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Introdução: A osteonecrose da arcada ósseo-dentária associada à bisfosfonatos tem se tornado um importante efeito adverso associado ao complexo maxilo-mandibular. Os reais eventos que permeiam o desenvolvimento dessa condição permanecem indeterminados. Objetivo: O presente estudo propõe-se a analisar os efeitos do uso dessa medicação no tecido ósseo alveolar, bem como o desenvolvimento de um modelo de estudo reprodutível utilizando o Ácido Zoledrônico como medicação indutora diante da ausência de doença metabólica. Metodologia: A amostra foi composta por 42 ratos wistar, com 60 dias e peso médio de 250g. Os animais foram divididos em seis grupos (GI, GII, GIII, GIV, GV, GVI), diferindo quanto à administração da medicação; extensão da terapia; realização de extração dentária do primeiro molar superior esquerdo e defeito com broca na coroa dentária do primeiro molar inferior esquerdo. Os animais dos grupos GII e GIV receberam dose de 0,2mg/kg de Ácido Zoledrônico, semanalmente, por via intraperitonial, por três semanas. O grupo GVI recebeu prolongamento da duração da terapia totalizando oito semanas. Os animais pertencentes aos grupos GI; GIII e GV receberam doses equivalentes de soro fisiológico. Os grupos GIII, GIV, GV, GVI foram submetidos a procedimentos para extração dentária no primeiro molar superior esquerdo e defeito com broca na coroa dentária do primeiro molar inferior esquerdo, na terceira semana após o inicio do experimento. Ao término de oito semanas todos os animais foram mortos através de câmara de CO² e realizou-se a necropsia e remoção das mandíbulas e maxilas para análise. Os dados foram avaliados por tomografia computadorizada de feixe cônico quanto aos níveis de cinza da imagem e por análise histológica, por meio da atribuição de escores quanto à presença de infiltrado inflamatório, tipo de infiltrado, vascularização, necrose óssea e reabsorção dentinária. Resultados: A comparação entre os grupos GI e GII quanto às avaliações dos níveis de cinza e densidade óssea, não foram estatisticamente significantes (p>0,05). Houve diferença significante quanto aos níveis de cinza na comparação entre os grupos GV e GVI em maxila e entre GIII e GIV em mandíbula (p<0,05). A avaliação histológica mostrou presença de necrose óssea no grupo GVI e menor presença de remodelamento ósseo nos grupos teste (GIV e GVI) comparado aos controles (GIII e GV). A avaliação por escores não demonstrou associação entre nenhuma das varáveis com os grupos (p>0,05). Conclusão: O Ácido Zoledrônico, isoladamente, retardou o reparo ósseo alveolar após extração dentária, no grupo que realizou terapia continuada por oito semanas (GVI) em comparação ao grupo controle (GV), com diminuição dos níveis de cinza. Além disso, a medicação foi capaz de diminuir a capacidade reacional dos tecidos de suporte dentário, apresentando níveis de cinza mais elevados no grupo teste (GIV) quando comparado ao grupo controle (GIII). Alterações histológicas do padrão de normalidade foram observadas nos ossos maxilares dos grupos teste (GIV e GVI). Portanto, este modelo experimental foi capaz de desenvolver alterações no tecido ósseo alveolar de ratos por meio de terapia por Ácido Zoledrônico. / Introduction: Osteonecrosis of the Jaw associated with bisphosphonates has become an important adverse effect associated with the maxillo-mandibular complex. The actual events that underlie the development of this condition remain undetermined. Objective: This study aims to analyze the effects of this medication in the alveolar bone, and the development of a reproducible model study using the Zoledronic acid only absence of metabolic disease. Methods: The sample consisted of 42 Wistar rats, 60 days and an average weight of 250g. The animals were divided into six groups (GI, GII, GIII, GIV, GV, GVI), differing in medication administration; extension of therapy; performing dental extraction of the maxillary left first molar and defect to drill in the first lower left molar in the dental crown. The animals of GII and GIV received a dose of 0.2 mg / kg of Zoledronic Acid, weekly, intraperitoneally, for three weeks. The group received GVI prolonged duration of therapy totaling eight weeks. The animals in groups GI, GII and GV received equivalent doses of saline. The GIII, GIV, GV, GVI underwent procedures for tooth extraction in left upper first molar and drill defect in the crown of the first molar tooth left in the third week after the start of the experiment. At the end of eight weeks all animals were killed by CO ² chamber, performed necropsy and removal of mandibles and jaws for analysis. Data were evaluated by cone beam computed tomography as the gray level image and histological analysis, by assigning scores for the presence of inflammatory infiltrate, type of infiltration, vascularization, bone necrosis and resorption dentine. Results: The comparison between GI and GII as the evaluations of gray levels and bone density were not statistically significant (p>0,05). There was significant difference in the levels of gray in the comparison between groups GV and GVI in maxilla and in GIII and GIV (p <0,05) in mandible. Histological evaluation showed the presence of bone necrosis in group GVI and lower presence of bone remodeling in the test groups (GIV and GVI) compared to controls (GIII and GV). The evaluation scores showed no association between any of the variables with the groups (p> 0,05). Conclusion: Zoledronic acid alone, delayed alveolar bone healing after tooth extraction in the group that underwent therapy continued for eight weeks (GVI) compared to the control group (GV), with decreased levels of gray. In addition, the drug was able to reduce the tissues of tooth support capacity reaction, with gray levels higher in the test group (GIV) when compared to the control group (GIII). Histological changes in the normal pattern were observed in the jaws of the test groups (GIV and GVI). Therefore, this experimental model was able to develop alterations in alveolar bone of rats by means of zoledronic acid therapy.

