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Previous issue date: 2016-03-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / The Human Papiloma Virus (HPV) is a Sexually Transmitted Disease (STD) very
common in the world. It infects the human epithelium may persisting of asymptomatic
form or causing some neoplasia. Many studies report the association between HPV
and many kinds of cancer such as: lap utero, anus, penis, vagina and vulva. According
to INCA data for the year of 2016 are expected 16.340 new cases of lap utero cancer,
being the second most frequent case in the female population in Brazil. For the
recognition of the virus, there`s a lots of tracking methods, as morphological test (pap
test), that observes cytopathic effects caused by the virus on human cells, suggesting
the existence of infection, however this type of test presents low results and has shown
high taxes of false negative and positive results. To overcome this problems, countless
studies has shown the effect of molecular techniques utilization to increase the
sensibility and especially, getting recognize and genotyping the HPV virus. On this
recent studies, were tested distinct molecular techniques for typing the HPV virus, as
Conventional PCR followed by Sanger Sequencing , Real time PCR (SYBRGreen® e
Taqman ®) and Sequencing of New Generation. Altogether were collected 318 samples
pf cervix grated, and from this material were collected the DNA using an adapted
protocol (POWELL; GANNON, 2002). Using the conventional PCR technique followed
by Sanger Sequencing we obtained 65 positives samples for the HPV(21%), in 49
samples(75,3%) it was possible to identify the HPV type, in the other 16
samples(24,7%) it was not possible the identification, probably because the infection
was formed for two or more types of the virus. With the real time PCR technique using
SYBRGreen®, were accomplished an experimente with 30 samples, which was
possible to confirm the results in 28 of it, using Sanger Sequencing. In two samples
the results are not confirmed, being possible to positive the sample, showing high
sensibility of the real time PCR technique. The methodology of New Generation
Sequencing (NGS) it showed useful for HPV identification, being one of the first studies
published for routine use. And it has great prospects because besides HPV can identify
other microorganisms in the sample and quantifies them as well. / O Papilomavírus humano conhecido como HPV é uma doença sexualmente
transmissível frequente em todo mundo, ele infecta o epitélio de seres humanos,
podendo persistir de forma assintomática ou causar neoplasias. Diversos estudos
relatam a associação entre o HPV (Alto Risco) e diversos tipos de câncer como: colo
de útero, ânus, orofaringe, pênis, vagina e vulva. Segundo dados do INCA para o ano
de 2016, são esperados 16.340 novos casos de câncer de colo de útero, sendo de
maior frequência na população feminina no Brasil. Para a identificação do vírus
existem inúmeros métodos de rastreio como testes morfológicos (exame do
Papanicolau), que observam os efeitos citopáticos que o vírus provoca nas células
sugerindo a existência da infecção, mas este tipo de teste apresenta baixa
especificidade e vem apresentando altas taxas de falsos-negativos e positivos. Para
contornar estes problemas inúmeros estudos têm demostrando a eficácia da utilização
de técnicas moleculares, para aumentar a sensibilidade e especificidade, conseguindo
identificar e genotipar o vírus do HPV. No presente estudo foram testadas diferentes
técnicas moleculares para a identificação do vírus do HPV como: PCR convencional
seguida por sequenciamento Sanger, PCR em tempo real (SYBRGreen® e Taqman®)
e sequenciamento de nova geração. Ao todo foram coletadas 318 de amostras de
raspado do colo cervical. Deste material foi extraído o DNA utilizando um protocolo
adaptado (POWELL, GANNON, 2002). Utilizando a técnica da PCR convencional
seguida por sequenciamento Sanger obtivemos 65 amostras positivas para o HPV
(21%), destas 49 amostras (75,3%) foi possível identificar o tipo do HPV e em 16 casos
(24,7%) não foi possível identificar o vírus, sendo possivelmente uma infecção
formada por dois ou mais tipos do vírus. Com a técnica de PCR em tempo real
utilizando SYBRGreen® foi realizado um experimento com 30 amostras sendo
possível confirma o resultado destas com o sequenciamento Sanger em 28 casos. Em
duas amostras os resultados não corroboraram, sendo possível positivar a amostra.
Mostrando a maior sensibilidade da técnica de PCR em tempo real. A metodologia de
sequenciamento de nova geração (NGS) se mostrou útil para identificação do HPV,
demonstrada neste trabalho de maneira inédita. O uso do NGS apresenta boas
perspectivas pois além do HPV pode identificar outros microrganismos na amostra e
quantifica-los.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufscar.br:ufscar/8289 |
| Date | 31 March 2016 |
| Creators | Rocha, Bruno Garcia |
| Contributors | Matheucci Junior, Euclides, Oliveira, Marcos Antônio de |
| Publisher | Universidade Federal de São Carlos, Câmpus São Carlos, Programa de Pós-graduação em Biotecnologia, UFSCar |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Unknown |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSCAR, instname:Universidade Federal de São Carlos, instacron:UFSCAR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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