The recently isolated bacterial metabolites, belactosins A-C from a fermentation broth of Streptomyces sp. UCK14, uniquely contain a β-lactone dipeptide motif and exhibit anticancer activities. The enantioselective synthesis of (-)-belactosin C and derivatives was accomplished in a concise manner employing the tandem, Mukaiyama aldol-lactonizaton (TMAL) process and test their bioactivities. . One approach involved a distal double diastereoselective TMAL reaction with a dipeptide glyoxamide, whereas a second approach involved amide coupling of a dipeptide with a β-lactone carboxylic acid, obtained via the TMAL process employing a chiral silyl ketene acetal. Enzymatic assays showed that the belactosins act as the dual inhibitors of the proteasome and the thioesterase domain of fatty acid synthase. Spongiolactone which uniquely contains a cyclopentyl-fused β-lactone was isolated in 1986 from Spongi-onellagracilis No biological activity have been reported for this compound; however, the acylating potential of the resident β-lactone warrants screening for potential activity. After many setbacks in the synthesis of spongiolactone, significant progress has been made. Importantly, NCAL process also enabled a concise construction of [3.2.0]-bicyclo β-lactone, which is the key structure in the spongiolactone synthesis and only a few steps remained to complete the synthesis.

The enzymatic hydrolysis of lactose by β-galactosidase plays an important role in the processing of dairy products, such as the production of milk containing low concentrations of lactose, the prevention of crystallization in dairy products, and the use of galactosyltransferase for synthesizing galacto-oligosaccharides. In this context, this work aims to study how Kluyveromyces strains can be used to produce β-galactosidase from an agro-industrial by-product such as whey. The species studied were K. marxianus (LAMI CE 025, CCA 510, ATCC 36907) and K. lactis(NRRL Y-1564 and Y-4087). This work also aims to investigate the immobilization of the enzyme onto chitosan and determine its properties such as the optimal operating pH and temperature, the thermal stability of the enzyme, the thermal desnaturation constant, the half-life and the kinetic parameters Km and Vmax using ONPG as substrate of the enzyme β-galactosidase from Kluyveromyces lactis strain NRRL Y1564. K. marxianus LAMI CE 025 and CCA 510 did not consume lactose of the complex medium. The other strains were studied for β-galactosidase production in whey. The maximum enzymatic activity of 3.7 U/mL was achieved by K. lactis NRRL Y-1564 after 12h of fermentation at 180 rpm and 30ÂC, being selected as a microorganism for β-galactosidase production. The optimal pH for soluble β-gal activity was found to be 6.5 while the optimal pH for immobilized β-gal activity was found to be 7.0, while the optimal operating temperatures were 50ÂC and 37ÂC, respectively. The soluble and immobilized enzyme showed similar deactivation profiles at 40ÂC. For more than 200 min, both biocatalysts showed the same stability, retaining approximately 50 % of their initial activities. However, However, the immobilized enzyme showed an increased stability (8 times) at 50ÂC. In the lactose hydrolysis at 37ÂC and pH 7.0 by soluble enzyme was observed a conversion of 58.68% using a enzymatic charge of 2.0 U and 17.57% to 0.5 U. The immobilized enzyme was reused for 10 cycles, showing a good operational stability by retaining more than 74% of its initial activity. The immobilized enzyme retained 100% of its initial activity when it was stored at 4ÂC and pH 7.0 for a period of 93 days. The soluble β-galactosidase lost 9.4% of its initial activity when it was stored at the same conditions. According to these results, an alternative culture medium prepared by using deproteinized whey supplemented with yeast extract was efficiently used for the production of β-galactosidase through the cultivation of Kluyveromyces strains. Chitosan activated with glutaraldehyde is a suitable alternative low cost support for β-galactosidase immobilization, providing the immobilized enzyme with higher thermal, operational and storage stabilities in comparison with the soluble enzyme. / A hidrÃlise enzimÃtica da lactose por β-galactosidase desempenha importante papel no processamento de produtos lÃcteos, sendo uma das aplicaÃÃes à obtenÃÃo de leite com lactose reduzida para o consumo por indivÃduos com intolerÃncia à lactose, produÃÃo de cÃpsulas de enzimas para tratamento e a prevenÃÃo da cristalizaÃÃo em produtos lÃcteos. Neste contexto, este trabalho