Introdução: A osteonecrose da arcada ósseo-dentária associada à bisfosfonatos tem se tornado um importante efeito adverso associado ao complexo maxilo-mandibular. Os reais eventos que permeiam o desenvolvimento dessa condição permanecem indeterminados. Objetivo: O presente estudo propõe-se a analisar os efeitos do uso dessa medicação no tecido ósseo alveolar, bem como o desenvolvimento de um modelo de estudo reprodutível utilizando o Ácido Zoledrônico como medicação indutora diante da ausência de doença metabólica. Metodologia: A amostra foi composta por 42 ratos wistar, com 60 dias e peso médio de 250g. Os animais foram divididos em seis grupos (GI, GII, GIII, GIV, GV, GVI), diferindo quanto à administração da medicação; extensão da terapia; realização de extração dentária do primeiro molar superior esquerdo e defeito com broca na coroa dentária do primeiro molar inferior esquerdo. Os animais dos grupos GII e GIV receberam dose de 0,2mg/kg de Ácido Zoledrônico, semanalmente, por via intraperitonial, por três semanas. O grupo GVI recebeu prolongamento da duração da terapia totalizando oito semanas. Os animais pertencentes aos grupos GI; GIII e GV receberam doses equivalentes de soro fisiológico. Os grupos GIII, GIV, GV, GVI foram submetidos a procedimentos para extração dentária no primeiro molar superior esquerdo e defeito com broca na coroa dentária do primeiro molar inferior esquerdo, na terceira semana após o inicio do experimento. Ao término de oito semanas todos os animais foram mortos através de câmara de CO² e realizou-se a necropsia e remoção das mandíbulas e maxilas para análise. Os dados foram avaliados por tomografia computadorizada de feixe cônico quanto aos níveis de cinza da imagem e por análise histológica, por meio da atribuição de escores quanto à presença de infiltrado inflamatório, tipo de infiltrado, vascularização, necrose óssea e reabsorção dentinária. Resultados: A comparação entre os grupos GI e GII quanto às avaliações dos níveis de cinza e densidade óssea, não foram estatisticamente significantes (p>0,05). Houve diferença significante quanto aos níveis de cinza na comparação entre os grupos GV e GVI em maxila e entre GIII e GIV em mandíbula (p<0,05). A avaliação histológica mostrou presença de necrose óssea no grupo GVI e menor presença de remodelamento ósseo nos grupos teste (GIV e GVI) comparado aos controles (GIII e GV). A avaliação por escores não demonstrou associação entre nenhuma das varáveis com os grupos (p>0,05). Conclusão: O Ácido Zoledrônico, isoladamente, retardou o reparo ósseo alveolar após extração dentária, no grupo que realizou terapia continuada por oito semanas (GVI) em comparação ao grupo controle (GV), com diminuição dos níveis de cinza. Além disso, a medicação foi capaz de diminuir a capacidade reacional dos tecidos de suporte dentário, apresentando níveis de cinza mais elevados no grupo teste (GIV) quando comparado ao grupo controle (GIII). Alterações histológicas do padrão de normalidade foram observadas nos ossos maxilares dos grupos teste (GIV e GVI). Portanto, este modelo experimental foi capaz de desenvolver alterações no tecido ósseo alveolar de ratos por meio de terapia por Ácido Zoledrônico. / Introduction: Osteonecrosis of the Jaw associated with bisphosphonates has become an important adverse effect associated with the maxillo-mandibular complex. The actual events that underlie the development of this condition remain undetermined. Objective: This study aims to analyze the effects of this medication in the alveolar bone, and the development of a reproducible model study using the Zoledronic acid only absence of metabolic disease. Methods: The sample consisted of 42 Wistar rats, 60 days and an average weight of 250g. The animals were divided into six groups (GI, GII, GIII, GIV, GV, GVI), differing in medication administration; extension of therapy; performing dental extraction of the maxillary left first molar and defect to drill in the first lower left molar in the dental crown. The animals of GII and GIV received a