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Previous issue date: 2006-12-05 / The aim of the study was to investigate: 1) the ultrastructural morphologic
characteristics in equine oocytes subjected to different times of exposure to
cryoprotectant solutions and 2) the effect of initial cumulus morphology and
cryoprotectants in the nuclear in vitro maturation (IVM) of the vitrified immature
equine oocytes. The oocytes were obtained from ovaries from a
slaughterhouse. In the first study 30 oocytes where divided in three groups:
Control group (G1, n=10); Group 2 (G2, n=10), the oocytes were vitrified for
exposure to VS-1 for 3min and VS-2 for 1min; Group 3 (G3, n=10), exposure to
VS1 for 1.5min and VS-2 for 30sec. The oocytes were vitrified in open-pulledstraws
(OPS). The ultrastructural characteristics where observed using a
transmission electron microscope. The oocytes were classified as: I) oocytes
morphologically normal; II) oocytes which presented intermediate damage but
had completed organelles, and III) oocytes with severe morphological
abnormalities. In the second study, compact (Ccp; n=248) and expanded (Cex;
n=264) cumulus oocyte complexes were divided in three groups: Control,
Treatment-1 (T1 - Ethylene glycol-EG + Dimetyl sulfoxide-DMSO + SIB) and
Treatment-2 (T2 - Formamide + EG + DMSO + Polyvinylpyrrolidone + SIB).
The control group was immediately matured in vitro, the other immature oocytes
were vitrified in OPS and then matured in vitro. The maturation stage was
observed under a fluorescence microscope (Hoechst 33342). The results of
ultrastructural morphology were rated as Class I: 80% oocytes of G1, 30% of
G2 and 60% of G3; Class II: 0% oocytes of G1, 20% of G2 and 30% of G3 30%,
and Class III: 20% oocytes of G1, 50% of G2 and 10% of G3. The maturation
rates (metaphase II - MII) were: 41% Control group, 38,3% T1 and 33,3% T2
(P>0,05). In the control group, the MII rates were higher in Cex oocytes (53,2%)
than those Cco oocytes (29,3%; P<0,05). The initial cumulus morphology didn t
significantly affect MII rates after vitrification (P>0,05). However, Cex oocytes had higher MII rates than Ccp oocytes in T1 (50% vs 27,3%) and T2 (45,7% vs
21,6%). It can be concluded that the reduction in time of exposure to
cryoprotectant solutions resulted in better preservation of ultrastructural
characteristics of equine oocytes submitted to vitrification. Immature equine
oocytes can be IVM after vitrification/re-warming, and satisfactory MII rates can
be obtained. The initial cumulus morphology did not affect nuclear in vitro
maturation of equine oocytes after vitrification. / Os objetivos do presente estudo foram: 1) analisar características morfológicas
ultra-estruturais em oócitos eqüinos submetidos à vitrificação; 2) avaliar a
maturação nuclear in vitro (MIV) de oócitos eqüinos vitrificados em soluções
contendo bloqueadores sintéticos da formação de gelo (SIB); 3) considerar a
influência das características das células do cumulus-oophorus no momento da
coleta sobre a maturação nuclear in vitro. Foram utilizados complexos cumulusoócito
obtidos de ovários provenientes de éguas de abatedouro. No primeiro
experimento 30 oócitos foram divididos em 3 grupos: Grupo controle (G1,
n=10); Grupo 2 (G2, n=10), vitrificados após exposição de 3min em VS-1 e
1min em VS-2; Grupo 3 (G3, n=10), exposição por 1,5min à VS-1 e 30s à VS-2.
A vitrificação foi realizada em palhetas abertas estiradas (OPS). As
características ultra-estruturais foram observadas em microscópio eletrônico de
transmissão, sendo os oócitos classificados em três categorias: I) Oócitos sem
alterações; II) oócitos com alterações intermediárias e III) oócitos com
alterações severas. No segundo experimento, oócitos cumulus compacto (Ccp;
n=248) e cumulus expandido (Cex; n=264) foram divididos em três grupos:
Controle, Tratamento-1 (T1 - Etilenoglicol-EG + Dimetilsulfóxido-DMSO + SIB)
e Tratamento-2 (T2 - formamida + EG + DMSO + Polivinilpirrolidona + SIB). O
grupo controle foi MIV imediatamente após a coleta, o restante foi vitrificado
imaturo em OPS e submetido a MIV após o reaquecimento. O estágio de
maturação após incubação foi avaliado em microscópio de fluorescência
(Hoechst 33342). Na avaliação de ultra-estrutura foram classificados no escore
I 80% oócitos G1, 30% do G2 e 60% do G3; Classificação II: 0% dos oócitos
G1, 20% do G2 e 30% do G3; e Classificação III: 20% dos G1; 50% do G2 e
10% do G3. Na avaliação da maturação, o índice de oócitos que atingiram MII
foi 41% Controle, 38,3% T1 e 33,3% T2 (P>0,05). Nos oócitos do grupo
controle, o índice de MII foi superior em oócitos Cex (53,2%) do que oócitos
Ccp (29,3%; P<0,05). A avaliação da influência das características das células
do cumulus na vitrificação não detectou diferença (P>0,05). Contudo oócitos Cex obtiveram maiores índices de MII do que oócitos Ccp em T1 (50% vs
27,3%) e T2 (45,7% vs 21,6%). Pode-se concluir que a diminuição do período
de exposição às soluções de vitrificação resultou em melhor preservação das
características ultra-estruturais de oócitos eqüinos submetidos à vitrificação.
Oócitos eqüinos imaturos podem ser MIV após vitrificação/reaquecimento,
obtendo índices satisfatórios de MII. As características das células do cumulus,
no momento da coleta, não interferem no índice de maturação nuclear in vitro
de oócitos eqüinos após vitrificação.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/1228 |
| Date | 05 December 2006 |
| Creators | Curcio, Bruna da Rosa |
| Contributors | CPF:25633015053, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783390T8, Nogueira, Carlos Eduardo Wayne, CPF:37145860082, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4785783H3, Deschamps, João Carlos |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFPel, BR, Biotecnologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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