foi desenvolvido visando a seleÃÃo de cepas de Kluyveromyces produtoras da enzima β-galactosidase usando um resÃduo agroindustrial, o soro de leite como meio de cultivo. Inicialmente, realizou-se a seleÃÃo de espÃcies de Kluyveromyces capazes de produzir β- galactosidase utilizando lactose como fonte de carbono, em meio complexo e posteriormente em soro de leite (50 g/L de lactose) desproteinado e suplementado com extrato de levedura (1 g/L). ApÃs definir a levedura que apresentava maior produÃÃo da enzima de interesse, estudou-se a produÃÃo e a viabilidade de imobilizÃ-la em quitosana. ApÃs, caracterizou-se a enzima solÃvel e imobilizada, consistindo na determinaÃÃo do pH e temperatura Ãtimos, estabilidade tÃrmica, estimativa dos parÃmetros termodinÃmicos e determinaÃÃo dos parÃmetros cinÃticos Km e VmÃx usando como substrato ONPG. As cepas de K. marxianus LAMI CE025 e CCA 510 nÃo consumiram lactose em meio complexo. As demais cepas foram avaliadas quanto à produÃÃo de β-galactosidase em soro de leite. A atividade mÃxima de 3,7 U/mL foi obtida por K. lactis NRRL Y-1564 apÃs 12 h de cultivo a 180 rpm e 30ÂC, sendo selecionada como micro-organismo para a produÃÃo da β-galactosidase. O pH Ãtimo para a enzima solÃvel e imobilizada foram 6,5 e 7,0, respectivamente, e temperatura Ãtima de 50 e 37ÂC para a β-galactosidase solÃvel e imobilizada, respectivamente. A enzima solÃvel e imobilizada mostrou perfis semelhantes de desactivaÃÃo a 40  C. Durante mais de 200 min, ambos os biocatalisadores mostrou a mesma estabilidade, retendo cerca de 50% da sua actividade inicial. Entretanto, a 50ÂC, a enzima imobilizada mostrou uma maior estabilidade tÃrmica, sendo 8 vezes mais estÃvel. Os parÃmetros cinÃticos Km e VmÃx foram 3,34 mM e 1,78 mM/min para a β-galactosidase solÃvel comparado com 3,68 mM e 3,38 mM.min para a enzima imobilizada. Na hidrÃlise de lactose utilizando a enzima solÃvel a 37ÂC e pH 7,0 foi verificada uma conversÃo de 30,77% da lactose para a carga de 2,0 U e 9,8% usando 0,5 U. ApÃs o 10 reciclo de uso, a enzima imobilizada reteve 74% da atividade inicial. A β-galactosidase imobilizada, estocada em tampÃo fosfato de potÃssio pH 7,0 a 4ÂC manteve 100% de sua atividade enzimÃtica inicial no perÃodo de 93 dias. A β-galactosidase solÃvel perdeu 9,4% de sua atividade inicial quando foi estocada nas mesmas condiÃÃes. De acordo com os resultados obtidos, o soro de leite mostrou-se uma fonte de carbono alternativa para produÃÃo de β-galactosidase de K. lactis NRRL Y1564 e a quitosana ativada com glutaraldeÃdo à um suporte alternativo adequado de baixo custo para imobilizaÃÃo da β-galactosidase, proporcionando a enzima imobilizada estabilidades tÃrmicas, operacional e de armazenamento comparado com a enzima solÃvel.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:50:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1552_1.pdf: 1703140 bytes, checksum: d7bfd9d933a3b87737c54066bb8b9ad3 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A β-defensina-1 (hBD1) e a lectina ligadora de manose (MBL) são importantes componentes do sistema imune inato. As β-defensina-1 são peptídeos que atuam como antibióticos naturais contribuindo como a primeira linha de defesa do nosso organismo. Enquanto a MBL é uma proteína capaz de ligar-se à carboidratos de superfície de microrganismos e ativar o sistema complemento. Ambas atuam no reconhecimento e eliminação dos microrganismos, tais como; bactérias, fungos, protozoários e vírus. O presente trabalho teve como objetivo analisar o polimorfismo do gene da β-defesina-1 e da MBL2 em pacientes com onicomicose causadas pelas amostras de Candida ssp. Foram selecionados 100 pacientes atendidos no Departamento de Micologia Médica da UFPE e as amostras de Candida isoladas foram identifidas no Laboratório de Medicina Diagnóstica NKB, baseada segundo as suas características morfológicas, bioquímicas. Em relação a análise do polimorfismo de um único nucleotídeo (SNPs), o DNA foi extraído de sangue total e submetido à amplificação por PCR em tempo-real. Os resultados obtidos da identificação das espécies de Candida foram os seguintes: C. parapsilosis (50%), C. tropicalis (34%) e C. albicans (6%). Estes resultados mostram que houve um predomínio de espécies de Candida não-albicans em relação às C. albicans, os resultados da freqüência alélica da MBL entre os pacientes com onicomicoses e controle saudáveis mostraram que a freqüência do alelo 0 foi estatisticamente mais significativa nos pacientes com onicomicose do que nos pacientes saudáveis (35% vs. 20%, p=0,0001), odds ratio (OR) 1,72 com 95% de intervalo de confidência. Na expressão da hBD1 foi observado que diferença na freqüência genotípica (13% s GG,vs CC 2%):odds ratio (OR= 1,98) e quanto ao mutante alélico foi predominante nos pacientes com onicomicose em relação ao controle (25% vs. 14%). Esses resultados indicam que a presença de alelo mutante da β-defesina-1 e/ou da MBL2 podem contribuir, como um dos fatores, na onicomicose causada por Candida sp