dose of 0.2 mg / kg of Zoledronic Acid, weekly, intraperitoneally, for three weeks. The group received GVI prolonged duration of therapy totaling eight weeks. The animals in groups GI, GII and GV received equivalent doses of saline. The GIII, GIV, GV, GVI underwent procedures for tooth extraction in left upper first molar and drill defect in the crown of the first molar tooth left in the third week after the start of the experiment. At the end of eight weeks all animals were killed by CO ² chamber, performed necropsy and removal of mandibles and jaws for analysis. Data were evaluated by cone beam computed tomography as the gray level image and histological analysis, by assigning scores for the presence of inflammatory infiltrate, type of infiltration, vascularization, bone necrosis and resorption dentine. Results: The comparison between GI and GII as the evaluations of gray levels and bone density were not statistically significant (p>0,05). There was significant difference in the levels of gray in the comparison between groups GV and GVI in maxilla and in GIII and GIV (p <0,05) in mandible. Histological evaluation showed the presence of bone necrosis in group GVI and lower presence of bone remodeling in the test groups (GIV and GVI) compared to controls (GIII and GV). The evaluation scores showed no association between any of the variables with the groups (p> 0,05). Conclusion: Zoledronic acid alone, delayed alveolar bone healing after tooth extraction in the group that underwent therapy continued for eight weeks (GVI) compared to the control group (GV), with decreased levels of gray. In addition, the drug was able to reduce the tissues of tooth support capacity reaction, with gray levels higher in the test group (GIV) when compared to the control group (GIII). Histological changes in the normal pattern were observed in the jaws of the test groups (GIV and GVI). Therefore, this experimental model was able to develop alterations in alveolar bone of rats by means of zoledronic acid therapy.

Introdução: A osteonecrose da arcada ósseo-dentária associada à bisfosfonatos tem se tornado um importante efeito adverso associado ao complexo maxilo-mandibular. Os reais eventos que permeiam o desenvolvimento dessa condição permanecem indeterminados. Objetivo: O presente estudo propõe-se a analisar os efeitos do uso dessa medicação no tecido ósseo alveolar, bem como o desenvolvimento de um modelo de estudo reprodutível utilizando o Ácido Zoledrônico como medicação indutora diante da ausência de doença metabólica. Metodologia: A amostra foi composta por 42 ratos wistar, com 60 dias e peso médio de 250g. Os animais foram divididos em seis grupos (GI, GII, GIII, GIV, GV, GVI), diferindo quanto à administração da medicação; extensão da terapia; realização de extração dentária do primeiro molar superior esquerdo e defeito com broca na coroa dentária do primeiro molar inferior esquerdo. Os animais dos grupos GII e GIV receberam dose de 0,2mg/kg de Ácido Zoledrônico, semanalmente, por via intraperitonial, por três semanas. O grupo GVI recebeu prolongamento da duração da terapia totalizando oito semanas. Os animais pertencentes aos grupos GI; GIII e GV receberam doses equivalentes de soro fisiológico. Os grupos GIII, GIV, GV, GVI foram submetidos a procedimentos para extração dentária no primeiro molar superior esquerdo e defeito com broca na coroa dentária do primeiro molar inferior esquerdo, na terceira semana após o inicio do experimento. Ao término de oito semanas todos os animais foram mortos através de câmara de CO² e realizou-se a necropsia e remoção das mandíbulas e maxilas para análise. Os dados foram avaliados por tomografia computadorizada de feixe cônico quanto aos níveis de cinza da imagem e por análise histológica, por meio da atribuição de escores quanto à presença de infiltrado inflamatório, tipo de infiltrado, vascularização, necrose óssea e reabsorção dentinária. Resultados: A comparação entre os grupos GI e GII quanto às avaliações dos níveis de cinza e densidade óssea, não