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Previous issue date: 2018-12-13 / Anurans represent a valuable source of bioactive molecules. These substances
constitute a primary line of defense against predators and pathogenic
microorganisms such as bacteria and fungi. Secreted peptides by granular glands
represent a source of potential pharmacological agents with diverse functions. The
structural and functional characterization of these biomolecules allows a better
understanding of their function and biotechnological applications. Thus, in this work,
the new peptides were isolated from H. raniceps with variable size between 11 and
16 amino acid residues, all of which contain two cysteines in their primary structure
and with immunomodulatory activity: AC12, DK16 and RC11. A nuclear magnetic
resonance analysis allowed to determinate a structure of these β-sheet molecules, as
well as the presence of disulfide bridges that gives stability to the peptides.
Regarding the structural analysis, none of the samples showed effective antimicrobial
action. The immunomodulatory action profile of the samples was also checked. For
this, a cytotoxicity essay of the molecules was initially tested. AC12 and DK16 did not
reduce the viability of RAW 264.7 cells, decreasing inflammatory markers such as
NO, IL-12 and TNF-α. They also decreased IL-10 production, a pro-inflammatory
cytokine, but associated with several types of neoplasms. The peptide RC11 was
shown to be toxic in RAW 264.7 strain. However, all samples were shown to be safe
when tested at different concentrations in erythrocytes of Balb/c mice, presenting low
hemolysis rates. In the in vivo tests, the three peptides reduced the paw edema
caused by carrageenan, standing out the peptide AC12. Such data were
corroborated by histological analysis of paw tissue. Regarding the
immunomodulatory action with carrageenan-induced peritonitis assay, peptide AC12
was again the most significant, reducing the TNF-α dosed from the peritoneal lavage
and increasing IL-10. In conclusion, AC12 has shown to be a good candidate as an
anti-inflammatory agent, and could be used in the treatment of several inflammatory
conditions. / Os anuros representam uma fonte valiosa de moléculas bioativas. Essas
substâncias constituem a linha de defesa primária contra predadores e
microrganismos patogênicos como bactérias e fungos. Peptídeos secretados pelas
glândulas granulares representam uma fonte de potenciais agentes farmacológicos
com funções diversas. A caracterização estrutural e funcional dessas biomoléculas
permite um melhor entendimento da sua função e aplicações biotecnológicas.
Assim, neste trabalho foram descritos três novos peptídeos isolados de H. raniceps
com tamanho variável entre 11 e 16 resíduos de aminoácidos, todos eles contendo
duas cisteínas na sua estrutura primária e com propriedades imunomoduladoras:
AC12, DK16 e RC11. A análise por ressonância magnética nuclear permitiu
determinar a estrutura dessas moléculas em folha-β, bem como a presença de
pontes de dissulfeto que fornecem resistência e estabilidade às moléculas.
Referente à análise estrutural, nenhuma das amostras mostrou ter ação
antimicrobiana efetiva. Foi também verificado o perfil de ação imunomoduladora das
amostras. Para tal, inicialmente foi testada a citotoxicidade das moléculas. AC12 e
DK16 não alteraram a viabilidade das células RAW 264.7, diminuindo marcadores
inflamatórios como NO, IL-12 e TNF-α. Também diminuíram a produção de IL-10,
uma citocina pró-inflamatória, porém, associada a vários tipos de neoplasias. O
peptídeo RC11 mostrou ser tóxico na linhagem RAW 264.7. Porém, todas as
amostras mostraram-se seguras quando testadas em diferentes concentrações em
eritrócitos de camundongos Balb/c, apresentando taxas de hemólise pouco
significativas. Nos testes in vivo, os três peptídeos reduziram o edema da pata
provocado por carragenina, sobressaindo o peptídeo AC12. Tais dados foram
corroborados pela análise histológica do tecido da pata. Relativamente à ação
imunomoduladora no ensaio de peritonite provocada por carragenina, novamente, o
peptídeo AC12 teve destaque, reduzindo o TNF-α dosado do lavado peritoneal e
aumentando a IL-10. Deste modo, o peptídeo AC12 mostrou ser um bom candidato
a agente anti-inflamatório, podendo ser utilizado no tratamento de diversos quadros
inflamatórios.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:bdtd.ucb.br:tede/2497 |
| Date | 13 December 2018 |
| Creators | Popov, Cláudia Sofia de Freitas Correia |
| Contributors | Rezende, Taia Maria Berto, Magalhães, Beatriz Simas |
| Publisher | Universidade Católica de Brasília, Programa Stricto Sensu em Ciências Genômicas e Biotecnologia, UCB, Brasil, Escola de Saúde e Medicina |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UCB, instname:Universidade Católica de Brasília, instacron:UCB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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