Efeito da rACLF, uma metalopeptidase recombinante da peçonha de Agkistrodon contortrix laticinctus, na viabilidade celular, expressão de citocinas e degradação de proteínas da matriz extracelular.

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Previous issue date: 2006-06-08 / Universidade Federal de Minas Gerais / ACLF is a fibrinolytic non-hemorrhagic metallopeptidase from the venom of
the snake Agkistrodon contortrix laticinctus. rACLF is synthesized as a zymogen (pro-
ACLF) with 412 aminoacids, while the active form of enzyme has 222 aminoacids. The
ORF (open reading frame) that codes for the peptidase was isolated (from a cDNA venom
gland library of A. contortrix. lacticinctus ) and characterized. This work shows the effects
of rACLF on endothelial cells (HUVECs), tumor cells (HeLa, MDA-MB-231 and MCF-7)
and non-tumor cell (fibroblast) as well its proteolytic activity on extracellular matrix
proteins. Our results showed that rACLF inhibited the apoptosis induced by serum
deprivation in HUVECs, but had no effect on cell proliferation. rACLF had direct effect on
HUVECs, since it was observed an increased amount of IL-8 in the cell supernatants, in
addition to the expression induction of molecules related to adhesion and inflammation
processes. rACLF and rACLH were not cytotoxic to human fibroblasts. On the other hand,
both proteins caused decrease of cell viability, changes in morphology, and detachment of
HeLa cells. On human fibroblasts, rACLF modulated the expression of chemokines CXC,
IL-8 and GRO, and chemokine CC, MCP1. The supernatant of human fibroblasts and
HeLa cells were analyzed for MMP-2 (gelatinase-A) secretion. No difference was
observed after 48 h incubation with rACLF and controls. rACLF presented hydrolytic
activity on extracellular matrix proteins, such as laminin, fibronectin, collagen IV, and
thrombospondin. Furthermore, hydrolytic activity on insulin β chain peptide was tested and
compared to rACLH activity. rACLF was shown to be more efficient than rACLH on this
substrate. In conclusion, the results of this study increased the knowledge on the protein
effects on different cell lines and open up perspectives for new studies concerning
signaling and regulation mechanisms affected by this protein activity. / A ACLF é uma metalopeptidase da peçonha da serpente Agkistrondon
contortrix laticinctus. A ACLF é sintetizada na forma de zimogênio (pró-ACLF) com 412
aminoácidos, enquanto a sua forma ativa possui 222 aminoácidos. A fase aberta de leitura
que codifica para a peptidase foi isolada (de uma biblioteca de cDNA feita a partir da
glândula venenífera da serpente) e caracterizada. Este trabalho apresenta os efeitos da
rACLF em células endoteliais (HUVECs), tumorais (HeLa, MDA-MB-231 e MCF-7) e
não-tumorais (fibroblastos), bem como a atividade proteolítica da enzima sobre proteínas
da matriz extracelular, como colágeno, fibronectina, laminina e trombospondina. Nossos
resultados demonstraram que a rACLF inibiu a apoptose induzida por privação de soro
fetal bovino em HUVECs, mas não foi capaz de induzir a proliferação celular. A rACLF
apresentou efeito direto sobre as células endoteliais, aumentando a liberação de IL-8, além
de induzir a expressão de moléculas envolvidas na adesão celular e reposta inflamatória. A
rACLF e a rACLH não foram citotóxicas para fibroblastos humanos. Por outro lado as
duas enzimas estudadas causaram redução na viabilidade alteração na morfologia e
desgrudamento em células HeLa. Em fibroblastos, a rACLF modulou a expressão das
quimoquinas CXC, IL-8 e GRO e CC, MCP1. Nos sobrenadantes de fibroblastos e HeLa
incubados com rACLF por 48 h não foi observada diferença na secreção de MMP-2
(gelatinase-A). A rACLF apresentou atividade sobre proteínas da matriz extracelular, como
laminina, fibronectina, colágeno IV e trombospondina. A rACLF também hidrolisou
alguns substratos fluorogênicos e foi mais eficiente na hidrólise do substrato
correspondente ao peptídeo central da cadeia β da insulina, quando comparada com a
rACLH .Os resultados deste trabalho contribuíram para melhor entendimento dos efeitos
da proteína estudada sobre diferentes linhagens celulares e abrem perspectivas para novos
estudos voltados à elucidação dos mecanismos de regulação e sinalização afetados pela
atividade da proteína.

Links & Downloads

1. MORAES, Caroline Krieger de. Efeito da rACLF, uma metalopeptidase recombinante da peçonha de Agkistrodon contortrix laticinctus, na viabilidade celular, expressão de citocinas e degradação de proteínas da matriz extracelular.. 2006. 98 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2006.
2. https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/1195

Tags

Proteínas

Matriz extracelular

Células - morte

Citocina

CIENCIAS BIOLOGICAS::FISIOLOGIA

Additional Fields

Identifer	oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufscar.br:ufscar/1195
Date	08 June 2006
Creators	Moraes, Caroline Krieger de
Contributors	Araújo, Heloísa Sobreiro Selistre de
Publisher	Universidade Federal de São Carlos, Programa de Pós-graduação em Ciências Fisiológicas, UFSCar, BR
Source Sets	IBICT Brazilian ETDs
Language	Portuguese
Detected Language	English
Type	info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Format	application/pdf
Source	reponame:Repositório Institucional da UFSCAR, instname:Universidade Federal de São Carlos, instacron:UFSCAR
Rights	info:eu-repo/semantics/openAccess