foram estatisticamente significantes (p>0,05). Houve diferença significante quanto aos níveis de cinza na comparação entre os grupos GV e GVI em maxila e entre GIII e GIV em mandíbula (p<0,05). A avaliação histológica mostrou presença de necrose óssea no grupo GVI e menor presença de remodelamento ósseo nos grupos teste (GIV e GVI) comparado aos controles (GIII e GV). A avaliação por escores não demonstrou associação entre nenhuma das varáveis com os grupos (p>0,05). Conclusão: O Ácido Zoledrônico, isoladamente, retardou o reparo ósseo alveolar após extração dentária, no grupo que realizou terapia continuada por oito semanas (GVI) em comparação ao grupo controle (GV), com diminuição dos níveis de cinza. Além disso, a medicação foi capaz de diminuir a capacidade reacional dos tecidos de suporte dentário, apresentando níveis de cinza mais elevados no grupo teste (GIV) quando comparado ao grupo controle (GIII). Alterações histológicas do padrão de normalidade foram observadas nos ossos maxilares dos grupos teste (GIV e GVI). Portanto, este modelo experimental foi capaz de desenvolver alterações no tecido ósseo alveolar de ratos por meio de terapia por Ácido Zoledrônico. / Introduction: Osteonecrosis of the Jaw associated with bisphosphonates has become an important adverse effect associated with the maxillo-mandibular complex. The actual events that underlie the development of this condition remain undetermined. Objective: This study aims to analyze the effects of this medication in the alveolar bone, and the development of a reproducible model study using the Zoledronic acid only absence of metabolic disease. Methods: The sample consisted of 42 Wistar rats, 60 days and an average weight of 250g. The animals were divided into six groups (GI, GII, GIII, GIV, GV, GVI), differing in medication administration; extension of therapy; performing dental extraction of the maxillary left first molar and defect to drill in the first lower left molar in the dental crown. The animals of GII and GIV received a dose of 0.2 mg / kg of Zoledronic Acid, weekly, intraperitoneally, for three weeks. The group received GVI prolonged duration of therapy totaling eight weeks. The animals in groups GI, GII and GV received equivalent doses of saline. The GIII, GIV, GV, GVI underwent procedures for tooth extraction in left upper first molar and drill defect in the crown of the first molar tooth left in the third week after the start of the experiment. At the end of eight weeks all animals were killed by CO ² chamber, performed necropsy and removal of mandibles and jaws for analysis. Data were evaluated by cone beam computed tomography as the gray level image and histological analysis, by assigning scores for the presence of inflammatory infiltrate, type of infiltration, vascularization, bone necrosis and resorption dentine. Results: The comparison between GI and GII as the evaluations of gray levels and bone density were not statistically significant (p>0,05). There was significant difference in the levels of gray in the comparison between groups GV and GVI in maxilla and in GIII and GIV (p <0,05) in mandible. Histological evaluation showed the presence of bone necrosis in group GVI and lower presence of bone remodeling in the test groups (GIV and GVI) compared to controls (GIII and GV). The evaluation scores showed no association between any of the variables with the groups (p> 0,05). Conclusion: Zoledronic acid alone, delayed alveolar bone healing after tooth extraction in the group that underwent therapy continued for eight weeks (GVI) compared to the control group (GV), with decreased levels of gray. In addition, the drug was able to reduce the tissues of tooth support capacity reaction, with gray levels higher in the test group (GIV) when compared to the control group (GIII). Histological changes in the normal pattern were observed in the jaws of the test groups (GIV and GVI). Therefore, this experimental model was able to develop alterations in alveolar bone of rats by means of zoledronic acid therapy.

