5 suggests restriction of MIF effect. The results suggest fetal placenta has specific populations expressing CD74-CD44 in the final pregnancy, which can be a determining factor in mechanisms of cellular activation mediated by MIF.

CRIPTO 1 (CR1) é membro da família de fatores de crescimento epidermal-CRIPTO-1/FRL-1/Cryptic com funções específicas na embriogênese e tumores. Este estudo verificou a presença de CR1 em placentas saudáveis e com distúrbios de invasividade. Nossos resultados mostraram a expressão de CR3 e CR1 em placentas de primeiro e terceiro trimestre de gestação, respectivamente. Placentas acretas e coriocarcinomas também foram imunorreativos para CR1, principalmente em células citotrofoblásticas invasivas e malignas, respectivamente. A expressão de CR1 em células citotrofoblásticas extravilosas de primeiro trimestre prevaleceu em células em diferenciação e em células invasivas, sugerindo sua participação nesses processos. CR1 recombinante aumentou significativamente a invasão e migração em células HTR8/SV-neo, o que foi abolido na presença de RNA de interferência. Esses achados corroboram a ação dessa proteína sobre as células trofoblásticas. / CRYPTO 1 (CR1) is member of the family of epidermal growth factor-CRYPTO-1 / FRL-1 / Cryptic with specific roles in embryogenesis and tumors. This study investigated the presence of CR1 in healthy placentas and in placentas with invasive disorders. Our results showed the expression of CR3 and CR1 in the first and third trimester placentas, respectively. Placental choriocarcinoma and accreta placentas were also immunoreactive for CR1, especially in malignant and invasive cytotrophoblast cells, respectively. CR1 expression in first trimester extravillous cytotrophoblast cells prevailed in differentiating and invasive cells, suggesting a role in these processes. Recombinant CR1 significantly increased invasion and migration HTR8 / SV-Neo cells, which was abolished in the presence of interference RNA. These findings corroborate the action of this protein on the trophoblast cells.

Os bovinos são considerados a maior fonte de proteína animal para o homem, razão pela qual se fazem imprescindíveis pesquisas em diversas áreas de produção desses animais com o intuito de minimizar problemas que possam interferir no desenvolvimento e produtividade dos rebanhos. Nesse cenário, o estudo da placenta e placentação tem por objetivo conhecer o desenvolvimento embrionário e suas interações fisiológicas entre o feto e o organismo materno, caracterizado pela íntima união entre eles. O estudo da placenta e placentação tem por objetivo conhecer o desenvolvimento embrionário e suas interações fisiológicas entre o feto e o organismo materno, caracterizado pela íntima união entre eles. Além disso, a falta de marcadores específicos para células placentárias bovinas e as alterações que essas células sofrem durante o progresso da gestação são as principais barreiras para a determinação do perfil morfológico celular presente na interface materno-fetal, razão pela qual seu monitoramento torna-se importante. Buscando melhor compreender essas mudanças, o presente trabalho estudou a dinâmica populacional de células de placenta bovina a fresco e em cultivo. Foram utilizadas 30 amostras de placentônios, divididos em três grupos, de acordo com o desenvolvimento da gestação, quais sejam: primeiro, segundo e terceiro trimestres (n:10 para cada terço). Células oriundas de placentônios foram examinadas a fresco e pós-cultivo durante dez dias, pela microscopia óptica, microscopia eletrônica de transmissão e citometria de fluxo. Os resultados deste trabalho demonstraram a presença de tipos morfológicos celulares distintos na dependência do progresso da gestação: células gigantes trofoblásticas binucleadas, células gigantes trofoblásticas trinucleadas, células gigantes trofoblásticas mononucleadas, células mononucleadas maiores, células mononucleadas menores e células que apresentam citoplasma amplo, contendo inúmeras vesículas em seu interior. Com a utilização da citometria de fluxo, foi possível identificar nas amostras a fresco três populações distintas em tamanho (FSC) e complexidade (SSC) no primeiro terço, cinco populações no segundo terço e duas populações no terceiro terço gestacional. As células placentárias bovinas apresentaram freqüências variáveis de acordo com o trimestre gestacional e seu tempo de cultivo. / There is a great diversity of cell types in the bovine placenta like mononucleate trophoblast giant cells, binucleate trophoblast giant cells, specialized leucocytes (uterine natural killer, uterine macrophages, etc.) and part of their characterization and function remains unknown or controversial. Besides that, some of these cells change as pregnancy progresses; thus their monitoring is very important. The lack of specific markers to bovine placental cells is a main barrier for the development of an efficient cell tracing. Alternative techniques are being used to study these cells, as well as morphologic observation by optical and electron microscopy methods. The study was carried out to establish a populational kinetics of fresh and cultured bovine placental cells by optical microscopy, by electron microscopy and flow cytometry. Bovine placentomas were sampled at the slaughterhouse from cows with different trimesters of pregnancy (n:10 each). Fragments from the cotiledonary/caruncular interface were collected and cells were mechanically dissociated and their viability was estimated by Trypan Blue exclusion. After that they were incubated (2,5x107 cells per 2 mL) in Dulbecco´s Modified Eagle Medium with 10% FBS. First of all, fresh bovine placental cells analyzed by flow cytometry in order to identity the profiles of populational cells. At the same time, smear of fresh cells was made, fixed by methanol, stained with Giemsa for optical microscopy morphologic analisys and differential counting. After this, cells were analised by flow cytometry and optical microscopy .This process was repeated on the first, fifth and tenth days of the culture. We found seven types of cell: mononucleate trophoblast giant cells, binucleate trophoblast giant cells, trinucleate trophoblast giant cells, large mononucleate cells and small mononucleate cells. The placental cells displayed different frequencies according to the gestation period and culture time length.