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Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
FIOCRUZ / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Os Rotavirus A (RV-A) são os principais causadores de gastroenterites em crianças
menores de cinco anos de idade. Estes vírus estão diretamente associados à
diarréia e vômito e são transmitidos pela propagação de pessoa a pessoa por via
fecal-oral; entretanto, a transmissão ambiental de RV-A pelo contato com superfícies
contaminadas tem sido descrita em hospitais. O objetivo deste estudo foi
estabelecer um protocolo para detecção de RV-A em superfícies e fômites, a fim de
avaliar o RV-A como marcador biológico de contaminação de superfícies
hospitalares. Um estudo piloto foi realizado para avaliação e determinação da
metodologia de recuperação viral a ser utilizada em estudo no Centro de Tratamento
Intensivo de um hospital da rede particular situado na cidade do Rio de Janeiro,
Brasil. Neste local, no período de janeiro a junho de 2009, foram realizadas coletas
mensais de 12 superfícies e fômites de 7 leitos do CTI, totalizando 504 amostras
provenientes de: suporte para álcool gel, botão de descarga, cadeira do
acompanhante, suporte de clorexidina, tampa da lixeira de resíduos comuns,
maçaneta interna da porta do leito, controle da cama, maçaneta externa do
banheiro, teclado da bomba de infusão, controle remoto, mesa de apoio e telefone.
As amostras foram obtidas por fricção de ―swabs” embebidos em meio de cultura
(DMEM) e a extração do ácido nucléico viral realizada pelo método de isotiocianato
de guanidina/sílica, seguida da síntese do cDNA utilizando iniciador randômico
(pdN6). Protocolos de reação em cadeia da polimerase (PCR) qualitativa e
quantitativa foram utilizados para detecção e quantificação do RV-A pela
amplificação parcial dos genes que codificam para a proteína estrutural VP6 e a não
estrutural NSP3, respectivamente. Das 504 amostras analisadas, 25 (5%) foram
positivas para RV-A pela RT-PCR, ao passo que pela Nested-PCR este número
aumentou para 73 (14,5%). Destas 45 (61,6%) foram quantificadas pela qPCR com
carga viral variando de
3,4 x 100cg/mL a 2,9 x 103cg/mL. O sequenciamento
nucleotidico dos produtos obtidos pela nested-RT-PCR confirmaram a contaminação
por RV-A. A detecção de RV-A em superfícies hospitalares aponta para a
necessidade de um maior controle de higienização que reduza a contaminação por
vírus, e sugere a utilização do RV-A como marcador biológico de contaminação de
superfícies hospitalares. / Rotavirus A (RV-A) is the main cause of acute gastroenteritis in children under five
years of age. This virus is directly associated with diarrhea and vomiting and is
transmitted by spread from person to person by the fecal-oral route, however,
environmental transmission of RV-A by contact with contaminated surfaces has been
described in hospitals. The aim of this study was to establish a protocol for detection
of RV-A on surfaces and fomites in order to assess RV-A as a contamination
biomarker of hospital surfaces. A pilot study was performed for evaluation and
determination of viral recovery methods to be used in a study in the intensive care
unit (ICU) of a private hospital located in the city of Rio de Janeiro, Brazil. From
January to June/2009, samples were collected monthly from 12 surfaces and fomites
of 7-bed of the ICU. There was a total of 504 samples collected from the following
sites: alcohol gel and chlorhexidine dispensers, toilet flush button, chair from the
accompanying person, ordinary waste bin lid, door handle from outside the bathroom
door and the patient’s room, bed control, infusion pump keyboard, TV remote control,
desk and telephone. Samples were obtained by rubbing swabs embedded in culture
medium (DMEM). Viral nucleic acid extraction was performed by the method of
guanidine isothiocyanate / silica, followed by cDNA synthesis using random primer
(pdN6). Qualitative and quantitative polymerase chain reaction (PCR) were used for
detection and quantification of RV-A by partial amplification of genes coding for the
structural protein VP6 and nonstructural protein NSP3, respectively. Of the 504
analyzed samples, 25 (5%) were positive for RV-A by RT-PCR; when nested-PCR
was used, the number increased to 73 (14.5%). Of these, 45 (61.6%) were quantified
by quantitative PCR with viral load ranging from 3.4 x 100cg/mL to 2.9 x 103cg/mL.
Nucleotide sequences of the products obtained by nested-RT-PCR confirmed RV-A
contamination. Detection of RV-A in hospital surfaces indicates the need of greater
control on cleaning procedures to reduce contamination by viruses and suggests
using RV-A as a possible biomarker for contamination of hospital surfaces.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/4096 |
| Date | January 2010 |
| Creators | Teixeira, Ana Carolina Ganime Alves |
| Contributors | Soares, Caroline Cordeiro, Costa, Filipe Aníbal Carvalho, Mascarenhas, Joana D’ Árc Pereira, Lamas, Cristiane, Cubel-Garcia, Rita, Leite, José Paulo Gagliardi |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | Ana Carolina Ganime Alves Teixeira, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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