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No presente estudo avaliamos a influência do Metotrexato (MTX-3mg/kg/semana) e do Corticosteróide (CE- prednisona 1,05 mg/kg/semana), ministrados de forma isolada, associados entre si, ou associados ao Ácido Folínico (AF- 0,25 mg/kg/semana) e ao Ácido Zoledrônico (ZOL- 0,1mg/kg dose única) respectivamente, na osseointegração de implantes de titânio realizados 6 semanas após o início da administração das drogas, em coelhos NZW. Os animais (2,67 ± 0,67 Kg) foram tratados durante um total de 18 semanas com solução salina (CTL; n=6), MTX (n=6), CE (n=8), MTX-CE (n=6), MTX-AF (n=6) e CE-ZOL (n=6). Foram realizadas análises de densitometria mineral óssea (DMO) na tíbia e na coluna antes e após os tratamentos para avaliação da variação da DMO (Delta DMO). Os resultados revelaram perda de osso cortical nos grupos tratados com CE (Delta DMO tíbia: 0,018 ± 0,010 vs CTL: 0,040 ± 0,011 p= 0,001; Delta DMO coluna: 0,004± 0,011 vs CTL: 0,055 ± 0,009 p= 0,009). A adição de ZOL ao CE reverteu a perda de DMO (Delta DMO tíbia: 0,027 ± 0,003 p= 0,002 em relação ao CE; Delta DMO coluna: 0,043 ± 0,011 p= 0,02 em relação ao CE). O tratamento com MTX não promoveu alteração da DMO. As análises histomorfométricas das tíbias com e sem o implante, foram realizadas 12 semanas após a colocação dos implantes, e os resultados mostraram uma redução de espessura cortical e de tecido ósseo em função do tratamento com CE sendo que a adição de ZOL reverteu também esse parâmetro. Da mesma forma, o percentual de contato entre osso e o implante foi alterado pelo tratamento com CE (CE: 25,98% vs. CTL: 42,40%; p= 0,013) e o ZOL reverteu esse efeito (CE- ZOL: 38,95% vs. CE: 25,98%; p= 0,014). Em conjunto, nossos resultados mostraram que a terapia com MTX não alterou a osseointegração de implantes de titânio, enquanto que o CE promoveu uma diminuição de contato entre osso e implante que foi revertida pela administração de ZOL, comprovando a eficácia terapêutica dessa associação. / In this study we evaluated the influence of Methotrexate (MTX- 3mg/kg/week) and Corticosteroid (CE- prednisona 1, 05 mg/kg/week), alone and in association with Folinic Acid (FA- 0, 25 mg/kg/week) and Zoledronic Acid (ZOL-0,1mg/kg/week) respectively, on osseointegration of titanium dental implants performed 6 weeks after treatment started in adult male NZW rabbits. Six animals in each group and eight in CE, were treated with the drugs during 18 weeks with exception of ZOL, which was infused as a single dose, at the moment of surgery. Dual-energy X-ray absorptiometryies were performed before and after treatment to determine bone mineral density alterations (Delta BMD). After 12 weeks post-implant placement, the animals were sacrificed for histomorphometric analysis. The BMD was significantly reduced by treatment with CE (Delta tibia: 0.018±0.010 vs CTL: 0.040±0.011; Delta lumbar: 0.004±0.011 vs CTL: 0.055±0.009), with recovery of BMD after ZOL administration (Delta tibia: 0,027± 0,003 vs CE: 0,018±0,010; Delta lumbar: 0.043±0.011 vs CE: 0.004±0.011). The BMD was not altered by MTX treatment or MTX-FA. The histomorphometric analysis revealed cortical bone loss and reduction in bone tissue in tibia in animals treated with CE, and these parameters were reversed by ZOL. Similarly, the percentage of bone to implant contact was reduced in the group treated with CE (CE: 25.98% vs. CTL: 42.40%; p=0.013), and reverted by ZOL (CE+ZOL: 38.95% vs. CE: 25.98%; p=0.014).The MTX and MTX-FA treatments did not alter osseointegration of the implant (35.09% and 35.92% respectively). Together our results showed that therapy with MTX did not interfere on osseointegration of titanium implants, while the CE reduced the bone to implant contact. ZOL administration reversed this effect, showing the therapeutic importance of this association.