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5008_1.pdf: 1316779 bytes, checksum: 4ac90091b5c7e9c1665a98b18c8fd9cd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / A via microbiológica de produção de carotenóides de interesse comercial, quando comparada à contrapartida oriunda de síntese química, vem alcançando progressiva aceitação, expressa por uma duplicação do porte de mercado a cada quinquênio. De um modo geral, observa-se que os fungos apresentam um relevante potencial biotecnológico para a produção de carotenóides, uma vez que acumulam pigmentos durante o crescimento micelial. Neste trabalho a presença de astaxantina, β-caroteno e licopeno foi investigada em três espécies do Gênero Mucor (M. circinelloides, M. javanicus e M. racemosus) e duas espécies do Gênero Cunninghamella (C. bertholletiae e C. elegans). Através da análise espectrofotométrica (UV-visível) e por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) constatou-se que dentre as cinco amostras investigadas as concentrações tanto de astaxantina (19,8 μg/g) como de β- caroteno (13,5 μg/g) foram mais altas no micélio de M. javanicus. O licopeno não foi detectado em nenhuma amostra. Surpreendentemente, a presença de astaxantina foi pela primeira vez observada em uma espécie de Mucor. O teor de astaxantina encontrado a partir de M. javanicus abriu perspectivas para a maximização dos rendimentos. Neste sentido, fatores, nutricionais e físicos, implicados no crescimento dos microrganismos e na produção de carotenóides, foram alterados e combinados através de planejamentos fatoriais completos e fracionários, buscando a localização da região de máxima produção. A otimização seqüencial do processo permitiu o aumento dos rendimentos de 145,9 para 1297,0 μg/L, confirmando o potencial de M. javanicus como fonte de astaxantina

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:32:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6464_1.pdf: 1145875 bytes, checksum: b7c1f3cf01c88de1f3680636ebeb0127 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / A β-lapachona (C15H14O3, MM 242,3), de nome químico 3,4-dihidro-2,2-dimetil-2H-naftol[1,2-b]pirano-5,6-diona, é uma ortonaftoquinona de ocorrência natural proveniente do ipê roxo, ou pau d arco roxo (Tabebuia avellandae Lor), da família Bigoneaceae. A β-lapachona tem sido alvo de diversas pesquisas, muitas delas visando explorar seu elevado potencial antineoplásico. Atuando contra diversos tipos de câncer humano, especialmente em neoplasias de ciclo celular muito lento, como determinadas linhagens de câncer de próstata que são refratárias aos tratamentos convencionais, especula-se que sua ação se dê por um mecanismo particular de apoptose. A principal barreira no desenvolvimento de uma forma farmacêutica aceitável tem sido sua baixa solubilidade aquosa, o que possivelmente acarretaria numa baixa biodisponibilidade. O presente estudo teve como objetivo executar estudos de solubilidade da β-lapachona em diferentes solventes farmacêuticos, bem como promover sua complexação com ciclodextrinas, para alcançar uma série de formulações que pudessem ser utilizadas em ensaios pré-clínicos. Embora o processo de complexação tenha sido bastante demorado, a utilização de ciclodextrinas mostrou-se como uma opção farmacotecnicamente viável, uma vez que resolvido o problema de baixa solubilidade aquosa, há um possível aumento na biodisponibilidade da β-lapachona. As formulações alcançadas foram doseadas através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), por uma metodologia analítica previamente validada, e duas delas foram eleitas para serem utilizadas nos ensaios in vivo: β-lapachona complexada com cilcodextrina em água e β-lapachona livre incorporada em óleo de gergelim, ambas com 2% do ativo e administradas por duas vias distintas: oral e intramuscular. Os resultados demonstraram que a resposta farmacológica à β-lapachona complexada é significativa, porém, as formulações ainda necessitam ser otimizadas

