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Previous issue date: 2016-05-16 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Terapias biológicas tem buscado novas substâncias/protocolos que promovam a
eliminação microbiana e induzam ou estimulem a regeneração pulpar e o
desenvolvimento completo radicular de dentes permanentes jovens com processos
patológicos pulpares. Os objetivos do estudo foram avaliar a a tividade
antimicrobiana/antibiofilme de algumas combinações de antibióticos sobre
microrganismos de interesse endodôntico e analisar o efeito da combinação de
antibióticos com melhor ação antimicrobiana associada à sinvastatina na expressão de
marcadores odontoblásticos em células da polpa dental humana (CPDH). A atividade
antimicrobiana dos seguintes antibióticos : Metronidazol (ME), Ciprofloxacina (CI),
Minociclina (MI), Doxicilina (DO) e Fosfomicina (FO), isolados ou em combinação dupla
(ME+CI, ME+MI, ME+DO, ME+FO, CI+MI, CI+DO, CI+FO, DO+FO, MI+FO) ou tripla
(ME+CI+MI, ME+CI+FO, ME+MI+FO, ME+CI+DO, ME+DO+FO, CI+DO+FO, CI+MI+FO)
foram testados contra Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces
israelii e Candida albicans em condições planctônicas. Biofilmes mono-espécie de E.
faecalis e biofilmes em dual-espécies de E. faecalis and C. albicans foram preparados
em blocos de dentina para testar a atividade antibiofilme das combinações de
antibióticos com os melhores resultados microbiológicos. O efeito antibiofilme das
combinações antibióticas sobre biofilme de E. faecalis dentro dos túbulos dentinários
foi também avaliada por microscopia confocal. Culturas de CPDH foram expostas à
combinação antibiótica com melhor resultado microbiológico e sinvastatina e
determinada a viabilidade celular, atividade da fosfatase alcalina (ALP), deposição de
nódulos de mineralização e expressão de DSPP (sialofosfoproteína dentinária),
importante marcador odontoblástico de mineralização denti nária. Os dados foram
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analisados estatisticamente, considerando p<0,05 . Todas as combinações de
antibióticos reduziram o crescimento bacteriano, exceto por CI+DO e DO+FO para A.
Israelii. ME+CI+MI e ME+MI+FO inibiram significantemente o crescimento de A. israelii
e E. faecalis, e ME+MI+FO eliminou S. mutans. ME+MI+FO e ME+CI+FO tiveram o
melhor efeito contra biofilme de E. faecalis, em mono ou dual-espécies e dentro dos
túbulos dentinários. CI e ME+CI+FO afetaram a viabilidade das células pulpares, em 1 e
7 dias. A atividade de ALP aumentou com a presença de sinvastatina para todos os
grupos, exceto para CI e ME+CI+FO. Grupos contendo sinvastatina mostram maior
deposição de nódulos de mineralização e expressão de DSPP que os grupos sem
sinvastatina. Pode-se concluir que a combinação de antibióticos tripla ME+CI+FO teve
efeito marcante contra os microrganismos endodônticos, em condições planctônicas e
em biofilme. A sinvastatina estimulou a expressão de marcadores odontoblásti cos de
mineralização dentinária pelas HDPC; entretanto, seu efeito foi reduzido pela presença
da CI. / Biological therapies have searching for substances/protocols, which promote microbial
elimination and induce or stimulate pulp regeneration and completion of apical root
development in young permanent teeth with pulp pathological processes . The
objectives of this study were to evaluate the antimicrobial /anti-biofilm activity of some
antibiotics combinations on endodontic microorganisms and the effect of the
combination of antibiotics with the best antimicrobial action associated with
simvastatin on expression of odontoblast markers by human dental pulp cells (HDPC).
The antimicrobial activity of the following antibiotics : Metronidazole (ME),
Ciprofloxacin (CI), Minocycline (MI), Doxycycline (DO) and Fosfomycin (FO), either
alone or in double (ME+CI, ME+MI, ME+DO, ME+FO, CI+MI, CI+DO, CI+FO, DO+FO,
MI+FO) or triple combinations (ME+CI+MI, ME+CI+FO, ME+MI+FO, ME+CI+DO,
ME+DO+FO, CI+DO+FO, CI+MI+FO) were tested against Streptococcus mutans,
Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii and Candida albicans in planktonic
conditions. Mono-species biofilm of E. faecalis and dual-species biofilms of E. faecalis
and C. albicans were prepared in dentin blocks to test the anti -biofilm activity of
antibiotic combinations with the best microbiological results. Antibiofilm effect of
antibiotic combination on E. faecalis biofilm inside dentin tubules was also evaluated
by confocal microscopy. Cultures of HDPC were exposed to the antibiotic combination
with the best antimicrobial effect and simvastatin and determined cell viability,
alkaline phosphatase activity, deposition of mineralization nodules and expression of
Dspp (dentin sialophosphoprotein), important odontoblast markers of dentin
mineralization. Data were analyzed statistically, considering p<0.05. All antibiotic
combinations reduced statistically the growth of bacteria tested, except by CI+DO and
DO+FO for A. israelii. ME+CI+MI and ME+MI+FO inhibited significantly growth of A.
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israelii and E. faecalis, and ME+MI+FO eliminated S. mutans. ME+MI+FO and
ME+CI+FO had the best effect against E. faecalis biofilm, in mono and dual -species
biofilms and inside dentin tubules, similar to CHX. CI and ME+CI+FO affected HDPC
viability, 1 and 7 days. ALP activity increased with the presence of simvastatin for all
groups, except by CI and ME+CI+FO. Groups containing simvastatin had higher
mineralized nodule deposition and higher DSPP expression than groups without
simvastatin. It can be concluded that triple antibiotic combination of ME+CI+FO ha d
remarkable effect against endodontic microorganisms, in planktonic and biofilm
conditions. Simvastatin stimulated the expression of odontoblast markers of dentin
mineralization by HDPC; however, its effect was reduced i n the presence of CI. / FAPESP: 2014/00589-7
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unesp.br:11449/138844 |
| Date | 16 May 2016 |
| Creators | Machado, Juliana de Carvalho [UNESP] |
| Contributors | Universidade Estadual Paulista (UNESP), Duque, Cristiane [UNESP] |
| Publisher | Universidade Estadual Paulista (UNESP) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UNESP, instname:Universidade Estadual Paulista, instacron:UNESP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 600 |
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