No presente estudo avaliamos a influência do Metotrexato (MTX-3mg/kg/semana) e do Corticosteróide (CE- prednisona 1,05 mg/kg/semana), ministrados de forma isolada, associados entre si, ou associados ao Ácido Folínico (AF- 0,25 mg/kg/semana) e ao Ácido Zoledrônico (ZOL- 0,1mg/kg dose única) respectivamente, na osseointegração de implantes de titânio realizados 6 semanas após o início da administração das drogas, em coelhos NZW. Os animais (2,67 ± 0,67 Kg) foram tratados durante um total de 18 semanas com solução salina (CTL; n=6), MTX (n=6), CE (n=8), MTX-CE (n=6), MTX-AF (n=6) e CE-ZOL (n=6). Foram realizadas análises de densitometria mineral óssea (DMO) na tíbia e na coluna antes e após os tratamentos para avaliação da variação da DMO (Delta DMO). Os resultados revelaram perda de osso cortical nos grupos tratados com CE (Delta DMO tíbia: 0,018 ± 0,010 vs CTL: 0,040 ± 0,011 p= 0,001; Delta DMO coluna: 0,004± 0,011 vs CTL: 0,055 ± 0,009 p= 0,009). A adição de ZOL ao CE reverteu a perda de DMO (Delta DMO tíbia: 0,027 ± 0,003 p= 0,002 em relação ao CE; Delta DMO coluna: 0,043 ± 0,011 p= 0,02 em relação ao CE). O tratamento com MTX não promoveu alteração da DMO. As análises histomorfométricas das tíbias com e sem o implante, foram realizadas 12 semanas após a colocação dos implantes, e os resultados mostraram uma redução de espessura cortical e de tecido ósseo em função do tratamento com CE sendo que a adição de ZOL reverteu também esse parâmetro. Da mesma forma, o percentual de contato entre osso e o implante foi alterado pelo tratamento com CE (CE: 25,98% vs. CTL: 42,40%; p= 0,013) e o ZOL reverteu esse efeito (CE- ZOL: 38,95% vs. CE: 25,98%; p= 0,014). Em conjunto, nossos resultados mostraram que a terapia com MTX não alterou a osseointegração de implantes de titânio, enquanto que o CE promoveu uma diminuição de contato entre osso e implante que foi revertida pela administração de ZOL, comprovando a eficácia terapêutica dessa associação. / In this study we evaluated the influence of Methotrexate (MTX- 3mg/kg/week) and Corticosteroid (CE- prednisona 1, 05 mg/kg/week), alone and in association with Folinic Acid (FA- 0, 25 mg/kg/week) and Zoledronic Acid (ZOL-0,1mg/kg/week) respectively, on osseointegration of titanium dental implants performed 6 weeks after treatment started in adult male NZW rabbits. Six animals in each group and eight in CE, were treated with the drugs during 18 weeks with exception of ZOL, which was infused as a single dose, at the moment of surgery. Dual-energy X-ray absorptiometryies were performed before and after treatment to determine bone mineral density alterations (Delta BMD). After 12 weeks post-implant placement, the animals were sacrificed for histomorphometric analysis. The BMD was significantly reduced by treatment with CE (Delta tibia: 0.018±0.010 vs CTL: 0.040±0.011; Delta lumbar: 0.004±0.011 vs CTL: 0.055±0.009), with recovery of BMD after ZOL administration (Delta tibia: 0,027± 0,003 vs CE: 0,018±0,010; Delta lumbar: 0.043±0.011 vs CE: 0.004±0.011). The BMD was not altered by MTX treatment or MTX-FA. The histomorphometric analysis revealed cortical bone loss and reduction in bone tissue in tibia in animals treated with CE, and these parameters were reversed by ZOL. Similarly, the percentage of bone to implant contact was reduced in the group treated with CE (CE: 25.98% vs. CTL: 42.40%; p=0.013), and reverted by ZOL (CE+ZOL: 38.95% vs. CE: 25.98%; p=0.014).The MTX and MTX-FA treatments did not alter osseointegration of the implant (35.09% and 35.92% respectively). Together our results showed that therapy with MTX did not interfere on osseointegration of titanium implants, while the CE reduced the bone to implant contact. ZOL administration reversed this effect, showing the therapeutic importance of this association.

