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Previous issue date: 2001-06-21 / Financiadora de Estudos e Projetos / The parasitic Trypanosoma brucei is the causative agent of African
Trypanosomiasis (sleeping sickness) in humans, and nagana in animals and is
responsible for heavy socioeconomic losses in most countries of sub-Saharan
Africa. Therapy against sleeping sickness is unsatisfactory because the toxicity
and arising of the drug resistant parasites. Trypanosomatids contain a single
mitochondrion, the kinetoplast, whose genetic code deviates from the universal
code where a UGA stop codon is used as a Trp codon. A single nuclear-encoded
tRNATrp(CCA), that can decode the canonical Trp codon, is used by both the
nucleus and mitochondria genes. A C to U editing event at position 34 of
tRNATrp(CCA) changes the anticodon from CCA to UCA allowing the decoding of
the UGA stop codon to Trp from the mitochondrial genes. We have identified
two different nuclear-encoded tryptophanyl-tRNA-synthetase (WARSs) genes
(one cytoplasmic (WARS1) and the other to the kinetoplast (WARS2)) in both
Leishmania and Trypanosoma cells. With the purpose to validate the
mitochondrial WARS enzymes of trypanosomatids, as potential drug targets, we
performed gene silencing (RNAi) experiments with both WARSs forms from T.
brucei. In the conditions tested, the expression of dsRNA from a dual promoter
system generated potent RNA silencing, leading to clear phenotypes
characterized by morphologic alterations, severe growth inhibition, reduction in
the levels of oxygen consumed (only TbWARS2) and cellular death. The
efficiency and specificity of silencing were estimated by quantitative PCR and
significant modifications of the specific amount of TbWARSs mRNA were
evidenced. / O parasita Trypanosoma brucei é o agente causal da Tripanossomíases Africana
(doença do sono) em humanos e nagana em animais, cujo impacto
socioeconômico é devastador nos paises sub-Saharianos da África. Atualmente,
as terapias existentes contra esta doença são insatisfatórias, devido a sua
toxicidade e ao surgimento de linhagens resistentes. Tripanosomatídeos contem
uma simples mitocôndria, o kinetoplasto, cujo código genético desvia do código
universal, onde o códon de parada UGA é usado como códon para Trp. Um
simples tRNATrp(CCA) codificado no núcleo, decodifica o códon canônico Trp,
usado para a tradução dos genes nucleares e mitocondriais. O evento de
editoramento C por U na posição 34 do tRNATrp(CCA) muda o anticódon de
CCA para UCA, permitindo a decodificação do códon de parada UGA para Trp,
nos genes mitocondriais. No genoma de Leishmania e Trypanosoma, foram
identificados dois genes nucleares para Triptofanil-tRNA sintetases (WARSs),
uma citoplasmática (WARS1) e outra mitocondrial (WARS2). Com o propósito
de validar a WARS mitocondrial de tripanosomatídeos, como um potencial alvo
farmacológico, foi realizado o silenciamento gênico (RNAi) de ambos genes
WARSs de T. brucei. Nas condições testadas, a expressão do dsRNA gerou um
potente silenciamento, levando ao desenvolvimento de um fenótipo
caracterizado por alterações morfológicas, drástica inibição do crescimento,
redução nos níveis de oxigênio consumido (somente na TbWARS2) e morte
celular. A eficiência e especificidade do silenciamento foram estimadas por PCR
quantitativo e foram evidenciadas significativas modificações na quantidade de
mRNA específico para as TbWARSs.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufscar.br:ufscar/5367 |
| Date | 21 June 2001 |
| Creators | Sánchez, Liliana Torcoroma García |
| Contributors | Thiemann, Otávio Henrique |
| Publisher | Universidade Federal de São Carlos, Programa de Pós-graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular, UFSCar, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSCAR, instname:Universidade Federal de São Carlos, instacron:UFSCAR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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