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Previous issue date: 2015-03-31 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Lippia microphylla Cham. (Verbenaceae), known as “alecrim-do-mato”,
“alecrim-de-tabuleiro” and “alecrim-pimenta”, is populary used as antiseptic or to treat
respiratory disorders. From its leaves, the essential oil (LM-OE) was extracted, that,
according to Silva (2013), presented tocolytic effect on rat, with a probably indirect
inhibition of Ca2+ influx through voltage-gated calcium channels (CaV). Thus, the aim
of this work was to characterize the tocolytic action mechanism of LM-OE on rat.
Isometric contractions were recorded to determine and compare the relative efficacy
and potency (n = 5). Considering that the NO pathway can negatively modulate the
CaV, we decided to evaluate this participation on rat uterus pre-contracted by
oxytocin. For that, it was employed L-NAME, a non-selective inhibitor of NO synthase
(NOS). The results show that the tocolytic potency of LM-OE
(EC50 = 2.7 ± 0.6 μg/mL) was approximately 9.5-fold attenuated in the presence of
L-NAME (EC50 = 25.6 ± 3.9 μg/mL). Furthermore, this reduction was reversed in the
presence of the L-arginine (EC50 = 6.2 ± 1.7 μg/mL), a NOS substrate, and
simultaneous presence of the L-arginine and L-NAME (EC50 = 7.2 ± 1.4 μg/mL),
confirming the participation of NO pathway in the tocolytic action of LM-OE. Similarly,
the relaxant potency of LM-OE was approximately 3.7-fold reduced in the presence
of ODQ (EC50 = 10.1 ± 0.9 μg/mL), a soluble guanylate cyclase (sGC) inhibitor, and
3.3-fold in the presence of Rp-8-Br-PET-cGMPS (EC50 = 8.9 ± 0.9 μg/mL), a protein
kinase G (PKG) inhibitor. Thus, LM-OE positively modulates the NO/sGC/PKG
pathway to promote its tocolytic effect on rat. Given that this pathway can activate the
K+ channels, it was questioned if these channels would be involved on tocolytic effect
of LM-OE. To confirm this hypothesis, experiments were made in the presence of
CsCl, a non-selective K+ channels blocker, and it was observed that the
concentration-response curve of LM-OE (EC50 = 2.7 ± 0.6 μg/mL) was rightward
shifted with an approximately 4.3-fold reduction on its relaxant potency, confirming
the participation of K+ channels on tocolytic effect of essential oil. In order to verify
the subtypes involved, it was employed selective blockers of K+ channels. Control
concentration-response curve was also shifted to the right and the tocolytic potency
of LM-OE was attenuated in the presence of tetraethylammonium
(EC50 = 10.5 ± 0.3 μg/mL), apamin (EC50 = 10.0 ± 1.0 μg/mL), 4-aminopyridine
(EC50 = 12.4 ± 2.0 μg/mL) and glibenclamide (EC50 = 9.7 ± 0.9 μg/mL), the large
(BKCa) and small conductance (SKCa) calcium-activated, voltage-gated (KV) and
adenosine triphosphate-sensitive (KATP) potassium channels blockers, respectively.