Introdução: o sarcoma de Ewing é um dos tipo mais agressivos de câncer pediátrico. Esse tipo de câncer é um tumor primitivo neuroectodérmico, grupo que inclui ainda outros tumores pediátricos como o meduloblastoma e o neuroblastoma. Apesar de avanços significativos desde o surgimento da quimioterapia, ainda há necessidade de aumento dos índices de cura, redução da toxicidade da quimioterapia e redução da resistência ao tratamento em pacientes com essa doença. Inibidores da acetilação de histonas (HDACIs ou HDIs) e bifosfonatos têm um futuro promissor no tratamento de câncer, especialmente quando utilizados conjuntamente ou em associação com outros agentes citotóxicos, como antineoplásicos clássicos. No entanto, os efeitos destes tratamentos combinados ainda não haviam sido devidamente estudados em Sarcoma de Ewing. Objetivos: este estudo se propôs a avaliar, in vitro, os efeitos do inibidor da acetilação de histonas, butirato sódico (NaB), do bifosfonato, zoledronato (ZA), da associação destes dois agentes e de combinações dos mesmos com antineoplásicos clássicos sobre a proliferação, viabilidade e sobrevivência celular em sarcoma de Ewing. Métodos: as linhagens celulares de sarcoma de Ewing, SK-ES-1 e RD-ES, foram tratadas com NaB, ZA, doxorrubicina, etoposídeo ou vincristina e com diferentes combinações destes agentes. O crescimento tumoral in vitro, incluindo parâmetros de proliferação e viabilidade celular, foi analisado pelos métodos de contagem celular por exclusão com azul de tripan e MTT. Os efeitos tardios (sobrevivência) também foram estudados através da determinação da formação de colônias (ensaio colonogênico). Resultados: a combinação de NaB e ZA teve um efeito citotóxico sinérgico 72h após o tratamento, persistindo durante 10-14 dias após o tratamento, em ambas as linhagens celulares testadas. Todas as combinações entre NaB ou ZA e os antineoplásicos clássicos testados apresentaram efeitos citotóxicos sinérgicos 72h após os tratamentos em ambas linhagens celulares, com a exceção das seguintes associações: NaB + VCR e ZA + Doxo, que apresentaram apenas efeito aditivo nas células RD-ES, quando comparados com cada um dos agentes em monoterapia. Estes efeitos “agudos” observados em ambas as linhagens celulares de sarcoma de Ewing foram confirmados pelo ensaio clonogênico. Conclusão: os dados obtidos sugerem que o uso combinado de bifosfonatos e HDIs e a associação destes agentes com quimioterápicos clássicos representam promissoras alternativas no tratamento de sarcoma de Ewing e proporcionam a base para novos estudos. / Background: Ewing sarcoma, often referred to as Ewing’s sarcoma family tumors, is a peripheral primitive neuroectodermal tumor. Ewing sarcoma is the second most common solid bone and soft tissue malignancy of children and young adults. Despite significant advances in cancer chemotherapy, there is still need for increased rates of cure, reduction of toxicity of chemotherapy and reduced resistance to treatment in patients with this disease. Histone deacetylase inhibitors (HDACIs or HDIs) and bisphosphonates have a promising future in the treatment of cancer as targeted anticancer drugs, especially when used together or in combination with other cytotoxic agents. However, the effects of these combined treatments have not yet been properly evaluated in Ewing sarcoma. Objective: In the present study, we evaluated the in vitro cytotoxic effects (on cellular proliferation, viability, and survival) elicited by the co-treatment of sodium butyrate (NaB) and zoledronic acid (ZA) alone or in combination with three anti-cancer drugs strongly recommended to treat Ewing sarcoma (doxorubicin, etoposide and vincristine) in two human cell lines. Methods: two Ewing sarcoma cell lines, SK-ES-1 and RD-ES, were treated with NaB, ZA, doxorubicin, etoposide, vincristine and with different combinations of these drugs. The proliferation and cell viability were analyzed by counting cell in a hemocytometer, by exclusion of trypan blue and by MTT assay. The survival and proliferation of cells were also studied by clonogenic assay. Results: our results demonstrate that the combination of NaB and ZA has a synergistic cytotoxic effect at 72h after treatment, persisting for 10-14 days post-treatment, in both cell lines tested. All combinations between NaB or ZA and classical antineoplastic drugs demonstrated a synergistic cytotoxic effect at 72h post-treatment in SK-ES-1 and RD-ES cells, with the exception of NaB plus VCR, and ZA plus Doxo, which showed only an additive effect in RD-ES cells when compared to each agent alone. These acute effects observed in both Ewing sarcoma cells were confirmed by the clonogenic assay. Conclusion: These data suggest that HDIs and bisphosphonate co-treatment in combination with classical chemotherapeutic drugs is a promising therapeutic venue the treatment of Ewing sarcoma, and provide a basis for further study in this field.