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:14:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Isolado da Cladonia verticillaris, o ácido fumarprotocetrárico (AF) apresenta diversas propriedades biológicas. O seu uso terapêutico ainda é limitado devido a sua baixa hidrofilicidade. As ciclodextrinas são oligossacarídeos cíclicos que podem formar complexos de inclusão com compostos lipofílicos, aumentando a hidrossolubilidade. Os lipossomas vêm se destacando nas pesquisas por incorporar uma variedade de compostos com características fisco-química desfavoráveis. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e caracterizar complexos de inclusão ácido fumarprotocetrárico:2-hidroxipropil-β-ciclodextrina e incorporar em lipossomas. Os parâmetros de validação foram estudados segundo as exigências da Conferência Internacional de Padronização de Uso Humano (ICH). Os xiv complexos de inclusão foram preparados por liofilização e caracterizados físicoquimicamente. Os lipossomas contendo o AF ou complexo de inclusão AF:HPβCD foram preparados pelo método de hidratação do filme lipídico, submetidos a ensaios de estabilidade e consequentemente a avaliação do perfil cinético de liberação in vitro. A linearidade foi determinada através da equação da reta Absorvância = 0,1119x[AF]+ 0,0071(r2=0,999). A exatidão foi atestada na recuperação do AF no complexo de inclusão. Os coeficientes de variação nos ensaios de precisão intermediária e robustez apresentaram valores inferiores a 5%, caracterizando o método como preciso e robusto. Os limites de detecção e quantificação do AF foram de 0,24 e 0,74 mg.mL-1, respectivamente. O método também demonstrou ser reprodutível, simples e específico. O diagrama de solubilidade de fases de AF:HPβCD apresentou uma curva do tipo AL, com K1:1 = 58 M-1. Na presença de 300 mM de HPβCD, a solubilidade do AF aumentou 19 vezes. O complexo de inclusão AF:HPβCD apresentou modificações no IV, RMN 1H, difração de raios-X, microscopia e DSC, sugerindo a formação do complexo de inclusão. Após o processo de preparação, as formulações lipo-AF e lipo-AF:HPβCD demonstraram-se homogêneas com efeito tyndall. O diâmetro médio e o índice de polidispersão das vesículas foram 85,8 ± 4,5 nm e 0,41 ± 0,14 para lipo-AF e; 86,5 ± 1,41 nm e 0,24 ± 0,05, para lipo-AF:HPβCD. As formulações lipo- AF:HPβCD mantiveram-se estáveis após 60 dias quando as suspensões são armazenadas a 4ºC. Avaliando o perfil cinético de liberação in vitro do AF a partir dos complexos AF:HPβCD e lipo-AF:HPβCD observou-se uma liberação lenta e controlada entre 4 h e 12 h, respectivamente. Estes resultados demonstram que a complexação do AF a ciclodextrina, e sua incorporação em lipossomas, proporcionou uma melhoria na estabilidade e hidrossolubilidade do composto, viabilizando, portanto, seu uso terapêutico

Mit der vorliegenden Dissertation möchte ich einen Beitrag zur Erforschung des schriftlosen Kontrapunktes leisten. Damit sollen die Studien zum contrapunto alla mente aus den letzten Jahren, die neues Licht auf dieses Phänomen geworfen haben, um einen Bereich erweitert werden, der bis jetzt wenig Beachtung gefunden hat: die weitere Entwicklung des improvisierten Kontrapunktes in Spanien bis ins 18. Jahrhundert. Dadurch eröffnen sich neue Perspektiven für das Verständnis der spanischen Musikkultur des Barockzeitalters. Zu den expliziten Informationen aus den Quellen, die bereits zugänglich gemacht worden sind, soll ein Teil des implizites Wissens hinzutreten, das in den Contrapunto-Lehren – insbesondere in den Notenbeispielen – eingefangen ist. Die vorliegende Arbeit ist also ein Versuch, dieses implizite Wissen freizusetzen. Auch wenn die tatsächlich erklungenen Improvisationen nicht konkret rekonstruierbar sind, lässt sich die Methodik, mit der professionelle Kontrapunktisten ausgebildet wurden, anhand der Contrapunto-Lehren gut nachvollziehen. Im Kern der Dissertation steht eine vergleichende Untersuchung der Quellen, die versucht, Antworten auf eine zentrale Frage zu finden: Nach welchen Methoden und Techniken hat man in Spanien um 1700 gelernt, Kontrapunkt zu improvisieren? / With this dissertation, I would like to make a contribution to the study of scriptless counterpoint. In doing so, the studies on contrapunto alla mente from recent years, which have shed new light on this phenomenon, will be expanded to include an area that has received little attention until now: the further development of improvised counterpoint in Spain up to the 18th century. The core of the dissertation is a comparative study of the sources, which attempts to find answers to a central question: What methods were used to learn to improvise counterpoint in Spain around 1700?

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