Moreover, LM-OE had its tocolytic potency reduced in the same intensity when these
four blockers were simultaneously incubated (EC50 = 16.6 ± 2.6 μg/mL), not
observing synergistic effect. Therefore, the tocolytic action mechanism of LM-OE on
rat involves the positive modulation of the NO/sGC/PKG/K+ channels pathway,
suggesting the blockade of calcium influx through CaV, leading to the relaxation of
uterine smooth muscle. / Lippia microphylla Cham. (Verbenaceae), conhecida como “alecrim-do-mato”,
“alecrim-de-tabuleiro” e “alecrim-pimenta”, é usada popularmente como antisséptico
ou para tratar distúrbios respiratórios. Das folhas dessa espécie foi extraído o óleo
essencial (LM-OE) que, de acordo com Silva (2013), apresentou efeito tocolítico em
útero isolado de rata, indicando uma provável inibição indireta do influxo de Ca2+
através dos canais de cálcio dependentes de voltagem (CaV). Diante disso, o
objetivo deste trabalho foi caracterizar o mecanismo de ação tocolítica do LM-OE em
rata. As contrações isométricas foram monitoradas para determinar e comparar a
eficácia e a potência relativas (n = 5). Tendo em vista que os CaV podem ser
modulados negativamente pela via do óxido nítrico (NO), decidiu-se avaliar a
participação dessa via em útero de rata pré-contraído com ocitocina. Para tanto,
utilizou-se L-NAME, um inibidor não seletivo de sintase do NO (NOS). Os resultados
evidenciaram que a potência tocolítica do LM-OE (CE50 = 2,7 ± 0,6 μg/mL) foi
reduzida em aproximadamente 9,5 vezes, na presença de L-NAME
(CE50 = 25,6 ± 3,9 μg/mL), sendo essa redução revertida na presença de L-arginina
(CE50 = 6,2 ± 1,7 μg/mL), substrato para a NOS, e na presença simultânea de
L-arginina e de L-NAME (CE50 = 7,2 ± 1,4 μg/mL), confirmando o envolvimento da
via do NO na ação tocolítica do LM-OE. Semelhantemente, a potência relaxante do
LM-OE foi reduzida em aproximadamente 3,7 vezes na presença de ODQ
(CE50 = 10,1 ± 0,9 μg/mL), inibidor de ciclase de guanilil solúvel (sGC), e 3,3 vezes
na presença de Rp-8-Br-PET-cGMPS (CE50 = 8,9 ± 0,9 μg/mL), inibidor de proteína
cinase G (PKG). Sendo assim, o LM-OE modula positivamente a via do
NO/sCG/PKG para promover seu efeito tocolítico em rata. Uma vez que essa via
pode ativar canais de K+, questionou-se se esses canais estariam participando do
efeito tocolítico do LM-OE. Para confirmar essa hipótese, foram realizados
experimentos na presença de CsCl, bloqueador não seletivo de canais de K+, e
observou-se que a curva concentração-resposta do LM-OE (CE50 = 2,7 ± 0,6 μg/mL)
foi desviada para a direita com redução da potência relaxante
(CE50 = 11,7 ± 1,5 μg/mL) em aproximadamente 4,3 vezes, confirmando a
participação dos canais de K+ no efeito tocolítico do óleo essencial. Para verificar
quais seriam esses subtipos de canais utilizou-se bloqueadores seletivos. A curva
controle concentração-resposta também foi desviada para a direita e a potência
tocolítica reduzida na presença de tetraetilamônio (CE50 = 10,5 ± 0,3 μg/mL), de
apamina (CE50 = 10,0 ± 1,0 μg/mL), de 4-aminopiridina (CE50 = 12,4 ± 2,0 μg/mL) e
de glibenclamida (CE50 = 9,7 ± 0,9 μg/mL), bloqueadores de canais de potássio:
ativados por cálcio de grande (BKCa) e de pequena condutância (SKCa), dependentes
de voltagem (KV) e sensíveis ao trifosfato de adenosina (KATP), respectivamente.
Ademais, o LM-OE teve sua potência tocolítica reduzida quando esses quatro
bloqueadores foram pré-incubados simultaneamente (CE50 = 16,6 ± 2,6 μg/mL), não
sendo observado efeito sinérgico. Assim, o mecanismo de ação tocolítica do LM-OE
em rata envolve a modulação positiva da via NO/sGC/PKG/canais de K+, sugerindo
o bloqueio do influxo de cálcio via CaV e, consequentemente, o relaxamento do
músculo liso uterino.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.biblioteca.ufpb.br:tede/9512 |
| Date | 31 March 2015 |
| Creators | Silva, Maria da Conceição Correia |
| Contributors | Silva, Bagnólia Araújo da, Cavalcante, Fabiana de Andrade |
| Publisher | Universidade Federal da Paraíba, Programa de Pós-Graduação em Produtos Naturais e Sintéticos Bioativos, UFPB, Brasil, Farmacologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFPB, instname:Universidade Federal da Paraíba, instacron:UFPB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -3526991091727869, 600, 600, 600, 600, 1949513326075358303, 700814650651154363, -2555911436985713659 |
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