Introdução: o sarcoma de Ewing é um dos tipo mais agressivos de câncer pediátrico. Esse tipo de câncer é um tumor primitivo neuroectodérmico, grupo que inclui ainda outros tumores pediátricos como o meduloblastoma e o neuroblastoma. Apesar de avanços significativos desde o surgimento da quimioterapia, ainda há necessidade de aumento dos índices de cura, redução da toxicidade da quimioterapia e redução da resistência ao tratamento em pacientes com essa doença. Inibidores da acetilação de histonas (HDACIs ou HDIs) e bifosfonatos têm um futuro promissor no tratamento de câncer, especialmente quando utilizados conjuntamente ou em associação com outros agentes citotóxicos, como antineoplásicos clássicos. No entanto, os efeitos destes tratamentos combinados ainda não haviam sido devidamente estudados em Sarcoma de Ewing. Objetivos: este estudo se propôs a avaliar, in vitro, os efeitos do inibidor da acetilação de histonas, butirato sódico (NaB), do bifosfonato, zoledronato (ZA), da associação destes dois agentes e de combinações dos mesmos com antineoplásicos clássicos sobre a proliferação, viabilidade e sobrevivência celular em sarcoma de Ewing. Métodos: as linhagens celulares de sarcoma de Ewing, SK-ES-1 e RD-ES, foram tratadas com NaB, ZA, doxorrubicina, etoposídeo ou vincristina e com diferentes combinações destes agentes. O crescimento tumoral in vitro, incluindo parâmetros de proliferação e viabilidade celular, foi analisado pelos métodos de contagem celular por exclusão com azul de tripan e MTT. Os efeitos tardios (sobrevivência) também foram estudados através da determinação da formação de colônias (ensaio colonogênico). Resultados: a combinação de NaB e ZA teve um efeito citotóxico sinérgico 72h após o tratamento, persistindo durante 10-14 dias após o tratamento, em ambas as linhagens celulares testadas. Todas as combinações entre NaB ou ZA e os antineoplásicos clássicos testados apresentaram efeitos citotóxicos sinérgicos 72h após os tratamentos em ambas linhagens celulares, com a exceção das seguintes associações: NaB + VCR e ZA + Doxo, que apresentaram apenas efeito aditivo nas células RD-ES, quando comparados com cada um dos agentes em monoterapia. Estes efeitos “agudos” observados em ambas as linhagens celulares de sarcoma de Ewing foram confirmados pelo ensaio clonogênico. Conclusão: os dados obtidos sugerem que o uso combinado de bifosfonatos e HDIs e a associação destes agentes com quimioterápicos clássicos representam promissoras alternativas no tratamento de sarcoma de Ewing e proporcionam a base para novos estudos. / Background: Ewing sarcoma, often referred to as Ewing’s sarcoma family tumors, is a peripheral primitive neuroectodermal tumor. Ewing sarcoma is the second most common solid bone and soft tissue malignancy of children and young adults. Despite significant advances in cancer chemotherapy, there is still need for increased rates of cure, reduction of toxicity of chemotherapy and reduced resistance to treatment in patients with this disease. Histone deacetylase inhibitors (HDACIs or HDIs) and bisphosphonates have a promising future in the treatment of cancer as targeted anticancer drugs, especially when used together or in combination with other cytotoxic agents. However, the effects of these combined treatments have not yet been properly evaluated in Ewing sarcoma. Objective: In the present study, we evaluated the in vitro cytotoxic effects (on cellular proliferation, viability, and survival) elicited by the co-treatment of sodium butyrate (NaB) and zoledronic acid (ZA) alone or in combination with three anti-cancer drugs strongly recommended to treat Ewing sarcoma (doxorubicin, etoposide and vincristine) in two human cell lines. Methods: two Ewing sarcoma cell lines, SK-ES-1 and RD-ES, were treated with NaB, ZA, doxorubicin, etoposide, vincristine and with different combinations of these drugs. The proliferation and cell viability were analyzed by counting cell in a hemocytometer, by exclusion of trypan blue and by MTT assay. The survival and proliferation of cells were also studied by clonogenic assay. Results: our results demonstrate that the combination of NaB and ZA has a synergistic cytotoxic effect at 72h after treatment, persisting for 10-14 days post-treatment, in both cell lines tested. All combinations between NaB or ZA and classical antineoplastic drugs demonstrated a synergistic cytotoxic effect at 72h post-treatment in SK-ES-1 and RD-ES cells, with the exception of NaB plus VCR, and ZA plus Doxo, which showed only an additive effect in RD-ES cells when compared to each agent alone. These acute effects observed in both Ewing sarcoma cells were confirmed by the clonogenic assay. Conclusion: These data suggest that HDIs and bisphosphonate co-treatment in combination with classical chemotherapeutic drugs is a promising therapeutic venue the treatment of Ewing sarcoma, and provide a basis for further study in this field.